脾气虚和脾阳虚模型大鼠空肠组织葡萄糖转运体5表达水平变化的实验研究

目的 建立脾气虚、脾阳虚模型,观察大鼠空肠组织葡萄糖转运体（GLUT）5表达水平变化,以探讨不同阶段脾虚能量代谢的实质与差异。方法 2015年3-9月,选取SPF级雄性SD大鼠24只,按照随机数字表法分为对照组、脾气虚组、脾阳虚组,每组8只。脾气虚模型的建立采用饮食失节结合劳倦过度的原则,脾阳虚模型则在脾气虚的基础上施加苦寒泻下法建立。观察大鼠一般体征状态（体质量、体温、进食量等）、前肢抓力（肌力检测）、行为学变化（旷场实验）对模型进行评价。采用实时定量荧光聚合酶链式反应（RT-PCR）法测定GLUT5 mRNA表达水平,Western blotting法测定GLUT5表达水平。结果 脾气虚组体质量、进食量、前肢抓力均低于对照组（P＜0.05）;脾阳虚组体质量、体温、进食量、前肢抓力均低于对照组（P＜0.05）;脾阳虚组体温低于脾气虚组（P＜0.05）。脾气虚组中心区域、周边区域停留时间长于对照组,角落区域停留时间短于对照组（P＜0.05）;脾阳虚组中心区域、角落区域、周边区域停留时间均短于对照组、脾气虚组（P＜0.05）。对照组、脾气虚组、脾阳虚组角落区域、周边区域停留时间均长于中心区域（P＜0.05）;脾气虚组、脾阳虚组周边区域停留时间长于角落区域（P＜0.05）。脾气虚组、脾阳虚组GLUT5 mRNA、GLUT5表达水平低于对照组（P＜0.05）;脾阳虚组GLUT5 mRNA表达水平低于脾气虚组（P＜0.05）。结论 脾虚状态下,大鼠空肠组织GLUT5 mRNA及其蛋白表达水平均降低,这可能是脾气亏虚、能量代谢障碍的重要分子机制之一。     

重组瘦素治疗对链脲佐菌素糖尿病大鼠胃促生长素水平的影响

目的：探讨重组瘦素治疗对链脲佐菌素（STZ）糖尿病大鼠血浆胃促生长素水平及胃壁组织mRNA表达水平的影响。方法：SPF级近交系雄性健康Wistar大鼠分为正常对照组(NC, n=8)、糖尿病组（DM, n=6）、糖尿病瘦素治疗组(DM-LEP, n=6)和糖尿病瘦素治疗饮食配对组(DM-PF, n=6)。瘦素按4mg/kg皮下注射。观察治疗前后各组大鼠进食量、体重及血糖、胰岛素、瘦素、胃促生长素水平以及瘦素在脂肪组织和胃促生长素在胃壁组织的mRNA表达水平。结果：瘦素治疗后，DM-LEP组大鼠摄食量显著低于DM组(P＜0.05)，血糖水平显著低于DM组和DM-PF组（P均＜0.05）,但与NC组比较，仍有显著差异（P＜0.01）；DM-LEP组和DM组及DM-PF组相比，血清瘦素水平及其脂肪组织表达水平均显著升高（P均＜0.05），但仍低于NC组（P＜0.05）；DM-LEP组血浆胃促生长素及其胃壁组织mRNA表达水平显著低于DM组和DM-PF组（P均＜0.05），但仍高于NC组（P＜0.05）。结论：瘦素可降低STZ大鼠血浆胃促生长素及其胃壁组织mRNA的表达水平，且此作用与其抑制摄食作用无关。     

