MicroRNA-199a-3p在肾癌中的表达及作用

目的 检测microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)在肾癌细胞株和组织中的表达情况并探究miR-199a-3p在肾癌细胞中的作用.方法 利用实时定量RT-PCR检测miR-199a-3p在肾癌细胞和组织中的表达水平;利用miR-199a-3p模拟物转染肾癌细胞786-0上调miR-199a-3p后,通过CCK-8、克隆形成、Transwell以及细胞周期检测来探究其在肾癌细胞中的作用.结果 miR-199a-3p在肾癌细胞中明显低表达,在78%(14/18)的肾癌组织中亦明显低表达;上调miR-199a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、存活和侵袭并能诱导细胞周期G1期阻滞.结论 我们的研究显示在肾癌中miR-199a-3p明显低表达并参与肾癌的发生、发展,这表明miR-199a-3p具有作为肾癌诊断和治疗靶点的潜能.     

上调lncRNA SNHG12与miR-199a-5p/FZD6轴对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化的影响

背景与目的：肝细胞癌（HCC）是临床上常见的恶性肿瘤之一,侵袭、转移和术后复发是导致HCC患者死亡的主要原因。目前认为长链非编码RNA（lncRNA）的失调可能与各类癌症的发生和转移有关。有研究显示lncRNA SNHG12在HCC组织表达明显上调,但其具体功能尚不清楚。故本研究探讨lncRNA SNHG12在HCC细胞中的作用及机制。 方法：用qRT-PCR检测SNHG12以及预测到的靶miRNA及靶基因（miR-199a-5p与FZD6）在HCC细胞HepG2细胞与人肝内胆管上皮细胞HIBEC中的基因表达量,观察下调SNHG12对HepG2细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;采用miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析SNHG12和miR-199a-5p之间的关系,分析下调miR-199a-5p对HepG2细胞增殖、侵袭和EMT的影响,以及SNHG12对miR-199a-5p作用的影响;TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-199a-5p和FZD6的关系;检测过表达及下调FZD6对HepG2细胞增殖、侵袭和EMT的影响,以及SNHG12和miR-199a-5p对FZD6表达的影响。 结果：与HIBEC细胞比较,HepG2细胞中SNHG12表达量明显升高、miR-199a-5p表达量明显降低、FZD6表达量明显升高（均P<0.01）。下调SNHG12表达,HepG2细胞增殖、侵袭和EMT被明显抑制,过表达SNHG12作用则相反（均P<0.05）。SNHG12与miR-199a-5p特异性结合,下调miR-199a-5p促进HepG2细胞增殖、侵袭与EMT,过表达miR-199a-5p则起到抑制作用（均P<0.05）。过表达miR-199a-5p对HepG2细胞的作用,能部分被同时过表达SNHG12所逆转（均P<0.05）。miR-199a-5p靶向FZD6,下调FZD6后HepG2细胞增殖、侵袭与EMT明显抑制,过表达FZD6则相反（均P<0.05)。下调SNHG12抑制FZD6的基因和蛋白表达,而下调miR-199a-5p则促进FZD6的表达（均P<0.01）;与单独下调miR-199a-5p比较,同时下调SNHG12和miR-199a-5p,FZD6的表达被抑制（P<0.01）。 结论：HCC细胞中lncRNA SNHG12的上调可能通过影响miR-199a-5p/FZD6轴促进HCC细胞的增殖、侵袭和EMT过程。     

长链非编码RNA NORAD和微小RNA-199a-3p在食管鳞癌病人血清中的表达及其临床意义

目的 探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)、微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)在食管鳞癌病人血清中的表达,分析其对食管鳞癌的诊断价值。方法 2018年1月～2022年12月间我院收治的食管鳞癌病人286例(食管鳞癌组),记录其临床病理特征,同期纳入健康体检者204例(对照组)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清LncRNA NORAD、miR-199a-3p表达水平;采用Pearson相关性分析血清LncRNA NORAD与miR-199a-3p表达水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA NORAD、miR-199a-3p表达水平对食管鳞癌的诊断价值。结果 食管鳞癌组血清LncRNA NORAD表达水平高于对照组,miR-199a-3p表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌病人血清LncRNA NORAD与miR-199a-3p表达水平呈负相关(r=-0.649,P<0.05)。有淋巴结转移、TNM分期为T3～T4期、低分化的食管鳞癌病人LncRNA NORAD高表...     

