感染性休克下调大鼠血管内皮和血小板L-精氨酸/一氧化氮通路

目的：观察感染性休克对大鼠血小板及血管L-精氨酸(L-Arg)/一氧化氮合酶(NOS) /一氧化氮(NO)通路的影响及其相互联系,探讨感染性休克损伤的机制。方法:利用盲肠结扎并穿孔复制早期和晚期感染性休克大鼠模型,采用Greiss法测定血管各层及血小板孵育液亚硝酸盐(NO^-₂/NO^-₃)含量;以同位素示踪法检测其NOS活性及L -Arg转运。结果:早、晚期感染性休克大鼠血小板和主动脉内膜NO-2/NO-3水平、NOS 活性及低亲合L-Arg 转运量均显著低于假手术组(高亲合L- Arg 转运量在早期休克增加、晚期休克降低);而中膜和外膜的NO^-₂/NO^-₃水平、NOS 活性及L-Arg 转运量则显著高于假手术组,均以休克晚期改变为显著。血小板和主动脉内膜NO^-₂/NO^-₃生成、NOS 活性及高、低亲合L-Arg 转运的改变均呈正相关(均P< 0. 01)。结论:感染性休克下调血管内膜和血小板的L-Arg/NO通路,上调血管中膜和外膜L-Arg/ NO通路。提示检测血小板L-Arg/NO通路的变化可能反映休克时血管内皮功能的损伤。     

慢性低氧对大鼠肺血管L-精氨酸

目的:探讨慢性低氧对大鼠肺血管L-精氨酸/一氧化氮(L-Arg/NO)途径的影响。方法:采用慢性低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺血管孵育,测定慢性HPH对大鼠肺动脉L-Arg转运,一氧化氮合酶(NOS)活性和NO生成释放的影响。结果:(1)低氧4周大鼠肺动脉平均压(mPAP)比对照组高33.7%(P＜0.01),右心室(RV)和左室加室间隔(LV+S)重量比值(RV/LV+S)高44.2%(P＜0.01)。(2)低氧对血浆L-Arg含量无明显影响。(3)低氧大鼠离体孵育的肺动脉摄取低浓度(0.2mmol/L)和高浓度(5.0mmol/L)[³H]-L-Arg分别低于对照组15.8%(P＜0.05)和27.2%(P＜0.01)。(4)低氧大鼠肺动脉tNOS、iNOS和cNOS活性较对照组高38.0%、32.8%和53.0%(P＜0.01)。(5)低氧大鼠血浆NO含量低于对照组,与mPAP和RV/LV+S呈负相关(P＜0.01)。结论:慢性HPH时NOS活性代偿性增强,但L-Arg转运受损使血浆NO生成仍减少,说明L-Arg转运是NO生成的重要限速步骤。     

亚低温对缺氧缺血性脑病大鼠脑内一氧化氮代谢的影响

目的　探讨亚低温对缺氧缺血性脑病大鼠脑内一氧化氮 (NO)代谢的影响。方法　制备新生大鼠缺氧缺血性脑病 (HIE)模型 ,采用 34℃亚低温干预 4 8h ,监测大鼠脑组织内NO含量及一氧化氮合酶 (NOS)的活性。结果　HIE 4 8h后NO含量及NOS的活性明显升高 ,与正常对照组相比有显著差异 (P <0 .0 1) ,亚低温干预组NO含量及NOS的活性无明显升高 ,与HIE组相比有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　亚低温可通过抑制NOS活性 ,减少NO的生成 ,防止NO大量生成所致的神经毒性 ,从而对缺氧缺血性脑损伤有保护作用。     

寒冷应激对小鼠脑内一氧化氮及一氧化氮合酶的影响研究

目的探讨寒冷应激(-10℃、10h)对小鼠脑内一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)的影响及意义.方法将40只雄性昆明品系小鼠随机分为对照组和实验组,每组20只.寒冷应激实验结束后取脑组织检测一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性.结果对照组NO及NOS分别为21.12±8.68μmol/gprot、2.21±0.57U/mgprot.实验组为16.03±6.98μmol/gprot、2.84±0.79U/mgprot.寒冷应激后NO水平降低并有统计学意义(t=2.58,P<0.05),NOS活性增高并有统计学意义(t=-2.72,P<0.05).应激后NO与NOS呈显著性负相关(r=-0.461,P<0.05).结论神经递质NO及NOS参与了中枢神经寒冷应激反应,且NO水平降低、NOS活性增高,可能对中枢神经细胞主要起保护作用.在寒冷应激后期吸入适量NO可能增强脑神经元对寒冷应激的耐受性.     

