人血液制品的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度分析

目的以聚丙烯酰胺凝胶电泳分析血液制品蛋白纯度。方法采用SDS-PAGE和2-DE对人血液制品进行电泳分离,分别以胶体考染和银染显示凝胶电泳分离结果,以Labworks45或ImageMaster2D软件分析图谱。结果SDS-PAGE和2-DE检测的人血白蛋白样品的纯度均低于现行方法的结果。重组人白蛋白样品含有明显的宿主细胞蛋白,需进一步分离纯化。结论聚丙烯酰胺凝胶电泳可以提高血液制品纯度分析的灵敏度。     

95%乙醇循环系统对人血白蛋白质量的影响分析

目的分析采用低温乙醇工艺制备人血白蛋白时,95%乙醇循环系统对人血白蛋白原液的超滤收率和成品各项质量指标的影响。方法在多批次规模化生产中,分别测定对95%乙醇新增乙醇循环系统前后人血白蛋白原液的超滤收率和成品的纯度、多聚体含量、激肽释放酶原激活剂(prekallikrein activator,PKA)等指标,并将测定结果进行对比。结果新增乙醇循环系统后,人血白蛋白成品的纯度明显升高(P0.001),多聚体含量明显下降(P0.001),PKA无明显变化;同时,人血白蛋白原液超滤收率呈稳定趋势,未表现出明显变化。结论在低温乙醇工艺制备人血白蛋白的过程中,对95%乙醇使用乙醇循环系统自动控制添加过程,可降低操作难度,提高工作效率及操作精细度,更好地实现制品分离过程,进一步提升人血白蛋白产品的质量。     

酶标板法检测甘油三酯净含量方法的优化、验证及其在人血白蛋白层析纯化工艺中的应用

目的优化酶标板法检测甘油三酯(triglyceride,TG)净含量的方法,进行验证,并将其应用于监测人血白蛋白层析纯化工艺中样品的脂类含量,对工艺优化提供指导。方法建立酶标板上快速检测TG含量方法,通过两步酶反应的吸光度值的差值计算TG净含量。确立该方法的标准曲线范围,并进行准确度和精密度进行验证。采用该方法监测层析工艺中样品的TG净含量,优化人血白蛋白层析纯化工艺。结果该方法检测TG的线性范围在78~2 500μg/ml之间,游离甘油(free glycerin,FG)的线性范围在8.13~260μg/ml之间,R2均为0.997。各样品检测结果 CV均4%,回收率在102%~107%之间,准确度较好;同一样品由同一个实验员在同一试验中连续测定6次和由不同的实验员在不同日期内分别测定3次的结果,CV均3%,精密度较好。在人血白蛋白层析纯化工艺中采用去脂剂可将白蛋白样品中的残余脂类去除。结论优化后的甘油三酯净含量检测方法为人血白蛋白层析纯化工艺的优化提供了指导,在血液制品工艺研发过程中具有重要的应用价值。     

重组人血白蛋白与小分子药物结合功能研究

目的研究重组人血白蛋白与小分子药物的结合功能。方法在366nm下检测地西泮与人血白蛋白结合前后吸收值的变化,计算二者的结合常数;华法令与人血白蛋白结合后,用SephadexG-25HPLC柱进行分离,对游离华法令和二者结合产物分别积分,得到华法令与人血白蛋白的结合率。结果重组人血白蛋白与地西泮的结合常数为14·68mol Diaze-pam/mol rHSA,天然人血白蛋白与地西泮结合常数为12·82mol Diazepam/mol HSA。重组人血白蛋白中华法令的结合率为8·69%,而天然人血白蛋白中华法令的结合率为6·73%。结论重组人血白蛋白与天然人血白蛋白小分子药物结合功能基本一致。     

顶空气相色谱法测定血液制品中乙醇残留量

目的建立顶空气相色谱法测定血液制品中乙醇残留量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:Rtx-1301(30 m×0.53 mm×3μm);气化室温度:220℃;柱温:90℃;检测器温度:250℃;载气为氮气,柱流速:2.5 ml/min;氢气流速:40 ml/min;分流比:2∶1;顶空85℃平衡30 min,运行时间:5 min。确定标准曲线的线性范围,并对方法进行重复性、稳定性、准确性、检出限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantitation,LOQ)验证。应用建立的方法测定14批人血白蛋白、静注人免疫球蛋白(p H 4)样品的乙醇残留量。结果该方法色谱峰形良好,峰单一且无其他干扰。标准曲线的线性范围为1.064~21.280μg/ml;同一人血白蛋白样品重复检测6次乙醇残留量的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.34%;人血白蛋白样品于4℃放置0、4、8、12、16、20 h,乙醇残留量检测结果的RSD为2.64%;样品的平均加标回收率及RSD分别为(99.58±1.19)%和1.40%;LOD和LOQ分别为0.266和0.532μg/ml。14批样品的乙醇残留量最高为3号人血白蛋白半成品(0.004 4%),均远低于《中国药典》三部(2010版)的半成品限量要求(0.025%)。结论顶空气相色谱法操作简便,重复性、稳定性、准确性良好,可用于血液制品中乙醇残留量的检测。     

