氯化钴对人eNOS基因启动子转录活性的影响

目的:建立氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)缺氧模型,研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因的启动子活性变化.方法:用含不同浓度氯化钴的培养基培养细胞,检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)含量;将已构建的pGL2-eNOS-p质粒转染HUVEC-12细胞,利用双荧光素酶报告基因技术检测在不同浓度氯化钴和不同作用时间下的eNOS启动子转录活性.结果:氯化钴刺激下HUVEC-12细胞培养上清的LDH含量随氯化钴作用浓度增加而提高;氯化钴刺激后转染细胞的eNOS启动子活性呈现随氯化钴剂量增加而升高的趋势,随作用时间的延长而上升的趋势.结论:成功建立氯化钴诱导HUVEC-12细胞缺氧的体外模型.     

氯化钴对人的eNOS基因启动子SP1改构体转录活性的影响

目的:构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子,利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12缺氧模型研究其基因启动子活性的变化.方法:用不同剂量的氯化钴体外处理细胞复制缺氧模型,PCR点突变技术构建突变启动子pGL2-eNOS-insSP1,分别将pGL2-eNOS-insSP1和pGL2-eNOS-p载体导入HUVEC-12细胞,双荧光素酶报告基因技术用于检测启动子转录活性的变化.结果:DNA测序显示人的eNOS基因启动子SP1改构体的序列正确;改构体eNOS启动子活性在一定范围内随氯化钴刺激剂量的增加而升高.结论:SP1插入改造的方法显著提高了eNOS基因启动子的转录活性.     

化学低氧诱导剂二氯化钴对PC12细胞自噬的影响

文章研究化学性低氧诱导剂二氯化钴(CoCl_2)对PC12细胞自噬的影响。体外培养PC12细胞,用不同浓度CoCl_2处理PC12细胞24 h。首先通过MTT实验选取后续的CoCl_2处理浓度,用荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction, q-PCR)实验检测不同浓度CoCl_2处理PC12细胞24 h后细胞内HIF-1α基因表达水平。用Western Blot方法检测CoCl_2处理后自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平。结果表明,400、800μmol/L CoCl_2处理PC12细胞24 h不仅能显著降低细胞存活率,并且能显著提高HIF-1α基因表达,即表明用CoCl_2造模确实可以模拟细胞体外缺氧。此外,800μmol/L CoCl_2处理组的Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达量出现显著降低,表明CoCl_2处理抑制了细胞自噬,并且该种抑制是呈时间依赖的。研究结果表明,CoCl_2引起的化学性缺氧会损伤PC12细胞,并且会抑制细胞正常的自噬,该异常的自噬可能参与了CoCl_2致PC12细胞的损伤。     

氯化钴纸法测定蒸腾作用的改进—蒸腾盒法

本文介绍采用厚1-2毫米的有机玻璃薄片,做成浓密不漏气的小盒,盒底平铺一片同面积的氯化钴纸,以代替通常之氯化钴纸法测定叶的蒸腾强度,即可求得准确的定量数据.文中曾就所用滤纸质地、氯化钴溶液浓度和盒的高度等因子对测定的影响进行了比较,并将本法与测定蒸腾强度的气流法和离体秤重法进行了对比,著者认为本法不但测定叶的蒸腾强度具有准确和方便的优点,而且改变盒的形式,还可用于测定树木茎枝的蒸腾强度.     