实验性脾虚证平滑肌细胞VIP受体信号传导障碍

[目的]以血管活性肠肽 (VIP)受体为研究对象,在胃肠肽平滑肌细胞受体 (信号接收系统)水平测定实验性脾气虚证大鼠胃肠动力紊乱的信号传导障碍以及香砂六君子汤治疗机制。[方法]逆转录聚和酶链反应 (RT-PCR)法测定胃、空肠和降结肠的VIP两种受体VIPR1和VIPR2mRNA的分布及半定量分析。[结果]在胃窦部,仅有VIPR2表达。与对照组相比,脾气虚组VIPR2mRNA含量降低;治疗组VIPR2含量明显升高。在空肠和降结肠,各组VIPR1和VIPR2均有表达,各组VIPR1mRNA含量均明显高于VIPR2。脾气虚组VIPR1、VIPR2mR NA含量低于对照组;治疗组VIPR1、VIPR2mRNA含量明显高于自然恢复组。[结论]VIP受体在胃肠道不同部位的分布差异可能与脾气虚所致胃与肠道肠动力紊乱表现的截然不同有一定关系,香砂六君子汤在大鼠实验性脾气虚胃肠肽受体水平的异常有调理作用机制之一。     

针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌胰岛素受体底物和葡萄糖转运蛋白4的影响

【目的】观察针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌胰岛素受体底物-1（IRS-1）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的影响。【方法】将32只SD大鼠随机分成正常组、正常针刺组、模型组和模型针刺组,采用葡萄糖氧化酶法、酶联免疫吸附法（ELISA）、实时荧光定量PCR等方法,检测并比较各组大鼠空腹血糖(FPG),血浆胰岛素(FINS),胰岛素敏感性指数(ISI),血清C-肽(C-P),骨骼肌IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达。【结果】模型组大鼠的FPG、 FINS、C-P水平较正常组显著升高（P＜0.01), ISI, IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达较正常组显著降低(P＜0.01);模型针刺组的FPG、 FINS、 C-P水平较模型组显著降低（P＜0.05或P＜0.01), ISI, IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达较模型组显著升高(P＜0.01)。【结论】针刺可能在基因转录水平对IRS-1、 IRS-2、 GLUT4产生影响,从而改善PI3K通路的信号转导。     

短暂缺血再灌注促进心肌葡萄糖转运体基因表达

目的了解短暂缺血再灌注后心肌葡萄糖转运体(GLUT)1 mRNA和GLUT4 mRNA的动态表达变化,及其与缺血再灌注时间的关系.方法将大鼠冠状动脉左前降支完全闭塞20 min后,于再灌注4 h、1、3和7天四个时相进行观察,用RT-PCR计算机凝胶成像分析系统检测心肌GLUT1 mRNA和GLUT4 mRNA相对含量.结果心肌缺血20 min,再灌注4 h后GLUT1 mRNA和GLUT4 mRNA的相对含量均达峰值,两者与对照组相比差异均有极显著性意义.GLUT1 mRNA含量在再灌注7天后仍有明显升高(P＜0.01),GLUT4 mRNA含量从再灌注3天后开始下降,且与对照组无明显差异(P＞0.05).结论短暂缺血后再灌注可增强心肌GLUT1和GLUT4 mRNA表达,有利于加强心肌缺血时葡萄糖的利用,保护缺血心肌和改善再灌注后心肌功能的恢复.     

加味四逆散对身心应激模型大鼠胃肠功能及胃组织中GASR和空肠组织中VIPR2 mRNA表达的影响

目的:建立大鼠慢性身心应激模型,探讨加味四逆散(JWSNS)对模型大鼠胃排空率及小肠推进比、大鼠下丘脑环核苷酸系统(cAMP、cGMP)、胃组织中胃泌素受体（GASR）与空肠组织中血管活性肠肽Ⅱ型受体（VIPR2）mRNA表达的影响,阐明JWSNS干预应激性胃肠功能障碍的机制。方法：60只大鼠随机分为正常组,模型组,小、中、大剂量JWSNS组和西沙比利组,每组10只。采用慢性心理性应激方法建立大鼠应激模型,经JWSNS等干预后检测胃肠动力,放射免疫法检测大鼠下丘脑中cAMP和cGMP含量,RT-PCR法检测胃组织中GASR及空肠组织中VIPR2 mRNA表达变化。结果：与模型组比较,各治疗组大鼠下丘脑中cAMP和cGMP 含量显降低(P<0.05或P<0.01);与西沙比利组比较,大剂量JWSNS组大鼠下丘脑cAMP和cGMP 含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,各治疗组胃排空率及小肠推进比均明显升高(P<0.05或P<0.01);与西沙比利组比较,大剂量JWSNS组胃排空率升高不明显(P>0.05),而小肠推进比明显升高 (P<0.05)。各治疗组大鼠胃组织中GASR mRNA表达水平均高于模型组,空肠组织中VIPR2 mRNA表达水平则降低(P<0.05或P<0.01);中和大剂量JWSNS组大鼠胃组织中GASR mRNA表达水平均高于西沙比利组 (P<0.05或P<0.01);大剂量JWSNS组大鼠空肠组织中VIPR2 mRNA表达水平低于西沙比利组 (P<0.01)。结论:环核苷酸系统（cAMP、cGMP）异常可影响胃肠功能,JWSNS可通过影响环核苷酸系统对慢性心理应激反应进行调控,进而改善胃肠功能,并可改善胃组织中GASR和空肠组织中VIPR2 mRNA的表达。     

