自体骨髓干细胞经肝动脉移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的 评价自体骨髓干细胞经肝动脉移植对兔急性肝损伤模型的治疗效果,了解促肝细胞生长素(pHGF)在干细胞移植治疗中的协同作用.方法 新西兰雄性大白兔15只,皮下注射50%CCl4橄榄油溶液0.8 ml/kg连续4 d制作急性肝损伤模型.模型动物随机分为实验组A(干细胞移植组),实验组B(干细胞移植+pHGF组)和对照组(各5只).实验组经兔双侧胫骨抽取骨髓约5 ml,采用密度梯度离心法分离骨髓干细胞,制成5 ml细胞悬液,透视下经股动脉插管将骨髓干细胞经肝动脉注入肝脏,对照组注人生理盐水.实验组B在干细胞移植后隔日静脉注射pHGF 2.0 mg/kg共20 d.干细胞移植后2、4、8周抽血进行肝功能检测,8周后取兔肝脏组织标本进行病理学观察.结果 骨髓干细胞肝动脉移植后肝功能逐渐改善,至移植后8周,各组血清AST、ALT活性和TBIL、ALB含量均显著低于术前指标,而球蛋白含量高于术前(P均<0.05),而且各组之间仍有明显差异.病理组织学观察显示实验组肝纤维组织增生程度和肝细胞变性较对照组明显减轻.免疫组化染色可见肝组织内散在分布有CD34阳性肝样细胞,实验组A较对照组多,实验组B最多.结论 自体骨髓干细胞经肝动脉移植对肝损伤有明显治疗作用,可改善肝功能,促进肝组织结构重建,抑制纤维组织增生;pHGF能加速肝组织的修复和肝功能的改善.     

经肝动脉微球支架自体骨髓干细胞移植治疗兔肝硬化的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞经肝动脉移植治疗兔肝硬化模型的治疗作用,评价微球支架在干细胞移植过程中的协同作用。方法将35只雄性大白兔分为正常对照组及模型对照组、移植Ⅰ组和移植Ⅱ组并制备兔肝硬化模型。将体外分离纯化的骨髓干细胞,经肝动脉移植于移植Ⅰ组大白兔的肝脏,在体外将自制的壳聚糖微球支架和骨髓干细胞混匀后经肝动脉移植于移植Ⅱ组大白兔的肝脏。在移植后1、2、4、8、12周分别检测大白兔的肝功能,12周行肝脏病理学检查。结果在干细胞移植12周后移植Ⅰ组大白兔的血清ALT、AST、总胆红素(TBIL)逐渐降低,白蛋白(ALB)逐渐升高,活化部分凝血激酶时间(APTT)逐渐缩短,到移植术后第12周这些改变与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。而移植Ⅱ组动物肝功能指标改变较移植Ⅰ组迅速,与模型对照组比较有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。在移植术后12周时,移植Ⅱ组比同一时期的移植I组大白兔的肝脏功能改善更显著,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。病理学检查显示移植Ⅰ组、移植Ⅱ组肝细胞形态较规整,无明显水肿和变性,假小叶结构仍存在,但肝组织纤维化程度较对照组明显减轻。结论自体骨髓干细胞移植对肝硬化有一定的治疗作用,而微球支架与干细胞移植对肝硬化的治疗具有协同作用。     

自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化失代偿的临床研究

目的：研究肝动脉插管自体骨髓干细胞移植对肝硬化失代偿和慢性重症肝病的治疗作用。方法：从患者髂后上棘抽取骨髓100~200 m l,分离纯化骨髓源性干细胞,行肝动脉介入将干细胞移植到肝脏。观察移植后的临床症状、术后不良反应、肝功能检测及2年的生存率。结果：自体骨髓干细胞移植后患者症状好转,肝功能明显改善,生存率提高,未发现严重并发症。结论：骨髓干细胞移植对肝硬化失代偿的治疗安全有效,可作为肝硬化失代偿和慢性重症肝病的一种新的治疗方法。     

