人肺腺癌紫杉醇耐药细胞系DNA polβ的表达

目的建立人肺腺癌紫杉醇多药耐药细胞系，测定耐药细胞系DNA聚合酶β（DNA polβ基因和蛋白表达。方法以紫杉醇为诱导药．人肺腺癌细胞系（A549）为诱导对象，逐步增加紫杉醇药物浓度进行诱导，建立耐紫杉醇的多药耐药细胞系A549／TXL20。采用MTT法检测A549／TXL20耐药指数，同时对顺铂、长春新碱、5氟脲嘧啶、丝裂霉素和羟基尿素五种药物进行交叉耐药检测。RC—PCR法和Western blotting法分别测定细胞内DNApolβ表达水平。结果A549／TXL20对紫杉醇及其他五种抗癌药物均有不同程度的耐药性。A549／TXL20细胞中DNA polβ mRNA及蛋白的表达水平均高于A549细胞（P〈0．05）。结论A549／TXL20具有多药耐药表型，耐药性产生可能与细胞内DNA polβ表达增高有关。     

几种肺癌细胞系中FHIT基因和蛋白表达的研究

目的研究不同人肺癌细胞系FHIT基因和蛋向的表达，为探讨外源FHIT基因对不同FHIT状态人肺癌细胞恶性表型的影响筛选受体细胞。方法提取B01D（人肺巨细胞癌细胞系）、LTEP-A2（人肺腺癌细胞系）、LTEP-Sm（人小细胞肺癌细胞系）和A549（人肺腺癌细胞系）细胞总RNA，定量后逆转录合成cDNA第一链，分别用5131、3D1和5U2、3D2两对引物进行巢式PCR扩增FHIT基因外显子1～10。1．5％琼脂糖凝胶电泳检测4种细胞株的FHIT基因表达。将扩增的PCR产物纯化后进行DNA测序。用FHIT单克隆抗体进行免疫组化染色检测4种细胞FHIT蛋白表达。结果801D和LTEP-Sm细胞有正常FHIT基因转录本，LTEP-A2细胞有一条正常FHIT基因转录本和一条异常转录本，正常转录本测序显示与FHIT cDNA同源，无缺失及重排。801D和LTEP-Sm细胞FHIT蛋向表达呈强阳性。A2细胞FHIT蛋白表达减弱。A549缺乏FHIT基因转录本和蛋白表达。结论4种细胞系代表3种FHIT基因状态，为进一步研究外源FHIT基因对不同FHIT状态人肺癌细胞恶性表型的影响提供了合适的受体细胞。     

大蒜素对K562细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的实验研究

目的:观察大蒜素对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:在体外设定的浓度梯度和作用时间下应用大蒜素处理K562细胞,采用锥虫蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率, Wright-Giemsa染色、光镜观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带(DNA,ladder),流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①大蒜素能够抑制K562细胞增殖;②0．1-5．0 mg／L大蒜素可诱导K562细胞凋亡。结论:大蒜素可抑制K562细胞生长,诱导其凋亡。     

p16、p53、p21基因对肺癌细胞增殖的影响

目的 观察肿瘤抑制基因ｐ１６,ｐ５３及细胞周期信赖激酶抑制物ｐ２１基因单独或联合应用时对肺癌细胞增殖的影响。方法 应用十八酰基胺阳离子脂质体介导ｐ１６,ｐ５３,ｐ２１基因单独或共转染到非小细胞肺癌细胞系Ａ５４９和小细胞肺癌细胞系ＳＨ７７,观察转染后１,３,５日该细胞增殖的活力。采用四甲基偶氮唑 盐微量酶反应比色法（ＭＴＴ法）测定吸光度（Ａ）,以检测细胞增殖活力,结果 Ａ５４９细胞系：Ａ均值分别为：     

外源性野生型p53基因对人肺癌细胞生长的抑制

目的观察外源性野生型ｐ５３基因对有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法用多聚酶链反应单链构象多态性及ＤＮＡ测序，选择ｐ５３基因突变的人肺巨细胞癌系８０１Ｄ为受体细胞。构建野生型ｐ５３表达质粒ＰＺＩＰｎｅｏＳＶｐ５３。用基因枪介导外源基因。建立转染细胞系８０１Ｄｐ５３。用聚合酶链反应检测外源基因，观察转染细胞恶性生长的变化。结果转染细胞系８０１Ｄｐ５３体外长期传代有ｎｅｏ基因及外源ｐ５３基因存在，转染细胞生长明显受到抑制，克隆形成抑制率达９６％，裸鼠异种移植致瘤性降低，肿瘤生长明显缓慢。结论外源性野生型ｐ５３经基因枪导入有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞后可长期存在于转染细胞中，且明显抑制转染细胞的恶性生长     

