连翘药理作用研究进展

目的:探讨基于以连翘酯苷(forsythiaside,FTS)为主要活性成分的连翘药理作用研究进展,为连翘进一步研究和开发利用提供文献支持。方法:查阅、收集连翘酯苷为主要生物活性成分的连翘药理作用相关的文献,并对其进行分析、整理。结果:以FTS为主要活性成分的连翘具有对认知障碍及短暂性脑缺血的神经保护作用、改善学习记忆障碍、舒张血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解热、抗DNA损伤、防护耳毒性等广泛的药理作用。结论:连翘药理作用广泛,具有广阔的开发前景。     

Study on in Vitro Aniti-bacterial Effects Correlation Between the Main Active Components in Shuanghuanglian Oral Liquid

目的 研究双黄连口服液中主要活性成分体外抗菌效应权重和相关性.方法 采用正交试验设计,通过L8 (27)表对双黄连口服液中各主要活性成分进行不同组合,观察各活性成分组合溶液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的体外抑制作用,得出其MIC、MBC和抑菌环直径,并用SPSS统计软件进行数据分析.结果 4种主要活性成分对革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌的抗菌作用权重依次为:黄芩苷＞连翘酯苷A＞绿原酸＞连翘苷;对革兰氏阴性细菌大肠杆菌的抗菌作用权重依次为:连翘酯苷A＞黄芩苷＞绿原酸＞连翘苷;对真菌代表菌白色念珠菌的抗菌作用权重依次为:黄芩苷＞连翘酯苷A＞绿原酸＞连翘苷.结论 连翘酯苷A、黄芩苷为双黄连口服液抗菌药效的主要影响因素,虽然连翘酯苷A在该复方中含量远低于黄芩苷,但在复方抗菌药效方面发挥着重要作用.     

连翘酯苷对拟AD复合动物模型小鼠学习记忆的改善作用及其机制研究

目的 以β淀粉样蛋白损伤自然衰老小鼠建立一种新的复合式老年痴呆(AD)小鼠模型,观察连翘酯苷对复合模型学习记忆障碍的改善作用,并对其机制进行初步探讨.方法 采用14月龄C57B L/6小鼠侧脑室注射Aβ25.35形成拟AD复合模型;Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力,实验结束取小鼠脑组织用放射免疫分析法检测TNF-α及IL-1的含量;Western blot方法检测GFAP蛋白表达,化学比色法测定ChAT、AchE、SOD酶活性及MDA的含量.结果 水迷宫实验中连翘酯苷组可显著改善小鼠的学习记忆能力(P＜0.05).作用机制研究发现:连翘酯苷能降低TNF-α、IL-1的含量(P＜0.05),抑制GFAP蛋白表达.提高ChAT、SOD酶活力,降低AchE活性及MDA的含量(P ＜0.05,P＜0.01).结论 连翘酯苷对拟AD复合动物模型学习记忆的改善作用可能与抑制脑内炎症反应,调节胆碱能系统,抗氧化作用等有关.     

连翘提取物和连翘酯苷A原料中连翘酯苷A的稳定性研究

目的 考察连翘提取物及其主要有效成分连翘酯苷A的稳定性,为更好控制连翘提取物质量提供依据。 方法 采用高温、高湿、强光照射等影响因素试验及加速试验对样品在固体状态下以及水溶液中的稳定性进行系统研究。 结果 固态条件下湿度对连翘酯苷A稳定性影响较大,光照次之,温度影响不大;在水溶液中,酸性条件及抗氧剂的加入能改善其稳定性,维生素C(Vc)能显著提高其在溶液中的稳定性。 结论 固态条件下,要保持连翘提取物及连翘酯苷A稳定,须对湿度、光照加以控制;水溶液中,酸性介质及抗氧剂的加入有利于改善水溶液中连翘酯苷A的稳定性。     

遗传算法优化连翘中连翘苷及连翘酯苷A的提取工艺

[目的]运用遗传算法(genetic alorithm,GA)对连翘中连翘苷及连翘酯苷A的提取工艺进行优化。[方法]建立以乙醇浓度、液料比、回流次数、回流时间为考察因素的L9(34)正交试验,通过高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定连翘中连翘苷及连翘酯苷A含量,并以连翘中连翘苷及连翘酯苷A含量为目标函数,采用GA对正交结果进行优化,得到最佳提取工艺。[结果]GA搜索所得最佳提取工艺条件:乙醇浓度59%、液料比10:1、回流次数3次、回流时间3h。[结论]运用GA所得的连翘中连翘苷及连翘酯苷A最佳提取工艺稳定可行,可用于连翘中连翘苷及连翘酯苷A提取。     