介入治疗联合干细胞移植治疗肝硬化临床分析

目的:探讨和评价介入治疗联合干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的近期疗效及其安全性。方法:30例失代偿期肝硬化患者,随机分为3组,每组各10例。A组仅行药物治疗,B组行TIPS治疗,C组行TIPS联合脐带血干细胞移植治疗。术前1周、术后1月及术后3月观察3组患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)水平变化及并发症情况。结果:手术及干细胞移植顺利,3组患者术前ALT、ALB、TB均无明显差异;A组患者药物治疗前后肝功能无特殊变化;B组患者术后1月、3月时ALT(P<0.01)及术后1月时TB(P<0.05)较术前升高;C组患者术后3月时ALT较术前减低,ALB则较术前明显升高(P<0.01),但ALB(30.78±0.69 g/L)仍低于正常下限(35 g/L)。术后1月时B组ALT及TB均较A组及C组升高(P<0.05);术后3月时C组患者ALT较其他组降低明显(P<0.05),而ALB则较其他组升高(P<0.01)。C组术后并发肝性脑病1例,术后3月肝胆CT检查分流道通畅,未见占位病变。结论:介入治疗联合干细胞移植治疗失代偿期肝硬化安全可靠,近期疗效显著。     

心肌灌注/代谢显像评价干细胞移植后犬受损心肌的修复能力

目的 采用核素心肌灌注(MPI)/代谢(MMI)显像评价犬心肌梗死自体骨髓干细胞移植后受损心肌的修复能力.方法 选取杂种犬12条,按动物编号法随机分为移植组(单号)及对照组(双号)各6条.通过手术间断阻断左前降支(LAD)下1/3循环90 min,建立犬心肌梗死模型.将诱导分化的骨髓间质干细胞自体移植到移植组动物梗死区,通过核素MPI和MMI、组织病理、免疫组织化学等技术评价干细胞移植治疗后6周和10周的效果.采用SPSS 10.0软件进行统计学处理.结果 (1)3条犬死亡,其中对照组2条.其余9条犬结扎冠状动脉24-48 h后的心电图、9～12 h后静脉血清心肌酶谱、5～7 d后MPI符合心肌梗死改变.(2)细胞移植后5～7 d MPI/MMI发现对照组心肌梗死节段数及梗死区存活心肌节段数分别为20及8个节段,移植组分别为25及10个节段,2组差异无统计学意义(t=0.389,P＞0.05).(3)ANOVA分析结果示,移植组有存活心肌的节段数在细胞移植10周与移植后5～7 d MPI/MMI比较差异有统计学意义(F=5.879,P＜0.05);无存活心肌的节段数细胞移植6周及10周MPI/MMI差异均无统计学意义(F=0.376,P＞0.05).对照组细胞移植后5～7 d、6周和10周的MPI/MMI所示梗死心肌节段数差异无统计学意义(F=0.212,0.005,0.316,P均＞0.05).(4)细胞移植5～7 d及10周后对照组与移植组的MPI所示左心室射血分数(LVEF)的变化值分别为(5.50±2.69)%及(16.20±2.93)%,2组之间差异有统计学意义(t=13.563,P＜0.01).结论 MPI/MMI不仅可以确定心肌梗死的部位、范围、程度及梗死心肌是否存活,还可以反映骨髓干细胞移植后的细胞存活及生长状况.     

骨髓干细胞移植对急性肝功能损伤大鼠治疗的实验研究

目的：研究不同的骨髓干细胞移植途径对急性肝功能损伤大鼠的治疗作用。方法：采用四氯化碳注射方法,建立大鼠急性肝损伤模型,观察门静脉移植和肝实质内移植干细胞两种方式对急性肝功能损伤大鼠的治疗作用。结果：对于药物致急性肝损伤大鼠,干细胞移植后3周,两种方式的移植组血清白蛋白水平均明显高于阴性对照组（P〈0.05）,且肝实质内移植组明显高于门静脉移植组（P〈0.05）;肝实质内移植组血清谷丙转氨酶明显高于门静脉移植组（P〈0.01）。结论：骨髓干细胞移植可以促进急性肝损伤大鼠血清白蛋白恢复;肝实质内移植骨髓干细胞易引起肝脏损害。     

