金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆、纯化与鉴定

金黄色葡萄球菌肠毒素Ａ(ＳＥＡ)是金黄色葡萄球菌分泌的一种肠毒素 ,具有多种生物学活性。作为一种超抗原 ,ＳＥＡ可直接与抗原递呈细胞(ＡＰＣ)表面的ＭＨＣ -ＩＩ类分子及ＴＣＲβ链的Ｖ区结合 ,选择性地大量扩增和激活ＴＣＲＶβ3 和ＴＣＲＶβ1 1 Ｔ细胞[1 ] ,并诱导肿瘤敏感性细胞因子如ＩＦＮ -γ ,ＴＮＦ -α的产生 ,从而达到杀伤肿瘤细胞 ,抑制肿瘤生长的效果。基于此 ,ＳＥＡ被越来越多地应用于多种肿瘤的基因治疗中 ,尤其是传统治疗方法疗效不佳的恶性黑色素瘤的治疗中。 2 0 0 1年1 0月～ 2 0 0 2年 1月利用ＰＣＲ技术成功地从…     

人转铁蛋白—葡萄球菌肠毒素B偶联蛋白的抗肿瘤活性

目的 研究人转铁蛋白（ＨｕＴｆ）与金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）偶联后,其Ｔｆ－ＳＥＢ偶合蛋白的抗肿瘤活性,探讨Ｔｆ作为载体用于肿瘤导向免疫治疗的可能性。方法 利用凋亡细胞指数检测和超抗原依赖的细胞介导的细胞毒（ＳＤＣＣ）效应,观察该偶合蛋白的超抗原活性和激活Ｔ细胞杀伤肿瘤细胞的作用。结果 Ｔｆ－ＳＥＢ偶合蛋白比单体ＳＥＢ能更有效地激活Ｔ细胞的杀伤肿瘤细胞活性,并对ＭＨＣ－Ⅱ类分子阴性的肿瘤瘤细     

超抗原SE抗肿瘤研究进展

超抗原 (ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＳＡｇ)是一组具有强大刺激能力的细菌外毒素或逆转录病毒 ,其无需抗原提呈细胞 (ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ ,ＡＰＣ)内处理加工 ,能直接与ＡＰＣ膜上的ＭＨＣ ＩＩ类分子抗原结合槽外侧非限制性结合 ,以完整的蛋白质分子形式被提呈给Ｔ细胞 ,只需极低浓度 (1～ 10ｎｇ/ｍｌ)即可诱发最大的应答效应 ,导致带有特异性Ｔ细胞受体 β链可变区 (Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｂｅｔａｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓ ,ＴＣＲ Ｖβ)序列的Ｔ细胞大量活化增殖 ,并释放出大量多种细…     

单抗导向超抗原SEA的抗肿瘤作用

近年来,对超抗原(superantigen, SAg)的理论研究及抗肿瘤治疗方面的探索不断深入. 超抗原抗肿瘤是一种在90年代才出现的肿瘤治疗方式,目前已进入Ⅰ期临床试验.在该方面瑞典科学家Dohlsten等学者已走在了世界的前列,并已取得了突出的成就,使超抗原理论得以迅猛发展,成为肿瘤治疗的新热点及方向.     

SEA诱导树突状细胞抗膀胱肿瘤免疫应答的实验研究

目的 研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）刺激后的树突状细胞（ＤＣ）体内诱导的抗膀胱肿瘤免疫效应。方法 分离小鼠Ｔ７３９脾脏ＤＣ,加ＳＥＡ贴壁培养并富集细胞,观察其对ＤＣ功能特性的影响及体内诱导的抗肿瘤免疫保护反应。结果 经ＳＥＡ刺激后的ＤＣ共刺激分子Ｂ７表达显著增加,刺激Ｔ细胞增殖能力明显增强（Ｐ〈０．０５）;在体内诱导出更强的细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）,有效抵抗膀胱肿瘤细胞ＢＴ１７３９的攻击。结论 ＳＥＡ可活化ＤＣ,使后者在体内诱导出显著的抗膀胱肿瘤保护性免疫反应。     

单抗导向超抗原SEA的抗肿瘤作用

近年来,对超抗原(superantigen, SAg)的理论研究及抗肿瘤治疗方面的探索不断深入. 超抗原抗肿瘤是一种在90年代才出现的肿瘤治疗方式,目前已进入Ⅰ期临床试验.在该方面瑞典科学家Dohlsten等学者已走在了世界的前列,并已取得了突出的成就,使超抗原理论得以迅猛发展,成为肿瘤治疗的新热点及方向.     

