Bcl-2反义寡核苷酸增强小细胞肺癌细胞化疗敏感性研究

目的研究Bcl-2反义寡核苷酸是否能增强小细胞肺癌细胞NCI-H69对化疗药物的敏感性.方法将NCI-H69细胞培养传代,细胞共分4组,反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体介导的方法将不同寡核苷酸导入细胞中,Western-Blot法检测Bcl-2蛋白的表达.不同浓度的顺铂与阿霉素作用于4组转染后的细胞,MTT法测定细胞存活分数.结果4组细胞中,与空白对照组相比较,反义寡核苷酸组的Bcl-2蛋白表达明显受到抑制,而正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组细胞的Bcl-2蛋白表达则与空白对照组差别不明显.细胞分别同顺铂与阿霉素作用后,反义寡核苷酸组细胞在各个浓度的存活分数均低于空白组,其差异在统计学上有显著性意义(P＜0.01),而转染正义链和无义链组与空白组比较其差异在统计学上无显著性意义.结论Bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭Bcl-2基因的表达,增强小细胞肺癌细胞对化疗药物的敏感性.     

PDGF-B链基因三链形成寡核苷酸对C6胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察PDGF-B链基因三链形成寡核苷酸(triplex-forming oligonucleotide,TFO)对C6胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响.方法应用免疫荧光流式细胞技术观察PDGF-B链基因TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA表达的影响.应用流式细胞技术观察PDGF-B链基因TFO对C6胶质瘤细胞细胞周期的影响.结果 PDGF-B链基因TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B链基因、PCNA的表达有明显抑制作用,而且抑制作用存在浓度依赖性.PDGF-B链基因TFO能使C6胶质瘤细胞S期的百分率明显降低,阻止细胞由静止期(G0-G1期)进入(S期).结论 PDGF-B链基因TFO能够抑制C6胶质瘤细胞PDGF-B链基因的表达,阻碍细胞进入S期,降低细胞增殖能力.     

bcl-2反义寡核苷酸对小细胞肺癌NCI—H69细胞凋亡的影响

目的探讨bcl-2反义寡核苷酸能否增加小细胞肺癌细胞NCI—H69的凋亡。方法将NCI—H69细胞培养传代,细胞共分4组,反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同浓度的寡核苷酸导人细胞中,WesternBlot法检测bcl-2蛋白的表达,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果与空白对照组比较,反义寡核苷酸组的bcl-2蛋白表达明显受到抑制,而正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组细胞的bcl-2蛋白表达则与空白对照组差异不明显。反义寡核苷酸组细胞在10、20、40umol／L 3个不同浓度时的凋亡率分别是（9．97±1．54）％、（15．28±1．73）％、（21．41±1．85）％,明显高于空白组和正义链、无义链组阴性对照组,且差异有统计学意义（F=7．19～15．48,q=5．21—7．98,P〈0．01）,而转染正义链和无义链组与空白组比较则差异无统计学意义。结论bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭bcl-2基因的表达,增加小细胞肺癌细胞的凋亡。     

反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞MTA1基因表达及侵袭性影响的研究

目的:合成人肿瘤转移相关基因(MTAl)的反义脱氧寡核苷酸,观察其转染后对人骨肉瘤MG-63细胞系中MTA1表达及骨肉瘤侵袭性的影响.方法:免疫细胞染色观察人工合成正义、反义及无意义MTA1基因片段转染人骨肉瘤细胞MG-63后,人肿瘤转移相关基因的表达;RT-PCR和蛋白质印迹法检测MTA1基因mRNA和蛋白质表达水平的变化;Boyden小室体外侵袭实验检测转染前后细胞侵袭力的变化.结果:反义寡核苷酸处理骨肉瘤细胞后,MTA1 mRNA的表达下降(吸光度之比为25.09±0.21),与正义链组、无意义链组和空白对照组(35.19±0.17、33.20±0.23和37.17±0.18)相比差异有统计学意义,P<0.05.Boy-den小室体外侵袭实验检测显示,反义寡核苷酸处理后骨肉瘤细胞的透膜能力明显下降.结论:MTA1同骨肉瘤的转移能力密切相关,反义寡核苷酸的转染可阻遏骨肉瘤细胞中MTA1的表达,并因此有可能限制骨肉瘤的侵袭和转移.     

