应用焦磷酸测序法检测进展期结直肠癌中K-ras基因点突变

目的建立基于焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)的结直肠癌K-ras基因点突变的检测方法,并应用于进展期结直肠癌及其转移灶中K-ras基因突变的检测。方法提取116例Ⅳ期结直肠癌及11例转移灶中的DNA,进行PCR扩增后应用Pyrosequencing法检测K-ras基因12及13密码子点突变。结果 116例Ⅳ期结直肠癌中有29例检出K-ras基因点突变,突变率为25.0%,在所有29例突变病例中12密码子点突变率为82.8%(24/29),13密码子点突变率为17.2%(5/29),所有11例转移灶的K-ras基因均与其原发病灶相一致。结论 Pyrosequencing能准确、快速、高通量地进行K-ras基因点突变测定,适合大规模临床标本检测,有利于指导结直肠癌尤其是转移性病变的个体化治疗。     

焦磷酸测序法快速检测胰腺癌K-ras基因点突变

目的 建立基于焦磷酸测序技术的胰腺癌K-ras基因点突变的检测方法,并与Sanger测序法作一比较.方法 用焦磷酸测序法(Pyrosequencing)和Sanger测序法(Sanger sequencing)分别在10名正常胰腺组织、49例胰腺癌、11例慢性胰腺炎、18例胰腺良性囊肿、7例胰岛素癌、9例壶腹癌、7例胆管癌及7例十二指肠乳头癌石蜡包埋组织的DNA中检测K-rag基因12密码子点突变.结果 采用上述两种方法在所有正常胰腺组织、慢性胰腺炎、胰腺良性囊肿、胰岛素癌、壶腹癌、胆管癌及十二指肠乳头癌均未见K-ras基因点突变,而采用焦磷酸测序法发现胰腺癌石蜡包埋组织K-ras基因点突变率为71.4%(35/49),显著高于采用Sanger测序法发现胰腺癌石蜡包埋组织K-rag基因点突变率(61.2%,30/49).结论 焦磷酸测序法较Sanger测序法更为敏感,且焦磷酸测序法准确、快速、高通量,适合临床标本的批量测定.     

蝎子PCR法与传统测序法检测K-ras基因突变的比较

目的建立一种简单、便捷、有效检测K-ras突变的蝎子PCR新方法.方法同时用蝎子PCR法和Sanger测序法对87例结直肠癌组织的K-ras基因进行热突变型G12D(GGT>GAT)进行检测,统计其符合率.结果87例结直肠癌组织样本中,蝎子PCR法和Sanger测序法检测到同样9例G12D突变,其符合率为100%.结论蝎子PCR法能有效检测到K-ras突变,且比Sanger测序法更为简便、快速,适合临床应用.     

皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族12/13位密码子突变的检测

目的:探讨皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族(H-ras/N-ras/K-ras)12/13位密码子的突变情况。方法:从14例皮肤病理性瘢痕,14例瘢痕癌石蜡包埋组织中提取DNA,进行PCR扩增及测序,分析H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子突变情况。结果:28个样本均成功提取DNA,扩增出基因片段,经测序均未发现H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子的点突变。结论:皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族的突变位点有待进一步探讨。     

K-ras基因突变表达谱与结直肠癌肝转移的相关性分析

目的探讨K-ras基因突变谱与结直肠癌肝转移的相关性,为进一步阐明结直肠癌肝转移的分子机制提供理论依据。方法收集2008年1月至2010年8月在我院治疗的结直肠癌肝转移患者30例,进行K-ras基因突变检测,分析K-ras基因的突变类型及频率,探讨K-ras基因的突变谱与结直肠癌肝转移患者性别、年龄、原发灶位置、转移位置、病灶形态及TNM分期的相关性。结果 30例结直肠癌肝转移患者组织中K-ras基因突变者14例,突变率为47%,其中12密码子突变9例,突变率为30%;13密码子突变者5例,突变率为17%。突变表达谱在性别、年龄、原发部位、肝脏转移灶部位、病灶形态、TNM分期方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 K-ras基因在结直肠癌肝转移的患者中突变率较高,以12,13号密码子突变最为常见,突变类型及频率在性别、年龄、原发部位、肝脏转移灶部位、病灶形态、TNM分期方面无显著性差异。     