不同溶剂提取对青翘、老翘主要成分含量测定的影响

目的:探讨不同溶剂提取对青翘、老翘中主要成分连翘酯苷、连翘苷、芦丁含量的影响,为临床制药提供依据。方法:采用水、乙醇为溶剂连续回流提取青翘、老翘中主要成分,HPLC法分析连翘酯苷、连翘苷、芦丁的含量。结果:以乙醇为溶剂提取出的连翘酯苷、连翘苷、芦丁的含量高于水提取的含量;同种溶剂提取,青翘中主要成分含量高于老翘。结论:不同溶剂提取对连翘中主要成分有影响。     

中药薏苡仁酯作用喉癌Hep-2细胞的体外研究

目的　研究中药薏苡仁酯对喉癌Hep 2细胞的增殖抑制作用及机制。方法　应用MTT法测定不同浓度的薏苡仁酯对Hep 2细胞增殖抑制情况 ;应用单细胞凝胶电泳法 ,检测薏苡仁酯引起Hep 2细胞的DNA损伤情况。结果　 5 μl/ml～ 4 0 μl/ml的薏苡仁酯作用 4 8h后明显抑制Hep 2细胞的增殖作用 (P <0 .0 1) ;5 μl/ml和 10 μl/ml的薏苡仁酯作用 4 8h后引起Hep 2细胞DNA损伤 (P <0 .0 1)。结论　在体外培养的条件下中药薏苡仁酯能明显抑制Hep 2细胞的增殖 ,其机制与DNA的损伤作用有关     

连翘提取物含量测定及其对脓毒症大鼠死亡率的影响

目的:建立连翘提取物中连翘苷、连翘酯苷A的含量测定方法并研究其对脓毒症大鼠死亡率的影响。方法:采用高效液相梯度洗脱法测定连翘提取物中连翘苷、连翘酯苷A含量,选用Promosil C18柱,流动相:乙腈-水,流速:1.0mL/min,进行梯度洗脱,检测波长:210 nm;采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型,尾静脉注射连翘提取物,观测SD大鼠CLP术后48、72h死亡率及1周存活情况。结果:连翘酯苷A在32.55~195.3μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 5),连翘苷在64.3~385.8μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 5)。平均回收率连翘酯苷A为:99.24%,RSD=1.11%,连翘苷为:99.33%,RSD=1.58%;给予连翘提取物50%乙醇大孔树脂洗脱部位的CLP大鼠死亡率相对于其他各组均显著降低(P<0.05)。结论:所建立的方法准确可靠,适合于测定连翘提取物中连翘苷、连翘酯苷A的含量;连翘提取物50%乙醇大孔洗脱部位是降低脓毒症大鼠死亡率的有效部位。     

D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的工艺研究

目的：开发一种高效实用的分离纯化连翘酯苷的技术，使分离纯化工艺达到最优化。方法：以连翘酯苷含量为指标，考察D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的最佳吸附及洗脱条件。结果：D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的最佳工艺为上样液浓度为含连翘生药1．2g／mL，用6BV的30％乙醇液进行洗脱，二次洗脱后，连翘酯苷的含量可达60％以上。结论：该技术能显著提高连翘酯苷的纯度，具有吸附量大，洗脱容易，经济环保等优点，适合于规模化生产。     

独一味中洋丁香苷和连翘酯苷B对照品的制备

目的 研究从独一味中分离制备连翘酯苷B和洋丁香苷对照品的方法。方法 结合大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶、制备HPLC法分离制备独一味中连翘酯苷B和洋丁香苷单体。结果 分离制备的连翘酯苷B的质量分数达98.93%,洋丁香苷的质量分数达 99.91%。结论 该方法所得洋丁香苷和连翘酯苷B质量分数高,可用于制备中药定性、定量分析使用的对 照品。     