Survivin反义核酸对大肠癌HT-29细胞化疗的影响

目的:探讨反义寡核苷酸对大肠癌化学治疗敏感性的影响。方法:设计针对Survivin模板序列的经硫代磷酸修饰的反义和正义核苷酸链的寡核苷酸链,导入大肠癌HT-29细胞中,观察其对大肠癌细胞活力、细胞增殖能力的影响以及Survivin反义核酸对大肠癌细胞化疗敏感性的影响。结果:ASODN明显抑制大肠癌细胞的集落形成能力。低浓度5-FU Survivin反义核酸对HT-29大肠癌细胞的抑制作用明显高于单独低浓度5-FU组和低浓度5-FU SODN组,其差异有统计学意义,P<0.05。结论:Survivin反义寡核苷酸作用后的大肠癌HT-29细胞株生长受到抑制,Survivin反义寡核苷酸对体外培养的大肠癌细胞化疗有增敏效应。     

Bel-2反义寡核苷酸增强小细胞肺癌细胞化疗敏感性研究

目的：研究Bcl-2反义寡核苷酸是否能增强小细胞肺癌细胞NCI—H69对化疗药物的敏感性。方法：将NCI．H69细胞培养传代，细胞共分4组，反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组，通过脂质体介导的方法将不同寡核苷酸导人细胞中，Western—Blot法检测Bcl-2蛋白的表达。不同浓度的顺铂与阿霉素作用于4组转染后的细胞，MTT法测定细胞存活分数。结果：4组细胞中，与空白对照组相比较，反义寡核苷酸组的Bcl-2蛋白表达明显受到抑制，而正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组细胞的Bcl-2蛋白表达则与空白对照组差别不明显。细胞分别同顺铂与阿霉素作用后，反义寡核苷酸组细胞在各个浓度的存活分数均低于空白组，其差异在统计学上有显著性意义（P〈0．01），而转染正义链和无义链组与空白组比较其差异在统计学上无显著性意义。结论：Bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭Bcl-2基因的表达，增强小细胞肺癌细胞对化疗药物的敏感性。     

ＤＮＡ双链断裂修复通路与遗传性乳腺癌的关系

遗传性乳腺癌具有家族聚集、早发、双侧等特点,多为易感基因发生胚系突变所致。ＤＮＡ损伤修复是哺乳动物细胞保证遗传物质稳定性的重要机制。双链断裂是最严重的ＤＮＡ损伤之一,修复过程涉及同源重组和非同源末端连接通路。ＤＮＡ双链断裂修复或信号传导相关基因或蛋白功能缺陷可以诱导染色体不稳定而增加乳腺癌的易感性。与ＤＮＡ修复功能相关的链交联剂和ＰＡＲＰ-１抑制剂为ＢＲＣＡ相关遗传性乳腺癌的治疗提供了新的途径。本文就ＤＮＡ双链断裂修复通路相关基因的突变与遗传性乳腺癌发病的关系作一综述。     

广西肝癌高低发病区p53基因突变热点的对比研究

目的 :并行、对比研究广西高、低发病区原发性肝癌p5 3基因突变热点。方法 :参照国际公共p5 3突变数据库资料发生频率最高的 7个突变类型作为检测探针设计寡核苷酸芯片 ,应用该种寡核苷酸芯片技术检测肝癌抑癌基因p5 3上对应的 7个常见突变位点的突变频率及突变类型。结果 :检测高发区组及低发区组肝癌石蜡包埋标本各 14例 ,p5 3突变发生率分别为 6 4 3%及 14 3% ,P <0 0 5。高发区组p5 3突变热点为 2 4 9编码区 ,占该组突变的 77 8% ,突变形式为 2 4 9ser突变。结论 :广西高发区肝癌p5 3基因突变热点为 2 4 9ser突变 ,低发地区肝癌p5 3基因突变点呈散发性 ;应用寡核苷酸芯片技术可并行、高效、多位点检测肿瘤的基因突变     