奥曲肽对TGF-α刺激肝癌细胞增殖和ERK表达的抑制作用

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对转化生长因子-α(TGF-α)刺激人肝癌细胞增殖和细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响。方法TGF-α刺激人肝癌细胞前后细胞增殖的变化以免疫组化法、绘制细胞生长曲线和集落形成实验检测，ERK蛋白表达以免疫组化法和Western-blot检测。结果TGF-α能上移细胞生长曲线，促进细胞集落形成，使细胞集落形成率增加，使增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白及ERK蛋白在细胞核内表达明显增加，Western-blot所测ERK蛋白表达也明显增加；奥曲肽和TGF-α同时作用于细胞后，与TGF-α单独作用相比，细胞生长曲线下移，细胞集落形成受抑制，集落形成率减少，PCNA蛋白及ERK蛋白在细胞核内表达明显减少，Western-blot所测ERK蛋白表达明显减少。结论奥曲肽能抑制TGFα刺激的人肝癌细胞增殖，阻断TGF-α在细胞内的信号传导。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞增殖的影响

目的 探讨藤梨根乙酸乙酯提取物影响肺癌A549细胞生长增殖的作用机制.方法 体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,倒置显微镜观察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后A549细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞增殖活性的影响,集落形成实验观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆原细胞增殖的影响,3H-掺入法检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞DNA合成的影响,免疫组化SP法检测用药后A549细胞Ki-67抗原表达变化.结果 倒置显微镜下观察细胞形态学变化、MTT实验、集落形成实验结果均显示在体外藤梨根乙酸乙酯提取物在一定浓度下可以抑制肺癌A549细胞的生长,当药物浓度在20～160 μg/ml时,抑制呈现出明显的时间和剂量依赖性.并且A549细胞epm值及增殖指数随着药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐降低,仍以40、80、160 μg/ml组作用明显,与对照组比较差异显著,有统计学意义(P＜0.05).结论 藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制肺癌A549细胞的生长、增殖,其机制可能与抑制细胞DNA合成、降低Ki-67抗原表达有关.     

端粒酶反义DNA影响肺癌细胞体外生长的初步研究

目的：研究端粒酶反义核苷酸对肺癌细胞体外生长的影响,探讨针对端粒酶进行肺癌基因治疗的可行性。方法：人工合成硫化修饰六核苷酸端粒酶反义DNA[5-d(TTAGGG)-3‘],在体外与端粒酶阳性肺癌细胞系801－D共同培养,观察其对肺癌细胞端粒酶活性,细胞形态和生长特性的影响,结果：端粒酶反义DNA对端粒酶阳性肺癌细胞系801－D生长,集落形成有明显的抑制作用,细胞形态发生明显改变,且端粒酶反义DNA的抑制作用与其浓度呈正比,结论：端粒酶反义DNA序列对肺癌细胞系801－D体外生长有明显的抑制作用。     

山茱萸水提取物对人肺癌A549细胞凋亡的作用

目的探讨山茱萸水提取物对人肺癌A549细胞的体外增殖的抑制及凋亡作用。方法采用MTT法及DNA琼脂糖凝胶电泳法检测山茱萸水提取物对A549细胞增殖的抑制及凋亡作用,并观察细胞形态改变。结果山茱萸水提取物对A549细胞抑制作用较明显,在一定范围内呈现较好的量效、时效关系;经不同剂量的山茱萸水提取物处理的细胞电泳均出现相差约200 bp的DNA梯状电泳图谱,形态学观察到细胞凋亡。结论山茱萸水提取物对人肺癌A549的细胞增殖有较强的抑制作用,能诱导其细胞凋亡。     

富硒麦芽粉水提取物通过细胞衰老和凋亡抑制人白血病K562细胞的增殖

目的 研究富硒麦芽粉水提取物能否抑制K562细胞增殖的作用.方法 Coulter细胞计数法检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞内活性氧自由基的水平,DNA特异染料Hoechst 33342染色检测染色质凝集,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达,衰老相关的β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老.结果 富硒麦芽粉水提取物能抑制K562细胞的增殖,IC50值为0.5 mg/mL.进一步研究发现：富硒麦芽粉水提取物使细胞阻滞在G2/M期、增加细胞内活性氧自由基水平,染色质发生凝集,引起细胞凋亡标志蛋白的切割.此外,4 mg/mL的水提取物能引起60％的细胞发生衰老.结论 富硒麦芽粉水提取物具有明显的抑制K562细胞增殖的作用,其机制与诱导细胞衰老和凋亡有关.     