胃旁路术对2型糖尿病大鼠肝脏葡萄糖转运体-2及葡萄糖激酶表达的影响

目的：观察胃旁路术（GBP）对自发性2型糖尿病（T2DM）大鼠（GK大鼠）肝细胞葡萄糖转运体-2（GLUT-2）及葡萄糖激酶（GCK）表达的影响,探讨其改善胰岛素抵抗的机制。方法30只8周龄雄性GK大鼠按照随机数字法分为手术组（10只）、假手术组（10只）、饮食配对组（10只）,另8周龄雄性SD作为空白对照组（10只）。检测和比较术前及术后1、2、4周各组大鼠空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）水平,应用蛋白印迹（Western blot）及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测各组术后4周肝脏组织GLUT-2、GCK mRNA及其蛋白的表达情况。结果 GK手术组术后1、2、4周FPG （（11.06±0.52） mmol／L、（7.49±0.34）mmol／L、（5.20±0.08）mmol／L）均低于术前水平（17.53±0.57）mmol／L）（均P＜0.05）;术后4周FINS由术前（11.90±0.75）mmol／L升至（14.20±1.23）mmol／L（P＜0.05）;术后4周GLUT-2、GCK mRNA及其蛋白表达明显增加（P＜0.01）。结论 GBP能上调T2DM大鼠肝细胞胰岛素信号转导通路中GLUT-2及GCK的表达,增强胰岛素受体后的信号转导,提高胰岛素的敏感性。     

Rad对心肌营养素1诱导心肌细胞肥大作用的实验研究

目的 探讨小G蛋白Rad对心肌营养素1（CT-1）诱导心肌细胞肥大作用的影响。方法 2011年6月-2013年3月,选取新生健康雄性SD乳鼠60只。构建载有Rad基因的腺病毒载体（Ad-Rad）、含有编码绿色荧光蛋白基因的空白腺病毒载体（Ad-GFP）。取乳鼠心脏并剪碎,进行心肌细胞原代培养。采用随机数字表法将提取的原代心肌细胞平均分为6组,即空白对照组〔转染磷酸盐缓冲液（PBS）,刺激物为PBS〕、Ad-GFP组（转染Ad-GFP,刺激物为PBS）、Ad-Rad组（转染Ad-Rad,刺激物为PBS）、CT-1对照组（转染PBS,刺激物为CT-1）、Ad-GFP+CT-1组（转染Ad-GFP,刺激物为CT-1）、Ad-Rad+CT-1组（转染Ad-Rad,刺激物为CT-1）。转染腺病毒载体48 h后,采用流式细胞仪检测腺病毒载体转染率,并采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测Rad、心房钠因子（ANF）、β肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达水平,Western blotting法检测Rad表达水平。结果 腺病毒载体转染率为95.51%。Ad-Rad组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组（P＜0.05）;Ad-Rad+CT-1组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组（P＜0.05）。CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组ANF mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组（P＜0.05）;Ad-Rad+CT-1组ANF mRNA表达水平低于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组（P＜0.05）。CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组β-MHC mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组（P＜0.05）;Ad-Rad+CT-1组β-MHC mRNA表达水平低于CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组（P＜0.05）。Ad-Rad组Rad表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组（P＜0.05）;Ad-Rad+CT-1组Rad表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组（P＜0.05）。结论 Rad具有负性调节CT-1诱导心肌细胞肥大的作用。     

