亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29基因克隆表达

目的 识别亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29(Hydatid disease diagnostic antigen P-29)的已知序列并行克隆和蛋白表达及免疫学研究.方法 利用在线生物信息学工具序列分析后以亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析.结果 重组体构建成功并以包涵体形式存在,破包涵体纯化蛋白并得到高纯度的蛋白,且该重组蛋白可被亚洲带绦虫及牛带绦虫病人血清识别,表明其具有免疫反应性.结论 亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29可在原核表达系统中获得具有免疫活性的高效表达.     

亚洲牛带绦虫26kDa GST基因表达及免疫学分析

目的 对亚洲牛带绦虫成虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因(glutathione S-transferase,GST)进行克隆、表达和免疫学初步分析研究,为深入研究其生物学功能提供依据.方法 将亚洲牛带绦虫成虫26kDa GST克隆到原核表达质粒pET-30a( )中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-30a( )-Ta GST构建成功.SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白.重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清和亚洲牛带绦虫患者血清,表明其具有免疫反应性.结论 亚洲牛带绦虫成虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达.     

亚洲牛带绦虫NOMO1基因在原核细胞中表达

目的 构建亚洲牛带绦虫NOMO1基因原核重组质粒,进行原核表达、纯化及免疫学研究.方法 以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含NOMO1基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒后再行诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,并用蛋白免疫印迹(Western-blotting)分析其免疫反应性.结果 成功建构了原核重组质粒pET28a(+)-NO-MI1.该基因在大肠埃希菌中以包涵体形式存在,破包涵体后纯化蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达.Western blotting结果显示,该重组蛋白可被亚洲牛带绦虫、牛带绦虫病人血清识别,具有免疫反应性.结论 成功克隆亚洲牛带绦虫NOMO1基因、表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件.     

亚洲牛带绦虫WD40基因表达及免疫学分析

目的 对亚洲牛带绦虫WD40基因进行克隆、表达和免疫学研究.方法 将亚洲牛带绦虫成虫WD40基因克隆到原核表达质粒pET-28a( )中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用免疫印迹试验(Western Blotting)进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明,pET-28a( )-WD40重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果表明,目的 基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达.重组蛋白能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清和患者血清,表明其具有免疫反应性.结论 亚洲牛带绦虫WD40基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达,为进一步研究该蛋白的功能提供了基础依据.     

亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白基因克隆及表达

目的 对亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4(Actin related protein 2/3 complex subunit 4)基因进行克隆、表达和免疫学研究.方法 以亚洲牛带绦虫eDNA文库中肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4的已知序列设计合成一对特殊引物,进行PCR技术扩增目的 基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在CaCl2制备的感受态大肠埃希茵BL21/DE3中经过异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导目的 基因表达,表达产物经过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.由于蛋白在包涵体表达,故通过N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)法纯化获得纯化重组蛋白并用蛋白印迹(Western-blotting)进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明,pET-28a(十)-Arp2/3重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果表明,基因在大肠埃希菌BL21/DE3包涵体中表达,经过包涵体沉淀的溶解、重折叠和离子交换层析方法获得高纯度蛋白.重组蛋白能识别亚洲牛带绦虫患者及牛带绦虫患者血清,表明该蛋白具有免疫反应性.结论 成功克隆亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因,表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件.     

亚洲牛带绦虫Spefl-Like基因克隆、表达及纯化

目的 扩增、克隆和表达亚洲牛带绦虫(Taenia saginata aslatica)Spefl-Like基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化.方法 以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含Spcfl-Like基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化.结果 PCR,双酶切及DNA测序见过均表明重组质粒pET-28a(+)-Spcfl-Like构建成功,该基因在大肠埃希菌中以上清表达,纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达.结论 成功克隆了亚洲牛带绦虫Spefl-Like基因,并表达和纯化了Spcfl-Like蛋白,为研究Spefl-Like的功能及其疫苗等研究提供了基础依据.     

