PDTC对膀胱癌EJ细胞Livin、Survivin mRNA表达影响

目的:探讨体外细胞培养,观察核转录因子κB通路特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对膀胱癌EJ细胞凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平的影响。方法:采用Real-time PCR法检测以不同浓度不同时间的PDTC处理的膀胱癌EJ细胞的凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平情况。结果:PDTC可降低膀胱癌EJ细胞凋亡抑制因子Livin、Survivin mRNA表达水平,呈剂量-时间依赖性,且呈负相关(P<0.05)。结论:PDTC可使膀胱癌EJ细胞凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平减少,其机制可能与NF-κB通路被抑制相关。     

五倍子单宁酸体外诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡及机制研究

目的观察五倍子单宁酸(TA)在体外培养条件下对人膀胱癌EJ细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将EJ细胞分为阴性对照组(TA浓度为0μmol/L)和不同梯度浓度TA实验组,阴性对照组加入不含TA药物的培养基,其他各组加入含有梯度浓度TA的培养基;用台盼蓝染色检测细胞损伤率,CCK-8检测细胞增殖率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色以及流式分析检测细胞凋亡率,Western Blot(WB)检测细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),BCL2-AssociatedX蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与阴性对照组比较,实验组TA可降低EJ细胞活力,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,促进细胞内Caspase3表达、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax/Bcl-2比值差异均具有统计学意义(P0.05)。结论TA可能通过调节细胞内Caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达诱导EJ细胞凋亡,抑制增殖,提示TA可能是一种潜在的抗膀胱癌药物。     

Gli抑制剂诱导胃癌细胞凋亡作用的研究

目的 研究Gli抑制剂GANT61对人胃癌细胞AZ521和AGS凋亡的作用.方法 应用不同浓度(0、10、20μmol/L)的GANT61处理AZ521和AGS细胞24 h后,蛋白免疫印迹法(Western blot)观察GANT61作用于AZ521和AGS细胞后对Gli-1、Gli-2、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响.流式细胞术观察细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果 Western blot结果显示GANT61可以剂量依赖性显著下调AZ521和AGS细胞Gli-1、Gli-2和Bcl-2蛋白表达和增加Caspase-3蛋白表达.流式细胞术检测显示10 μmol/L GANT61作用AZ521,AGS细胞后凋亡率为(19.37±0.81)％和(16.1±0.26)％,显著高于0 μmol/L GANT61凋亡率(4.23±0.35)％和(6.00±0.87)％(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GAN761的AZ521细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为355.33±10.12、312.67±7.37,与0μmol/L GANT61 423.33±11.37相比显著降低(P＜0.05);10μmol/L和20 μmol/L GAN761的AGS细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为306.67±4.16、273.33±8.02,与0 μmol/L GANT61388.33±11.06相比显著降低(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AZ521细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为305±9.64、360.24±8.54,与0 μmol/L GANT61 261.12±11.53相比显著增高(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AGS细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为255.00±6.56、310.67±8.50,与0μmol/L GANT61 198.33±2.50相比显著增高(P＜0.05).结论 GANT61通过特异性抑制Gli-1,Gli-2蛋白表达从而调节AZ521和AGS细胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平,诱导细胞凋亡.     

雷公藤内酯酮联合甘草次酸对促进人肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 研究雷公藤内酯酮(TPN)单独或联用甘草次酸(GA)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移、凋亡及相关信号通路Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 采用CCK-8法测定TPN单独或TPN(0.3、0.6、1.2μmol/L)联用GA(2、10、20μmol/L)对HepG2细胞24 h的增殖抑制作用,利用增效指数(q值)判定协同药效;Annexin V-FITC/PI染色法检测给药后细胞凋亡率变化;细胞划痕实验检测药物对细胞迁移能力的影响;Western-blot法检测Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果 TPN、GA单独作用对HepG2细胞24 h的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为(7.28±2.13)和(26.56±6.32)μmol/L。TPN(1.2μmol/L)和GA(2μmol/L)联用组的q值(1.505)最大,细胞抑制率为(62.28±6.13)%;该联用组对HepG2细胞的总凋亡率高于单独使用TPN(P<0.05),同时抑制HepG2细胞的迁移,使细胞内Caspase-3蛋白表达水平升高、Bcl-2...     