树突状细胞与消化系肿瘤免疫治疗研究进展

Ｔ细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤过程中起着主导作用。Ｔ细胞的致敏、激活和扩增都有赖于抗原提呈细胞 (ＡＰＣ)提呈相应的抗原多肽并提供激活信号 ,而树突状细胞 (ＤｅｎｄｒｉｔｉｃＣｅｌｌｓＤＣ)是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞。后者能摄取各类抗原 ;表达丰富的主要组织相容性复合物 (ＭＨＣ)分子、共刺激分子、粘附分子 ,分泌能主导初始型Ｔ细胞生成ＴＨ1型应答的细胞因子———ＩＬ - 12 ;在体内外都能诱导特异性的细胞毒性Ｔ淋巴细胞 (ＣＴＬ)生成〔1〕。但ＤＣ在肿瘤中不但数量少 ,而且活性低 ,所以如何激活ＤＣ和得到大量…     

超抗原与感染性疾病

超抗原与感染性疾病中国医科大学第一临床学院（１１０００１）李丽云高双燕１超抗原的概念超抗原（ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ，ＳＡｇ）是近年来发现的一类能高效激活Ｔ细胞增殖并释放大量细胞因子的细菌或病毒产物，比普通抗原多达数千倍以上，故称为“超抗原”。最早在...     

葡萄球菌肠毒素A的细胞增殖诱导能力

目的：观察葡萄球菌肠毒素Ａ的细胞增殖诱导能力及其抗肿瘤作用。方法：ＭＴＴ微量酶反应比色法。结果：纯化ＳＥＡ在１０＾－１２￣１０＾－１５ｇ／ｍｌ浓度范围对体外培养的ＢＡＬＢ／Ｃ鼠脾细胞表现了细胞增殖诱导能力,并呈剂量依赖关系,其中１０＾－７￣１０＾０５ｇ／ｍｌＳＥＡ的作用强于最适量（２５μｇ／ｍｌ）ＰＨＡ。在Ｅ／Ｔ为５￣２０：１条件下,１０＾－５ｇ／ｍｌＳＥＡ活化４８小时的ＢＡＬＢ／Ｃ鼠脾细胞对Ｙａｃ－１细胞的杀伤活性高于ＮＫ细胞,但ＳＥＡ未能增强ＢＡＬＢ／Ｃ鼠脾细胞对Ｂ１６细胞的杀伤活性。结论：葡萄球菌肠毒素Ａ具有较强的细胞增殖诱导能力,据此超抗原特性可应用于肿瘤的生物治疗。     

超抗原诱导效应细胞的过继免疫作用

目的：探讨超抗原诱导的效应细胞抗肿瘤作用。方法：用ＳＥＡ（金黄色葡萄球菌Ａ型肠毒素）在体外诱导Ｃ５７ＢＬ／６鼠的脾细胞，使其成为抗肿瘤的效应细胞，给已皮下注射小鼠Ｌｅｗｉｓｅ肺癌的Ｃ５７ＢＬ／６鼠同时注射这种效应细胞，结果：注射效应细胞的肿瘤明显缩小，结论：ＳＥＡ诱导的效应细胞对肿瘤的生长具有一定的抑制作用。     

共同刺激分子在自身免疫病中的作用

Ｔ细胞活化需要两种不同的信号 :第一信号是Ｔ细胞受体 (Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ ,ＴＣＲ)识别抗原提呈细胞 (ａｎｔｉ ｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌ,ＡＰＣ)上的组织相容复合体 (ｍａｊｏｒｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｒｐｌｅｘ ,ＭＨＣ)和抗原 (ａｎｔｉｇｅｎ ,Ａｇ)复合物 ;第二信号是非抗原特异性信号 ,即共同刺激信号。Ｔ细胞主要表达的共同刺激分子 (ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅ ,ＣＭ )是ＣＤ2 8和ＣＤ152 。ＣＤ152 又称细胞毒Ｔ淋巴细胞相关抗原 4(ｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃ…     