运用高灵敏度COLD-PCR法检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变

目的 评价COLD-PCR法检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变的价值.方法 采用COLD-PCR/Sanger测序法与普通PCR/Sanger测序法检测KRAS基因野生型结直肠癌细胞系SW116中混有的KRAS基因突变型和结直肠癌细胞系SW480中的KR4S基因突变,确定两种方法 的灵敏度,并采用两种方法 分别检测20例胰腺癌和39例结直肠癌患者石蜡包埋组织的KRAS基因突变,并评价两种方法 的符合率.结果 细胞系检测结果 显示,普通PCR/Sanger测序法和COLD-PCR/Sanger测序法检测KRAS基因突变的灵敏度分别为1∶20和1∶100(突变型:野生型).COLD-PCR/Sanger法检测20例胰腺癌患者KRAS基因突变率[75%(15/20)]高于普通PCR/Sanger测序法[40%(8/20),x2=5.013,P<0.05];COLD-PCR/Sanger测序法检测39例结直肠癌患者的KRAS基因突变率[44%(17/39)]高于普通PCR/Sanger测序法[31%(12/39),x2=1. 372,P=0.174)].两种方法 检测胰腺癌标本的符合率为65%,但一致性较差(Kappa=0.364,P<0.05);而两种方法 检测结直肠癌标本的符合率为87%,且一致性较好(Kappa=0.730,P<0.05).结论 COLD-PCR/Sanger测序法是一种高灵敏性检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变的方法 .     

某地区结直肠癌患者KRAS基因及BRAF基因突变状态的检测分析

目的 检测某地区结直肠癌患者KRAS基因和BRAF基因的突变状态及其与年龄、性别的关系.方法 由某地区30例结直肠癌患者石蜡组织中提取DNA,通过直接测序法及荧光定量PCR法检测KRAS基因及BRAF基因突变状态.结果 KRAS基因突变率为43.3%,共发现6种突变类型,主要位于12、13密码子,其中以c.38G>A突变率最高(38.5%).单因素及多因素分析均提示KRAS突变与年龄或性别无相关性.BRAF基因突变率为0.结论 某地区结直肠癌患者KRAS基因突变率高,靶向治疗前进行突变状态检测具有重要临床价值.     

Ion Torrent测序技术检测Ⅰ型神经纤维瘤病患者NF1基因突变

摘要：目的：评价Ion Torrent测序技术检测Ⅰ型神经纤维瘤(NF1)基因及其突变类型的可行性。 方法：提取12例NF1患者的外周血DNA,用Ion Torrent个体化基因测序仪(PGM)对患者NF1基因进行测序,用Sanger测序法验证NF1基因相应的突变位点,Ion Torrent PGM检测后覆盖缺失的外显子样本用Sanger测序法重新检测。 结果：检测到10例患者存在NF1基因致病突变,其中2种无义突变,5种小缺失或插入突变,1种错义突变,2种剪接突变。2例患者未检测到致病突变。 结论：Ion Torrent测序技术检测含有大量外显子的NF1基因快速、准确;NF1基因突变可导致氨基酸密码子提前终止。     

HRM法检测结直肠癌患者循环DNA中KRAS和EGFR基因突变

摘要:目的：探讨高分辨率熔解曲线(HRM) 法检测结直肠癌患者循环DNA中KRAS和EGFR基因突变的可行性。 方法：用HRM法检测70例结直肠癌患者KRAS基因2号和3号外显子以及EGFR基因19和21号外显子的突变情况,用直接测序法验证结果的准确性。 结果：70 例结直肠癌患者血液标本经HRM法、直接测序法分别检测到18例(25.7%)和17例(24.3%)KRAS基因2号外显子突变;均检测到3例EGFR基因19号外显子突变(4.3%);两法均未检测到3号外显子和21号外显子突变。HRM检测与直接测序法结果符合率为99.6% (279/280)。 结论：HRM法检测结直肠癌患者血样本KRAS和EGFR基因突变,具有准确度高、操作简单、检测成本低等优点,适合在临床推广应用。     

非小细胞肺癌中EGFR和K-ras基因突变检测分析与病理特征的关系

目的探讨不同分型非小细胞肺癌的EGFR与K-ras基因突变及其相关病理特征的关系。方法基因测序方法检测260例非小细胞肺肿瘤患者肿瘤组织中的EGFR(18,19,20,21外显子)和K-ras(12,13,61密码子)基因的突变。结果 260例样本中,EGFR基因突变检出率为48.8%(127/260),突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。K-ras基因突变检出率为10%(26/260),其中12、13和61密码子均发现突变。受检的所有样本中没有发现EGFR与K-ras基因同时出现突变的情况。腺癌的EGFR突变检出率明显高于鳞状细胞癌等其他组织类型。在分化程度上,高分化与中分化癌基因突变检出率和中分化与低分化突变检出率比较差异显著(P<0.01)。EGFR突变与有无淋巴结转移无关(P>0.05)。K-ras基因突变与组织类型、患者性别、分化程度、有无淋巴结转移间无相关性。结论非小细胞肺癌EGFR基因突变检出率较高,K-ras基因突变检出率较低,且两种突变并不同时出现。EGFR基因突变与性别、肺癌组织类型、分化程度有关,存在多种突变。     