用18 F-FDG和99 TCm-MIBI显像评估冷冻心肌骨髓CD34+细胞移植后代谢和灌注的变化

目的用18F-脱氧葡萄糖(FDG)、99Tcm-甲氧基异丁基异腈(MIBI)评价犬冷冻心肌骨髓CD34+细胞移植后心肌代谢和灌注的变化.方法12只杂种犬分为细胞移植组和对照组.用免疫磁珠法从犬肋骨骨髓分离CD34+细胞并注射到用CO2冷冻建立的慢性心肌梗死模型区,对照组注射伊思考夫改良杜尔贝可培养基(IMDM)培养液.分别于建立模型前、后4周和干细胞移植后8周行18F-FDG和99Tcm-MIBI心肌显像,评价细胞移植结果,计算冷冻心肌代谢与灌注显像的F值.干细胞移植后8周取心肌做第8因子免疫组织化学和病理检查.结果正常心肌代谢与灌注显像清晰,F值接近0,干细胞移植前、后8周冷冻心肌18F-FDG与99Tcm-MIBI显像的F值分别为5.50±1.31,5.44±0.70与1.17±0.41,1.50±0.55(P＜0.01);对照组为5.53±0.80,5.54±1.29与5.00±1.55,5.08±1.46(P＞0.05),骨髓CD34+细胞移植使冷冻心肌的代谢与灌注明显得到恢复.干细胞移植后8周冷冻区血管密度高于对照组(P＜0.01).结论骨髓CD34+细胞移植后冷冻区存在大量活的心肌细胞.     

骨髓间质干细胞移植对肝纤维化模型大鼠治疗效果

目的探讨骨髓间质干细胞(MSCs)对肝纤维化模型大鼠肝功能及肝纤维化的改善情况。方法将39只健康雌性SD大鼠分为对照组(n=14)和肝纤维化模型组(n=25)。对照组给予普通食水喂养;肝纤维化模型组给予四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射及乙醇喂养,建立大鼠肝纤维化模型。建模成功后将存活的大鼠随机分为对照组、模型组和移植组(每组各9只)。取健康SD大鼠骨髓,利用全骨髓贴壁的方法原代培养骨髓MSCs,然后将MSCs通过大鼠尾静脉对肝纤维化模型大鼠进行移植。移植后4周,检测血清白蛋白、转氨酶、胆红素、Ⅳ型胶原;HE和Masson染色观察肝纤维化程度。结果 MSCs移植后4周,移植组和模型组大鼠肝的纤维组织增生较对照组大鼠重,差异有统计学意义(P<0.01);但移植组大鼠肝的纤维组织增生较模型组大鼠显著减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和移植组的肝功能较对照组差,差异有统计学意义(P<0.01);但与模型组比较,移植组大鼠血清白蛋白显著增高,胆红素、转氨酶、Ⅳ型胶原显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝纤维化模型大鼠骨髓MSCs移植4周后肝功能改善,肝纤维化程度显著减轻。     

磁标记大鼠骨髓间充质干细胞活体内移植后向肝癌细胞趋向性迁移的研究

目的 探讨磁标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)活体内移植后对大鼠肝细胞癌的趋向性迁移及其机制.方法 培养大鼠BMSCs,超顺磁性氧化铁粒子标记.制备大鼠肝癌模型24只,数字表法随机分为3组:实验组(n=12)经脾植入磁标记的BMSCs;对照组A(n=6)移植未标记的BMSCs;对照组B(n=6)不作任何处理.分别于移植前及移植后1、3、7和14 d行MR扫描,选用T_2*WI序列进行移植细胞的示踪并测量肿瘤组织与正常肝组织的信号强度的比值(SI/SI*),结果行单因素方差分析;取肿瘤组织、瘤旁正常肝组织行普鲁士蓝染色,分析BMSCs在体内的分布并与MR对照.结果 BMSCs的磁标记率为90%以上.移植后实验组T_2*WI显示肿瘤信号强度值明显减低,移植前及移植后1、3、7和14 d的SI/SI*值分别为3.18±0.21、1.98±0.20、2.38±0.28、2.70±0.25及3.16±0.24,差异有统计学意义(F=56.65,P<0.05);与移植前相比,1、3、7 d肿瘤信号强度的减低有统计学意义(t值分别为1.20、0.79、0.48,P值均<0.05).对照组移植前后各SI/SI*值差异无统计学意义(P>0.05).免疫组织化学显示实验组肿瘤边缘及内部有大量监染的普鲁士蓝阳性细胞分布,标记细胞在肿瘤内的分布与MR信号改变基本一致.对照组肿瘤组织普鲁士蓝染色均为阴性结果.结论 BMSCs在活体内对肝癌细胞有明显的趋向迁移特性,有望成为基因治疗肝细胞癌的载体.     

