季节性流感疫苗免疫血清与H7N9禽流感病毒交叉反应研究

目的分析接种季节性流感疫苗人群是否具有对新发H7N9流感病毒具有交叉保护,并反向检测了雪貂产生H7N9抗血清与H1／H3／H5不同亚型流感病毒的免疫反应。方法利用血凝抑制试验和微量中和实验检测疫苗免疫后人群转阳血清对A／Anhui／1（H7N9）病毒中和作用及雪貂H7N9抗血清与A／California／07／2009（H1N1）、A／PR／8／34（H1N1）、A／Brisbane／59／2007（H1N1）、A／Brisbane／10／2007（H3N2）、A／Shenzhen／406H／2006（H5NI）和A／Vietnam／1203／2004（H5N1）等不同亚型病毒的中和作用。结果季节性流感疫苗受众者转阳血清与H7N9病毒反应HI及中和抗体反应均为阴性,雪貂H7N9抗血清与H1／H3／H5不同亚型流感病毒反应HI及中和抗体反应均为阴性。结论季节性流感疫苗接种人群不具有对新发H7N9流感病毒交叉保护,并且反向验证了H7N9病毒抗血清与H1／H3／H5亚型流感病毒亦无交叉免疫反应。     

A(H1N1)疫苗免疫的血清中和抗体的交叉免疫反应分析

目的分析接种A(H1N1)疫苗人群血清的中和抗体对2009年A(H1N1)的抗病毒作用和相关病毒的交叉免疫保护作用。方法利用MDCK细胞的细胞病变检测接种A(H1N1)疫苗的人血清和未免疫的对照血清对甲型流感病毒A/Brisbane/10/2007(H3N2),A/Brisbane/59/2007(H1N1),A/California/07/2009(H1N1)和A/Shenzhen/406H/2006(H5N1)等病毒的中和作用。结果通过细胞病变观察,证实接种A(H1N1)疫苗的人血清稀释度为1∶40时,30份免疫血清可以中和H3N2(Brisbane),H1N1(Brisbane)和H1N1(CA7)而不产生细胞病变,中和保护率分别均为100%,而相同稀释度的未免疫对照血清的中和保护率分别为100%,100%,40%;而当稀释度为1∶400时,30份免疫血清分别有13,20和21例未出现细胞病变,中和保护率分别为43%,67%,70%,10份对照血清的中和保护率分别为80%,70%,0%。两种稀释度的免疫血清和未免疫对照血清均不能中和H5N1引起细胞病变,中和保护率均为0%。结论接种2009年A(H1N1)疫苗可以诱导能中和CA7 H1N1的抗体产生,但该中和抗体对H3N2(Brisbane),H1N1(Brisbane),H5N1(SZ)高致病禽流感病毒等甲型流感病毒无交叉保护作用。     

唾液酸受体并非流感病毒各亚型在雪貂组织中播散分布的决定因子

目的 探讨流感病毒在雪貂组织中的分布与唾液酸受体的关系.方法 用病毒分离的方法分析流感病毒H5N1( SZA06H,A/VN/1203/04),SH1N1,H3N2(Brisbane/09,HK/09)在雪貂各组织中分布,用直接免疫荧光法分析雪貂各组织的唾液酸受体的分布,并通过体外实验证实活病毒与组织上受体的结合.结果 H5N1(SZ)和H5N1(A/VN/1203/04)在雪貂的肝、脾、肺、肠中有分布,H5N1(A/VN/1203/04)在脑组织中也有分布,而SH1N1、H3N2( Brisbane/09,HK/09)只分布于肠组织.而唾液酸受体SAα2,6Gal和SAα2,3Gal的Ⅰ型受体分布于脾、心、肺、肠、脑组织中,和SAα2,3GalⅡ型受体分布于肝、脾、心、肺、肠、脑组织.SH1N1病毒与SAα2,6Gal能结合,而H5N1与SAα2,3Gal结合.结论 H5N1能在雪貂的多器官组织组织中分布和繁殖,而H3N2和SH1N1仅能在肠组织中分布繁殖.SAα2,6Gal和SAα2,3Gal受体在雪貂多器官组织中均有表达,说明唾液酸受体是病毒进入的门户,但不是病毒分布的决定因子.     