The acoustic characteristics of the skull

Many investigators have stated that the difficulties of imaging with acoustical energy through the skull result from the marked attenuation of the energy by the skull. In the literature measurements of total attenuation have been confused with those for absorption.Measurements made by us show that absorption by compact bone varies between 2–3 dB cm^?1 MHz^?1 and, in the low megaHertz region appears to be directly proportional to frequency.It has also between shown that the convoluted inner surface of the ivory bone of the inner table of the skull may degrade the collimation and directionality of the beam by refraction.Cancellous bone, such as is present in the dipole of the skull, greatly attenuates the energy. It is postulated that this largely results from scattering. It is also postulated that the energy propagates through cancellous bone as two components, one in the soft tissues and the other partly in the bony spicules. Observations suggest that attenuation due to scattering much more markedly affects the latter of these components and scatters more greatly the higher frequencies in a pulse of broad bandwidth.The energy in each component has varying propagation paths so that the later cycles in the pulse of each component are subject to increasing interference as a result of the variations in propagation times. The two components moreover may have different propagation times so that interference may occur between the pulses of each component as well.All of these phenomena degrade the collimation, coherence, directionality, beam width, pulse length, frequency and other properties of the ultrasonic energy upon which imaging through the skull depends.The interference effects described above are least for the first cycle in the pulse which usually is not the cycle of highest amplitude. Since, in the free field, most of the energy is concentrated around the beam axis, most of the energy in the field which is deflected from its normal propagation path is deflected away from the beam axis. Thus the directionality of the beam is least degraded in the beam axis. The effects of the skull in degrading the properties of the ultrasonic pulse would therefore be lessened if the amplitude of the first cycle of the pulse and the directionality of its energy could be used for imaging.     

Organ Preservation: Current Concepts and New Strategies for the Next Decade

SUMMARY: Organ transplantation has developed over the past 50 years to reach the sophisticated and integrated clinical service of today through several advances in science. One of the most important of these has been the ability to apply organ preservation protocols to deliver donor organs of high quality, via a network of organ exchange to match the most suitable recipient patient to the best available organ, capable of rapid resumption of life-sustaining function in the recipient patient. This has only been possible by amassing a good understanding of the potential effects of hypoxic injury on donated organs, and how to prevent these by applying organ preservation. This review sets out the history of organ preservation, how applications of hypothermia have become central to the process, and what the current status is for the range of solid organs commonly transplanted. The science of organ preservation is constantly being updated with new knowledge and ideas, and the review also discusses what innovations are coming close to clinical reality to meet the growing demands for high quality organs in transplantation over the next few years.     

2017年呼吸疾病主要进展

2017年,国内外学者在呼吸系统疾病的临床和基础领域均进行了深入研究,不仅对相关指南进行了更新,并且针对一些临床热点、难点问题达成专家共识,现就2017年呼吸疾病相关进展作一简单介绍。     

儿童遗传性心律失常的诊治进展

回顾在遗传性心律失常领域最新发表的相关研究,主要关注与儿童心源性猝死关系密切的离子通道病,包括长QT综合征（LQTS）、短QT综合征（SQTS）、Brugada综合征（BrS）和儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速（CPVT）,总结它们在发病机制及诊治方面的进展。     

家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症1例并文献复习

目的加强对家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（familially hemophagocytic lymphohistiocytosis,FHL）的认识。方法报道确诊为FHL的新病例1例,结合国内外报道的FHL的病例,对该病的临床特点进行汇总分析。结果FHL2常与PRF1基因突变相关,约20%~40%的患者存在穿孔素基因突变。结论对于有阳性家族史,基因诊断明确,应尽早行化疗或者造血干细胞移植。若无家族史,未发现与继发性HLH相关的原发病因,可考虑行基因筛查以明确是否存在FHL的可能。     