败血症休克大鼠血管外膜L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮通路的变化

目的：观察败血症休克大鼠主动脉外膜L-精氨酸（L-Arg）转运，一氧化氮合酶（NOS）活性和一氧化氮(NO)生成的变化。方法:雄性Wistar大鼠盲肠结扎并穿孔复制败血症休克模型。测定大鼠主动脉外膜亚硝酸盐(NOx)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及L-精氨酸(L-Arg)转运；RT-PCR方法测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA水平。结果:严重感染休克大鼠呈现严重的血流动力学紊乱, 心功能抑制。败血症休克大鼠表现为严重的低血糖和高乳酸血症。血管外膜iNOS的mRNA水平均明显高于假手术组（均P<0.01），主动脉外膜NOx生成、NOS活性及L-Arg转运速率显著高于假手术组（P<0.01）。结论:败血症休克时血管外膜L-Arg/NOS/NO系统激活在败血症休克发病中可能起重要作用。     

L-精氨酸和一氧化氮抑制剂对大鼠血管钙化的影响

观察给予一氧化氮合酶(NOS)的抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)或底物L-精氨酸(L-Arg)对血管钙化的影响。利用维生素D3和尼古丁制备大鼠血管钙化模型，测定大鼠尾动脉压，血管钙含量、碱性磷酸酶活性及^45Ca沉积；并检测血管组织的L-Arg转运，NOS活性及NO2^-和cGMP含量。发现钙化大鼠血压略升高；动脉钙含量、ALP活性及^45Ca沉积明显增加，von Kossa染色可以看到明显的钙化颗粒；钙化血管组织NOS活性升高；NO和cGMP含量均减少。给予L-NNA或L-Arg后，与单纯钙化组相比，L-NNA干预组的L-Arg转运、NOS活性及NO和cGMP的含量均降低；而L-Arg干预组上述指标的变化正相反。同时，L-NNA干预组的钙化程度比钙化组加重，而L-Arg干预组的钙化程度比钙化组减轻；提示血管钙化时NO—NOS—cGMP途径发生紊乱，干预NO—NOS—cGMP途径可以影响钙化的进程。     

强迫游泳对小鼠脑内一氧化氮及一氧化氮合酶的影响研究

目的 :探讨应激对小鼠脑内一氧化氮 (NO)及一氧化氮合酶 (NOS)的影响及意义。方法 :将 6 0只雄性昆明品系小鼠随机分为 3组。其中对照组 2 0只 ,强迫游泳分 2组各 2 0只。分别于强迫游泳 (实验组 )后 1h (一组 )、 2h (二组 )取脑组织检测NO含量及NOS活性。结果 :对照组NO及NOS分别为 2 7 4 7± 15 16 μmol/gprot、 2 16± 0 5 3U/mgprot。实验一组为 17 83± 5 6 3μmpl/gprot、 2 76± 0 87U/mgprot ;实验二组为 11 38± 1 2 2 μmpl/gprot、 3 2 9± 0 4 1U/mgprot。急性应激后 1hNO水平降低并有统计学意义 (t =2 6 7,P <0 0 5 ) ;2h后进一步降低 (t=5 0 5 ,P <0 0 1)。急性应激后 1hNOS活性增高并有统计学意义 (t =-2 4 2 ,P<0 0 5 )。应激后NO与NOS变化呈显著性负相关 (r=-0 316 ,P <0 0 5 )。结论 :神经递质NO及NOS参与了中枢神经急性应激反应 ,且NO水平降低、NOS活性增高。     