人用甲型H1N1流感疫苗两种免疫方法动物免疫效果比较

目的：比较甲型H1N1流感疫苗0 d一针免疫方法与0、21 d二针免疫方法的免疫效果,同时观察季节性流感疫苗免疫后是否对甲型H1N1流感病毒具有交叉保护性。方法：用甲型H1N1流感疫苗分别按0 d一针及0、21 d二针2种免疫方法免疫BALB／c小鼠,首针免疫后14、21、28、35及42 d眼眶采血分离血清,用血凝抑制(HI)法测定小鼠血清中甲型H1N1特异性抗体滴度,比较2种免疫方法的免疫效果。用季节性流感疫苗免疫小鼠,14、28 d后采血分离血清,用甲型H1N1流感病毒特异性抗原采用HI法测定季节性流感疫苗抗血清是否能甲型H1N1流感病毒特异性抗原进行非特异性结合。结果：二针免疫的方法在第21天加强免疫一次后,第28、35及42天时抗体滴度明显高于一针免疫方法的抗体滴度,且第42天时的抗体滴度约为一针免疫方法抗体滴度的4倍。用甲型H1N1流感病毒特异性抗原采用HI法测定季节性流感疫苗抗血清,未测出甲型H1N1交叉抗体。结论：0、21 d二针免疫的方法在第28天后抗体滴度仍保持较高的水平,明显高于0 d一针免疫的方法。季节性流感疫苗对甲型H1N1流感病毒无交叉免疫保护性。     

雪貂感染流感病毒H3N2动物模型的建立

目的建立甲型流感病毒H3N2感染的雪貂动物模型。方法按实验要求筛选出流感抗体反应阴性的雪貂,经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染H3N2流感病毒株A/Brisbane/10/07,设立两个稀释度106和107 TCID50,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死。感染前采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量,每天记录雪貂一般临床变化。处死时取雪貂肺、肝、脾、小肠、脑组织作病毒滴度检测,肺组织做病理检查。结果 106和107TCID50的H3N2病毒分别感染雪貂,没有雪貂死亡。雪貂感染后都出现一过性的体温升高,体重的下降,流涕、打喷嚏等症状。在鼻甲骨活检物中可测到病毒载量,肠组织可分离到病毒。肺组织以轻度性间质性肺炎为主要病理变化。结论雪貂感染H3N2病毒株A/Brisbane/10/07后,临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H3N2病毒动物模型已建立,其中106 TCID50病毒滴度的是一个建立感染动物模型比较合适的剂量。     

H7N9禽流感病毒与其他流感病毒对雪貂致病性与传播力的比较

目的 针对2013年3月中国爆发的人感染H7N9禽流感病毒,在雪貂体内进行致病性及传播力的研究,并与甲型H1N1流感病毒、H5N1禽流感病毒进行比较。方法 对新发H7N9毒株、甲型H1N1流感病毒、H5N1禽流感病毒感染雪貂后的临床症状、体征,呼吸道排毒情况,组织病理学变化等进行评价和比较,并对H7N9毒株在雪貂群体中的传播力进行研究。结果 雪貂模型的临床症状、死亡率、病毒传播以及组织病理学分析显示：H7N9病毒的致病性低于H5N1,与2009年起源于北美的甲型H1N1流感病毒相当。新发H7N9禽流感病毒可以在雪貂的呼吸道、心脏、肝脏以及嗅球进行复制。值得注意的是H7N9禽流感可以通过飞沫在雪貂间进行低水平的传播,并且在传播过程中,病毒基因组内有多个位点的氨基酸发生了替换。结论 H7N9禽流感病毒对雪貂的致病性较H5N1禽流感病毒低,与甲型H1N1流感病毒对雪貂的致病性相当,H7N9禽流感病毒可在雪貂间进行传播。     