动态心电图临床操作标准化方法

动态心电图,又称Holter或Holter检查,是一种评价各种心脏病患者心电图异常的简便、高效、准确、安全的无创检查,广泛用于心律失常的相关症状评价,心肌缺血的诊断,心脏病患者的预后和日常生活能力评估,药物疗效评价,起搏器等埋藏式心脏电治疗装置监测等领域。目前动态心电图已广泛用于于临床各级医疗机构,为了更好地发挥其作用,有必要对该项技术进行规范化培训。本文参考相关指南、共识及专家建议,结合作者经验,撰写动态心电图临床操作标准化方法供临床使用时参考。     

甲状旁腺功能减退性心肌病的系统综述

目的 甲状旁腺功能减退（甲旁减）性心肌病是一种罕见的心脏疾病,为扩张型心肌病中少数可逆转的一种,常被误诊为不明原因或难治性心力衰竭。本文旨在探寻甲旁减性心肌病的规律性特征。方法 检索Pubmed、SinoMed、万方数据库中符合标准的甲旁减性心肌病病例,采用统计分组法对纳入研究的文献进行分析,依据系统综述和meta分析优先报告条目（PRISMA声明）进行报告。结果 在我们筛查出的41例患者中,女性居多（68.29%）,平均年龄为45.5岁,各年龄段均有发病。甲旁减性心肌病最常见的病因为特发性甲旁减（78.05%）,颈部手术导致的甲旁减性心肌病次之（17.07%）。患者均以心力衰竭就诊,伴不同程度的低钙血症。51%的患者有神经肌肉兴奋性增加的病史,90%的患者左心室射血分数降低。该病误诊漏诊率较高,仅36%的患者于入院后即明确诊断为甲旁减性心肌病。低血钙的纠正是治疗的关键,90%的患者心脏功能在血钙浓度正常化后恢复至正常。结论 对所有不明原因或难治性心力衰竭患者都应警惕甲旁减性心肌病的可能。     

单核细胞/高密度脂蛋白胆固醇比值不能预测PCI术后对比剂肾病的发生

目的 探讨术前单核细胞与高密度脂蛋白比值(monocyte to high density lipoprotein cholesterol ratio, MHR)与经皮冠状动脉介入（percutaneous coronary intervention , PCI）治疗后发生造影剂肾病（contrast induced nephropathy, CIN）的相关性，为CIN的发生寻找其他可能的危险因素，为及早筛选CIN高危人群提供新的方向。方法 回顾性分析5P试验入选的我院心内一科行经皮冠状动脉介入治疗术的冠心病患者1 087例，根据在PCI术后是否发生造影剂肾病分为CIN组和非CIN组，研究CIN的相关危险因素，分析MHR与造影剂肾病的相关性，应用Logistic回归分析查看MHR是否为CIN发病的高危因素。结果 CIN组共57例，非CIN组1 030例。两组在高脂血症、BMI、左心室射血分数（LVEF）、术前尿酸及术前C 反应蛋白水平等方面比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 Logistic回归分析显示LVEF及糖尿病与造影剂肾病的发生相关。结论 同以往研究结果不同，MHR并不能作为CIN的危险因素，但LVEF对于CIN可能具有更高的预测价值。     

CAG及CAG联合地西他滨化疗方案治疗老年急性髓系白血病的疗效比较

目的 比较CAG及CAG联合地西他滨（DAC）化疗方案治疗老年急性髓系白血病(AML)的疗效。方法 回顾性分析我院诊治的老年AML患者76例,对采用CAG或CAG+DAC两种不同化疗方案做为诱导缓解方案的患者的临床疗效进行分析,分析两组在完全缓解率,总有效率,中位生存期,中位无复发生存期的差异。结果 在老年AML患者,CAG组49例,完全缓解率为51.0%,总有效率为61.2%, CAG+DAC组27例,分别为59.3%和77.8%,两者完全缓解率和总有效率差异无统计学意义(P>0.05);在中位生存期（10.0个月 vs 12.0个月,P=0.225）和无复发生存期（8.0个月 vs 11.0个月,P=0.652）差异无统计学意义。但在高危组患者,CAG+DAC组完全缓解率,总有效率优于CAG组,分别为57.1% vs 15%;71.4% vs 25%,差异有统计学意义(P<0.05)。中位生存期6.0个月 vs 10.0个月及无复发生存期为4.0个月 vs 7.0个月(P>0.05),CAG+DAC组均有延长趋势。 结论 CAG和CAG+DAC化疗方案临床疗效相当,但对预后差的老年AML患者,CAG+DAC在临床疗效方面显示出了优势。