合成肽作抗原诊断HIV感染的酶免疫方法的研究

本方法克服了基因重组抗原制备复杂、非特异性强及难以纯化的缺点,价廉、安全、快速且重复性好。一、材料和方法1.HIV 多肽抗原 SP1、SP2分别位于HIV-1gp41 和 HIV-2gp36 区域。用AB1431A 型多肽合成仪以固相法合成,两种多肽混合包被,剂量均为0.5ug/孔。2.酶标记物辣根过氧化物酶标记的单克隆抗人 IgG。     

我国首例HIV-2感染者的确认

目的 HIV-2抗体的确认。方法 用多种血清学检测方法测定一份可疑HIV-2抗体,并用HIV-2特异性免疫印迹试剂盒确认。结果 从一个科特迪瓦回国人员采集的血液标本经FAGT(GBC,HIV-1 2)和ELISA(Vironostica,HIV-1 2)检测为HIV抗体阳性,使用HIV-1 2免疫印迹试验(WB)证实该血清含有HIV-2特异性抗体,其中LiaTekⅢWB出现HIV-1 p24和HIV-2的gp105、gp35 3条反应条带,HIV Blot 2.2WB出现HIV-1 p24和HIV-2 gp36 2条反应带,继续用HIV-2特异性的HIV-2 Blot 1.2试剂盒检测,出现gp125、gp80、P68、p56、gp36、p26和p16条带,而HIV-1感染者血清仅出现p26反应带,因此,确认检出HIV-2抗体阳性者。结论 发现我国首例HIV-2病毒感染者。     

抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义

目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB／c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体（mAb）,用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵（SAS）纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的最佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb：7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1μg/L。结论获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。     

艾滋病絮谈(三十三)

一、抗 HIV-1的新药 SJ-2176SJ-2176是最近根据 HIV-1gp120和gp41的氨基酸序列合成的,能阻止 HIV-1与靶细胞融合的一种多肽。它能选择性地作用于 HIV-1gp41N-末端的融合片段,从而阻止了艾滋病毒与靶细胞膜融合,使得 HIV-1     

适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。     

HIV—1感染者确认实验带型分析

对169份初筛为HIV阳性的血清进行确认实验,发现166份为HIV—1阳性,2份可疑,1份阴性.阳性反应中,外膜蛋白抗原gp160出现频率最高,为100%;多聚酶抗原p66为97%,核心抗原p24为95.2%,提示这三种抗原为HIV-1感染的重要的标志性抗原.其中有20份样本出现HIV—2型反应条带,感染类型需进一步证实.     

以多肽为抗原的HIV ELISA检测试剂的研究与开发

［摘要］　目的　采用四种特异性化学合成多肽抗原(HIV-Ⅰ gp41、gp120、p24和HIV-Ⅱ gp36)作为包被主要原材料,制备成检测HIV-Ⅰ/Ⅱ抗体的试剂盒。方法　用棋盘滴定法选择合适的抗原包被浓度及酶标抗原的工作浓度,经过优化检测系统后,对本试剂盒进行相关的性能验证,并以上海科华、厦门英创及珠海丽珠试剂作为对照。结果　研究得出合适包被抗原浓度为5 μg/ml,酶标抗原工作浓度为1∶160。经过优化检测系统试剂的检测,CUT-OFF值为0.207,灵敏度为97.2%,特异性为98.6%。试剂主要活性成分的稳定性及检测的重复性良好,与对照试剂检测结果一致。结论　以化学合成多肽抗原为主要包被原材料制备成检测HIV抗体的试剂盒具有可行性,试剂盒主要活性成分稳定,且具有较好的检测敏感度和特异性。     

人工合成gp210多肽抗原在原发性胆汁性肝硬化中的应用

目的 尝试用gp210抗原的羧基末端氨基酸序列合成多肽做抗原,探索一种简单实用的抗gp210抗体的检测方法.方法 采用棋盘试验法建立抗gp210抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,分别用ELISA方法与免疫印迹法检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)组与对照组的抗gp210抗体.结果 gp210抗原的工作浓度为5 μg/ml.血清抗gp210抗体的吸光度(A)值>0.61(x+3s)为阳性.两种方法在检测抗gp210抗体之间差异无统计学意义(p=0.617),二者之间有很强的相关性(r=0.868,P=0.000).结论 人工合成gp210多肽抗原与天然纯化抗原敏感性和特异性基本一致,可以用于临床检测抗gp210抗体.     