2014年江苏省江阴市职业暴露人群禽流感血清学调查

目的了解江阴市职业暴露人群H5、H7、H9亚型禽流感病毒的感染状况,为制定人感染禽流感防控措施提供科学依据。方法采集监测人群血清,用马血球红细胞凝集抑制试验检测血清中的H5N1、H7N9、H9N2亚型禽流感病毒HI抗体,数据用Excel软件进行统计分析。结果共调查职业暴露人群80人,血清学结果显示14份标本H7N9和27份H9N2亚型禽流感病毒中和抗体阳性,总阳性率为45. 00%。职业暴露人群和对照组人群HI抗体效价阳性率差异有统计学意义(χ2=10. 98,P <0. 05)。问卷调查显示人群年龄偏大、文化水平偏低、流感疫苗接种率为0. 00%,防护意识较差。结论职业暴露人群存在H7N9和H9N2隐性感染现象,应加强健康教育,提高防护意识,同时加强职业人群和外环境监测,降低禽流感感染风险。     

抗流感病毒血清的制备

目的 :制备抗流感病毒血清为所分离的流感病毒亚型分型和鉴定之用。方法 :用灭活流感病毒免疫家兔 ,使其产生抗体 ,收集兔血清 ,测定抗血清的血凝抑制效价以判定血清的抗体滴度。结果 :抗H5N1 血清和抗H6 N1 血清效价高且与其它病毒抗原不产生交叉反应 ,抗H9N2 (Y2 80 )和抗H9N2 (G1 )两种血清彼此间有较明显的交叉反应 ,可能与两者血凝素结构未发生变化有关 ,故这两种血清均可应用于H9N2 病毒的鉴定。结论 :本方法制备的抗流感病毒血清效价高 ,交叉反应小 ,可作流感病毒的亚型分型及鉴定之用     

甲型H1N1流感病毒在季流病毒、禽流感病毒共感染时变异可能性的验证

目的 甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009分别与A/Brisbane/10/07和A/ShenZhen/406H/06共感染小型香猪,预测甲流病毒在与季流H3N2病毒/甲流病毒与禽流感病毒共感染时是否会发生变异.方法 分别将A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)对5～6月龄小型猪共感染,小型猪经复方氯胺酮0.1 mL/kg麻醉后进行滴鼻感染,感染后第5天安乐死动物,取动物肺组织作病毒测序分析.结果 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2)共感染后,A/California/7/2009病毒PB1基因993位G→A突变,PA基因1659位G→A突变,没有氨基酸的变异.A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后A/California/7/2009病毒PB2基因1711位T→C突变.碱基的突变未引起氨基酸的变异.结论 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后在猪的体内没有发生病毒重组、变异.     

雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型的建立

目的建立雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型。方法 A/Anhui/1/2013(H7N9)禽流感病毒经鼻吸入感染雪貂,观察动物临床症状和体征,上呼吸道排毒情况及组织病理学变化。结果雪貂感染后出现体重下降、活动减少以及打喷嚏的临床表现,上呼吸道、心脏、肝脏及嗅球可检测到活病毒,上呼吸道排毒的峰值出现在感染后的第3~5天。血清抗体滴度最高达到1280,外周血淋巴细胞数量减少、粒细胞数量增加。组织病理学显示动物肺脏呈局灶性间质性肺炎及肺泡炎改变,CT显示肺内片状阴影。结论成功建立雪貂感染H7N9禽流感病毒的动物模型,模型的建立为H7N9禽流感发病机制研究、药物及疫苗的评价奠定了实验基础。     