补肾疏肝方对神经性厌食应激模型大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴功能的影响

目的：探讨补肾疏肝方对神经性厌食应激模型大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴（hypothalamus-pituitary-ovarian axis,HPOA）功能的影响。方法：按照隔离、限食、束缚的方法建立神经性厌食大鼠应激模型,设立对照组、模型组、假操作组和补肾疏肝方组,每组10只,检测各组大鼠的体质量和动情周期的变化。在灌胃第35天、大鼠处于动情间期时收集血清和下丘脑、垂体组织标本,用放射免疫法检测血清雌二醇（estradiol,E2）、垂体卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）、垂体黄体生成素（luteotrophic hormone,LH）和下丘脑β-内啡肽（β-endorphin,β-EP）,用酶联免疫法测定血清皮质酮（corticosterone,CORT）。结果：补肾疏肝方组大鼠体质量明显高于假操作组（P〈0.01）;动情周期紊乱率明显低于模型组和假操作组;血清E2和垂体LH水平明显高于模型组（P〈0.05）;下丘脑β-EP明显低于假操作组（P〈0.05）;血清CORT水平明显低于模型组（P〈0.05）,亦明显低于假操作组（P〈0.01）;垂体FSH水平高于模型组和假操作组,但差异无统计学意义。结论：补肾疏肝方可以提高神经性厌食应激模型大鼠的血清E2和垂体LH水平,可能是通过降低下丘脑β-EP和血清CORT水平,进而起到调控HPOA功能的作用。     

急性脑梗死患者不同时期Apelin-13及应激相关蛋白水平的变化及其与预后的关系研究

目的 探讨急性脑梗死（ACI）患者不同时期Apelin-13和应激相关蛋白热休克蛋白70（HSP-70）、β内啡肽（β-EP）水平的变化及其与预后的相关性。方法 选取2013年1月-2014年12月在复旦大学附属上海市第五人民医院确诊为ACI的患者50例作为ACI组,另选取同期在本院体检正常者40例作为对照组。采集两组受试者血液,并检测对照组和ACI组发病第1、3、7、14、21、30天Apelin-13、HSP-70、β-EP水平。ACI患者根据改良Rankin分级法评估预后,分为预后好（n=28）、一般（n=15）、差（n=7）,并比较不同预后患者发病第1天的Apelin-13、HSP-70、β-EP水平、格拉斯哥昏迷量表（GCS）评分、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHEⅡ）评分、美国国立卫生研究所卒中量表（NHISS）评分、洼田饮水试验分级。结果 对照组、ACI组不同时期Apelin-13、HSP-70水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,β-EP水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）;其中ACI组第1天Apelin-13水平低于对照组,ACI组第14、21、30天Apelin-13水平高于ACI组第1天（P＜0.05）;ACI组第1、3天HSP-70水平高于对照组,ACI组第3、7、14、21、30天HSP-70水平低于ACI组第1天（P＜0.05）。ACI患者Apelin-13与HSP-70呈直线负相关（r=-0.909,P=0.012）,Apelin-13与β-EP无直线相关性（r=-0.172,P=0.744）,HSP-70与β-EP无直线相关性（r=0.121,P=0.820）。不同预后ACI患者β-EP水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;不同预后ACI患者Apelin-13、HSP-70水平、GCS评分、APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验分级比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中预后差者Apelin-13水平、GCS评分均低于预后好和预后一般者,HSP-70水平、APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验分级高于预后好和预后一般者（P＜0.05）;预后一般者GCS评分低于预后好者,APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验分级高于预后好者（P＜0.05）。结论 Apelin-13水平在ACI发病第1天降低,随ACI病程逐渐升高;HSP-70水平在ACI发病第1天升高,随ACI病程逐渐下降。预后差的ACI患者发病第1天的Apelin-13水平、GCS评分低于预后一般和预后好者,而HSP-70水平、APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验分级高于预后一般和预后好者,可以根据这些指标的变化判断ACI患者预后。     