SMYD3对氯化钴诱导T47D乳腺癌细胞缺氧的影响分析

为了探究组蛋白甲基化酶SMYD3是否会对氯化钴(CoCl_2)诱导乳腺癌细胞缺氧损伤作用产生影响,采用MTT法和流式细胞术检测不同浓度的CoCl_2(0、50、100、200、400,μmol/L)给药24,h以及联合转染过表达质粒使SMYD3过表达后对T47D细胞的增殖及细胞周期的影响;实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测其对SMYD3转录表达的影响情况.MTT和流式细胞术结果显示:CoCl_2可剂量依赖性地对T47D乳腺癌细胞的增殖产生抑制作用(P0.01),并诱导产生G0/G1期细胞周期阻滞(P0.05).CoCl_2可以抑制SMYD3的转录(P0.01).利用siRNA抑制内源性SMYD3表达后同样可诱导细胞发生G0/G1期阻滞(P0.05),而转染外源质粒使SMYD3过表达则可明显拮抗CoCl_2所诱导的G0/G1期阻滞及对细胞的杀伤作用.CoCl_2对T47D细胞的周期调控作用可能与抑制SMYD3的表达有关,SMYD3的过表达可提升肿瘤细胞在缺氧环境下的存活能力.     

组织化学方法研究豚鼠耳蜗的组织结构

以豚鼠为材料,用苏木素伊红、硝酸银、锇酸、网状纤维、神经纤维、高尔基体、乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶、酸性磷酸酶、细胞色素氧化酶等染色方法,证实了毛细胞为耳蜗的功能活动中心。卜契氏(Boettcher's)细胞与毛细胞的组织化学反应基本一样。在亨生氏(Hensen's)细胞中有脂肪滴存在。螺旋韧带表面覆有假复层上皮并有血管伸入。     

豚鼠气管平滑肌细胞培养

目的 建立一种简便、快捷的豚鼠气管平滑肌细胞培养方法。方法 幼年豚鼠气管平滑肌组织块原代培养 法。结果 豚鼠气管平滑肌组织块贴壁5～8d后可见细胞自组织块周围长出,细胞长梭形,核位于中央,呈辐射状 向四周生长。两周后细胞长满瓶壁。经α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-smooth muscle actin monoclonal antibody, α-SMA)免疫组化染色鉴定,获得的细胞为平滑肌细胞。结论 豚鼠气管平滑肌组织块培养法可快速获得数量充足 的气管平滑肌细胞。     

野亚麻蝇(Parasarcophaga Similis)幼虫凝集素的细胞凝集和糖抑制作用

野亚麻蝇幼虫凝集素的测定结果表明:它对人的A、B、O、AB血型红细胞,以及兔、豚鼠、大鼠、小鼠、鸽子的红细胞有凝集作用,其中对豚鼠红细胞凝集活性最高;但对牛、绵羊、鸡、鸭、龟、蛙、鳝鱼、鲤鱼、泥鳅的红细胞无凝集作用。对小鼠淋巴细胞凝集作用的浓度为18.75μg/ml,而对大鼠淋巴细胞凝集浓度则为150μg/ml,对牛的淋巴细胞无凝集活性。对肿瘤细胞的凝集作用很不相同,可凝集小鼠的S180、SP2/0、u14、LⅡ细胞,但不能凝集小鼠艾氏细胞,大鼠W256细胞、人Hela细胞和MGC80—3胃癌细胞。该凝集素对兔红细胞的凝集作用可被D—半乳糖,N—乙酰氨基半乳糖抑制。     

Grignard试剂与卤代烃在二氯化钴存在下的反应、反应机理的探讨

Grignard试剂(乙基溴化镁,苯基溴化鎂)与二氯化钴反应所产生的钴催化剂不能直接与溴乙烷反应,但若有过剩的Grignard试剂存在时,立即引起反应,产生乙烷和乙烯。若在反应体系中加入苯乙烯,气体的形成受到抑制,从反应混合物中可以测定苯乙烯的消耗,并分离出聚苯乙烯,若在反应体系中加入異丙苯,可以分离出脱氢介偶合产物,2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷。 Grignard(试剂与二氯化钴反应所产生的钴催化剂,在氮气下保存一星期后,仍然具有活性,而能连续地引起Grignard试剂与溴乙烷的反应,生成乙烷及乙烯,钴催化剂因此可能是一种活性金属钴。建议Grignard试剂与卤代烷在少量二氯化钴催化下的反应包括如下的重要步骤: RMgx+R’×+Co→R·+R’+Co+Mgx_2反应可能是在活性钴的表面上通过某种結合物的形成而进行的。     