K-ras和IGF-IR反义寡核苷酸联合转染对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的:已有研究表明K-ras基因点突变及胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor receptor type1,IGF-IR)过表达在胰腺癌的发生发展过程中起着重要作用,针对K-ras mRNA和IGF-IR mRNA的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)均可抑制胰腺癌细胞的增殖。本研究旨在探讨针对K-ras基因12密码子点突变的硫代反义寡核苷酸(K-ras ASODN)联合IGF-IR硫代反义寡核苷酸(IGF-IR ASODN)对人胰腺癌Patu8988细胞体内外增殖和凋亡的影响。方法:顺序特异引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction using special sequence primers,PCR-SSP)法和基因测序检测Patu8988细胞K-ras点突变形式,根据点突变形式设计并合成K-ras ASODN。K-ras ASODN和IGF-IR ASODN分别单独和联合作用Patu8988细胞后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验及透射电镜观察其对Patu8988细胞增殖及形态结构的影响;流式细胞术(FCM)检测K-ras和IGF-IR蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测K-ras和IGF-IR mRNA表达水平;以Patu8988细胞建立裸鼠人胰腺癌模型,观察K-ras ASODN与IGF-IR ASODN联合应用在体内的抗肿瘤效果。结果:PCR-SSP法和基因测序检测表明Patu8988细胞存在K-ras基因第12密码子点突变,其突变方式为GGT→GTT。2～32mg/L的K-ras ASODN和2～32mg/L的IGF-IR ASODN单独应用均能一定程度抑制Patu8988细胞增殖、诱导细胞凋亡,两者联合应用较单独应用抑制作用更为显著(P<0.01)。体内实验表明,K-ras ASODN与IGF-IR ASODN联合应用较单独应用能更有效地抑制BALB/c裸鼠胰腺癌的生长(P<0.01)。结论:K-ras ASODN和IGF-IF ASODN两种反义寡核苷酸对人胰腺癌Patu8988细胞增殖的抑制具有协同作用,其机制可能是联合下调K-ras、IGF-IR蛋白及K-ras、IGF-IR mRNA表达水平。     

XIAP反义寡核苷酸抑制胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的体外实验研究

目的观察X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系BT325的增殖及凋亡的影响。方法将XIAP全硫代反义寡核苷酸，通过脂质体途径转染BT325脑胶质瘤细胞。用CCK-8实验检测细胞杀伤率，RT-PCR和Western blot技术检测XIAP的mRNA和蛋白表达，JC—1检测细胞线粒体膜电位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测Caspase-3活性。结果XIAP反义寡核苷酸能够抑制BT325脑胶质瘤细胞的增殖；XIAP反义寡核苷酸使XIAP的mRNA和蛋白表达均明显下调，mRNA较对照组减少了67．8％，蛋白较对照组减少了63．3％；反义寡核苷酸使线粒体膜电位下降，诱导BT325细胞凋亡，反义寡核苷酸组的凋亡率为54．7％，错义链组为14．O％，两组比较，差异具有显著性（P〈0．05）；反义寡核苷酸使BT325细胞Caspase-3活性明显增高，与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论XIAP可能参与了脑胶质瘤细胞BT325的增殖和凋亡，下调XIAP可抑制BT325细胞增殖及促进其凋亡。     

ODC反义寡核苷酸对K562细胞生长抑制作用

鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)是催化多胺生物合成的限速酶.过去的研究表明多胺在维持肿瘤恶性表型中起着重要作用.用ODC不可逆抑制剂抑制多胺生物合成不仅能抑制肿瘤细胞的增殖而且还诱导细胞分化.近年我们采用反义技术,以ODC反义RNA转染肿瘤细胞,通过对ODC表达的封闭,成功地使其恶性表型得到了逆转.提示抑制肿瘤细胞的多胺合成可能是抗癌的有效途径.本文用ODC反义寡核苷酸控制肿瘤细胞的多胺生物合成,观察了其对K562细胞生长特性的影响,以期为ODC反义寡核苷酸在肿瘤临床的应用提供实验依据.     

BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞的影响

 目的　探索抑癌基因BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP 96 0 7的影响。方法　通过细胞培养 ,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期等 ,观察BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP 96 0 7的影响。结果　BRCA1基因反义寡核苷酸浓度为 1 0 μmol/L时 ,骨肉瘤细胞的生长速度变快 ,集落形成率明显增高 ;流式细胞仪检测发现其引起细胞周期变化 ,细胞增殖活性提高。结论　BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP 96 0 7有明显的影响 ,使得骨肉瘤细胞恶性生物学特性更加显著 ,提示BRCA1基因在人骨肉瘤发展过程中起作用     

bFGF反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡的影响

目的: 探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡的影响,以期寻找肾癌反义治疗的合适药物.方法: 以脂质体作为转染载体,将bFGF反义寡核苷酸转染人肾癌细胞系786-0,应用RT-PCR和Western印迹法检测转染bFGF反义寡核苷酸后肾癌细胞中bFGF mRNA及其蛋白的表达,应用流式细胞仪检测转染bFGF反义寡核苷酸后肾癌细胞的凋亡率.结果: 与转染错义寡核苷酸组相比,转染bFGF反义寡核苷酸组786-0细胞中bFGF mRNA及其蛋白的表达有明显下降,且转染bFGF反义寡核苷酸可明显提高786-0细胞的凋亡率(P<0.01).结论: 经bFGF反义寡核苷酸作用后,肾癌细胞bFGF的表达受到了抑制,同时促进了肾癌细胞的凋亡,因此应用bFGF反义寡核苷酸治疗肾癌可能是一种较有希望的肿瘤治疗新方法.     

甲基化寡核苷酸抑制 MRP2表达逆转人肝癌细胞 HepG2多药耐药的研究

背景与目的：多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,MRP2)在肝癌细胞过表达,是肝癌细胞多药耐药的主要原因之一。胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸中胞嘧啶甲基化可使基因静止不转录。本研究探讨人MRP2基因甲基化寡核苷酸(methylated oligonucleotide,MON)抑制MRP2基因转录,增加肝癌细胞对化疗药物敏感性的作用。方法：设计了与MRP2启动子区域互补的甲基化寡核苷酸(MON),实验设对照组、MON组、非甲基化寡核苷酸(nonmethylated oligonucleotide,NON)组,MON及NON转染肝癌细胞系HepG2,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分析转染后肝癌细胞对化疗药物敏感性的改变;逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)、流式细胞术检测甲基化寡核苷酸对多药耐药相关蛋白MRP2基因转录、蛋白质表达的影响。结果：与对照组相比,MON可以显著抑制MRP2基因转录,下调HepG2细胞MRP2mRNA表达量,抑制MRP2蛋白质的表达,其作用有明显的剂量依赖性,1、2、4、8、16μmol／L MON转染后,MRP2蛋白阳性率分别为18．0％、9．15％、5．73％、3．73％、2．56％,而相同序列的非甲基化寡核苷酸则无此作用。化疗药物对甲基化寡核苷酸转染后HepG2细胞的IC50显著降低。结论：MRP2甲基化寡核苷酸可以抑制肝癌细胞表面MRP2的表达,增加细胞内化疗药物的浓度,逆转肝癌细胞多药耐药。     

影响原癌基因c-myc作用因素的研究进展

c-myc基因是一种核内原癌基因,可编码磷酸化蛋白,与多种核内DNA发生特异性结合,从而在多个方面影响细胞的生长、分化、凋亡及细胞周期进程.c-myc对细胞具有双重作用,既可刺激细胞增殖,也可促进细胞凋亡.c-myc能否刺激细胞增殖或促进细胞凋亡受多种因素的影响,包括多种蛋白、细胞因子、基因、寡核苷酸、反义寡核苷酸、蛋白酶体抑制剂以及c-myc自身因素.通过对这些因素进行调控,可以影响肿瘤的发生和抑制,从而为研究抗肿瘤药物的作用靶点提供理论基础.本文就近年来有关对c-myc的影响因素作一综述.     