CTL表位预测的方法学进展

ＣＤ8 +αβＴ细胞在机体抗感染和抗肿瘤免疫中发挥着极为重要的作用。现已知 ,ＣＤ8+αβＴ细胞所识别的靶抗原需先经抗原递呈途径以“抗原肽 ＭＨＣＩ类分子”复合物的形式呈现于抗原递呈细胞 (Ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ ,ＡＰＣｓ)或靶细胞表面方可被表达有相应αβＴＣＲ(Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ)的ＣＤ8+Ｔ细胞所识别 ,相应的与ＭＨＣＩ类分子结合的抗原肽即为ＣＴＬ表位 (ＣｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍ ｐｈｏｃｙｔｅｅｐｉｔｏｐｅｓ)。对于一个已知序列的蛋白抗原 ,若单纯用实验方法来鉴定其ＣＴＬ表位 ,常…     

运用短期外周血超抗原反应T细胞系研究超抗原诱导的T细胞凋亡

目的：建立短暂外周血抗原金黄色葡萄球菌Ａ肠毒素（ＳＥＡ）反应Ｔ细胞系,研究ＳＥＡ诱导的Ｔ细胞凋亡。方法：采用超抗原ＳＥＡ剌激ＰＢＭＣ增殖,ｒＩＬ－２维持细胞生长,高速度Ｆｉｃｏｌｌ离心去除死细胞建立细胞系。ＦＣＭ及琼脂糖凝胶电泳检测ＳＥＡ诱导短期外周血ＳＥＡ反应Ｔ细胞系凋亡。结果：ＳＥＡ０．５～５μｇ／ｍｌ,ｒＩＬ－２Ｕ／ｍｌ能有效建立ＳＥＡ反应Ｔ细胞系,此细胞系能在体外维持生长４０ｄ,对ＳＥＡ的     

树突状细胞抗乙肝病毒免疫和抗肝癌免疫

Ｔ细胞介导的免疫应答在抗肿瘤免疫和抗病毒免疫中起主导作用 ,Ｔ细胞的致敏激活和扩增依赖于抗原提呈细胞(ＡＰＣ)提呈相应的抗原多肽和提供共刺激信号 ,分泌Ｔｈ1型应答主导因子 ,诱导机体生成抗原特异性ＣＴＬ ,并通过细胞溶解机制和非细胞溶解机制对肿瘤或病毒产生杀伤或抑制 ,因而ＡＰＣ是启动机体产生抗肿瘤免疫和抗病毒免疫的中心环节 ,能否进行有效的抗原提呈直接关系到免疫激活或免疫耐受的诱导。ＡＰＣ包括树突状细胞 (Ｄｅｎｄｒｉｔｉｅｃｅｌｌｓ,ＤＣ)、巨噬细胞、Ｂ细胞等 ,其中ＤＣ是机体最有效、功能最强的抗原提呈细胞 ,…     

Fas抗原在超抗原诱导T细胞凋亡中的作用

目的：研究Ｆａｓ抗原介导的死亡效应在超抗原诱导Ｔ细胞凋亡中的作用。方法：ＳＥＡ诱导从人外周血建立的短期ＳＥＡ反应Ｔ细胞系凋亡,１．８％琼脂凝胶ＤＮＡ电泳观察凋亡的特征条带;ＦＣＭ检测Ｆａｓ,ＦａｓＬ的表达量变化,Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光批示剂检测胞浆「Ｃａ＾２＋」ｉ的变化。     

化学合成的转化生长因子α七肽的抗体制备及对BT325细胞增殖…

转化生长因子α（ＴＧＦα）抗体可被用于识别和定位细胞产生的ＴＧＦα及抗肿瘤，作以化学合成的七肽为抗原制备抗体，并观察其生物效应。方法：采用碳化二乙胺为交联剂，将人工化学合成的ＴＧＦα七肽（ＮＨ３－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ａｓｐ－ＣＯＯＨ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联，并以此作抗原免疫家兔制备ＴＧＦα抗体，观察此抗体的生物学效应，结果：ＴＧＦα七肽合成正确，七肽与ＢＳＡ偶联     