亚甲蓝对体外培养C6细胞凋亡的实验研究

目的研究亚甲蓝(MB)对体外培养C6胶质瘤细胞的促凋亡作用及其对Caspase3mRNA水平的影响。初步探讨MB抗胶质瘤的作用机制,并为MB作为肿瘤的辅助治疗提供理论和实验依据。方法以0.1μg/ml MB处理0、6、12、24小时的C6细胞;以0μg/ml、0.05μg/ml、0.1μg/ml、0.15μg/ml MB处理24小时的C6细胞,通过流式细胞仪检测C6细胞的凋亡率;通过RT-PCR进行凋亡相关基因Caspase-3mRNA水平的检测。结果经流式细胞术检测,0.1μg/ml MB作用24小时后细胞大部分集中在G0/G1期,出现典型的凋亡峰。以同一浓度(0.1μg/ml)MB处理不同时间的C6细胞;以不同浓度MB处理同一时间(24小时)的C6细胞,经RT-PCR证实Caspase-3mRNA随MB作用时间延长和浓度增高而升高,各组间均有显著差异(P<0.01)。结论MB对C6细胞具有诱导凋亡的作用,此过程中伴有Caspase-3的升高,且Caspase-3的升高与MB作用时间的延长和作用浓度的增高相一致。提示MB可能通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,且MB的抗胶质瘤作用有明显的时间和浓度依赖性。     

Apelin-13对肝细胞癌HepG2细胞增殖的影响

目的探讨Apelin-13对肝细胞癌HepG2细胞增殖的影响。方法将HepG2细胞按Apelin-13不同浓度分组:10%胎牛血清组(对照组)、0.000 1、0.001、0.01、0.1 μmol/L Apelin-13组,处理时间为24 h;按Apelin-13时效关系分组:0、6、12、18、24 h组,处理浓度为0.1 μmol/L。细胞增殖实验检测各组处理后细胞水平。蛋白质印迹法检测细胞增殖相关蛋白细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平。结果HepG2细胞增殖程度随Apelin-13浓度增加及作用时间延长而增强(P＜0.05)。CyclinD1蛋白表达水平随Apelin-13处理浓度的升高及处理时间延长而升高(P＜0.05);Caspase-3蛋白表达水平随Apelin-13处理浓度的升高及处理时间延长而降低(P＜0.05)。结论Apelin-13在一定范围内促进肝细胞癌HepG2细胞增殖,抑制Caspase-3蛋白的表达,抑制效果随着处理时间延长和浓度的升高而增强。     

灵芝酸A对人前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡的影响

目的 初步探讨灵芝酸A对人前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡的影响.方法 培养DU-145细胞,然后使用0、0.1、0.25以及0.5 mmol/L灵芝酸A进行诱导,处理DU-145细胞24 h后收集细胞然后提取总RNA;处理DU-145细胞48 h后收集细胞提取总蛋白;采用荧光定量PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3和LivinαmRNA水平和蛋白水平的表达变化.结果 采用灵芝酸A处理人前列腺癌细胞DU-145细胞能够显著上调Bax和Caspase-3 mRNA水平和蛋白水平的表达量(P<0.01),显著下调Bcl-2以及LivinαmRNA水平和蛋白水平的表达量(P<0.01),促进前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡,并且随灵芝酸A剂量的升高细胞凋亡增加.结论 灵芝酸A能够促进DU-145细胞凋亡,可能是通过调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3和Livinα的表达发挥作用.     

黄连素联合顺铂诱导人肺癌耐药A549/DDP细胞凋亡的实验研究

目的观察黄连素联合顺铂对A549/DDP细胞凋亡的影响并探讨其相关机制。方法以A549/DDP细胞为研究对象,分别加入12μg/m L的顺铂、浓度为20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的黄连素+12μg/m L的顺铂,设置空白对照孔(PBS孔),分别用药物干预24 h、48 h、72 h,采用MTT法检测细胞增殖活性;各组用药干预48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白表达情况,Real-time PCR法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的m RNA表达水平。结果黄连素联合顺铂能够抑制A549/DDP细胞增殖(P0.01),并具有一定的时间-浓度依赖性。黄连素联合顺铂能够诱导耐药细胞A549/DDP凋亡(P0.01),且呈一定的浓度依赖性。不同浓度的黄连素联合顺铂使促凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、Bax在蛋白和m RNA水平表达上调(P0.05),而抗凋亡基因Bcl-2在蛋白和m RNA水平表达下调(P0.05)。结论黄连素联合顺铂抑制A549/DDP细胞增殖和促凋亡的分子机制可能是上调促凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、Bax的表达,下调抗凋亡基因Bcl-2的表达。     