牛带绦虫乳酸脱氢酶基因原核表达及免疫学特征

目的 克隆牛带绦虫乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因在大肠杆菌中表达,研究其免疫学特征.方法 将牛带绦虫成虫LDH基因与质粒pET-28a(+)连接构建原核重组质粒,在大肠埃希菌BL21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blotting)进行分析.结果 牛带绦虫乳酸脱氢酶基因编码332个氨基酸,理论分子量为35.4kDa,PCR、双酶切及DNA测序的结果均证明pET-28a(+)-LDH构建成功;SDS-PAGE结果表明,牛带LDH基因在大肠埃希菌高效表达,经过亲和层析高纯度蛋白,且该重组蛋白可以被亚洲带绦虫、牛带绦虫及猪带绦虫感染病人血清识别,表明其具有免疫反应性.结论 牛带绦虫LDH基因可在原核系统中有免疫活性的高效表达.     

亚洲牛带绦虫自吞噬相关蛋白3基因克隆及表达

目的 从亚洲带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别并预测自吞噬相关蛋白(autophagy related protein3-like,APG3)基因,并将该基因进行克隆表达,为进一步研究其生物学功能提供基础依据.方法 利用生物信息网站及其他分析软件包,分析该蛋白质理化特性等,并将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及测序鉴定之后诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果 该基因全长为1 331 bp,编码区为92～1099,编码335个氨基酸,理论分子量、等电点分别为37 498.5 Da和4.71.PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ta APG3重组质粒构建成功.经过尿素破包涵体法得到纯化蛋白.结论 发现亚洲牛带绦虫APG3基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.     

亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析

目的 通过筛选亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫cDNA质粒文库,识别半胱氨酸分泌蛋白(Ta CRISP),并进行克隆表达,为进一步研究其功能提供基础依据.方法 用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别TaCRISP的全长编码基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能;将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,测序鉴定重组质粒,之后进行诱导表达,表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定.结果 该基因全长1 090bp,编码239个氨基酸,1aa-16aa位为分泌信号肽,理论分子量为26 973.8,等电点为5.96.生物信息分析揭示,Ta CRISP与中殖孔绦虫CRISP一致性为38%,相似性为54%;所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符.SDS-PAGE结果表明,目的 基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中表达成功.结论 发现亚洲牛带绦虫Ta CRISP基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.     

猪带绦虫成虫EF-1基因生物信息分析及原核表达

目的 分析和预测牛带绦虫成虫精氨酰-Trna转移酶(arginyl-Trna-protein transferase,ATE)基因及其编码蛋白的结构域特性,并进行原核表达.方法 利用在线生物信息学网站及工具对牛带绦虫精氨酰-Trna转移酶基因的功能进行预测并将其编码区序列克隆到原核表达载体Pet-28a(+)上,测序鉴定重组质粒.结果 该基因全长1 476 bp,编码区为141～1 617 bp,编码491个氨基酸;该基因为全长基因,无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白的理化性质稳定,理论分子量为56 436.3Da;没有质体、线粒体定位序列;十二烷基一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL21-DE3中表达成功.结论 筛选出牛带绦虫成虫精氨酰-Trna转移酶基因,成功构建重组原核表达质粒.     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

政府公共财政支出分配公平性研究进展

政府公共财政支出是社会再分配的一种形式，其目的是促进社会公平。因此，政府的公共财政支出应该具有较强的目标针对性，应该向社会贫困人群倾斜，使其从中受益。本文通过查阅国内外政府公共财政支出分配公平性的相关文献资料。阐述了相关研究的进展情况，井着重探讨了政府公共财政支出分配公平性的内涵、研究范围、测算方法和研究意义。以及实际研究中存在的问题，最后提出我国政府公共财政支出分配公平性的研究方向和需要进一步完善的地方。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。     

上海市某医院骨科平均住院日影响因素分析

对上海市某医院2003年-2007年骨科出院病人的住院日描述性分析．2003年-2007年骨科的床位利用指数与平均住院日相关性分析．2003年-2007年骨科床位与医护比例分析．2007年骨科前10大病种平均住院目影响因素分别进行单因素相关性分析和多因素逐步回归分析（STATA软件）。通过对骨科10大病种住院日影响因素分析,术前等待天数、手术类型、是否输血分别对10个、9个和8个病种的住院目有影响。输血因素和手术类型是医院不可控、由病人的病情决定的,术前等待天数是管理因素,是最值得医院重视的影响因素。