维拉帕米通过阻断钙离子内流抑制血管平滑肌细胞钙化研究

目的 探讨维拉帕米抑制高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的作用及可能机制。方法 2014年12月-2015年6月选取5～8周龄清洁级健康雄性SD大鼠6只,体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫组化法鉴定。将对数期VSMCs随机分为正常对照组〔含10%胎牛血清（FBS）培养基〕、高磷组（高磷培养基,含10 mml/L β-甘油磷酸）、维拉帕米干预组（在高磷培养基的基础上加入维拉帕米至浓度为20 mmol/L）。细胞接受2、4、6 d干预后,检测VSMCs内钙离子水平,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测VSMCs内目的基因（smad1、runx2 mRNA）表达水平。细胞接受14 d干预后进行钙化检测,包括钙水平测定和茜素红染色情况。结果 高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均高于正常对照组（P＜0.05）;维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均低于高磷组（P＜0.05）。高磷组、维拉帕米干预组4、6 d后VSMCs内钙离子水平分别高于2 d后（P＜0.05）;高磷组6 d后VSMCs内钙离子水平高于4 d后（P＜0.05）;维拉帕米干预组6 d后VSMCs内钙离子水平低于4 d后（P＜0.05）。高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均高于正常对照组（P＜0.05）;维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均低于高磷组（P＜0.05）。高磷组4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平分别高于2 d后,6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平分别高于4 d后（P＜0.05）;维拉帕米干预组4 d后VSMCs内smad1 mRNA表达水平高于2 d后,runx2 mRNA表达水平低于2 d后,6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均高于2、4 d后（P<0.05）。高磷组、维拉帕米干预组VSMCs钙水平均高于正常对照组（P＜0.05）;维拉帕米干预组VSMCs钙水平低于高磷组（P＜0.05）。高磷组、维拉帕米干预组橘红色钙化结节较正常对照组多,维拉帕米干预组橘红色钙化结节较高磷组少。结论 维拉帕米在高磷诱导的VSMCs钙化中起抑制作用,其可能是通过抑制钙离子内流进而抑制smad1表达,进一步抑制runx2表达,进而抑制VSMCs发生表型转化来实现的。     

糖皮质激素对普通大鼠和肥胖大鼠下丘脑AGRP、CART基因表达的影响

目的：探讨糖皮质激素对普通大鼠和肥胖大鼠下丘脑Agouti相关蛋白（AGRP）和受可卡因和安非他明调节的转录肽（CART）基因表达的影响。方法：肥胖大鼠和普通大鼠分别随机分为生理盐水组（NSG）、小剂量组（LDG）和大剂量组（HDG）,连续20天腹腔注射生理盐水0.2ml/100g和琥珀酸氢化可的松5mg/kg、15mg/kg。逆转录实时荧光定量PCR测定下丘脑AGRP和CART mRNA的表达水平。结果：大剂量糖皮质激素可使普通大鼠和肥胖大鼠下丘脑组织中促进食欲肽AGRP mRNA和抑制食欲肽CART mRNA的表达水平显著低于盐水组（P〈0.05）。给予小剂量糖皮质激素后,肥胖大鼠下丘脑组织中AGRP和CART mRNA的表达量与生理盐水组相比差异无统计学意义（P〉0.05）,普通大鼠下丘脑组织中AGPR mRNA的表达水平与生理盐水组明显下降（P〈0.05）,而普通大鼠CART的表达与生理盐水组无差异。结论：应用大剂量糖皮质激素使肥胖大鼠和普通大鼠下丘脑促进食欲肽AGRP和抑制食欲肽CART mRNA的表达均下降。小剂量糖皮质激素使普通大鼠下丘脑促食欲神经肽AGRP mRNA的表达下降。     