检测人血白蛋白制品中微量铝荧光分析法的建立

目的　建立一种人血白蛋白铝含量的检测方法。方法　采用Lumogallion(荧光镓 )作为荧光试剂 ,以 10 %三氯乙酸去除蛋白 ,0 1%邻菲啉消除Fe3+ 的干扰 ,建立人血白蛋白中铝含量的荧光分析法。结果　检测限度为 6ng ml,CV值为 3 99%～ 5 74 % ,回收率为 92 5 %～ 10 5 4 %。结论　该方法操作较为简便 ,速度快 ,适于在原子吸收光谱仪缺乏的条件下 ,作为人血白蛋白制品中微量铝的检测方法     

检测人血白蛋白中铝含量的石墨炉原子吸收分光光度法的建立

目的 建立一种人血白蛋白铝含量的检测方法。方法 用石墨炉原子吸收分光光度法检测人血白 蛋白（ＨＡＳ）中的铝含量，并对该方法进行分析。结果 检测限度达１ｎｇ／ｍｌ，检测精确度的ＣＶ值为７．６２％，均达满意标 准。结论 该方法可检测出的铝含量符合ＷＨＯ铝含量应≤２００ｎｇ／ｍｌ的要求，可作为实验室常规的铝含量检测方法。     

全氟丙烷人血白蛋白微球注射液配制方法的优化

目的优化全氟丙烷人血白蛋白微球注射液配制方法。方法采用不同辅料超声制备全氟丙烷人血白蛋白注射液,并检测微球的大小及稳定性。结果采用2%右旋糖酐-40溶液作为辅料的配方制备的微球,粒径大小最佳,放置6个月后,各项质量指标几乎无变化,稳定性较好。结论已优化了全氟丙烷人血白蛋白微球注射液的配制方法。     

模制瓶及盐水透析对人血白蛋白制品中铝离子残留量的影响

目的 探讨模制瓶及盐水透析对人血白蛋白制品中铝离子残留量的影响.方法 采用原子吸收法检测5％、10％、20％和25％4种规格人血白蛋白空白制剂(不含人血白蛋白,仅含辛酸钠和氯化钠等辅料配方制剂,不同规格空白制剂的辅料配方相同,仅浓度不同)的铝离子含量,随后分别灌装至不同厂家的模制瓶中,于57℃存放0、2、4、6和8周,...     

人血白蛋白制品浊度与稳定性的分析

目的 研究和确定浊度测定方法用于人血白蛋白的外观和热稳定性试验。方法 采用美国HACH公司2100N Turbidimeter测定人血白蛋白浊度值。结果 压滤法制备的产品的浊度及其热稳定性试验后的浊度增加百分比明显高于离心法。pH值和稳定剂不影响制品的浊度。结论 人血白蛋白浊度及浊度增加百分比可用于制品的外观和热稳定性试验。     

无明胶和人血白蛋白腮腺炎减毒活疫苗冻干保护剂配方的筛选

正目前已有部分冻干疫苗使用无明胶、无人血白蛋白保护剂,如水痘疫苗、甲型肝炎疫苗等,而现行的冻干腮腺炎减毒活疫苗仍以明胶和人血白蛋白作为保护剂,因此,有必要开发一种无明胶和人血白蛋白的保护剂配方。本文对3种不同保护剂配方的冻干腮腺炎减毒活疫苗的质量进行了比较,现将结果报道如下。     

血液制品管理全面收紧

日前，国家食品药品监督管理局（SFDA）发出《关于进一步实施血液制品批签发工作的通知》，加速扩大血液制品批签发管理的范围。通知显示．除了已经纳入批签发管理的人血白蛋白外，自6月1日起，对人免疫球蛋白类制品也将实施批签发。而到2008年1月1日，     

应用ELISA检测rIL-2含量

目的 应用ELISA法检测重组人白介素—2(rIL-2)含量。方法 采用ELISA双抗体夹心法测定rIL-2含量,同时对该法的灵敏度、精密性、重复性、特异性进行分析。结果 白介素-2含量的实测值与理论推算值基本一致,偏差小于10％,灵敏度高,精密性和重复性好,特异性强,可排除保护剂人血白蛋白对检测结果的干扰。结论ELISA法是检测rIL-2含量较为理想的方法。     

重组人血白蛋白蛋白质含量RS20国家标准品的研制

目的 制备重组人血白蛋白蛋白质含量RS20国家标准品,用于重组人血白蛋白产品的质量控制.方法 以重组人血白蛋白为原料,经灭菌注射用水稀释、除菌过滤后,进行分装、冻干,制备重组人血白蛋白蛋白质含量RS20国家标准品.8家实验室采用凯氏定氮法进行协作标定,并检测标准品的分装误差、水分含量、均匀性及稳定性.结果 8家实验室测...     