同种异体骨髓基质细胞肝内移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的 探讨同种异体骨髓基质细胞(BMSCs)移植到D-氨基半乳糖(D-Gal)诱导的兔急性肝损伤模型的治疗效果.材料与方法 BMSCs由雄性白兔的股骨和胫骨的骨髓中提取,分离、培养及传代3周并观察其形态学特征,然后直接肝脏注射移植到D-Gal诱导的同种雄性兔的急性肝损伤模型内.实验组(n=24):为直接肝脏内注射5 ml BMSCs(约2×107个);对照组(n=34):为直接肝脏内注射5ml D-Hanks液.每天观察各组实验兔的行为变化、存活率、肝功能[丙氨酸氨基转移酶(ALT),谷草转氨酶(AST),白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)]的改变;BMSCs移植后1、2、4周分别处死两组实验兔,观察肝脏组织病理学变化及肝脏坏死程度,参照评分标准.两位组织病理学医师双盲予以各实验动物的肝脏组织标本评分.结果 实验组1周后的存活率高于对照组(95.8%vs 70.6%,P＜0.05),而1～2周后的存活率较对照组未见显著性改善(100%vs82.4%,P＞0.05).肝功能的检测显示:与对照组比较,实验组在细胞移植后血清ALB明显升高(P＜0.05),ALT和AST均有显著性降低(P＜0.05),但两组的TBIL水平的变化并无统计学意义(P＞0.05).组织病理学评分的结果显示:与对照组比较,BMSCs移植到受损肝脏后可显著减轻肝脏坏死程度及刺激肝细胞再生进而发挥强大的抗坏死作用(P＜0.001).结论 同种异体BMSCs移植可加速修复D-Gal诱导的兔严重急性肝损伤.BMSCs直接肝内注射移植为实验动物模型简单实用的移植方式.     

MRI对急性心肌梗死后不同心脏状态下干细胞移植后体内再分布与疗效评价的动物实验研究

目的 探讨MRI在研究停跳与不停跳两种心脏状态下,经猪心肌梗死模型心肌注射骨髓间充质干细胞后全身各主要脏器(心、肝、脾、肾)干细胞的早期再分布及疗效评价中的应用价值.方法 干细胞提取自雄性猪并用超顺磁性氧化铁标记.雌性猪制成急性心肌梗死模型7 d后数字表随机方法分为4组.第1组为心脏停跳细胞注射组(6只),体外循环后心脏停跳,超顺磁性氧化铁标记的干细胞(1×108)经心肌注入心肌梗死周边区.第2组为不停跳心脏细胞注射组(6只),相同的细胞在心脏跳动下经心肌注入心肌梗死周边区.第3组停跳心脏对照组(6只)和第4组不停跳心脏对照组(6只)中,相同剂量的生理盐水分别在停跳和不停跳状态下经心肌注入心肌梗死周边区.3 d后,行MR T2*WI示踪和心功能检查.并取动物心、肝、脾、肺、肾的标本,用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测雄性细胞特异性的性别决定区域(SRY)基因定量检查.统计学分析采用方差分析和t检验.结果 第1～4组术前左心室舒张末期容积(LVEDV)分别为(56.8±5.3)、(54.8±6.8)、(57.4±4.3)和(56.8±2.8) ml,术后LVEDV分别为(65.2±5.2)、(63.2±3.7)、(60.2±4.7)和(62.2±4.4) ml,术前左心室收缩末期容积(LVESV)分别为(33.5±7.6)、(32.3±5.3)、(33.5±3.6)和(32.7±4.6) ml,术后LVESV分别为(37.3±5.6)、(36.3±6.9)、(34.3±5.4)和(36.3±8.1) ml;术前左心室射血分数值(LVEF)分别为(42.3±7.2)%、(41.7±6.8)%、(41.8±8.6)%和(42.7±7.7)%,术后LVEF分别为(44.5±8.7)%、(43.1±7.4)%、(42.8±5.6)%和(43.3±8.4)%;术前心肌梗死面积(MI)分别为(6.5±2.1)、(6.4±1.9)、(6.5±2.5)和(6.4±2.6) cm2,术后MI分别为(6.4±2.3)、(6.2±2.6)、(6.3±2.5)和(6.4±2.8) cm2,差异均无统计学意义(术前P值均＞0.05,F值分别为0.277、0.066、0.066、0.003;术后P值均＞0.05,F值分别为1.137、0.182、0.021及0.008).心脏中第1组较第2组T2*降低显著[(-22.3±2.2)和(-17.0±0.8) ms,t=-5.489,P＜0.01],而脾脏中第2组较第1组T2*值降低显著[(-7.7±0.7)和(-13.3±1.1) ms,t=9.055,P＜0.01],在肝脏及肾脏2组差异无统计学意义(肝脏t=-0.532,P>0.05,肾脏t=-0.113,P>0.05).SRY基因和qRT-PCR结果,第1组及第2组心脏[(150±62)和(72±4) U/L]、脾脏[(131±1)和(233±17) U/L]及肝脏[(17±1)和(9±5) U/L]差异有统计学意义(P值均＜0.05,t值分别为3.109、-13.286及3.492),病理学检查可以见移植细胞呈普鲁士蓝染色阳性,与MRI有很好的一致性.结论 干细胞氧化铁颗粒标记后,MRI可以作为方便而有效的手段在移植早期活体示踪干细胞,评价其在体内的分布情况.在心脏停跳状态下经心肌注射骨髓间充质干细胞将更有利于细胞在心脏的滞留.