CD28与CTLA—4介导的信号传导及其在肿瘤免疫治疗中的作用

在Ｔ细胞的充分激活过程中需要两个刺激信号,一是抗原特异的、由抗原提呈细胞(ＡＰＣ)提呈的ＭＨＣ-Ⅱ-抗原肽与ＣＤ4Ｔ细胞表面的ＴＣＲ-ＣＤ3复合体交联所提供的第一信号;二是共刺激信号(ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌ),也称第二刺激信号,由ＡＰＣ表面的粘附分子与ＣＤ4Ｔ细胞表面相应受体结合及细胞因子与其相应受体结合所提供,共刺激信号是非抗原特异性的,但为Ｔ细胞抗原特异性激活所必需。在共刺激信号中,ＣＤ28/ＣＴＬＡ-4:Ｂ7这对粘附分子最为引人注目,其所介导的信号传递作用在Ｔ细胞激活和效应过程中均起重要作用。本文…     

LFA－1、LFA－2、CD44和CD45分子对T细胞的共刺激作用

为了解粘附分子（Ａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）在Ｔ细胞激活中的作用及其机制，作者采用ＴＣＲ－ＣＤ３复合物、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－２、ＣＤ４４和ＣＤ４５特异性单克隆抗体刺激，ＦｃγＲＩＩ阳性或阴性肿瘤细胞刺激，以及刺激阻断的方法，以ＩＦＮ－γ定量检测作为Ｔ细胞激活的标志，研究了ＴＣＲ－ＣＤ３复合物交联（Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ），交联的不同形式，ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－２、ＣＤ４４和ＣＤ４５分子对Ｔ细胞激活的影响及其机制。结果提示：ＴＣＲ－ＣＤ３复合物的持久性交联是Ｔ细胞体外激活的必要条件，上述４种粘附分子是Ｔ细胞激活的共刺激分子，其作用机制不仅是细胞间的粘附，而且还作为各自独立的刺激分子影响Ｔ细胞的信号传递。     

双抗体夹心法检测胆管癌患者血清中胆管癌相关抗原的临床意义

胆管癌相关抗原（ＣＣＲＡ）是我们从人胆管癌组织中提取的一种新的肿瘤标志物。建立了检测ＣＣＲＡ的ＥＬＩＳＡ方法，检测了４０例正常人及２６８例良恶性疾病病人血清的ＣＣＲＡ浓度，后者包括胆管癌３６例、原发性肝癌４０例、胰腺癌２６例、胃癌３１例、结直肠癌３４例、肺癌１７例、肝硬变２０例、胆石症４０例及胃溃疡２４例。结果显示：４０例正常对照组的血清ＣＣＲＡ浓度为（１４．３８±７．３４）μｇ／ｍｌ（ｘ±ｓ），正常上限为２８．９５μｇ／ｍｌ（ｘ＋２ｓ）；血清ＣＣＲＡ诊断胆管癌的敏感性是７７．７８％，明显高于其它肿瘤组（０～２５）％（Ｐ＜０．００１），特异性是（７５～１００）％。认为对于胆管癌的诊断，ＣＣＲＡ可能是一种较特异的肿瘤相关抗原。     

肺癌,食管癌患者血清鳞癌相关抗原水平的临床意义

作者对１１９例肺癌（鳞癌８０例、腺癌２５例、小细胞癌８例、大细胞癌６例），６２例食管鳞癌和２５例良性病变病人进行血清鳞癌相关抗原（ＳＣＣ－Ａｇ）测定，肺鳞癌阳性率为６２．５％、食管鳞癌为３２．３％，良性病变组检测均为阴性。手术前ＳＣＣ－Ａｇ的阳性率与肿瘤的分期呈正相关。因此ＳＣＣ－Ａｇ是鳞癌较特异的标记，特别对于肺鳞癌意义更大。根治性切除病人血清ＳＣＣ－Ａｇ在７２小时内转阴，而姑息性切除或探查术者仍停留在高值，该抗原复又回升提示肿瘤转移或复发，持续阴性者尚未发现肿瘤转移或复发，因此ＳＣＣ－Ａｇ可准确反映手术疗效及监测肿瘤的复发。