牛磺酸对失血性休克复苏家兔肺组织NOS活性及NO含量的影响

探讨失血性休克复苏时肺组织中一氧化氮合酶 (NOS)活性、一氧化氮 (NO)含量的变化及牛磺酸对其的影响。新西兰种兔 2 4只随机分为三组 (n =8) :对照组、休克复苏组、牛磺酸治疗组。采用失血性休克复苏动物模型。结果发现 :休克复苏 3h肺湿重 肺干重、肺水含量、肺通透指数 (LPI)、肺泡灌洗液 (PALF)中蛋白含量、肺组织中NOS活性、NO含量均升高 (均P <0 0 1)。同时 ,血浆中NOS、LDH活性及NO含量均有显著升高 (均P <0 0 1)。预先给予牛磺酸 (静脉注射 ,4 0mg kg体重 )可显著缓解上述变化 (均P <0 0 1)。提示失血性休克复苏时NOS的激活和NO的大量释放 ,对休克复苏所致肺损伤的发生发展起重要作用 ,牛磺酸对这种肺损伤具有明显的保护作用     

败血症休克大鼠血管L-精氨酸/一氧化氮途径的变化

目的:观察败血症休克大鼠主动脉内膜、中膜和外膜一氧化氮合成途径的改变。方法:雄性Wistar大鼠盲肠结扎并穿孔复制败血症休克模型,分别测定假手术组、早期休克组和晚期休克组大鼠主动脉内膜、中膜和外膜的亚硝酸盐(NO^-₂)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及L-精氨酸(L-Arg)转运;免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在主动脉各层的分布。结果:早期及晚期败血症休克大鼠主动脉内膜产生的NO^-₂含量、NOS活性及L-Arg转运速率均低于假手术组,而中膜和外膜的NO^-₂、NOS活性及L-Arg转运速率则显著高于假手术组,外膜增加的程度尤为显著。免疫组织化学染色显示,败血症休克时血管中膜和外膜尤其是外膜iNOS阳性染色明显较强。结论:败血症休克时血管内膜NO合成受到抑制,而中膜和外膜NO合成显著增强,这一改变与休克状态下血管中L-Arg转运、iNOS表达及其活性的变化有关。     

牛磺酸对果糖诱导的高血压胰岛素抵抗大鼠红细胞L-精氨酸/一氧化氮途径的影响

目的和方法:在4%果糖引起大鼠胰岛素抵抗高血压模型上,观察红细胞L-精氨酸(L-Arg)/一氧化氮(NO)途径的改变,并观察牛磺酸对其改变的影响。结果:饮用果糖大鼠血压、血糖、血浆胰岛素水平明显高于对照大鼠的同时,红细胞对L-Arg总的转运及Y⁺载体转运的最大转运速率(V_max)分别低于对照大鼠31%和37％(P＜0.01);米氏常数(Km)分别比对照大鼠高35%和30%(P＜0.01)。红细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性、cGMP水平和血浆NO含量明显低于对照大鼠(P＜0.01)。应用牛磺酸治疗可明显逆转上述改变(P＜0.01)。结论:胰岛素抵抗高血压大鼠存在有红细胞L-Arg/NO系统的功能障碍,牛磺酸可显著提高红细胞对L-Arg的转运速率和NOS活性。     

化学发光法测定脑组织中一氧化氮合酶的活性

在NADPH等辅助因子的参与下，一氧化氛合酶（NOS）能催化L-精氨酸生成一氧化氮（NO）。NO与过氧化氢反应生成过氧亚硝酸，过氧亚硝酸能与鲁米诺产生化学发光反应，当NO浓度为100fmol／L～Inmol／L时，发光强度与NO量成正比．根据这一原理、利用化学发光分析建立了一种新的NOS活性测定方法。用该方法测量10只大鼠脑组织中的NOS活性，其NOS活性为28．3±6．9pmolNO／mg蛋白／min。     