Abstract：

Objective To evaluate the efficacy of MRI for assessment of re-distribution of bone marrow mesenchymal stem cells injected intramyocardially in main organs (heart, liver, spleen and kidney) under different heart status (beating or arresting) in a porcine model. Methods Bone marrow-derived mesenchymal stem cells were obtained from the male swine and labeled with iron oxide during culture. Acute myocardial infarction was created in female swine, one week later, the survivors were randomly divided into 4 groups. Cardiopulmonary bypass was set up to arrest the heart, and then labeled cells (1×108) were intramyocardially injected into the border of the infracted myocardium in group 1 (n=6). The same volume of cells was grafted into the beating heart in group 2 (n=6). In group 3 and 4, saline was injected into either the arresting or beating myocardium. Three days later, re-distribution of stem cells and cardiac function were assessed by T2*WI and cine MRI, respectively. All animals were sacrificed for histology and real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) of sex-determining region on Y-chromosome (SRY) investigation.The ANOVA and t test was used for statistics. Results The left ventricular end-diastolic volume (LVEDV) before transplantation for group 1-4 were: (56.8±5.3),(54.8±6.8),(57.4±4.3)and(56.8±2.8) ml, and after transplantation for group 1-4 were: (65.2±5.2),(63.2±3.7),(60.2±4.7)and(62.2±4.4) ml. The left ventricular end-systolic volume (LVESV) before transplantation for group 1-4 were: (33.5±7.6),(32.3±5.3),(33.5±3.6)and(32.7±4.6) ml,and after transplantation for group 1-4 were: (37.3±5.6),(36.3±6.9),(34.3±5.4)and(36.3±8.1) ml. The left ventricular EF values (LVEF) before transplantation for group 1-4 were: (42.3±7.2)%,(41.7±6.8)%,(41.8±8.6)% and(42.7±7.7)%,and after transplantation for group 1-4 were: (44.5±8.7)%,(43.1±7.4)%,(42.8±5.6)% and(43.3±8.4)%. The myocardial infarction area (MI) before transplantation for group 1-4 were: (6.5±2.1),(6.4±1.9),(6.5±2.5)and(6.4±2.6) cm2,and after transplantation for group 1-4 were: (6.4±2.3),(6.2±2.6),(6.3±2.5)and(6.4±2.8) cm2 . There were no statistical differences before and after transplantation in these 4 groups[P values of before and after transplantation for LVEDV, LVESV, LVEF,MI were >0.05 (F= 0.277, 0.066,0.066, 0.003); and >0.05 (F= 1.137,0.182,0.021,0.008),respectively]. The T2 value of the infracted myocardium in group 1 decreased more obviously than that in group 2[(-22.3 ± 2.2) vs (-17.0 ± 0.8) ms, t=-5.489, P＜0.01], while the T2 value of the spleen decreased more significantly in group 2 than that in group 1[(-7.7 ± 0.7) vs (-13.3 ± 1.1) ms,t=9.055, P＜0.01]. The T2 values of the liver and kidney were no significant differences in group 1 and 2 (liver, t=-0.532,P>0.05 and kidney, t=-0.113,P>0.05). The results of RT-PCR in group 1 and 2 showed significant differences in heart[(150±62) vs (72±4) U/L ,P<0.05, t=3.109], spleen[(131±1) vs (233±17) U/L, P＜0.01, t=- 13.286]and liver[(17±1) vs (9±5) U/L ,P<0.01,t= 3.492]. Pathological examination demonstrated that the transplanted stem cells were positive for Prussian blue staining, which had a good correlation with MRI results. Conclusion MRI can serve as a convenient and efficient imaging method to track the migration of stem cells with SPIO labeled in early stage and evaluate its early re-distribution in vivo. Injection of bone marrow mesenchymal stem cells in the arresting heart could favor retaining more cells in the myocardium.     

