单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病对50,000道尔顿结构蛋白

以HFRS病毒感染的乳小白鼠脑为原材料,用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法制备粗纯病毒抗原。将此粗纯抗原通过抗HFRS病毒McAb与Sepharose 4B偶联制成的免疫吸附柱,并用3M的KCNS洗脱,获得了SDS-PAGE单点纯的特异性病毒结构蛋白。该蛋白分子量为50,000道尔顿,具有较高的抗原滴度和良好的免疫原性。     

肾综合征出血热病毒50kD结构蛋白的抗原位点分析

采用23株抗HFRS病毒McAb,以放射免疫沉淀及ELISA等试验,证实HFRS病毒的50kD蛋白为该病毒的核蛋白(NP)。用抗NP的McAb对经亲和层析纯化的NP以ELISA阻断试验进行抗原位点分析,结果表明该蛋白与一般有囊膜病毒的NP相比,有两点明显的不同。一是HFRS病毒的NP上不仅有组特异性抗原位点,而且有型特异性抗原位点,两者都至少分布在2个区域,这些抗原位点及其分布区域之间有部分重叠或比较靠近。二是HFRS病毒的NP上可能存在中和抗原及血凝抗原位点。     

单克隆抗体亲和层析法粗提HFRS病毒的初步研究

用McAb亲和层析法粗提HFRS病毒81-14A株感染BHK细胞培养上清液,效果较满意。病毒抗原获得率为48.07％。经McAb亲和层析法洗脱,病毒抗原,蛋白峰基本一致。特异性试验证明洗脱物为HFRS病毒抗原。SDS-RAGE经氨银染色主要有4条区带。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharosc 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或童叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明,该50K血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的抗独特型抗体的制备与初步鉴定

本文用HFRS病毒McAbs免疫家兔,制备了抗Id抗体(Ab_2),用小鼠γ球蛋白-Sepharese AB免疫亲和层析柱纯化了Ah_2,并以ELISA试验对其特异性作了签定。结果表明,所制备的Ab_2具有良好的Id特异性,并能与所用的小鼠抗HFRS病毒单抗、兔抗HFRS病毒抗体和HFRS病人血清结合。同时提示,这种Ah_2可能具有替代抗原的免疫潜能。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的抗独特型抗体的制备与初步鉴定

本文用HFRS病毒McAbs免疫家兔,制备了抗Id抗体(Ab_2),用小鼠γ球蛋白-Sepharose4B免疫亲和层析柱纯化了Ab_2,并以ELISA试验对其特异性作了鉴定。结果表明,所制备的Ab_2具有良好的Id特异性,并能与所用的小鼠抗HFRS病毒单抗、兔抗HFRS病毒抗体和HFRS病人血清结合。同时提示,这种Ab_2可能具有替代抗原的免疫潜能。     

酶标单克隆抗体检测肾综合征出血热病毒抗原ELISA法的初步研究

本文用辣根过氧物酶标记了肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体,建立了ELISA双单克隆抗体夹心法,对该法在HFRS病毒抗原检测及单克隆抗体特异性分析中的应用作了探讨。结果表明,本法具有良好的特异性和重复性。用本法对Vero—E_6细胞培养上清中的HFRS病毒抗原进行了检测。在正常Vero—E_6细胞感染HFRS病毒后,第8天即出现HFRS病毒3H_4抗原可疑阳性;至第14天可测出抗3H_4的HFRS病毒抗原,阳性率达5/9;第16—18天,阳性率达9/9。抗体特异性分析表明,在所用的8种单克隆抗体中,3H_4、3H_7、3D_(10)三种单克隆抗体具有相同或极为相近的抗体特异性。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒结构蛋白

用抗肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)5H5与CNBr活化的Sepharose 4B偶联,制成免疫吸附柱,并使粗纯化HFRS病毒抗原(从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取)遗过免疫吸附柱。用3M硫氰酸钾洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个高而窄的蛋白洗脱峰,用McAb-ELISA间接夹心法从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴     

应用抗人μ链McAb和APAAP法检测HFRS患者血清中IgM抗体

<正> 肾综合征出血热(HFRS)患者的早期特异性诊断多采用免疫荧光法检测血清中IgM抗体。最近有报道采用抗人μ链McAb荧光结合物检测患者血清IgM抗体。本文以HFRS病毒陈株感染Wish细胞作为抗原     

MbAb-ELISA间接夹心法检测HFRS患者血清中血凝抑制抗体的研究

为了防治肾综合征出血热(HFRS)需要建立一种在试管内检测特异的保护性抗体的方法。本文采用抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)和粗制HFRS病毒血凝素抗原,建立了一种McAb-ELISA间接夹心法。经取代试验,抗体阻断试验都表明有高度特异性。以本法曾检测了63例临床诊断为HFRS患者血清中血凝抑制抗体,同时平行地与血凝抑制试验比     