应用层析法分离高纯度人血浆白蛋白

应用层析法分离提纯人血白蛋白，其纯度高于cohn改良法，而多聚体含量又远低于Cohn法。     

气相色谱法检测重组人血白蛋白中异丙醇残留量

目的建立重组人血白蛋白产品中异丙醇残留量检测的气相色谱法。方法色谱条件:DB-624毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm,3μm);进样口温度150℃;检测器为FID,温度200℃;空气流量400 ml/min;氢气流量40 ml/min;载气为高纯氮气,流量6.0 ml/min;程序升温:起始温度60℃保留5 min,以40℃/min升至120℃,保持3 min;分流进样,分流比为5∶1;进样量为1μl。以正丁醇为内标,对建立的方法进行专属性、精密度、准确度、耐用性验证,确定该方法的线性范围和检测限。用建立的方法检测3批重组人血白蛋白样品中异丙醇残留量。结果异丙醇浓度在10~300μg/ml范围内,与异丙醇与正丁醇峰面积比的线性关系良好(r=0.999 9),最低检出限为0.09μg/ml;该检测条件下与异丙醇性质相似的甲醇和乙醇对异丙醇的测定基本无影响;异丙醇与正丁醇峰面积比3次检测结果的RSD为0.4%,精密度良好;不同浓度异丙醇分别与重组人血白蛋白等体积混合,3次检测结果的回收率在94.2%~105.0%之间,准确度良好;不同检测器温度和不同进样口温度条件下测定的色谱峰面积的平均RSD分别为1.6%和2.2%,对测定结果基本无影响。3批重组人血白蛋白样品均未检测出异丙醇残留,符合《中国药典》三部(2015版)推荐标准。结论建立的气相色谱法快速、准确,可用于检测重组人血白蛋白中异丙醇的残留量。     

酸碱处理去除血液制品中热原工艺的探索

目的寻找酸碱处理去除血液制品中热原的最佳工艺。方法将高热原的制品通过调整其 ｐＨ。 离子强度、蛋白浓度等参数后,在不同的温度孵放不同的时间,监测其热原的变化。结果在ｐＨ１０或ｐＨ４孵放一 定时间后,内毒素含量明显降低,经 ｐＨ１０、３７℃孵放的人血白蛋白（ＨＡＳ）制品用鲎试法（ＴＡＬ）和家兔法检测热原均 合格,且其他相关指标也均达到现行《中国生物制品规程》要求。结论酸碱处理是去除血液制品中热原的一个经 济、有效的方法。     

人血白蛋白价格全国按基准价执行

各地人血白蛋白最高临时零售价“诸侯割据”的局面今天终于告一段落。9月25日，国家发改委新公布的10g50ml／瓶360元的基准价于28日开始正式执行。此次调价允许进口人血白蛋白价格上浮5％；同时，为了保障边远地区的供应，允许青海等9省（区）销售的人血白蛋白价格上浮5％。对于人血白蛋白价格新政，业内工商企业均表示将对各地的价格做统一梳理，执行统一零售价。这将有助于产业的健康发展。[第一段]     

实现自控分离对人血浆蛋白质量的影响

目的对低温乙醇血浆蛋白分离工艺实现自控后分离的人血浆蛋白各项质量指标和收获率进行评价。方法按照《中国药典》三部(2005版)规定的方法和标准,对低温乙醇工艺实现自控后分离的人血浆蛋白样品各项指标进行测定,并将测定结果与自控前的制品进行比较。结果连续测定实现自控后分离的71批人血白蛋白和52批静注人免疫球蛋白(IVIG)样品,并与实现自控前的82批人血白蛋白、29批静注人免疫球蛋白(IVIG)成品检定结果进行比较,发现人血白蛋白及IVIG的纯度和收获率均有明显提高,多聚体含量明显下降,其他指标(离子含量、吸光度等)均无明显改变,且制品质量稳定,符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论低温乙醇分离蛋白实现自控后,进一步提高了人血浆蛋白的质量,使分离过程更加容易控制,制品质量更加趋于稳定。     

高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量

目的应用高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量。方法参照《中国药典》三部(2005版)附录ⅢD,采用凝胶色谱柱,以紫外吸收检测器在280nm波长处检测,按照《中国药典》三部(2005版)附录ⅢB中的公式计算人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量。分析线性关系,计算加标回收率,并验证该方法的重复性。结果乙酰色氨酸含量在0.16～0.64mmol/L的范围内与峰面积有良好的线性关系,相关系数为0.99992;3个浓度梯度(0.16、0.32和0.48mmol/L)乙酰色氨酸的加标回收率分别为100.4%、103.9%和102.8%;连续5次检测人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量,变异系数为0.46%。结论应用高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量,结果准确可靠。