微小RNA-148a-3p对肝癌树突状细胞活化的影响及其机制

目的探讨微小RNA(miR)-148a-3p对肝癌树突状细胞活化的影响及其机制。方法分离肝癌患者外周血树突状细胞, 通过双荧光素酶报告验证miR-148a-3p和细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)的靶向关系。树突状细胞分为4组:对照组、miR-148a-3p组、SOCS1组和miR-148a-3p+SOCS1组。通过转染miR-148a-3p类似物和/或SOCS1质粒来实现过表达。检测各组细胞中miR-148a-3p和SOCS1蛋白、抗原呈递蛋白(CD11c和CD86)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-α(IFN-α)的表达水平和树突细胞迁移能力。多组间的差异采用单因素方差分析(ANOVA), 组间两两比较采用SNK-q检验。结果 miR-148a-3p组的miR-148a-3p水平高于对照组(4.21±0.38比1.00±0.07, t=66.461, P<0.05), SOCS1组的SOCS1蛋白表达水平显著高于对照组(2.91±0.25比1.00±0.08, t=58.212, P<0.05)。miR-148a-3p+SOCS1组的SOCS1蛋白水平显著高于...     

lncRNA MEG3靶向调节miR-27a-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞GES-1和GC细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics组;比较各组AGS细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系。结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P<0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用。miR-27a-3p是MEG3的靶基因。结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭。     

SIX4和miR-103a-3p在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探究SIX同源盒蛋白4（SIX4）、微小RNA（miR）-103a-3p在胆囊癌组织中的表达情况,以及二者对胆囊癌细胞增殖、侵袭的影响。方法 胆囊癌组织及癌旁组织取自永州市中心医院2019年10月至2021年9月32例接受手术治疗的胆囊癌患者,并将体外培养的胆囊癌细胞系GBC-SD分为对照组、mimic NC组、miR-103a-3p mimic组、miR-103a-3p mimic+pc DNA3.1组、miR-103a-3p mimic+SIX4组。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测SIX4 mRNA、miR-103a-3p水平;蛋白印迹法检测SIX4、增殖细胞核相关抗原Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）以及基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9蛋白水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况。双荧光素酶验证SIX4 mRNA 3’UTR与miR-103a-3p的结合作用。结果 与癌旁组织相比,胆囊癌组织中SIX4 mRNA水平升高,miR-103a-3p水平降低（P<0.05）。miR-103a-3p靶向负调控SIX4。与对照组、mimic NC组比较,miR-103a-3p mimic组细胞中SIX4 mRNA和蛋白水平,OD₄₅₀,侵袭数量,Ki-67、PCNA、MMP2、MMP9蛋白水平降低,miR-103a-3p水平升高（P<0.05）;与miR-103a-3p mimic+pc DNA3.1组比较,miR-103a-3p mimic+SIX4组上述各项指标均被逆转。结论 胆囊癌组织中SIX4水平升高、miR-103a-3p水平降低,过表达miR-103a-3p可能通过靶向抑制SIX4表达,从而抑制胆囊癌细胞增殖、侵袭。     