2017年10月北京市啮齿类实验动物的病理检测

目的 通过检测北京市啮齿类实验动物的病理变化,为北京市实验动物质量监控及改进提供依据。方法 对送检的400只啮齿类实验动物,其中包括180只小鼠、80只大鼠、120只豚鼠及20只金黄地鼠,采集心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠,制成石蜡切片后进行HE染色,对镜检肝细胞肿胀的样品又分别进行了PAS染色和冰冻切片油红O染色,并于显微镜下观察。结果 此次进行实验动物质量的抽检,检出病变主要为小鼠、大鼠、豚鼠均出现不同程度的肝脏细胞肿胀,并均有糖原沉积病变检出,脂肪变性在豚鼠检出;此外小鼠及金黄地鼠,尤其是部分金黄地鼠出现明显肝脏坏死及炎性细胞浸润;小鼠和豚鼠的心脏发生增生性炎;小鼠肾脏炎性细胞浸润。结论 本次抽检的啮齿类实验动物基本健康,部分啮齿类动物的饲养管理仍需加强,本监测结果可为科研实验的准确性提供可靠有效的依据。     

电针刺激鱼际穴抗哮喘作用的研究

关于实验性过敏性哮喘豚鼠脑组织内β-肾上腺素能受体的数量和cAMP含量的变化已有报道，针刺鱼际穴对哮喘患者具有一定的良好疗效，但其机理未明。作者观察了电针刺激鱼际穴对实验性过敏性哮喘豚鼠（简称哮喘鼠）肺组织内β-肾上腺素能受体（简称β受体）Bmax值和cAMP含量的变化。以期为进一步探讨针刺鱼际穴治疗哮喘的机理提供部分实验资料。1材料和方法1．1主要试剂3H-双氢心得舒（3H－DHA，Toci/mmol,Amersham）3H－DHA药盒（北京原子能研究所），dl-心得安（sigma）。1．2实验动物和哮喘动物模型取体重400g左右的雄性豚鼠，向腹…     

改进的枯否氏细胞染色法

肝脏是人体最大的腺体 ,肝巨噬细胞又称枯否氏细胞 ,是肝血窦内的吞噬细胞 ,细胞形态不规则 ,具有吞噬、分泌、参与免疫等功能 ,常用的 H- E染色不易显示出细胞的形态 ,故研究该细胞时一般采用活体注射色素的方法 ,以观察枯否氏细胞的胞质内有否吞噬的颗粒。( 1 )方法 :由家兔耳静脉注入 0 .5 %台盼蓝水溶液 3～ 5 m L(每千克 ) ,经 2 4～ 36小时后杀死动物 ,取出肝脏。取组织块 2～ 4mm,用 Susa氏液固定 8～2 4小时 ,常规石腊切片后用核真红复染 ,水洗去浮色 ,按常规封片。光镜下观察。核真红 ( Kernechtrot)染色液的配制 :核真红 :0 .1 …     

小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCR方法的建立

目的为实验动物微生物检测提供一种简便、灵敏、快速,并且特异性强的小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCR检测方法。方法根据小肠结肠炎耶尔森氏菌fox基因、假结核耶尔森氏菌inv基因、志贺氏菌ipa H基因及空肠弯曲菌gyr A基因设计并筛选出特异性引物;优化退火温度等条件,分析多重PCR的特异性、敏感性,使用该多重PCR方法检测小鼠和豚鼠样品。结果多重PCR扩增出了预计的PCR产物,即小肠结肠炎耶尔森氏菌(511 bp)、假结核耶尔森氏菌(779 bp)、志贺氏菌(290 bp)和空肠弯曲菌(156 bp)。该方法的灵敏度为1×10-3ng/μL(小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌)和1×10-2ng/μL(空肠弯曲菌)。特异性检测未从其他菌中检测出阳性条带。使用该方法从样品中检测出不等的阳性样品数。结论该多重PCR方法对实验动物微生物检测具有很好的应用和开发前景。     