自体外周血干细胞移植联合自体骨髓移植治疗恶性血液病61例临床分析

目的　总结分析自体外周血干细胞移植 (APBSCT)联合自体骨髓移植 (ABMT)治疗恶性血液病的经验。方法　APBSCT联合ABMT治疗恶性血液病患者 6 1例 ,其中急性髓系白血病 (AML) 2 0例 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 2 4例 ,非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 17例。结果　AML ,ALL ,NHL组的 3年及 5年无病生存率分别为 (6 3.2± 10 .6 ) % ,(5 4.6±10 .3) % ;(32 .8± 12 .5 ) % ,(15 .4± 12 .4) % ;(75 .4± 11.3) % ,(73.2± 11.5 ) %。移植后造血重建时间 ,WBC恢复至 >0 .5× 10 9/L时中位天数 +12 .0d ,WBC >1.5× 10 9/L时中位天数 +14.0d。PLT最低降至 <30× 10 9/L者当恢复 >30× 10 9/L时的中位天数 +17.5d。全部患者移植相关死亡率为零。 6 1例中至今死亡 14例 ,皆死于复发 ,主要为ALL患者。移植相关并发症以发热、肝功能受损最常见。结论　APBSCT联合ABMT治疗恶性血液病的疗效优于常规化疗。     

肝移植急性排异患者外周血Th17及调节性T细胞的特征及意义

目的 探讨肝移植术后急性排异患者外周血中Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的变化特征及临床意义.方法 2011年1-9月解放军302医院肝移植研究中心收治的肝移植术后患者25例,根据移植组织穿刺活检病理结果分为急性排异组(排异组,12例)和非排斥稳定组(稳定组,13例),另选取13名健康体检者作为对照.采用流式细胞分析法检测外周血中Th17、Treg细胞占CD4+T细胞的比例,观察Th17/Treg比值变化及其与肝脏损伤的关系.结果移植术后排异组外周血中Th17占CD4+T细胞的比例(3.50％±0.86％)明显高于稳定组(2.10％±0.52％)和对照组(1.79％±0.42％,P＜0.01),稳定组和对照组比较无统计学差异(P＞0.05).排异组和稳定组患者外周血中Treg占CD4+T细胞的比例(分别为0.90％±0.25％、1.51％±0.23％)明显低于对照组(2.57％±0.79％,P＜0.01),且排异组明显低于稳定组(P＜0.05).排异组Th17/Treg比值(4.20±1.69)明显高于稳定组(1.43±0.47)及对照组(0.75±0.28,P＜0.01),且稳定组明显高于对照组(P＜0.01).Th17/Treg比值与丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酸转氨酶(GGT)水平呈正相关(分别为r=0.5023,P=0.0105; r=0.4561,P=0.0219;r=0.4393,P=0.0280; r=0.5516,P=0.0043).结论 肝移植术后急性排异反应患者外周血中存在Th17/Treg失衡,且与肝脏损伤有一定关系.Th17/Treg失衡可能参与了肝移植术后急性排异反应的发生发展过程.     