建立H5N1流感病毒感染雪貂动物模型

目的建立甲型H5N1流感病毒感染雪貂动物模型[1-3]。方法 H5N1流感病毒株A/Vietnam/1203/2004病毒以103和104 TCID50滴度分别感染雪貂。对4～10月龄去势雪貂经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死。感染后每天记录雪貂一般临床变化。感染前0 d采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量和病毒滴度。处死时取雪貂气管、肺、心、肝、脾、肾、小肠、脑组织作病毒滴度检测和病理检查。结果 H5N1103和104 TCID50的病毒分别感染雪貂,雪貂死亡都率在33%。103TCID50和104 TCID50病毒分别感染雪貂,动物都出现持续3 d体温升高,104 TCID50组出现超过20%的体重下降。上呼吸道排毒呈现上升趋势,并可在除呼吸系统以外的组织器官中分离到病毒。感染的雪貂病理表现为重度肺炎。结论雪貂感染H5N1病毒株后在临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H5N1病毒动物模型已建立,104 TCID50病毒滴度是一个建立感染动物模型比较合适的剂量。     

甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化分析

【目的】 了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律&#65377;【方法】 分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用RT-PCR技术扩增了病毒NA基因全序列,并对其分子进化和重要功能位点的遗传变异进行了分析&#65377; 【结果】 2009年新型H1N1流感病毒与2006年季节性HIN1流感病毒比较,NA基因的同源性较低(77.9% ~ 78.8 %),与世界各地不同年代代表株及WHO推荐的1979 ~ 2010年季节性流感疫苗株比较,NA基因的同源性也较低(78.1% ~ 79.3%),但与WHO推荐的2009年新型H1N1流感疫苗株比较同源性则高达99%以上;系统进化分析结果表明,2009年新型H1N1流感病毒NA基因与欧亚猪流感病毒株A/swine/Belgium/1/1983的亲缘关系最近;并发现自2005年以来季节性H1N1流感病毒NA基因的某些抗原位点和神经氨酸酶活性位点已发生了变异&#65377;【结论】 2009年新型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒;接种季节性流感疫苗不能对本次流行的新型流感产生有效的免疫保护作用;季节性H1N1流感病毒在流行过程中NA基因已发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测病毒的变异情况&#65377;     

2012-2013年鄂州市禽流感职业暴露人群及外环境监测结果分析

目的了解鄂州市禽流感职业暴露人群H5N1感染及外环境禽流感病毒H5、H7、H9亚型污染状况。方法2012-2013年采集鄂州市从事家禽养殖、屠宰等人群血清标本,用红细胞凝集抑制试验(HI)检测H5N1抗体;对在城乡活禽市场等外环境采集的污水、鸡粪和鸡笼标本用荧光定量PCR法检测禽流感病毒(甲型流感病毒,又称A型流感病毒,Flu A)H5、H7、H9核酸。结果共采集职业暴露人群160人份血清标本,H5N1抗体均为阴性;环境标本240份禽流感病毒核酸监测,阳性标本为36份,阳性率为15.00%。A型禽流感病毒核酸阳性标本分布于鄂州市3个区,阳性率差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P=0.0 047),以华容区阳性率最高;各种类型标本阳性率差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P=0.0 024),污水的阳性率最高;不同监测场所标本阳性率差异也有统计学意义(Fisher精确概率法,P<0.01),城乡活禽市场禽流感病毒检出率最高;各个季度采集的标本阳性率差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P<0.01),第二季度禽流感病毒检出率最高。结论禽流感H5亚型在鄂州市职业暴露人群中未发现隐性感染,鄂州市监测点外环境存在H5、H9禽流感病毒,城乡活禽市场为人感染禽流感的高风险场所。     