SARS病毒N蛋白的表达与DNA疫苗的构建

目的：在大肠杆菌中表达SARS冠状病毒核衣壳N蛋白，并构建其DNA疫苗。方法：构建含N基因的原核表达载体pQEN，并在大肠杆菌M15中表达N蛋白。采用NP亲和层析法纯化目的蛋白。将N基因克隆入真核表达载体pSecTagB中，构建真核重组质粒pSecN。以其免疫小鼠制备抗血清，并用ELISA法检测其与大肠杆菌中表达的重组N蛋白及天然全病毒N蛋白的反应性。结果：重组N蛋白能与DNA疫苗免疫的小鼠血清以及SARS患者血清发生特异性反应；SARS—CoV病毒颗粒也可与DNA疫苗免疫的小鼠血清发生特异性反应。结论：重组N蛋白保留了病毒的一些特异性抗原表位，可作为用ELISA法检测SARS—CoV的抗原。构建的DNA疫苗可在小鼠体内产生高效价的抗SARS病毒N蛋白的特异性抗体，从而为该疫苗的开发奠定了基础。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

本文作者采用抗肾综合征出血热(HFRS)病毒血凝素单克隆抗体(McAb)和辣根过氧化物酶标记的同一McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法有高度特异性。与各种正常对照抗原试验均为阴性,     

单克隆抗体对HFRS病毒50K结构蛋白的分析

采用18株抗HFRS病毒McAb,以Western-blotting技术对纯化的该病毒50K结构蛋白进行了分析。结果有7株McAb可与该蛋白反应,这7株McAb的特性(包括感染细胞膜抗原免疫荧光染色模式、中和活性及HI活性等)各不相同,提示它们所针对的抗原决定簇的特性也不同。用ELISA阻断试验等证明,上述7株McAb中,有5株所针对的抗原决定簇之间有部分相同或重叠,并提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。分析结果表明,该50K结构蛋白的特性及结构均较复杂,值得进一步研究。     

适宜标记的HFRS病毒组特异性McAb的建立与应用

本文用陕西省从黑线姬鼠肺分离的HFRS病毒81-14A株,感染BHK细胞,收集感染细胞。经紫外线灭活后,病毒抗原通过粗提,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,建立了适宜于标记的HFRS病毒组特异性3-1C_4 McAb。荧光素标记McAb效价为1:5120,标记后一年半效价下降一个滴度,与26株从不同地区分离的HFRS病毒株作直接免疫荧光反应,均产生较     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素结构蛋白的初步研究

本文报告用蔗糖-丙酮法从肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株感染的乳鼠小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)3G_1与Se-pharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得了纯化的HFRS病毒血凝素结构蛋白,经特异性试验证实该洗脱物为HFRS病毒血凝素,并有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和     

HFRS患者汉滩病毒核蛋白特异性T细胞克隆及其靶细胞的建立

目的　建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒 (HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆 ,为HTNVNPT细胞表位鉴定及HFRS患者T细胞免疫功能研究奠定基础。方法　采用Fi coll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,用灭活HTNV和IL 2体外刺激 ,有限稀释法建立T细胞克隆 ,流式细胞术鉴定克隆表型。并用EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞 ,建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) ,以含HTNVS基因的重组痘苗病毒感染B LCL作靶细胞 ,以CTL克隆作效应细胞进行细胞毒杀伤试验 ,测定T细胞克隆的抗原特异性。结果　T细胞克隆能特异性识别表达NP的B LCL。在 5名患者中 ,3名有较高的杀伤率 ,并自 2名患者建立了 5株HTNV特异性CTL克隆 ,其表型为CD8 均大于 6 0 %。结论　成功建立了HFRS患者HTNVNP特异性CTL克隆及其靶细胞。NP是HFRS患者HTNV特异性CTL应答的主要靶抗原之一。     

McAb亲和层析纯化HFRS病毒50K结构蛋白及其鉴定

先用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取出粗制病毒抗原。再选择一株的抗HFRS病毒的McAb(5H5)与CNBr活化Sepharose 4B相偶联,制成免疫吸附柱, 并以上述粗制病毒抗原通过免疫吸附柱。用3M KCNS洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个明显的蛋白洗脱峰,用ELISA从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴度。而用从正常乳鼠脑提取的对照抗原通过该免疫吸附柱,同样洗脱,结果洗脱物中未捡出抗原活     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的研究进展

近年来,各种不同特性的抗HFRS病毒McAb不断产生。并得到广泛应用。在病原学方面,McAb不仅能区分HFRS病毒的型别,还可对其抗原性作进一步分析,并为深入研究HFRS病毒各种结构蛋白的抗原位点、特性及功能,病毒对机体的感染与免疫,以及疫苗(特别是亚单位疫苗)的研制等提供了有力的工具。在HFRS检验诊断和流行病学调查方面,采用McAb建立了一些新检测方法,敏感性和特异性得到提高。另外,通过McAb对HFRS病毒感染乳鼠保护作用的研究,为特异性治疗HFRS提供了实验依据。