Clusterin、Livin、Caspase-3蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达

目的:探讨细胞凋亡相关因子Clusterin、Livin、Caspase-3在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测70例乳腺浸润性导管癌、20例乳腺增生和10例乳腺癌旁组织(距癌组织≥4cm,组织学结构正常)标本中Clusterin、Livin、Caspase-3的表达情况,探讨三者的相关性及其与乳腺癌各临床病理学参数间的关系。结果:Clusterin、Livin蛋白在癌组织中的阳性表达率分别为71.4%和64.3%,均明显高于乳腺增生和乳腺癌旁组织的20%、25%(P<0.05)和0%、10%(P<0.05),且Clusterin蛋白与Livin蛋白表达呈正相关(P<0.05)。Caspase-3蛋白在癌组织中的阳性表达率为45.7%,明显低于乳腺增生和乳腺癌旁组织中的75%和80%(P<0.05),且Clusterin、Livin蛋白与Caspase-3蛋白表达呈负相关(P<0.05)。Clusterin蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达随着临床分期的增加阳性表达率显著升高且与组织学分级及淋巴结转移情况有关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),而Livin蛋白的阳性表达率随着临床分期增加显著升高(P<0.05),但与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移无关(P>0.05),Caspase-3蛋白的表达随着临床分期的增加其阳性表达率下降(P<0.05),与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级和淋巴结转移无相关性(P>0.05)。在乳腺浸润性导管癌组织中Clusterin、Livin蛋白与ER、PR的表达负相关(P<0.05),与C-erbB-2的表达无相关性(P>0.05),Caspase-3蛋白与ER、PR表达显著正相关(P<0.05),与C-erbB-2表达无相关性(P>0.05)。结论:Clusterin、Livin可能通过抑制细胞凋亡在乳腺癌的发生发展中发挥重要促进作用,二者可能成为乳腺浸润性导管癌诊断的重要标志物和评估预后的潜在指标;Clusterin与Livin的联合靶向治疗,有望成为乳腺浸润性导管癌治疗的新方法。Caspase-3在Clusterin、Livin抗凋亡通路中发挥着重要作用。     

比卡鲁胺对膀胱癌细胞增殖和侵袭功能的影响

目的:探讨比卡鲁胺对膀胱尿路上皮癌EJ细胞增殖、迁移和浸润功能的影响及其可能机制。方法:0,25,100μmol/L比卡鲁胺处理EJ细胞,MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞PI单染法检测细胞周期;transwell细胞迁移实验法检测细胞迁移能力;transwell细胞侵袭实验法检测细胞侵袭能力;Western blotting检测雄激素受体(AR)、细胞周期蛋白D1、基质金属蛋白酶-2(MMP2)及瞬时受体蛋白家族成员-8蛋白(TRPM8)水平变化。结果:100μmol/L比卡鲁胺处理48 h后,EJ细胞增殖能力明显下降,细胞周期表现为G0/G1阻滞(P<0.05);不同浓度(25,100μmol/L)比卡鲁胺处理48 h后,EJ细胞迁移及浸润能力明显降低,AR、Cyclin D1、MMP2和TRPM8蛋白表达明显降低。结论:比卡鲁胺能抑制膀胱癌EJ细胞增殖、迁移和浸润功能,其机制可能与抑制AR信号通路、降低相关蛋白表达有关。     