一氧化氮合酶抑制物对大鼠离体乳头肌收缩力的影响及其机制

目的:探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制物对电刺激大鼠离体左心室乳头肌收缩力的影响及其机制。方法:制备大鼠离体左心室乳头肌条,用Muscle Research System记录电刺激(频率1 Hz、波宽5 ms)诱导心肌收缩张力。结果:与正常对照组比较,用30μmol/L内源性NOS抑制物非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)孵育乳头肌60 min后,肌条对电刺激收缩张力明显降低;用相同浓度的外源性NOS抑制物NG-硝基-L-精氨酸孵育60 min,均可产生与ADMA相似的抑制作用。用1 mmol/L一氧化氮(NO)合成前体L-精氨酸或10μmol/L NO供体硝普钠预孵育肌条15 min,再与ADMA共孵育60 min,均可逆转ADMA对心肌收缩的抑制作用。用10μmol/L蛋白激酶C抑制剂chelerythrine或抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸预处理,亦可逆转ADMA的抑制作用。结论:NOS抑制物对电刺激大鼠离体左心室乳头肌收缩具有抑制作用,可能是由于减少NO生成、活化蛋白激酶C、使氧化应激增加所致。     

Increased nitric oxide synthesis in uraemic platelets is dependent on L-arginine transport via system y(+)L

Bleeding tendency in uraemic patients seems to be related to alterations in the activity of the L-arginine-nitric oxide (NO) signalling pathway in platelets. We have reported previously that L-arginine influx into human platelets is mediated by the high-affinity cationic amino acid transport system y(+)L. In the present study we examined the dependency of nitric oxide synthase (NOS) activity on L-arginine transport in platelets isolated from healthy controls and uraemic patients on haemodialysis. We investigated basal and ADP-stimulated NOS activity, as reflected by the conversion of L-[(3)H]arginine to L-[(3)H]citrulline, in platelets obtained from healthy controls and uraemic patients on haemodialysis. To determine whether NOS activity depended on L-arginine transport, we analysed the effects of competitive inhibitors of L-arginine transport via system y(+)L on NOS activity. Basal NOS activity was increased from 0.21+/-0.06 to 0.7+/-0.2 pmol/10(8) platelets ( n=9, P<0.05) in uraemic patients. Stimulation by ADP (10 micro M) significantly increased NOS activity (inhibitable by L-NAME) in control platelets (252%) but failed to increase further the elevated NOS activity in uraemic platelets. Homocysteine and L-leucine, competitive inhibitors of system y(+)L, markedly inhibited NOS activity in uraemic platelets. These observations indicate that platelets from uraemic patients on haemodialysis generate more NO than control platelets and that entry of L-arginine via system y(+)L is most likely rate-limiting for platelet NO production in chronic renal failure.     

Constitutively synthesized nitric oxide is a physiological negative regulator of mammalian angiogenesis mediated by basic fibroblast growth factor

We recently reported that the systemically administered nitric oxide synthase (NOS) inhibitor Nw-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME, administered before, during and after the angiogenic treatment stimulated angiogenesis induced by basic fibroblast growth factor, bFGF, in the rat. This suggests that suppression of constitutively expressed NOS, cNOS, plus inducible NOS, iNOS, and thus reduced production of nitric oxide, NO, was the stimulating factor. In those studies, the rat mesenteric-window angiogenesis assay was used. Moreover, the systemic administration of a NO releaser inhibited bFGF-mediated angiogenesis. Using the same experimental system, we have now studied whether the inhibition of cNOS alone in adult animals under physiological conditions, i.e. prior to the administration of the angiogenic stimulation with bFGF, affected the subsequent angiogenic response. cNOS constitute endothelial cell NOS (ecNOS) and neuronal NOS (nNOS). L-NAME or its inactive enantiomer Nw-nitro-D-arginine methyl ester, D-NAME, were given continuously in the drinking water (1.0 g/L) during 14 days prior to the start of the treatment with bFGF. The treatment with L-NAME significantly enhanced the subsequent angiogenic response. NO synthesized under physiological conditions by ecNOS in endothelial cells and platelets or nNOS in platelets may thus act as a first constitutional angiostatic factor in bFGF-mediated mammalian angiogenesis.     