WT1反义寡核苷酸对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用

目的:观察WT1反义寡核苷酸作用后的人卵巢癌细胞株SKOV3在裸鼠皮下的成瘤能力.方法:应用反义寡核苷酸(ASODN)技术,将WT1反义寡核苷酸转染到SKOV3细胞中,然后将这种被转染的细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率.结果:脂质体介导的WT1反义寡核苷酸作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低...     

反义寡核苷酸抑制survivin基因表达及肝癌细胞生长的研究

目的:采用反义寡核苷酸抑制肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其对肝癌细胞生长的作用.方法:采用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,Western blot及原位杂交方法检测survivin蛋白及mRNA表达,流式细胞仪检测凋亡细胞比率,检测转染前后细胞贴壁率变化,并绘制细胞生长曲线.结果:survivin反义寡核苷酸转染后,肝癌细胞survivin蛋白及mRNA表达均显著降低,细胞贴壁率显著降低,细胞增殖活性明显受抑,细胞凋亡率显著增加.结论:survivin反义寡核苷酸转染可以有效降低细胞内survivin基因的表达,诱导细胞发生凋亡,抑制肝癌细胞生长.     

DNA-PKCS反义寡核苷酸转染肺腺癌细胞系A549提高放射敏感性的实验研究

目的 通过DNA-PKCS反义寡核苷酸转染肺癌细胞A549,探讨DNA-PKCS对肺癌细胞放射敏感性影响.方法 设0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0.8.0 Gy放射剂量点处理对照组(与转染无关的寡核苷酸)和实验组(转染DNA-PKCS反义寡核苷酸),用成克隆法分析细胞存活分分数,并分别用线性二次模型和多靶单击模型拟合出细胞存活曲线,求出放射生物学参数α、β、SF2、Do、Dq和N,评价细胞放射敏感性变化.结果 对照组α值为0.14,β值为0.030,SF2值为0.63,Do值为2.38,Dq值为1.43.实验组α值为0.31,β值为0.018,SF2值为0.41,Do值为2.09,Do值为0.60.实验组细胞的α值增大,β、SF2、Do、Dq值均减少.结论 DNA-PKCS反义寡核苷酸可增强A549细胞放射敏感性,DNA-PKCS是治疗肺癌的潜在靶点.     

CRISPR/Cas基因编辑技术应用于表皮生长因子受体突变型肺腺癌的治疗

CRISPR/Cas基因编辑技术是一种强大的新技术,可以精确编辑细胞基因组.该技术在实验室应用的基础上,引入至肿瘤研究领域,成为目前肿瘤治疗研究领域的热点.肺癌的综合治疗已经进入了分子靶向时代,表皮生长因子受体(epi-dermal growth factor receptor,EGFR)基因突变是肺腺癌最主要、最重要的驱动基因之一,表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosinekinase inhibitors,EGFR-TKI)治疗EGFR突变肺腺癌有显著疗效,但随之而来的原发性和继发性耐药现象成为当前迫切需要解决的问题.应用CRISPR/Cas基因组编辑技术进行个性化分子手术可有效地纠正或破坏EGFR突变,从而抑制肿瘤生长和进展.随着CRISPR/Cas基因重组技术的日臻完善与成熟,分子手术方法联合传统外科手术、放疗和/或TKI靶向药物治疗必将为携带EGFR突变的肺腺癌患者带来很好的希望.     

RAS癌基因突变少发于慢性粒细胞性白血病后期

以往的文献报道中,共发现5例慢性粒细胞性白血病患者有ras癌基因突变。其中1例用NIH/3T3细胞转染测定证实,另4例用多聚酶链反应(PCR)放大ras特异序列和突变特异性合成寡核苷酸探针证实。这些突变四分之三发生子母细胞危象期,这意味着ras突变发生于慢粒