吡格列酮对2型糖尿病大鼠胃促生长素表达的影响

目的探讨吡格列酮对2型糖尿病大鼠血浆胃促生长素水平及其胃壁组织mRNA表达水平的影响。方法SPF级近交系雄性健康Wistar大鼠,以高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素（30mg/kg）建立2型糖尿病模型,分为3组：正常对照组（NC组,10只）、糖尿病吡格列酮治疗组（DM-PIO组,12只）和糖尿病未治疗组（DM组,12只）。吡格列酮剂量为20mg·kg^-1·d^-1。用酶免法测定血浆胃促生长素水平,以RT-PCR检测胃壁组织mRNA表达水平。结果DM组和DM-PIO组血浆胃促生长素及其胃壁组织mRNA表达水平显著低于NC组（P均＜0.05）,DM-PIO组与DM组相比有上升趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）。血浆胃促生长素水平与体重（P＜0.05）、HOMA-IR(P＜0.01)和瘦素水平(P＜0.05)呈负相关。结论2型糖尿病大鼠血浆胃促生长素及其在胃壁组织的mRNA表达水平均显著降低,未发现吡格列酮对其有显著影响。     

镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化相关因子表达的影响

目的 探讨镁离子对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化相关因子表达水平的影响。方法 选择5周龄健康雄性SD大鼠6只。以组织贴壁法进行原代VSMCs培养,至3～5代时用于细胞实验。将VSMCs采用随机数字表法分为正常对照组、高磷组（加入10 mmol/L β-甘油磷酸）、镁干预组〔加入10 mmol/L β-甘油磷酸＋3 mmol/L硫酸镁（MgSO4）〕、2-氨基乙氧基二苯基硼酸（2-APB）干预组（10 mmol/L β-甘油磷酸＋3 mmol/L MgSO4＋10-4 μmol/L 2-APB）。采用邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞培养14 d后钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞培养14 d后碱性磷酸酶（ALP）活性,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测0、3、6、10、14 d时细胞内基质G蛋白（MGP）mRNA和骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达水平。结果 细胞培养14 d后,4组钙水平比较,差异有统计学意义（F=409.800,P＜0.05）;高磷组、2-APB干预组钙水平高于正常对照组和镁干预组 （P＜0.05）。4组ALP活性比较,差异有统计学意义（F=490.901,P＜0.05）;高磷组、2-APB干预组ALP活性高于正常对照组和镁干预组 （P＜0.05）。培养14 d后,4组MGP mRNA和OPN mRNA的表达水平比较,差异有统计学意义（F=1 279.905、1 157.247,P＜0.05）;镁干预组MGP mRNA和OPN mRNA的表达水平高于高磷组及2-APB干预组 （P＜0.05）。动态观察MGP mRNA和OPN mRNA的表达变化,结果显示在培养第3天时,高磷组MGP mRNA和OPN mRNA表达水平均降低（P＜0.05）,并随着时间的延长呈下降趋势|镁干预组MGP mRNA和OPN mRNA表达水平均升高（P＜0.05）,并随着时间的延长呈上升趋势。结论 高浓度镁离子在抑制VSMCs钙化过程中可上调MGP及OPN的表达,并呈一定时间依赖性,为临床进一步研究提供了参考依据。     

miR-137通过调控血红素铁输出蛋白FLVCR、BCRP对大鼠I/R损伤的保护作用

探讨大鼠脑缺血/再灌注（I/R）后血红素铁输出蛋白猫白血病病毒C亚组受体(FLVCR)、乳腺癌抗性蛋白(BCRP)的表达变化及miR-137对其表达的调控作用。方法 选取SD大鼠60只,随机分为假手术（SO）组、模型（MCAO/R）组、miR-137模拟物（Mimic）组、miR-137模拟对照（Mimic对照）组、miR-137抑制物（Inhibitor）组、miR-137抑制对照（Inhibitor对照）组,每组10只。采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,分别于再灌注后12、24 h取材。通过qRT-PCR测定大鼠脑组织FLVCR、BCRP及miR-137的mRNA表达,免疫组化检测FLVCR、BCRP蛋白的表达水平。结果MCAO/R组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P＜0.01),Mimic组评分显著下降（P＜0.01）,Inhibitor组评分显著升高（P＜0.05）。MCAO/R组miR-137 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,与Mimic对照组同时间比较,Mimic组miR-137 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）,且24 h升高更显著（P＜0.05）;与Inhibitor对照组同时间比较,Inhibitor组miR-137 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,且24 h降低更显著（P＜0.05）。与SO组比较,MCAO/R组FLVCR mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05);与Mimic对照组比较,Mimic组FLVCR mRNA及蛋白表达水平在12 h显著升高（P＜0.05),24 h最高(P＜0.05);与Inhibitor对照组比较,Inhibitor组FLVCR mRNA及蛋白表达水平降低（P＜0.01）,在24 h降低更明显（P＜0.05）。与SO组比较,MCAO/R组BCRP mRNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.05);与Mimic对照组比较,Mimic组BCRP mRNA及蛋白表达水平在12 h显著升高（P＜0.01）,24 h最高（P＜0.05）;与Inhibitor对照组比较,Inhibitor组BCRP mRNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.01)。结论 miR-137过表达可能促进FLVCR和BCRP的表达以保护大鼠脑缺血再灌注损伤     