miR-92a-3p靶向EZH2对IL-1β诱导软骨细胞合成基质降解酶的影响

目的研究miR-92a-3p靶向zeste基因增强子同源物2(EZH2)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞合成基质降解酶的影响。方法分离培养人软骨细胞,分成Normal、IL-1β(IL-1β处理)、miR-NC+IL-1β(mimics control转染后IL-1β处理)、miR-92a-3p+IL-1β(miR-92a-3p mimics转染后IL-1β处理)组,RT-PCR方法测定miR-92a-3p表达变化,Western blot检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达。靶基因预测软件发现EZH2可能为miR-92a-3p的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将p CDNA3.1-EZH2和miR-92a-3p mimics共同转染到软骨细胞中,检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达情况。结果与Normal比较,IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达减少,MMP-13、MMP-1表达增多,COLⅡ表达减少(P0.05)。与miR-NC+IL-1β比较,miR-92a-3p+IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达增多,MMP-13、MMP-1表达减少,COLⅡ表达增多(P0.05)。miR-92a-3p靶向负调控EZH2表达。p CDNA3.1-EZH2可以逆转miR-92a-3p mimics对IL-1β条件下软骨细胞中MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达影响。结论 miR-92a-3p靶向下调EZH2抑制IL-1β诱导的软骨细胞合成基质降解酶。     

坐骨神经预损伤后背根神经节中miRNomes改变对大鼠脊髓后索损伤修复的影响

【摘要】 目的：研究大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中miRNomes改变对脊髓后索损伤修复的影响。方法：39只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D组。A组（n=12）坐骨神经损伤造模后7d进行T10节段脊髓后索损伤造模,B组（n=12）仅进行T10节段脊髓后索损伤造模,C组（n=12）仅进行坐骨神经损伤造模,D组（n=3）不进行任何造模操作。A组和B组分别于脊髓后索损伤造模后4h、3d、7d、14d取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测,于脊髓后索损伤造模后14d取损伤中心脊髓组织行神经丝蛋白200（NF-200）免疫组织化学染色和HE染色;C组于A组各时间点取材的同时取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测;D组取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测。对A、B两组各时间点背根神经节miRNA表达谱进行微阵列芯片分析和生物信息学分析,观察与坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复有关的miRNA,选出A组中与B组相比变化倍数明显、经过生物信息学分析靶蛋白为Dusp4的miR-199a-5p进行研究。并用RT-qPCR技术对各组miR-199a-5p及A、B和D组Dusp4 mRNA表达进行检测,用Western blot技术检测各组Dusp4蛋白以及A、D组p38蛋白和p-p38蛋白,对A组和B组脊髓后索损伤中心脊髓组织用NF-200免疫组织化学染色及HE染色观察损伤脊髓的恢复情况。结果：芯片分析结果显示miR-199a-5p在A组各个时间点表达与D组相比明显下调,B组miR-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调,3d、7d和14d的表达量无明显变化。RT-qPCR结果显示A组各时间点miR-199a-5p表达与D组相比下调（P＜0.05）,B组miR-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调（P＜0.05）,3d、7d和14d的表达量与D组比较无明显变化,C组各时间点miR-199a-5p表达与D组比较无明显变化。A组和B组各时间点Dusp4 mRNA表达与D组相比无明显变化。A组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后各个时间点与D组比较均有上调且存在统计学差异（P＜0.05）。B组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比显著下调（P＜0.05）,脊髓后索损伤后3d、7d、14d与D组比较无明显差异。C组Dusp4蛋白在各时间点的表达水平与D组比较无明显差异。A组p38蛋白及p-p38蛋白的表达变化趋势与miR-199a-5p趋势一致。在脊髓后索损伤后14d,与B组比较A组损伤中心尾端脊髓NF-200表达明显增加,且损伤中心尾端脊髓白质纤维束形态规整、后索纤维束排列有序。结论：大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中miR-199a-5p表达下调可以促进脊髓后索损伤的修复。     

微小RNA-30a-5p抑制胃癌增殖与侵袭的机制

目的探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Frizzled 2(FZD2)基因激活Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法体外培养胃癌MKN-45细胞;在胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立微小RNA(miR)-30a-5p的敲除和过表达模型, 胃癌MKN-45细胞分为3组:miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组, miR-30a-5p过表达RNA(miR-30a-5p mimics)组和空白对照组(negative control, NC), 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-30a-5p的直接靶基因FZD2基因及Wnt/β-catenin信号通路下游关键基因c-myc的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与直接靶基因FZD2的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮, 分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p i...     