2013年广州市禽流感职业暴露人群及市场环境禽流感病毒H7N9监测分析

目的了解广州市禽流感职业暴露人群中禽流感病毒H7N9、H9、H5亚型隐性感染状况以及禽类市场环境中H7N9病毒污染状况。方法采集从事家禽养殖、宰杀、贩卖等职业暴露人群以及H7N9疫情专项调查人群血清标本,用红细胞凝集抑制试验（HI）检测H7N9、H9、H5亚型抗体;用实时荧光定量PCR方法对禽类市场环境标本进行H7N9禽流感病毒核酸检测。结果2013年采集职业暴露人群常规监测血清394份,广州某市场首次检出H7N9禽流感病毒后采集密接从业人员专项血清259份,H7、H5检测抗体均为阴性,H9抗体阳性血清分别为23份（5.83％）和7份（2.70％）;6264份市场环境标本中共检出流感A阳性标本204份,其中H7N9亚型阳性5份（0.07％）、H5亚型阳性13份（0.20％）、H9亚型阳性80份（1.27％）、A未分型106份（1.69％）。结论广州市禽流感职业暴露人群在2013年市场首次检出H7N9禽流感病毒前后尚未发现H7N9隐性感染者,广州市禽类市场环境中禽流感病毒亚型仍以H9等低致病性亚型为主,但不排除今后H7N9亚型增多的可能。     

禽流感病毒的生物学特性与防治

流感病毒是流行性感冒病毒的简称,在分类上流感病毒属正粘病毒科,包括甲、乙、丙(也称A、B、C)3个型别.流感病毒可引发人类、禽类和动物类的"流行性感冒",其中禽流感病毒是甲型流感病毒中的某些亚型(如H5N1、H9N2、H7N7等).它们以鸡、鸭等禽类病毒贮存,宿主可以感染人类,早年已有若干先例.而此次出现的禽流感病毒主要为甲型流感病毒中的H5N1亚型.     

快速检测人新甲型H1N1、季节性和乙型流感病毒多重PCR方法的建立

目的 建立一种可以同时检测人类新甲型H1N1、季节性H1N1和H3N2亚型流感病毒及乙型流感病毒的多重PCR方法.方法 根据以上4种流感病毒的特异性基因设计4对引物,建立可同时扩增出4个流感病毒特异性片段的多重PCR的方法.用人的GAPDH基因作为内参判断标本来源和实施质量控制的依据.并进行敏感性、特异性和盲样检测评价实验.结果 该方法可同时扩增出流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为106 bp(新甲型H1N1)、135 bp(季节性H1N1)、118 bp(季节性H3N2)、170 bp(乙型流感病毒).该实验检测新甲型H1N1(A/colifornia/07/ 2009)的敏感性为102copies/反应.特异性实验结果显示每对引物只检测对应的病毒,32份盲样检测结果特异性好.结论 该多重PCR方法可同时检测新甲型H1N1及季节性流感病毒,敏感性、特异性强,可用于人类流感病毒的鉴别分型检测.     

2008～2009年南宁市季节性H1N1亚型流感病毒血凝素HA1基因变异分析

目的分析南宁市2008～2009年度流行性感冒的病原学监测结果,探讨其季节性H1N1亚型流感病流行情况和HA1基因变异规律及进化趋势。方法根据流感病原学监测和疫情挑选2008～2009年中分离到的季节性H1N1亚型毒株20株(每年10株),提取病毒RNA,采用RT-PCR扩增病毒HA基因后进行核苷酸序列测定,利用VectorNTI 9.0分析处理,并与WHO推荐疫苗株进行比对,用Mage 4.1构建系统进化树。结果 2008～2009年南宁市季节性流感流行主要集中在夏秋季节,H1N1成为2008年度的优势毒株。进化树分析表明,南宁市2008～2009年毒株被分为2个分支(Ⅰ和Ⅱ),A/Solomon/3/2006和A/Brisbane/59/2007分别分布在分支Ⅰ和Ⅱ内。对H1N1HA1氨基酸序列分析表明,20份毒株二硫键和糖基化位点比较保守,受体结合位点(RBS)和抗原决定簇位点相对活跃,其中RBS 188、189、222、224均发生了不同程度的变异。与A/Solomon/3/2006相比,2008年毒株抗原决定簇存在4个氨基酸的替换并且分布在两个抗原决定簇区域,2009年毒株除A/nanning/473/2009外,抗原决定簇区氨基酸变异未达到4个。结论南宁市2009年H1N1流感病毒HA1基因特性与A/Brisbane/59/2007疫苗株接近,2008年毒株与两疫苗株相比变异较大,这可能是导致2008年南宁市H1N1亚型流感病毒流行强度明显增加的原因。     