双抗体夹心ELISA法检测HIV-1 p24抗原的初步建立

目的 建立敏感、特异的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1) p24抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,为试剂盒的研制奠定基础.方法 用纯化的基因工程p24表达抗原免疫小鼠及兔子,获得单克隆抗体(单抗)及多克隆抗体(多抗),用单抗包被酶标板,辣根过氧化物酶标记多抗,初步建立HIV-1 p24抗原的ELISA检测方法.进一步与美国杜邦公司的HIV-1 p24抗原检测试剂同时检测88份HIV感染者血清和50份健康献血员血清中的p24抗原,确定其特异性;采用倍比稀释法的p24抗原标准品,测定试剂的灵敏度.结果 两种方法检测88份HIV感染者血清和50份献血员血清中的p24抗原.结果 均为阴性(符合率为100%);自建ELISA法检测HIV-1 p24抗原的灵敏度为100pg/ml.结论 初步建立了检测HIV-1 p24抗原的ELISA法,与国外同类试剂比较,本法的特异性和灵敏度均接近国外同类试剂,有较好的特异性和灵敏度,为进一步研制HIV-1 p24抗原ELISA检测试剂盒打下了基础.     

两种试剂在HIV确证试验中的比较

目的为减少艾滋病病毒(HIV)检测中不确定结果的产生,缩短窗口期,寻找一种更准确、灵敏度更高的试剂。方法对已检测的9份HIV早期感染者的血清,及其阳转后的血清,分别用两种HIV抗体确证试剂盒检测并进行比较。结果 MP-WB试剂对9份HIV早期感染标本的检测结果均为HIV-1抗体不确定,RIBA试剂的检测结果为7份HIV-1抗体阳性,2份HIV-1抗体不确定。两种确证试剂对早期感染标本检测时,条带的主要区别在于是否检测出gp41带。两种确证试剂对9份阳转后血清的检测结果均为HIV-1抗体阳性。对RIBA与MPWB试剂的一致率和对gp41带检测能力进行McMemanr检验,差异有统计学意义(P=0.016,P=0.008)。结论与目前常用的MP-WB相比,RIBA试剂可以缩短HIV抗体确证实验的窗口期,减少不确定结果的产生。     

GENSCREENULTRA HIV抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒的敏感性评价

目的评价BIO-RAD公司开发研制的人类免疫缺陷病毒（HIV1＋2）抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒（GENSCREEN~ ULTRA HIVAg-Ab）,对不同来源样本检测的敏感性。方法以法国生物梅里埃公司生产的HIV1＋2抗原/抗体ELISA检测试剂为参比试剂,分别使用评价试剂和参比试剂检测621例样本,分析两种试剂检测HIV抗原/抗体的敏感性。结果评价试剂和参比试剂检测502份HIV感染者/AIDS患者临床血浆标本均为阳性,符合率为100%,敏感性为100%。评价试剂和参比试剂检测92份HIV分离培养上清液,评价试剂检出89份阳性、参比试剂检出31份阳性,表明评价试剂检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。另外,又检测了27份HIV抗原系列稀释样本,计算出评价试剂检测HIV抗原的敏感性是参比试剂的4～8倍。结论评价试剂检测HIV抗体的效果与参比试剂相同,检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。     

GENSCREEN~ULTRA HIV抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒的敏感性评价

目的评价BIO-RAD公司开发研制的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒(GENSCREEN~ ULTRA HIVAg-Ab),对不同来源样本检测的敏感性。方法以法国生物梅里埃公司生产的HIV1+2抗原/抗体ELISA检测试剂为参比试剂,分别使用评价试剂和参比试剂检测621例样本,分析两种试剂检测HIV抗原/抗体的敏感性。结果评价试剂和参比试剂检测502份HIV感染者/AIDS患者临床血浆标本均为阳性,符合率为100%,敏感性为100%。评价试剂和参比试剂检测92份HIV分离培养上清液,评价试剂检出89份阳性、参比试剂检出31份阳性,表明评价试剂检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。另外,又检测了27份HIV抗原系列稀释样本,计算出评价试剂检测HIV抗原的敏感性是参比试剂的4～8倍。结论评价试剂检测HIV抗体的效果与参比试剂相同,检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。     