三黄糖肾康对2型糖尿病并发骨质疏松症大鼠瘦素表达的影响研究

目的 探讨三黄糖肾康对2型糖尿病并发骨质疏松症大鼠瘦素表达的影响。方法 2013年6月-2014年11月取雌性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为正常对照组10只,骨质疏松症模型组10只和糖尿病模型组50只。糖尿病模型组大鼠进一步按血糖水平随机分为糖尿病模型对照组、中药预防组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组（每组10只）。7组大鼠分别给予相应干预,喂养20周后取材检测大鼠空腹血糖、血清瘦素、骨密度、骨组织瘦素mRNA和瘦素表达水平、下丘脑瘦素长型受体（LRb）、磷酸化信号转导与转录激活因子3（p-STAT3）和磷酸化信号转导与转录激活因子5（p-STAT5）的表达水平。结果 中药预防组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组大鼠空腹血糖水平、骨组织瘦素mRNA和瘦素表达水平、下丘脑LRb表达水平较正常对照组和骨质疏松症模型组升高,较糖尿病模型对照组下降（P＜0.05）;血清瘦素水平、下丘脑p-STAT3和p-STAT5表达水平较正常对照组升高,较骨质疏松症模型组和糖尿病模型对照组下降（P＜0.05）;骨密度较骨质疏松症模型组升高（P＜0.05）。结论 三黄糖肾康可能通过改善瘦素抵抗,直接或间接调节瘦素对骨代谢的影响,从而对2型糖尿病并发骨质疏松症起到治疗作用。     

养阴活胃合剂对慢性萎缩性胃炎大鼠血清胃蛋白酶原和胃组织水通道蛋白的影响

目的 探究养阴活胃合剂治疗慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis,CAG）的作用机制。方法 将66只SD大鼠随机分为正常组,模型组,胃复春组,养阴活胃合剂高、中、低剂量组。采用综合法（氨水+脱氧胆酸钠+不同浓度乙醇＋饥饱失常法）复制CAG模型,连续12周。采用ELISA法检测大鼠血清胃蛋白酶原Ⅰ（pepsinogen Ⅰ,PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（pepsinogen Ⅱ,PGⅡ）水平及胃蛋白酶原比值（pepsinogen ratio,PGR）。采用RT-qPCR法检测胃组织水通道蛋白（aquaporin,AQP）1、AQP3和AQP4 mRNA表达水平。〖JP〗结果 与模型组比较,养阴活胃合剂高、中、低剂量及胃复春可以提高大鼠胃液总酸度,改善胃液pH值（P＜0.05）;各给药组大鼠血清PGⅠ水平和PGR升高,PGⅡ水平降低;各给药组大鼠AQP1 mRNA表达水平降低,养阴活胃合剂中、低剂量组与胃复春组大鼠AQP3 mRNA表达水平明显升高（P＜0.05）,养阴活胃合剂高、中剂量组和胃复春组AQP4 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）。结论 养阴活胃合剂通过升高血清PGⅠ水平和PGR,上调AQP3、AQP4 mRNA表达水平,降低PGⅡ水平和下调AQP1 mRNA表达水平改善CAG大鼠的胃酸分泌。     