淫羊藿苷对人肝癌HepG2细胞的作用及其机制研究

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对HepG2肝癌细胞的作用及其可能机制。方法:给人肝癌HepG2细胞施加不同浓度的ICA(0～40μM)培养,用CCK-8法和集落形成试验测定细胞增殖能力,通过流式细胞术分析检测细胞周期进程和细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法分析细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、以及芳烃受体(AHR)蛋白的表达水平。结果:ICA可抑制HepG2细胞的集落形成和细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G0～G1期,并诱导肝癌细胞凋亡。此外,ICA上调AHR蛋白表达,且其对HepG2细胞增殖的影响被AHR拮抗剂CH223191抑制。结论:ICA可能通过激活AHR信号抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和诱导细胞周期阻滞于G0～G1期,并诱导细胞凋亡。     

硒蛋氨酸诱导食管癌细胞株凋亡的实验研究

目的：探讨硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC 9706凋亡的影响。方法：采用MTT比色法，细胞生长曲线描绘观察硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC 9706增殖的影响。采用流式细胞仪观察硒蛋氨酸对EC 9706细胞诱导其凋亡的作用及对细胞周期的影响。琼脂糖凝胶电泳法检测DNA ladder。结果：硒蛋氨酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC 9706细胞增殖，改变细胞周期分布，增加G0／G1期细胞比例，诱导细胞凋亡。结论：硒蛋氨酸可能通过影响细胞周期分布和诱导细胞凋亡，从而抑制EC 9706细胞增殖。硒蛋氨酸可能是预防和治疗食管癌的一种新制剂。     

毛花苷C促进肝癌SMMC-7721细胞凋亡及抑制survivin的表达

目的:通过毛花苷C作用于人肝癌SMMC-7721细胞,研究其对SMMC-7721细胞增殖的影响初步探讨其作用机制.方法:使用不同浓度毛花苷C干预S M M C-7721细胞,通过细胞增殖实验及克隆形成实验,检测毛花苷C对SMMC-7721细胞增殖的作用;通过流式细胞仪检测毛花苷C对SMMC-7721细胞周期和凋亡的影响;采用Western blot技术分析细胞凋亡抑制基因survivin的表达.结果:毛花苷C对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用,各加药组与对照组相比差异有统计学意义(P0.01),并呈现剂量-效应相关关系;流式细胞术显示,毛花苷C将S M M C-7721细胞阻滞于S期,并诱导其凋亡;Western blot检测结果显示毛花苷C下调SMMC-7721细胞内survivin蛋白的表达.结论:毛花苷C明显抑制SMMC-7721细胞增殖,将细胞阻滞在S期并诱导其凋亡.该机制可能与下调survivin的蛋白表达有关.     

外源P53对人肺癌细胞生长的抑制

目的 观察外源性野生型Ｐ５３基因对有Ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法 用多聚酶链反应－单链多肽性及ＤＮＡ测序，选择Ｐ５３突变的人肺癌巨细胞系８０１－Ｄ。构建野生型Ｐ５３表达质粒ＰＺｉＰｎｅｏＳＶ－Ｐ５３。用基因枪介导外源基因。经新霉素筛选得到转染细胞系８０１－Ｄ－Ｐ５３。用ＰＣＲ检测外源基因，观察转染细胞恶性生长的变化。结果 转染细胞８０１－Ｄ－Ｐ５３体外长期传代有Ｎｅｏ基因及外性ＰＴ     

黑色素瘤相关抗原-A3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定及其在肺癌细胞株中的表达

目的 构建重组慢病毒载体PLV-MAGE--A3-GFP,并检测其在人肺癌细胞系A549的表达情况.方法 利用DNA重组技术将MAGE-A3基因克隆到带GFP的慢病毒表达载体质粒PLV中,经限制性酶切和测序鉴定重组载体.将重组慢病毒载体PLV- MAGE- A3 -GFP与包装质粒pCMV-dR 8.91及pCMV-VSV-G共转染人胚肾上皮细胞株293TAB,包装重组慢病毒PL V-MAGE-A3-GFP,并感染人肺癌细胞株A549,用Western blot法检测MAGE-A3蛋白的表达情况.结果 限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实,构建了重组慢病毒载体PLV-MAGE-A3-GFP,免疫荧光显微镜下观察显示慢病毒感染A549细胞后,MAGE-A3基因能够在细胞内正确地转录、翻译并稳定表达MAGE-A3基因.结论 成功构建了慢病毒载体PLV-MAGE-A3-GFP,包装的病毒能够成功感染人肺癌细胞系A549,并使MAGE-A3基因得以稳定表达,为进一步对非小细胞肺癌进行免疫治疗提供了适合的稳定转染的载体.     