山西省HIV-1主要流行株外膜蛋白env基因gp120区变异特性的研究

目的 研究山西省艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)主要流行株env基因gp120区变异特性及其分子流行病学的意义.方法 应用套式聚合酶链反应(Nested-PCR)对山西省56份HIV-1毒株的gp120区进行扩增,使用ABI测序仪测序,应用BLAST、GCG和MEGA等序列分析软件,对gp120区序列进行分析.结果 山西省HIV-1主要流行株在系统进化树上与国际参考株B.CN.RLA2_U71182汇聚在一起.山西省56份HIV-1毒株gp120区的共享序列与同源性较高的国际参考株B.CN.RL42_U71182相比,N-糖基化位点增加了5个,并在V1-V5、C2、C3、C5区段存在独特的特征性氨基酸位点.V3顶端四肽存在着9种类型:GPGQ(39.29%)、GPGR(19.64%)、GPGK(17.86%)、GQGR(10.71%)、GLGR(5.36%),GQGQ、GPGA、RLRR与RPRK分别为1.79%.结论 在山西省HIV感染者中,HIV-1主要流行株仍为B'亚型,其HIV感染者中流行毒株的基因变化较大,gp120基因N-糖基化位点的增加和特征性氨基酸的存在,以及多种V3顶端四肽的存在,表明在较长的流行时间里已经有形成自己独特的序列特征模式的倾向.     

区分HIV-1p24抗原和HIV抗体检测方法的临床应用

目的了解艾滋病病毒(HIV)-1p24抗原和抗体联合检测在临床应用的价值。方法总结从2012-2016年HIV-1p24抗原和抗体联合检测并且能区分是抗原还是抗体阳性的临床结果,并和不能区分抗原抗体的四代酶联试剂结果比较,对其中HIV-1p24抗原阳性的样本进行CD4+T淋巴细胞及HIV核糖核酸(RNA)的检测。结果 2012-2016年共检测HIV-1p24抗原和抗体联合检测样本10 476例,其中HIV抗体阳性777例,HIV-1p24抗原阳性36例,其中抗原抗体同时阳性8例,单独HIV-1p24抗原阳性28例。结论 HIV-1p24抗原和抗体联合检测敏感性高、特异性强,尤其是能将抗原和抗体阳性区分开来,大大缩短了窗口期,提高了HIV急性期感染的检出率。     

应用流式细胞术检测HIV-1感染者外周血p24、gp41和gp120抗原表达的研究

目的分析HIV-1感染者外周血CD4^＋T淋巴细胞p24、gp41和gp120抗原的表达状况,探讨流式细胞术用于检测HIV-1感染的可行性。方法应用三色流式细胞术,对192例HIV-1感染者和29例健康者外周血CD4^＋T淋巴细胞表达的HIV-1 p24、gp41和gp120抗原进行检测。结果HIV-1 p24、gp41和gp120抗原阳性率HIV-1感染组与健康对照比较差异有统计学意义（P均〈0.01）;CD4^＋T细胞数〈200 cells/μl的HIV-1感染人群与CD4＋T细胞数〉200 cells/μl的人群比较差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）;静注吸毒途径感染人群与性途径感染人群比较差异有统计学意义（P〈0.01）。在HIV-1感染人群中,p24、gp41和gp120抗原阳性率四分位数25%75%区间范围分别为1.67%5.95%、1.61%8.12%和0.56%2.35%。结论流式细胞术简便、快速、敏感,可用于HIV-1感染检测。     