ARID1A对结肠癌细胞迁移的调控作用

为研究ARID1A对结肠癌细胞迁移的影响,并进一步分析ARID1A调控细胞迁移的机制,本文通过在结肠癌细胞系HCT116中过表达和干扰ARID1A基因,观察细胞迁移率的变化,通过比较HCT116与正常组织中的基因表达数据,筛选出ARID1A共表达基因,进行GO和KEGG分析.结果显示,过表达ARID1A后,细胞迁移率降低,而干扰ARID1A则与之相反.在1212个相关系数大于0.9的ARID1A共表达基因中,仅有4个基因参与细胞增殖,29个基因参与细胞迁移,涉及趋化因子信号通路、细胞因子受体相互作用等多个信号通路.以上结果说明ARID1A抑制细胞迁移,并可能通过多个信号通路调控细胞迁移.     

三种重组乙型肝炎疫苗异常毒性检查对动物影响的比较

摘要:目的 观察和比较三种重组乙型肝炎疫苗异常毒性检查对动物体质量增长情况和注射后状态的影响,探讨采用不同药用辅料生产的重组乙型肝炎疫苗检查对动物的影响。 方法 汇总 2016 年 3 月—2018 年 2 月,重组乙型肝疫苗(汉逊酵母 Hansenula ploymorpha) 、 重组乙型肝疫苗( 酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae) 和重组乙型肝炎疫苗( CHO 细胞)的异常毒性检查中的动物体质量和注射后状态情况,采用 IBM SPSS Statistics 23 分析软件进行统计分析。 结果 疫苗的异常毒性检查结果均符合规定。 注射疫苗后,动物均未见异常。 比较空白对照组 ICR 小鼠和三 种 乙 型 肝 炎 疫 苗 给 药 组 ICR 小 鼠 体 质 量 增 长 值, 差 异 没 有 统 计 学 意 义 ( P > 0. 05 ) , 重 组 乙 型 肝 疫 苗( S. cerevisiae)给 药 组 小 鼠 的 体 质 量 增 长 的 平 均 值 大 于 重 组 乙 型 肝 炎 疫 苗 ( CHO 细 胞) 和 重 组 乙 型 肝 疫 苗( H. ploymorpha)给药组小鼠的体质量增长值,差异有统计学意义( P< 0. 05) ;比较空白对照组 Hartley 豚鼠和三种乙型肝炎疫苗给药组 Hartley 豚鼠的体质量增长值,重组乙型肝炎疫苗( CHO 细胞) 组豚鼠与空白对照组豚鼠的差异,有统计学意义( P<0. 05) ,其他两组动物与空白对照组动物的差异无统计学意义( P> 0. 05) ,比较三种疫苗的给药组豚鼠的体质量增长值,差异没有统计学意义( P> 0. 05) 。 结论 本研究中的实验动物一般状态观察未见明显差别,均没有观察到文献记载的因铝佐剂导致的 ICR 小鼠腹膜刺激症状;三种重组乙型肝炎疫苗对 ICR 小鼠给药后 7 d 内的体质量增长值影响不同;对 Hartley 豚鼠给药后 7 d 内的体质量增长值未见明显影响。     

氨茶碱对哮喘豚鼠肺组织核因子-κB的表达作用

目的　研究氨茶碱对哮喘豚鼠模型肺组织核因子 κB的影响.方法　雄性豚鼠24只,随机分为哮喘组、治疗组、对照组,采用免疫组化方法观察核因子 κB的表达.结果　哮喘组豚鼠肺组织核因子 κB的表达比对照组显著增加(P<0.01);治疗组核因子 κB胞核阳性细胞(18 4%±2 9%)与哮喘组的相比(29.5%±5.6%)明显减少(P<0.05),与对照组相比(8.2%±2.3%),有统计学意义(P<0.01).结论　核因子 κB的激活在哮喘发病过程中具有重要作用,氨茶碱能够抑制哮喘豚鼠核因子 κB的表达,这可能是氨茶碱治疗哮喘的机制之一.     