白藜芦醇诱导小细胞肺癌H446细胞凋亡机制的研究

目的研究白藜芦醇对小细胞肺癌H446细胞增殖的抑制、凋亡诱导作用及作用特点,并探讨其可能的机制。 方法采用MTT法观察白藜芦醇对H446细胞的毒性以及细胞抑制率,筛选合适的药物作用浓度。通过不同浓度组及不同作用时间组观察白藜芦醇对H446细胞的毒性及细胞抑制率。采用流式细胞术检测不同浓度白藜芦醇及白藜芦醇不同作用时间对H446细胞的凋亡诱导作用、线粒体膜电位的变化以及细胞内ROS释放量的变化。 结果白藜芦醇对小细胞肺癌H446细胞增殖有明确的抑制作用,高浓度时可引起细胞死亡,随着药物剂量增加和作用时间的延长,抑制作用更强,具有剂量依赖和时间依赖的特点,差异有统计学意义(P<0.05)。白藜芦醇可诱导H446细胞凋亡、促进细胞内ROS的释放、使线粒体膜电位下降,随着药物剂量增加和作用时间延长,凋亡诱导作用更强、细胞内ROS释放量更多、线粒体膜电位下降速度更快,呈现剂量和时间依赖的特点,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论白藜芦醇对小细胞肺癌H446细胞的增殖具有明确的抑制作用,其诱导小细胞肺癌H446的凋亡可能与线粒体功能障碍有关。     

腺病毒介导的CIAPIN1基因对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

目的 以重组腺病毒载体介导细胞因子诱导的凋亡抑制分子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)基因转染人肺腺癌细胞系A549,观察并鉴定该基因在腺癌细胞中的表达及其对细胞生长和细胞周期的影响.方法 构建腺病毒载体介导CIAPIN1基因(Ad-CIAPIN1),转染到低水平表达CIAPIN1的人肺腺癌细胞系A549,采用Western blot检测目的蛋白的表达;台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线;流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化.结果 外源性CIAPIN1基因在A549肺癌细胞获得高水平的表达;CIAPIN1能显著抑制A549的生长(P＜0.01);流式细胞仪检测显示肺癌细胞发生凋亡,并出现明显的G1/S期阻滞现象.结论 以腺病毒为载体介导CIAPIN1基因在A549细胞内表达,可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡及参与细胞周期调控的作用.提示Ad-CIAPIN1基因可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用.     

肺腺癌SPC-A-1细胞表皮生长因子受体表达水平对其增殖的影响

目的 探讨采用体外化学合成的针对表皮生长因子受体(EGFR)设计的双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)，是否能诱导肺非小细胞肺癌(NSCLC)细胞出现序列特异性基因沉默，及抑制EGFR基因表达后NSCLC细胞的生物学特征。方法 体外合成EGFR序列特异性dsRNA(dsRNA-EGFR)，结合脂质体2000转染肺腺癌SPC-A-1细胞，用荧光显微镜及流式细胞仪测定转染细胞的EGFR受体数量；适时定量聚合酶链反应检测其EGFR基因表达水平。采用集落形成试验检测SPC-A-1细胞的增殖和集落形成能力。建立裸鼠肿瘤模型，计算肿瘤抑制率。结果 dsRNA-EGFR可使EGFR在蛋白水平表达下降71．3％、基因水平表达下降50．0％，SPC-A-1细胞集落形成下降66．8％，并显著抑制在体肿瘤生长，肿瘤抑制率为75．0％。结论 dsRNA-EGFR可序列特异性下调NSCLC细胞EGFR在基因及蛋白水平的表达，有效抑制肿瘤生长。     

肺炎支原体对小鼠腹腔巨噬细胞激活作用的研究

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,Mp）是引发人类急性呼吸道感染疾病和多系统／多器官肺外并发症的常见病原体。它侵入宿主与免疫活性细胞相互作用,可多克隆刺激T淋巴细胞、B淋巴细胞增殖,激活巨噬细胞、NK细胞及增强细胞毒性T细胞溶细胞能力,诱导炎性细胞因子和化学毒素,引起机体组织损伤,产生免疫病理变化。本研究旨在探讨肺炎支原体对小鼠腹腔巨噬细胞（MФ）的激活作用。现将结果报告如下。     

茶多酚对肺癌SPC-A1细胞增殖的影响

目的探讨茶多酚对人肺癌SPC—Al细胞增殖的影响。方法体外培养人肺腺癌SPC—A1细胞，以50—300mg／L茶多酚作用12、24、36h后，MTT法测定细胞的增殖活性，琼脂糖凝胶电泳、透射电镜观察细胞凋亡情况，流式细胞仪检测对细胞周期的阻滞作用。结果茶多酚可抑制肺癌细胞的增殖活性，其抑制作用随时间的延长而增强，以36h抑制作用最强。浓度50～150mg／L，抑制作用随浓度增高而增强；浓度〉150mg／L，抑制作用随浓度增高反而减弱。茶多酚可使肺癌细胞阻滞于G1期，以150mg／L阻滞作用24h最强。结论茶多酚可诱导人肺癌SPC-Al细胞的凋亡，并使细胞周期阻滞于G1期，抑制肺癌细胞的增殖。