微小RNA-19a-3p通过调控转录因子ETS样蛋白3对乳腺癌细胞阿霉素耐药的影响

目的探讨微小RNA(miR)-19a-3p在乳腺癌细胞阿霉素耐药中的作用及其机制。方法以人乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象, 根据转染物的不同, 将细胞分为对照组、miR-NC组(转染miR-19a-3p mimics阴性对照miR-NC)、miR-19a-3p mimics组(转染miR-19a-3p mimics)和miR-19a-3p mimics+si-转录因子ETS样蛋白3(ELK3)组[共转染miR-19a-3p mimics和ELK3小干扰RNA(siRNA)]。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-19a-3p的表达, RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中ELK3的mRNA和蛋白表达, Western blot法检测细胞中P-糖蛋白(P-gp, ABCB1)的表达, 分别用不同浓度的阿霉素(0、5、10、25、50 nmol/L)处理各组细胞, 细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力, 评价各组细胞对阿霉素的药物敏感性。多组间均数比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用LSD-t法。结果 miR-1...     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的: 研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法: 采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中(分别为过表达组和抑制剂组),并设置miR 阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果: 与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达(P<0.05),而HOXB4在骨肉瘤中高表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞减少(P<0.05)。敲低miR-181a-5p促进骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于S期细胞增加(P<0.05)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因系统验证HOXB4为miR-181a-5p的下游靶基因(P<0.05)。Western blot显示,过表达miR-181a-5p的HOS细胞中,HOXB4蛋白表达低于阳性对照组(P<0.05),而敲低miR-181a-5p的HOS细胞中HOXB4蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论: miR-181a-5p在骨肉瘤细胞中低表达,过表达miR-181a-5p能够抑制骨肉瘤细胞HOS增殖、周期和迁移能力,该作用可能通过靶向HOXB4发挥作用。     

低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响

目的 探讨低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响.方法 24 h内新生SD大鼠,断头处死,分离、培养和传代星形胶质细胞,取本室构建的永生化神经前体细胞,根据培养条件的不同分为3组,每组24孔,对照组永生化神经前体细胞在正常培养条件下培养(O2 17%-CO2 5%-N2 78%);共培养组取第三代星形胶质细胞孵育24 h后接种永生化神经前体细胞,培养条件同对照组;低氧/复氧后共培养组取第三代星形胶质细胞,先置入低氧培养箱(O2 2%-CO25%-N2 93%)中孵育12 h后,恢复正常培养条件12 h,再接种永生化神经前体细胞.3组以相同密度接种永生化神经前体细胞(1×104/cm2),隔天半量置换培养基,培养时间为6 d.共培养6 d后每组取6孔,采用免疫荧光细胞化学法,观察共培养后永生化神经前体细胞的增殖与分化情况,计算其增殖倍数、神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率.结果 与对照组和共培养组相比,低氧/复氧后共培养组永生化神经前体细胞增殖倍数升高(P＜0.05),神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低氧/复氧后星形胶质细胞可促进永生化神经前体细胞增殖,但对其分化无影响.     