南昌地区无偿献血人群HIV-1感染状况及特征分析

目的调查近5年南昌地区无偿献血人群1型艾滋病病毒(HIV-1)感染状况,描述感染者特点,为本地区降低HIV经输血传播风险,制定有效献血者招募及艾滋病防控策略提供数据支持。方法无偿献血者血液标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行抗-HIV初复检筛查,ELISA初筛阴性标本用核酸检测(NAT)方法检测艾滋病病毒核糖核酸(HIV RNA),抗-HIV或HIV RNA反应性标本用蛋白印迹试验(WB)方法进行确证。统计2014-2018年南昌地区献血者HIV抗体检出率,整理分析HIV-1感染者人口学特征及流行病学资料。结果 2014-2018年南昌地区无偿献血者HIV-1型抗体确证阳性57例,HIV抗体不确定30例,抗体检出率0.018%。ELISA-/NAT+1例,WB鉴定为HIV抗体不确定。57例感染者中,男性占98.25%;21～30岁青年人占40.35%;未婚占64.91%;本科文化占33.33%;本市(县区)户籍占43.86%;高校学生占40.35%;初次献血占75.44%,捐献全血占96.49%;男男同性性传播占52.63%,异性性传播占43.86%;合并梅毒感染占14.04%。HIV-1型抗体阳性标本出现WB特异性条带gp160、gp120、p24均占100%,p66占96.49%,gp41占91.23%,HIV抗体不确定标本出现条带p24占66.67%,gp160占36.67%。结论近5年南昌地区无偿献血人群中HIV-1感染者以初次捐献全血的高校青年男男性行为者(MSM)为主。应采用先进的检测方法和试剂开展HIV筛查,保证血液安全。     

HIV诊断试剂的发展

1985年,第1种HIV抗体检测试剂问世,在10多年的时间内,HIV血清学检测方法有了长足的进展,目前已经发展到第4代试剂。回顾HIV检测方法发展的历程,可以看出,AIDS防治的需要是诊断试剂发展的动力,如:为了保证输血安全,试剂的敏感性不断提高,窗口期显著缩短、输血传播HIV的危险性大幅度下降。另一方面,对HIV感染和病毒学认识的不断深入以及分子生物学技术的进步也是HIV诊断试剂发展的前提和保证,如对HIV-2、HIV-1O群、HIV-1亚型等的认识对检测提出了新的要求、基因工程技术的发展提供了新的制备HIV抗原的方法和途径。1 第1代试剂 1983～1984年,HIV体外分离培养成功（当时称为 LAV、HTLV-Ⅲ和 ARV,1986年命名为 HIV）,为通过病毒培养的方法制备HIV抗原奠定了基础。     

提高对HIV-1急性感染和HIV-2诊断能力的检测策略北大核心

针对多年使用的艾滋病病毒(HIV)检测策略存在的问题,以及目前的检测技术研发和应用状况,美国疾病控制和预防中心在2014年6月提出了新的HIV检测策略,联合使用HIV抗原和抗体检测试剂、能够区分HIV-1和HIV-2抗体的诊断试剂以及HIV-1核酸定性诊断试剂,提高对HIV-1急性感染和HIV-2的检出效能,同时减少需要随访的不确定结果,缩短等待时间。文章对这个检测策略进行了全面介绍,并提出制定适合我国的HIV检测策略的建议。     

献血者HIV一次筛查与两次筛查对比分析

正《血站技术操作规程(2012版)》献血者血液人类免疫缺陷病毒(HIV)检测采用2个不同生产厂家的酶联免疫法(ELISA)试剂检测HIV-1和HIV-2抗体或联合检测HIV-1和HIV-2抗原和抗体,而新版(2015版)血液检测策略采用2遍血清学方法和1遍核酸检测或1遍血清学方法和1遍核酸检测。多年来我国血站采用2遍ELISA,为此本文分析献血者血液HIV筛查ELISA 1次筛查方法     

提高对HIV-1急性感染和HIV-2诊断能力的检测策略

针对多年使用的艾滋病病毒(HIV)检测策略存在的问题,以及目前的检测技术研发和应用状况,美国疾病控制和预防中心在2014年6月提出了新的HIV检测策略,联合使用HIV抗原和抗体检测试剂、能够区分HIV-1和HIV-2抗体的诊断试剂以及HIV-1核酸定性诊断试剂,提高对HIV-1急性感染和HIV-2的检出效能,同时减少需要随访的不确定结果,缩短等待时间。文章对这个检测策略进行了全面介绍,并提出制定适合我国的HIV检测策略的建议。