甘肃省2010年人群甲型H1N1流感病毒抗体水平监测

目的了解甘肃省2010年不同时期一般人群甲型H1N1流感(甲流)抗体水平变化及季节性流感抗体水平。方法采用血凝抑制(Hemagglutination Inhibition,HI)试验检测HI抗体,≥1:40为阳性。结果2009年8月、12月、2010年1月、2月、3月及9月底甘肃省城市人群甲流抗体阳性率分别为3.64%(11/302)、10.45%(44/421)、17.30%(55/318)、20.29%(70/345)、33.69%(94/279)和27.75%(111/400),9月份季节性流感H1N1、H3N2、B(Victorian)和B(yamagata)毒株抗体阳性率分别为30.25%(121/400)、15.50%(62/400)、12.75%(51/400)和5.00%(20/400)。结论甘肃省甲流首先在学生中出现,甲流HI抗体水平从流行初期的3.64%逐步上升至流行结束的33.69%;2010年9月人群中甲流及季节性H1N1流感病毒抗体阳性率相对较高,H3N2及B(yamagata)系病毒抗体阳性率较低。建议加强流感疫苗的接种,做好学校等集体单位流感样暴发疫情的防控工作。     

2014—2021年湖北省鄂州市职业暴露人群血清学和外环境禽流感病毒监测分析

目的 了解2014—2021年湖北省鄂州市外环境禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)分布情况及相关职业暴露人群感染状况,为鄂州市防控人感染禽流感疫情提供依据。方法 2014—2021年鄂州市3个区的4类场所,5种类型外环境标本,采用荧光定量PCR方法对标本进行A型、H5亚型、H7亚型、H9亚型流感病毒检测,同时采集禽流感职业暴露人群血清标本,使用红细胞凝集抑制实验法检测禽流感病毒H5N6、H7N9、H9N2抗体,采用描述性流行病学方法对检测结果进行统计分析。结果 2014—2021年鄂州市采集禽流感外环境标本2 187份,检出流感病毒A型(Influenza virus type A,FluA)阳性标本645份,阳性率为29.49%;以H9亚型和H5+H9混合型为主,分别占50.39%和17.36%。鄂城区禽流感病毒检出阳性率最高(38.41%),梁子湖区最低(11.92%)。4类场所中城乡活禽市场禽流感病毒检出阳性率最高(46.60%)。5种类型外环境标本中,清洗禽类污水禽流感病毒检出阳性率最高(46.09%)。时间分布,第1季度(39.09%)和第4季度...     

2011-2012年肇庆市禽流感职业暴露人群及外环境病毒分布监测分析

目的了解肇庆市禽类职业暴露人群禽流感病毒感染状况以及外环境禽流感病毒的分布情况。方法采集禽类职业暴露人员血清样本,用红细胞血凝抑制试验(HI)检测H5N1流感抗体;采集外环境样本,用荧光定量PCR法检测禽流感病毒FluA、H5、H7和H9核酸。结果 2011-2012年共采集职业暴露人员血清样本400份,检测H5N1抗体均为阴性;共采集外环境有效样本202份,检出FluA阳性25份,阳性率为12.38%,其中AH9亚型阳性14份(56.00%),AH7亚型阳性1份(4.00%),A未分型10份(40.00%),未检出AH5亚型。结论肇庆市职业暴露人群尚未发现感染高致病性禽流感H5N1病毒;外环境存在禽流感病毒的污染,H9亚型是主要的病原体。