碘油磁液经肝动脉栓塞热疗兔VX2肝癌的实验研究

目的 探讨碘油磁液经肝动脉栓塞热疗术对荷瘤兔肝、肾功能的影响及其疗效.方法 VX2兔肝癌模型32只,数字表法随机等分成4组:碘油磁液栓塞热疗组(A组)、碘油磁液栓塞组(B组)、单纯碘油栓塞组(C组)、对照组(D组).A、B两组实验兔经肝动脉注入碘油磁液0.5～0.8 ml栓塞病灶,C组实验兔仅用碘油栓塞.栓塞后仅A组实验兔在交变磁场下诱导热疗.实验兔分别于栓塞或栓塞热疗术前1 d和术后1、7、14 d经耳缘静脉取血,行肝、肾功能检查.肝功能指标选取丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST),肾功能指标选取血清尿素氮(BUN)和血清肌酐(Cr).栓塞术前、术后即刻、术后7、14 d行CT扫描并随访,观察碘油磁液或碘油在瘤内沉积分布情况并分别测量肿瘤大小.术后14 d处死实验兔,完整切取肝脏、脾、肾和肺,作病理检查.各组测量数据以重复测量方差分析进行统计学分析.结果 A组实验兔术前1 d和术后1、7、14 d ALT分别为(43.9±19.0)、(795.1±327.1)、(67.0±9.3)、(41.9±10.8)U/L,AST分别为(50.2±13.6)、(1011.2±655.9)、(62.4±24.1)、(51.6±7.9)U/L;B组ALT分别为(45.0±19.1)、(580.8±160.4)、(67.2±31.0)、(47.6±7.8)U/L,AST分另U为(52.9±20.3)、(735.2±186.1)、(57.9±24.8)、(50.9±9.8)U/L;C组ALT分别为(47.4±14.6)、(558.5±167.8)、(63.5±21.9)、(48.0.±9.3)U/L,AST分别为(51.8±9.5)、(752.5±112.0)、(56.5 ±20.6)、(51.4±8.6)U/L;术后1 dALT和AST较术前和D组明显升高(P值均<0.01),术后7、14 d所测值与术前比较差异无统计学意义.栓塞术前后4组实验兔BUN和Cr值组间和组内比较,差异均无统计学意义.术后7 d CT示A、B、C 3组瘤区碘油磁液和碘油沉积分布与栓塞或栓塞热疗前相比无明显变化.术后14 d CT示A组瘤区碘油磁液沉积更集中、密实,B、C两组共5例肿瘤瘤周碘油磁液或碘油移位、部分消失.术后14 d,A组肿瘤体积[(6.1±0.6)cm~3]较术前[(7.8±1.4)cm~3]平均缩小约21.7%(F=17.56,P<0.01),而术前B、C两组肿瘤体积分别为(7.9±1.1)、(7.8±0.9)cm~3,治疗后14 d分别为(9.1±0.8)、(9.3±1.0)cm~3,较术前平均增大16.2%、18.9%(F值分别为25.23、55.50,P值均<0.01).病理检查,栓塞14 d后,A组肿瘤坏死均达80%以上,B、C两组肿瘤坏死约30%~50%.结论 碘油磁液对兔VX2肝癌行选择性肝动脉栓塞热疗是安全有效的,具有可行性.     

Enhanced autophagy protects hepatic cells from radiation injury

Objective To study the influence of radiation on autophagy and its protective effect on radiation injury of hepatic cells. Methods Autophagy in mouse liver tissues was examined by GFP-LC3 staining and Western blot. Radiation-induced hepatic injury was evaluated by ALT and AST in mouse serum, protein expressions, and H & E and TUNEL staining of liver tissue. L02 cells were used for in vitro study. Chloroquine and rapamycin were used to manipulate the level of autophagy. Results Total body irradiation (TBI) of 8 Gy caused an increase of autophagy in mouse liver tissue and AST level in serum(t=-7.47, P<0.05) at 12 h after irradiation. Irradiation significantly increased the apoptotic level in liver tissue as well. Inhibition of autophagy by chloroquine caused a further increases of AST[IR:(345.42±35.25)U/L vs. IR+CQ:(433.42±40.07)U/L, t=-2.86, P<0.05] and ALT[IR:(35.67±8.08)U/L vs. IR+CQ:(98.5±26.67)U/L, t=-3.09, P<0.05] in the serum, and it also promoted apoptosis in live tissue. However, rapamycin as an autophagy promoter showed protective effect for radiation-induced hepatic injury[AST:IR:(345.42±35.25)U/L vs. IR+Rap:(278.42±20.09)U/L, t=-2.86, P<0.05]. Similar changes of autophagy and apoptosis in L02 cells were also observed in the cells treated with chloroquine and rapamycin. Inhibition of autophagy by CQ caused an increase of ROS in vitro and in vivo and further increased ALT and AST levels in serum, reduced L02 cell viability. Activation of autophagy by Rap effectively reversed those changes. Conclusions Autophagy protects hepatic cells from radiation injury by decreasing ROS induction, which provides a potential target for the development of new clinical regimens against radiation induced liver injury.     