成体小鼠肝脏卵圆细胞的分离及培养

目的:建立一种稳定的成体小鼠卵圆细胞的分离和培养方法。方法:采用喂饲2-乙酰氨基芴（AAF）加2/3肝切除方法诱导肝脏卵圆细胞的增殖。经门静脉灌注消化法和等密度离心法分离卵圆细胞，并在体外进行长期培养。免疫荧光和免疫双标法对培养的卵圆细胞加以鉴定。结果:体外培养的卵圆细胞呈集落样生长，稳定传代并已培养至3个月。免疫荧光和免疫双标法证实培养的细胞为卵圆细胞，并显示该细胞具有分化潜能。结论:该方法是一种稳定的成体小鼠卵圆细胞的分离和培养方法，为肝脏干细胞的相关研究和应用奠定基础。     

高转移和低转移前列腺癌株细胞与血小板体外粘附

用体外肿瘤细胞－血小板粘附方法，观察血小板在肿瘤转移中的作用，结果表明用噻唑蓝比色法分析法优于直接计数法，可用于观察肿瘤细胞－血小板粘附差异及影响因素；血小板铺板前体外滞留过程中发生激活反就而与肿瘤细胞粘附增强，血小板铺板后用固定液固定不影响其与肿瘤细胞粘；高转移前列腺癌细胞株细胞和血小板粘附作用随血小板活化而增强，而低转移前列腺癌细胞株细胞无此现象，实验结果提示血小板可能促进高转移肿瘤发生转移，     

缺氧对人脐静脉内皮细胞株增殖与活力的影响

目的了解缺氧对人脐静脉内皮细胞增殖与活力的影响。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞株 EA.hy926分为常氧组和缺氧组。常氧组常规培养,缺氧组细胞充入混合气体(含体积分数94%N_2、5%CO_2、1%O_2)后置于37℃缺氧培养1、3、6、12 h。提取两组细胞总蛋白,用蛋白质印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平;以噻唑蓝法检测细胞活力,并用流式细胞仪检测细胞周期。结果与常氧组比较,缺氧组细胞培养1 h VEGF 表达增高,6 h 达高峰,12 h 降低但仍明显高于常氧组;培养3 h 时细胞 PCNA 蛋白表达开始升高,6 h 达峰值并持续至12 h。培养1、3 h,缺氧组细胞活力较常氧组明显增高(P<0.05),6 h 开始下降,至12 h 时低于常氧组但差异无统计学意义(P>0.05)。缺氧组细胞培养1、3、6 h,G_0/G_1期细胞均较常氧组少,S 期和 G_2/M 期细胞增多,增殖指数(PI)各为(43±9)%、(39±11)%、(40±11)%,均高于常氧组(32±9)%,其中3、6 h 时差异有统计学意义(P<0.05);12 h 时 PI 为(27±4)%,降至常氧组水平以下(P<0.05)。结论缺氧早期可促进人脐静脉内皮细胞增殖,但随着缺氧时间的延长细胞增殖将受抑制。     

紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量及功能变化

目的 探讨紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的数量及功能特点.方法 选取法洛四联症及单纯室间隔缺损病人各10例,采用Ficoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞,用添加牛脑垂体提取物和胎牛血清的M199培基进行体外诱导分化培养.用免疫组化和透射电镜行EPC表型鉴定;采用流式细胞仪计数CD133+/KDR+细胞;采用改良的Boyden小室,黏附能力测定实验和MTT比色法,观察EPC的迁移、黏附及增殖能力.结果 紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞的数量增多[集落记数(14.7±3.1)/100倍视野对(8.2±1.3)/100倍视野;DiIAcldl+/UEA-Ⅰ+细胞数(72.2±9.73)/200倍视野对(51.2±3.83)/200倍视野;CD133+/KDR+细胞百分比(0.66±0.20)%对(0.18±0.08)%,P＜0.01],其迁移能力[(140.6±9.24)/200倍视野对(91.84±8.58)/200倍视野]、黏附能力[(149.00±11.58)/200倍视野对(112.6±7.02),200倍视野]及增殖能力(OD值0.34±0.02对0.27±0.01)增强(P＜0.01).结论 紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量增多,其迁移、黏附及增殖能力增强.     