CCK、Cx43、GLP-1对2型糖尿病胃轻瘫患者胃排空的预测价值及其相关性分析

目的 探讨胆囊收缩素（cholecystokinin,CCK）、间隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）、胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)对2型糖尿病胃轻瘫患者胃排空的预测价值及其相关性。 方法 选择2型糖尿病胃功能异常患者127例,其中功能性消化不良49例设为消化不良组,糖尿病胃轻瘫患者78例设为胃轻瘫组,另选择同期体检的胃功能正常的健康者50例设为对照组,所有受试对象均进行胃半排空时间测定。酶联免疫吸附法检测CCK、Cx43、GLP-1水平,放射性核素法检测固体胃排空功能。分析CCK、Cx43、GLP-1对2型糖尿病胃轻瘫患者胃排空的预测价值,并分析CCK、Cx43、GLP-1的相关性。 结果 消化不良组和胃轻瘫组CCK、Cx43水平低于对照组,GLP-1水平高于对照组,胃半排空时间长于对照组;胃轻瘫组CCK、Cx43水平低于消化不良组,GLP-1水平高于消化不良组,胃半排空时间长于消化不良组（P＜0.05）。CCK、Cx43、GLP-1联合检测对2型糖尿病胃轻瘫患者胃排空的预测价值较高。CCK、Cx43呈正相关（r=0.482;P＜0.001）;CCK、GLP-1呈负相关（r=-0.356;P＜0.001）;Cx43、GLP-1呈负相关（r=-0.619;P＜0.001）。 结论 CCK、Cx43、GLP-1在2型糖尿病胃轻瘫疾病中异常表达,对预测2型糖尿病胃轻瘫患者有一定的价值。     

细针穿刺标本中葡萄糖转运体1基因检测在诊断甲状腺癌中的价值

目的：探讨葡萄糖转运体1（glucose transporter 1,GLUT1）基因检测在术前鉴别甲状腺良恶性结节中的价值。方法：采用RT?qPCR检测112例甲状腺结节（42例良性,70例恶性）和52例结节周边正常甲状腺细针穿刺（fine needle aspiration,FNA）标本中GLUT1 mRNA的表达量,然后采用免疫组织化学方法检测术后病理组织中GLUT1蛋白的表达情况。构建受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评价GLUT1基因对甲状腺癌的诊断价值。结果：甲状腺结节FNA标本中可以检测出GLUT1 mRNA的表达,且其与术后免疫组化GLUT1蛋白的表达水平相一致。PCR结果表明GLUT1基因在良性结节与正常甲状腺细胞之间的表达水平无显著性差异（P > 0.05）。与良性结节相比,甲状腺癌中GLUT1基因表达水平显著增高（P < 0.001）。GLUT1基因诊断甲状腺癌的敏感性、特异性及ROC曲线下面积（AUC）分别为62.9%、92.9%和0.797。甲状腺癌中GLUT1基因表达与年龄、性别、肿瘤大小、结节数目、BRAFV600E突变和淋巴结转移均未见明显相关性（P > 0.05）,但与AJCC分期显著相关（P < 0.001）。结论：GLUT1基因检测对甲状腺癌的诊断具有较高的特异性,可作为术前鉴别甲状腺良恶性病变的重要参考指标。     

葡萄糖转运体3在大鼠脑缺血/再灌注后海马中的表达

[目的]研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、海马区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达.[方法]健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分成3组:①缺血1 h再灌注组(MCAO1h/R)28只;②缺血3 h再灌注组(MCAO3h/R)24只;③假手术组(pseudo operation)4只.用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用Kontron IBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取海马区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT3蛋白水平的变化.[结果]脑缺血1 h后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3h再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小.MCAO1h/R组:GLUT3 mRNA在6 h有1次升高,但以后各时相均低于正常对照组.MCAO3h/R组:各时间点GLUT3 mRNA的表达均低于正常对照组,在72h、1周不能测到GLUT3 mRNA的表达.GLUT3蛋白水平的表达与mRNA相符合.MCAO3h/R组与MCAO1h/R组在相应的各时间点比较,GLUT3 mRNA降低幅度差异有统计学意义.[结论]GLUT3在缺血海马区的表达下降,可能与脑缺血再灌注损伤后神经元退变或死亡有关.