肝脏CT灌注成像与肝硬化程度的关系

目的:利用多层螺旋CT进行肝脏血流灌注,初探不同程度的肝硬化血流灌注参数变化。方法:对10例不同程度的肝硬化患者以及8例对照者,选取肝门区良好显示脾脏、门脉主干、肝脏左右叶的层面,行CT同层动态增强扫描,绘制时间-密度曲线,计算肝脏灌注参数。结果:正常组肝动脉灌注量(HAP)为(0.341 1±0.138 7)ml.min-1.ml-1,门脉灌注量(PVP)为(1.105 2±0.369 7)ml.min-1.ml-1,总肝灌注量(THBF)为(1.450 3±0.445 6)ml.min-1.ml-1,肝动脉灌注指数(HAI)为(23.42±5.94)%。肝硬化严重程度不同时,Child-Pugh A、B、C 3组肝动脉灌注量均较正常组增高,但组间呈逐渐下降趋势,分别为(0.467 7±0.158 8,0.447 8±0.100 4,0.436 7±0.094 2)ml.min-1.ml-1;门脉灌注量和总肝灌注量均较正常组下降,组间呈下降趋势,分别为(0.921 4±0.179 3,0.845 6±0.158 6,0.745 3±0.119 1)ml.min-1.ml-1,(1.397 8±0.324 1,1.568±0.204 6,1.158 6±0.168 4)ml.min-1.ml-1;肝动脉灌注指数则较正常组逐级升高(30.21±4.66,34.88±4.79,37.08±4.13)%。结论:多层螺旋CT肝硬化肝脏血流灌注参数的变化与肝硬化的程度相关。     

AFP、CEA和CA199联合检测在原发性肝癌诊断中的应用

目的：探讨多种血清肿瘤标志物联合检测对原发性肝癌的诊断价值。方法：采集110例原发性肝癌和152例良性肝病（肝硬化和慢性肝炎）患者血液,用化学发光法测定AFP、CEA和CA199水平。结果：原发性肝癌患者血清中AFP、CEA和CA199水平分别为（60.6±80.5）μg/L、（22.2±13.9）μg/L、（47.2±28.3）U/L,明显高于良性肝病患者血清水平;原发性肝癌患者中AFP、CEA和CA199阳性率分别为74.6%、49.1%和45.5%,显著高于良性肝病患者;三者联合检测将原发性肝癌检测敏感率提升至92.7%。结论：联合检测可提高原发性肝癌诊断的敏感率,在原发性肝癌的筛查中有一定的应用价值。     

乙肝患者外周血单核细胞比例与肝脏病变程度的关系研究

目的探讨乙肝患者外周血单核细胞比例与肝脏病变程度的关系。方法收集2010-2011年解放军302医院明确诊断的轻中度慢性乙型肝炎患者197例(肝炎组)、乙肝肝硬化患者248例(肝硬化组),以同期269例健康体检者作为对照组。采用Sysmex XE-2100血液分析仪进行全血细胞分析,实时荧光PCR扩增仪进行血清HBV DNA定量,ELISA法测定血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(IV.C)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平。共390例患者进行了肝组织活检,参照中华医学会《病毒性肝炎防治方案》(2000年)进行肝脏炎症程度(G0-G4)及纤维化程度(S0-S4)评价。结果全血细胞分析结果表明,肝炎组和肝硬化组外周血单核细胞比例(分别为8.93%±3.05%、9.85%±3.61%)明显高于对照组(8.16%±1.88%,P<0.01),且肝硬化组明显高于肝炎组(P<0.01);血清HBV DNA定量分析表明,239例HBV DNA≥100U/ml的患者单核细胞比例(8.61%±2.83%)显著高于206例HBV DNA<100U/ml的患者(8.12%±2.53%,P<0.05);ELISA检测结果表明,肝硬化组肝纤维化指标HA、LN、IV.C、PCⅢ水平均明显高于肝炎组,且同组内肝纤维化指标升高者的单核细胞比例高于肝纤维化指标正常者;390例患者的肝组织活检病理结果显示,随肝脏炎症及纤维化程度加重,单核细胞比例升高的患者逐渐增多,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。结论乙肝患者外周血单核细胞比例升高与肝脏病变程度关系密切,可在一定程度上反映肝脏的炎症及纤维化水平。