肝外胆管癌细胞系的建立

为研究胆管癌生物学特性，我们建立了国内首株人肝外胆管癌细胞系，命名为ＱＢＣ＿９３９，组织学上与源癌组织相似。观察结果：ＱＢＣ＿９３９细胞具有较多的微绒毛、微管、微丝及细胞连接，细胞质和细胞膜存在角蛋白和桥粒蛋白等上皮来源特征，且生长速度快，群体活力高，独立生存能力强，并具有较强的致瘤性；该细胞系呈现明显的染色体数目和结构异常，频繁发生断裂、移位、缺失和插入等，多倍体癌细胞比例甚高。结果表明：该细胞系的建立对胆管癌细胞生物学特性研究提供了有价值的资料，并且为进一步的研究提供了稳定、可靠的细胞来源。     

Vero cell growth and differentiation on poly(L-lactic acid) membranes of different pore diameters

In the last few years, the demand has increased for research on polymeric materials, which can be used as substitutes for injured tissues and organs or to improve their regeneration. In this work, we studied poly(L-lactic acid) (PLLA) membranes, a resorbable biomaterial, which were either dense or had different pore diameters (less than 45 microm, between 180 and 250 microm, and between 250 and 350 microm), in relation to stimulation of cell adhesion, growth, and differentiation in vitro. We used Vero cells, a fibroblastic cell line, as the biological model of investigation. We found that cells attached slowly to all PLLA membranes studied. On the other hand, once the adhesion occurs, the cells are able to grow and differentiate on the different polymers. The cells grew to form a confluent monolayer and were capable of producing collagen Type IV and fibronectin on different PLLA membranes. This behavior indicates that cells try to create a better environment to stimulate their growth. This also indicates that Vero cells alter their differentiation pattern once they are producing extracellular matrix molecules related to epithelial differentiation.     

强骨宝方对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:探讨不同浓度强骨宝方提取液直接添加对体外培养成骨细胞增殖、分化与矿化功能的影响。方法:采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从2只1~2日龄SD乳鼠颅盖骨中分离出成骨细胞,鉴定细胞并传代培养后,分为对照组与4个实验组,实验组分别用终浓度为100、50、10、5μg/ml的强骨宝方提取液加入成骨细胞培养体系,对照组用不含强骨宝方提取液的培养基培养,应用MTT比色法、ALP含量测定、矿化结节形成等分别观察其对成骨细胞增殖、分化及矿化能力的影响。结果:100、50及10μg/ml浓度的强骨宝方提取液均具有促进体外成骨细胞增殖、分化与矿化的作用,以100μg/ml与50μg/ml促进作用最强。结论:每毫升含生药2g的强骨宝方提取液,pH=7.0,50μg/ml的添加浓度可能最适合于体外培养成骨细胞的增殖、分化及矿化成骨能力。     

人骨膜细胞生物学特性的实验研究

目的 探讨人骨膜细胞体外培养的生物学特性. 方法 以胫骨骨膜组织为材料,采用组织块法分离细胞,完全培养基培养,通过倒置显微镜观察细胞形态学,锥虫蓝染色计数法检侧细胞增殖能力;流式细胞学分析细胞表面抗原.随机分为3组,成骨实验组和成软骨实验组分别加入不同的定向培养剂,对照组加入完全培养基,采用碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色检测各组细胞的成骨和成软骨分化指标. 结果 骨膜细胞在体外培养条件下呈贴壁生长,细胞生长曲线证实骨膜细胞传至第9代仍保持良好的增殖能力,流式细胞仪检测证实细胞表面抗原CD90及CD105呈阳性;组织化学染色检测证实成骨实验组分化后细胞碱性磷酸酶及钙结节呈阳性,成软骨实验组分化后细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原呈阳性,对照组各项指标均生阴性.结论 骨膜细胞体外培养细胞增殖能力强,具有间充质干细胞的特性和良好的成骨和成软骨分化潜能,其定向诱导分化的成骨细胞和软骨细胞均具有各自明显的细胞功能表达.