隐丹参酮诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的探讨隐丹参酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的隐丹参酮处理MDA-MB-231细胞24 h。采用MTT、流式细胞术检测不同浓度隐丹参酮对MDA-MB-231细胞活性、凋亡的影响。采用Western blot检测MDA-MB-231细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果与0μmol/L对照组相比,10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L隐丹参酮组MDA-MB-231细胞存活率显著降低,且呈剂量依赖(P0.05)。流式细胞仪检测显示隐丹参酮在20μmol/L浓度时MDA-MB-231细胞凋亡率为(6.34±0.52)%,与对照组(6.09±0.76)%相比无统计学差异(P0.05)。在40μmol/L、80μmol/L浓度时MDA-MB-231细胞凋亡率分别是(18.74±0.65)%、(28.04±3.08)%,与对照组相比有统计学差异(P0.05),且两浓度组之间相比差异亦有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,隐丹参酮在40μmol/L、80μmol/L浓度时,MDA-MB-231细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调(P0.05),同时,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达显著增加(P0.05)。结论隐丹参酮可诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关。     

吡柔比星调控原钙黏蛋白10的表达对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡诱导的作用机制研究

目的探讨吡柔比星(THP)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 2014年4月-2019年3月在郴州市第一人民医院实验室进行实验。应用终浓度为0.1mg/L、1mg/L、2.5mg/L、5 mg/L吡柔比星处理多发性骨髓瘤细胞KM3,记为THP 0.1mg/L组、THP 1 mg/L组、THP 2.5mg/L组、THP 5mg/L组;未经任何处理的KM3细胞作空白对照(Con)组;转染pcDNA3.1为pcDNA3.1组,转染pcDNA3.1-PCDH10为pcDNA3.1-PCDH10组,转染si-NC后用1 mg/L的THP处理为THP 1 mg/L+si-NC组,转染si-PCDH10后用1 mg/L的THP处理为THP1 mg/L+si-PCDH10组。MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot法检测蛋白表达。结果不同浓度THP处理后,KM3细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著降低,p21、Bax、PCDH10蛋白的表达水平显著升高(P <0.05);过表达PCDH10后,KM3细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著降低,p21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);抑制PCDH10表达后,THP处理的KM3细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低,Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,p21、Bax蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论吡柔比星可抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控PCDH10表达相关。     

天麻素调节cAMP/PKA/GRK2信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

摘要:目的 探讨天麻素(Gastrodin)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 不同浓度的天麻素(2.5 ~80.0μmol/L)分别处理 U87细胞24、48、72h,检测细胞增殖确定最佳给药浓度;U87细胞分为对照组(Control组)、天 麻素低、中、高浓度组(Gastrodin-L、Gastrodin-M、Gastrodin-H 组,天麻素工作浓度分别为5、10、20μmol/L)、天麻素+ cAMP/PKA 信号通路抑制剂组(Gastrodin+H-89组,20μmol/L 的天麻素与10μmol/L 的 H-89共同处理细胞),分别 检测 U87细胞增殖、凋亡及cAMP及 CyclinD1、p21、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p-PKA、PKA、p-GRK2、GRK2的蛋白表达水 平。结果 2.5~80.0μmol/L的天麻素均可抑制 U87细胞增殖,选择浓度为5、10、20μmol/L的天麻素进行后续实验。 与 Control组比较,Gastrodin-L、Gastrodin-M、Gastrodin-H 组 G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、cAMP、p21、Bax、Caspase3、p-PKA、p-GRK2蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),S期与 G2/M 期细胞比例、集落形成数、CyclinD1、Bcl-2蛋 白表达水平显著降低(均P<0.05),且呈药物浓度依赖性;与 Gastrodin-H 组比较,Gastrodin+H-89组 G0/G1期细胞比 例、细胞凋亡率、cAMP、p21、Bax、Caspase-3、p-PKA、p-GRK2蛋白表达水平显著降低(均 P<0.05),S期与 G2/M 期细 胞比例、集落形成数、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论 天麻素可能通过激活cAMP/PKA/ GRK2通路抑制脑胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡。     