大鼠急性脑缺血再灌注NO含量和NOS活性变化的实验研究

目的探讨一氧化氮和一氧化氮合酶是否参与了急性脑缺血再灌注的发病机制。方法采用栓线法复制大鼠大脑中动脉阻塞模型，观察血清及脑组织NO含量和NOS活性的变化。结果脑缺血45min再灌注2h后血清及脑组织中NO含量及NOS活性增加，再灌注8h达高峰。结论NO及NOS在急性脑缺血再灌注的过程中起着重要的作用。     

一氧化氮途径在大鼠肝移植缺血再灌注损伤中的作用

本实验应用三袖套法大鼠原位肝移植模型,探讨一氧化氮途径在大鼠原位肝移植缺血再灌注损伤中对移植肝的功能作用及可能机制。加强一氧化氮途径能显著延长受体的存活率,改善肝功能及抑制肿瘤坏死因子（Ｔｈ卜ａ）的合成与表达;而抑制ＮＯ合成则能明显降低术后受体存活率、加剧肝功能恶化,上调ＴＮＦ－ａ及Ⅰ型细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）的表达。提示：ＮＯ途径很可能是肝移植缺血再灌注损伤的关键因素。     

香烟烟雾提取物对大鼠肺组织的损伤作用及对一氧化氮生成的影响

将大鼠肺组织切片与香烟烟雾提取物（ＣＳＥ）共同孵育,测定其乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性、亚硝酸盐（ＮＯ_２） 含量、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性及左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）转运,以探讨吸烟对肺组织的氧化损伤作用及对一氧化氮 生成的影响。结果显示： １０％ ＣＳＥ时间依赖地增加大鼠肺组织 ＬＤＨ漏出及 ＮＯ_２释放,二者高度正相关（ｒ=０．６５, Ｐ＜０．０１）,刺激诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）活性增加,并通过增加最大转运速度（Ｖｍａｘ）使Ｌ－Ａｒｇ转运增加。提示：吸烟可 能通过增加 Ｌ－Ａｒｇ的跨膜转运使细胞内 Ｌ－Ａｒｇ浓度增高,并增加 ｉＮＯＳ活性使 ＮＯ过量产生。 ＮＯ可能参与了吸烟对肺 组织的损伤过程。     

低糖诱导人脐静脉内皮细胞一氧化氮与活性氧变化的研究

目的观察低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞一氧化氮（NO）与活性氧（ROS）变化的影响。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12为研究对象,将实验分为正常对照组（5.5mmol/L葡萄糖）、低糖组（2.8mmol/L葡萄糖）、无糖组（0mmol/L葡萄糖）。分别用2.8、0mmol/L葡萄糖干预HUVEC-12细胞,经过1、2、4、12h后,硝酸还原酶法测定NO产量,化学比色法测定一氧化氮合成酶（NOS）活性,Dihydroethidium荧光探针法测定细胞内ROS水平。结果与正常对照组相比,低糖组与无糖组NO水平降低（P〈0.01）,NOS活性下降（P〈0.01）,细胞内ROS水平升高（P〈0.01）,均呈剂量依赖关系。同一浓度组内随着时间的延长,内皮细胞NO水平、NOS活性进一步降低（P〈0.01）,ROS水平进一步升高（P〈0.05）,各指标都具有浓度和时间依赖性。结论低糖可导致内皮细胞功能障碍,NO水平降低,NOS活性下降,其机制可能与低糖导致内皮细胞氧化应激损伤有关。     

脑挫伤后一氧化氮合酶阳性细胞及一氧化氮含量的变化

目的　探讨脑挫伤后一氧化氮合酶 (NOS)阳性细胞和一氧化氮 (NO)的变化和意义。方法　采用自由落体法致Wistar大鼠顶叶皮质挫裂伤动物模型。伤后 2 4h、72h和 7d取脑 ,制作冰冻切片 ,采用NADPH组织化学染色 ,显示脑挫伤区NOS阳性细胞。用硝酸还原酶法测定血液和脑组织中NO含量。结果　脑挫伤后 72h ,NOS阳性细胞数密度 (Nv)和面密度(Sv)明显增高 (P <0 0 5 ) ,而且 7d时仍无明显下降。血液和脑中NO含量也增高 ,并与NOS细胞呈平行关系。结论　脑挫伤后不同时间NOS细胞数目和NO含量有明显改变 ,提示NOS和NO参与了脑挫伤的病理过程