离子型^211At对实验性艾氏腹水癌细胞的体外杀伤作用

在前人工作的基础上,本实验在体外培养条件下研究离子型~(211)At对小鼠实验性艾氏腹水癌细胞的杀伤作用,测定实验动物延生率,观察细胞形态及酶活性改变,以期为深入探讨该核素的辐射毒理机制提供资料.     

两种发物对已激发过敏的致敏豚鼠模型伤口愈合的影响

目的研究羊肉和虾两种发物对已激发过敏的致敏豚鼠模型伤口愈合的影响。方法取卵白蛋白、氢氧化铝溶于生理盐水中,在豚鼠两后腿各肌内注射0.5 m L。两周后卵白蛋白超声雾化吸入攻击1 min,造已激发过敏的致敏豚鼠模型。豚鼠背部开直径2 cm圆形全层皮肤切除创面,对豚鼠用虾和羊肉匀浆进行灌胃。创面切片染色后观察各组炎症细胞。结果创伤后1 d羊肉组与对照组相比炎症细胞计数有显著差异,差异有统计学意义(P0.05),创伤后1 d虾组与对照组相比炎症细胞计数有非常显著差异,差异有统计学意义(P0.01);创伤后3 d、7 d羊肉组、虾组与对照组炎症细胞计数无显著差异。结论羊肉、虾对已激发过敏的致敏豚鼠模型伤口愈合有影响。     

硫酸镁对大鼠继发性脊髓损伤保护作用的实验研究

为探讨硫酸镁对大鼠继发性脊髓损伤的保护作用及机制.用30只体重280±20g wister成年大白鼠随机分为三组:A组(对照组),仅行T10阶段椎板减压;B组(损伤组),C组(治疗组),均行T10阶段椎板减压和Allen's重物打击致脊髓损伤,伤后30min时B组腹腔注射蒸馏水1600mg/kg,C组腹腔注射硫酸镁1600m//kg.48h后切去伤段脊髓组织分别测定H2O、Ca2+、Mg2+离子含量,观察局部组织病理学改变,超微结构及单位面积的凋亡细胞数.结果显示跟A组比较,B、C组损伤段脊髓组织H2O、ca2+含量增多,Mg2+含量减少,组织病理学及超微结构破坏严重,凋亡细胞数升高,而且C组较B组轻.由此可知,病程早期应用硫酸镁可以减轻脊髓损伤后的继发性损伤,从而对受损脊髓起到保护作用.     

选择性除去氯化钴溶液中铜的热力学分析

根据溶液体系电荷平衡和离子同时平衡原理,通过热力学平衡计算,研究298 K下氯化钴溶液中Co-Cu(Ⅱ)-Cl-H_2O体系金属离子及其配合离子浓度随pH及总氯浓度变化规律,并基于不同的除铜方法进行热力学分析。在Co-Cu(Ⅱ)-Cl-S-H_2O体系中,计算硫化除铜终点各离子的平衡浓度,同时给出除铜终点金属浓度随总硫浓度对数变化关系图和随pH变化关系图。研究结果表明:在Co-Cu(Ⅱ)-Cl-H_2O体系下,铜钴主要以阳离子配合物形式存在,加入还原剂后,在Co-Cu(Ⅰ)-Cl-H_2O体系中,铜主要以阴离子配合物形式存在,钴仍主要以金属自由阳离子形式存在。因此,可以采用阴离子交换树脂深度除铜。随着总硫浓度的增加,铜逐渐沉淀,在除铜终点处恰好能保证钴不沉淀,因此,也可以采用硫化法除铜。