Livin、XIAP和Caspase-3在胃癌组织的表达及临床意义

目的研究凋亡相关蛋白Livin、XIAP和Caspase-3在胃癌的表达变化,分析其与胃癌发生的相关性。方法 TUNEL染色检测细胞凋亡情况,免疫组化方法检测Livin、XIAP和Caspase-3蛋白表达的变化,分析其与胃癌临床病理特征之间的关系。结果胃癌组织的凋亡指数明显低于正常组织和癌旁组织(P<0.05)。Livin、XIAP蛋白在胃癌组织的表达明显高于正常组织和癌旁组织(P<0.05),而Caspase-3蛋白的表达明显低于正常组织和癌旁组织(P<0.05)。Livin、XIAP和Caspase-3蛋白的表达与胃癌的淋巴转移有关(P<0.05)。结论 Livin、XIAP和Caspase-3与胃癌的发生密切相关,可作为胃癌发展和预后判断的参考指标。     

N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过上调Bak和下调Bcl-2蛋白表达诱导前列腺癌细胞凋亡

目的探究N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素(D,L-sulforaphane N-Acetyl-L-cysteine,SFN-NAC)诱导前列腺癌细胞凋亡的分子机制。方法将前列腺癌细胞DU145和PC-3分别培养在6孔板中,当细胞密度达到70%-80%时,分别随机分为对照组(不加SFN-NAC)和加药组(加入终浓度为30μmol/L的SFN-NAC),继续在37℃培养24 h。利用AnnexinⅤ异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡程度;利用Western blot检测Bak、Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组相比,加药组的细胞凋亡率增高(P<0.01)。加药组细胞Bak蛋白表达较对照组升高(P<0.05);Bax蛋白表达也有少量增加,但与对照组相比,无统计学差异(P>0.05);Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);Bax/Bcl-2比值增加(P<0.01);细胞cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.01)。结论 N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过上调Bak、下调Bcl-2蛋白表达,活化Caspase-3,诱导前列腺癌细胞凋亡,说明N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过线粒体途径发挥抗癌作用。     

ROS/SRC/FAK信号通路在膀胱癌疾病进展中的作用机制研究

目的观察活性氧(ROS)/类固醇受体共激活因子(SRC)/黏着斑激酶(FAK)信号通路对膀胱癌疾病进展的影响。方法收集2019年6月—2020年12月同济大学附属同济医院泌尿外科经膀胱镜活检、膀胱部分切除的膀胱癌组织标本69份,同时取癌旁组织作为对照,免疫组化检测组织中SRC、FAK蛋白阳性表达,并比较其在不同病理分化程度、浸润程度中的差异。以膀胱癌T24细胞为研究对象,分为对照组(细胞正常培养)、ROS清除剂N,N’-二甲基硫脲(DMTU)干预组(DMTU浓度20μmol/L)、DMTU+SRC激酶抑制剂(PP2)干预组(DMTU浓度20μmol/L,PP2浓度5μmol/L)。ROS检测试剂盒检测细胞中ROS水平;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭情况;蛋白免疫印迹(WB)检测细胞中SRC、磷酸化SRC(p-SRC)、FAK、磷酸化FAK(p-FAK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、钙蛋白酶2(calpain2)蛋白表达情况。结果SRC阳性表达于细胞膜上,FAK阳性表达于细胞浆中,与癌旁组织比较,膀胱癌组织中SRC、FAK阳性比例升高(χ^(2)/P=44.357/0.000、15.019/0.030)。浸润性膀胱癌组织中SRC、FAK表达阳性率高于非浸润性膀胱癌(χ^(2)/P=18.200/0.000、4.681/0.030)。与对照组比较,DMTU干预组ROS相对含量降低(P<0.05),细胞迁移、侵袭数量及细胞中p-SRC/SRC、p-FAK/FAK、MMP-9、calpain2蛋白水平升高(P<0.05);与DMTU干预组比较,DMTU+PP2干预组ROS相对含量升高(P<0.05),细胞迁移、侵袭数量及细胞中SRC、p-SRC/SRC、p-FAK/FAK、MMP-9、calpain2蛋白水平降低(P<0.05)。结论抑制ROS可激活SRC/FAK信号通路,从而增强膀胱癌细胞迁移、侵袭,加重疾病进展。     

高甘油三酯对人主动脉平滑肌细胞凋亡和炎症因子的影响

目的:探讨高甘油三酯(HTG)对人主动脉平滑肌细胞(HASMC)凋亡和炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法:不同浓度的甘油三酯(TG)干预HASMC 24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达水平；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6和TNF-α的水平。结果:与对照组相比，TG 2.5 mmol/L和5 mmol/L组凋亡率增加(P<0.05),且TG 5 mmol/L组凋亡率高于2.5 mmol/L组(P<0.05),而TG 1 mmol/L组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05); TG处理细胞后，2.5 mmol/L和5 mmol/L组中Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),2.5 mmol/L和5 mmol/L组中IL-6和TNF-α浓度均升高(P<0.05),呈浓度依赖性。结论:中高浓...     

苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响并探讨其作用机制。方法 实验分组如下,A组：膀胱癌EJ细胞不作处理;B组：加入苦豆碱浓度25μmol/L;C组：加入苦豆碱浓度50μmol/L;D组：加入苦豆碱浓度100μmol/L。通过CCK8检测各组细胞的存活率,通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过Western blot法检测各组细胞Bcl-2、Bax、p-Erk1/2蛋白的表达水平。结果 CCK8结果显示,B、C、D组较A组细胞存活率降低（P<0.05）;流式细胞术结果显示：B、C、D组较A组细胞凋亡率增加（P<0.05）;Western blot结果显示：B、C、D组较A组Bcl-2、p-Erk1/2表达水平降低（P<0.05）,Bax表达水平增高（P<0.05）。结论 苦豆碱可降低膀胱癌EJ的存活率,诱导其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Erk1/2的磷酸化而实现的。     

转化生长因子β1对体外培养hRPE细胞增殖率及Ⅰ型胶原表达的影响

目的:探讨TGF-β1对体外培养人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞增殖率及I型胶原表达的影响。方法:实验组用0.1、1、10μg/L的TGF-β1对体外培养hRPE细胞进行干预,对照组只加培养液培养hRPE细胞,用RT-PCR与酶联免疫吸附法检测Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达,用MTT法检测细胞的增殖率。结果:实验组hRPE细胞Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量及细胞增殖率较对照组明显增高(P<0.05),1μg/L组进一步升高(P<0.05),10μg/L组达高峰(P<0.05),呈现明显的剂量依赖性,TGF-β1浓度与Ⅰ型胶原蛋白的表达及增殖率的相关系数r分别为0.863及0.901。结论:TGF-β1能够促进hRPE细胞Ⅰ型胶原的表达和细胞的增殖,这种现象与TGF-β1的浓度成正相关。     

虎杖白藜芦醇对人结肠癌HCT-15细胞增殖及凋亡的影响

目的观察虎杖白藜芦醇对人结肠癌HCT-15细胞增殖及凋亡的影响。方法以0、25、50、100、200μmol/L白藜芦醇作用人结肠癌HCT-15细胞24h以及50μmol/L白藜芦醇处理HCT-15细胞0、12、24、48、72h。采用噻唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对HCT-15细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期的分布以及细胞凋亡率,免疫印迹方法以及聚合酶链反应法观察主要的细胞周期蛋白以及基因的表达情况。结果虎杖白藜芦醇能显著抑制HCT-15细胞生长,并呈现时间-浓度依赖性。细胞形态学检测显示随着药物浓度升高,细胞明显皱缩。流式细胞检测显示,随着白藜芦醇浓度的增加以及作用时间的延长,G0/G1期细胞比例明显增加,其中0、50、100、200μmol/L白藜芦醇处理24h后分别为(42.81±1.21)%、(49.25±0.92)%、(54.67±1.03)%、(64.24±1.17)%,50μmol/L白藜芦醇作用0、24、48、72h后分别为(32.41±1.09)%,(48.35±1.03)%,(55.61±1.33)%,(70.24±1.43)%,各组数据差异均有统计学意义(P0.05)。0、50、100、200μmol/L白藜芦醇组S期细胞比例随着浓度增大而减小,分别为(34.89±0.66)%、(31.07±1.75)%,(28.66±1.71)%,(23.65±0.62)%,各组数据差异均有统计学意义(P0.05)。免疫印迹法检测显示,白藜芦醇以时间依赖方式下调周期蛋白cyclin D1表达,上调p21cip1蛋白以及细胞凋亡相关蛋白剪切行Caspase-3和PRAP表达。结论白藜芦醇能明显抑制HCT-15细胞增殖,并诱导其细胞凋亡,可引起HCT-15细胞的S期阻滞。