仙草提取物对小鼠脾淋巴细胞DNA氧化损伤保护作用的研究

目的:观察仙草提取物对原代培养脾淋巴细胞H2O2所致DNA氧化损伤的保护作用。方法:原代培养24 h的脾淋巴细胞悬液,随机分为6组,其中4组细胞用不同浓度的仙草提取物溶液预先处理60 m in,再加入50μm o l/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,6组细胞共同在4℃下染毒20 m in,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,最后用激光共聚焦显微镜拍摄图像,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度。结果:H2O2可致原代培养脾淋巴细胞DNA的严重损伤,而仙草提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100μg/m l的浓度下,彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为88%、60%和36%(P分别<0.05、0.01、0.01),总彗星长度也从对照组的(49.56±6.94)μm,逐渐降低为(41.14±5.64)μm、(38.89±9.81)μm、(28.62±4.66)μm(P分别<0.05、0.01、0.01)。结论:仙草提取物具有显著的抗氧化功能,能在一定浓度范围内保护细胞免受氧自由基对DNA的氧化损伤。     

五种维吾尔药的清除羟自由基及抗DNA损伤作用研究

目的　研究 5种维吾尔药的清除羟自由基 (· OH)及保护 DNA氧化损伤的作用。方法　采用现代生物化学发光分析技术 ,以 Cu SO4- Vit C- H2 O2 -酵母菌发光体系测定药材对· OH的清除作用。结果　研究表明 ,5种维吾尔药材对· OH具有不同程度的清除作用 ,并能保护 DNA的氧化损伤 ,而且它们清除· OH及抗 DNA氧化损伤的作用与它们的浓度之间存在正比性依赖关系。结论　 5种维吾尔药清· OH及抗 DNA损伤的作用可能是它们抗衰老、防治某些疾病的主要作用机制之一。     

超氧阴离子自由基致NIH3T3细胞DMA损伤与c—myc基因表达

目的 研究超氧阴离子自由基（Ｏ２．＾－）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ的损伤及其脂质过氧化作用和对ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法 用黄嘌呤黄嘌呤氧化酶（Ｘ－ＸＯ）系统产生Ｏ２．＾－,测定ＤＮＡ－溴乙锭结合物荧光强度变化确定ＤＮＡ损伤程度以太代巴比妥酸法测定脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）含量,以细胞原位杂交法检测ｃ－ｍｙｃ基因表达。结果 高剂量Ｏ２．＾－能直接引起ＤＮＡ断裂损伤。Ｏ２．＾－能引起明显的ｃ－     

Possible role of DNA polymerase beta in protecting human bronchial epithelial cells against cytotoxicity of hydroquinone

Objective To explore the toxicological mechanism of hydroquinone in human bronchial epithelial cells and to investigate whether DNA polymerase beta is involved in protecting cells from damage caused by hydroquinone. Methods DNA polymerase beta knock-down cell line was established via RNA interference as an experimental group. Normal human bronchial epithelial cells and cells transfected with the empty vector of pEGFP-C1 were used as controls. Cells were treated with different concentrations of hydroquinone(ranged from 10 μmol/L to 120 μmol/L) for 4 hours. MTT assay and Comet assay [single-cell gel electrophoresis(SCGE)] were performed respectively to detect the toxicity of hydroquinone. Results MTT assay showed that DNA polymerase beta knock-down cells treated with different concentrations of hydroquinone had a lower absorbance value at 490 nm than the control cells in a dose-dependant manner. Comet assay revealed that different concentrations of hydroquinone caused more severe DNA damage in DNA polymerase beta knock-down cell line than in control cells and there was no significant difference in the two control groups. Conclusions Hydroquinone has significant toxicity to human bronchial epithelial cells and causes DNA damage. DNA polymerase beta knock-down cell line appears more sensitive to hydroquinone than the control cells. The results suggest that DNA polymerase beta is involved in protecting cells from damage caused by hydroquinone.     

银杏叶提取物对羟自由基所致DNA损伤保护作用的研究

目的:研究银杏叶提取物(Ginkgo-bilobaExtract,EGb)对羟自由基(·OH)所致DNA氧化损伤的保护作用。方法:采用生物化学发光技术,应用硫酸铜-邻菲罗啉-抗坏血酸-过氧化氢(CuSO4-phen-VitC-H2O2)化学发光体系中测定EGb清除·OH的数据,并通过发光抑制率分析EGb对DNA氧化损伤的保护作用。结果:EGb能显著降低发光体系的发光,而且EGb浓度愈大,发光抑制率愈大。结论:EGb具有较强的抗氧化作用,能保护DNA免受·OH的氧化损伤。     

金匮肾气丸延缓衰老作用的实验研究

目的：探讨金匮肾气丸延缓衰老作用的机理。方法：用环磷酰胺（ＣＰＰ）诱致小鼠骨髓细胞ＤＮＡ损伤，以微核（ＭＮ）和姐妹染色单体互换（ＳＣＥ）为指标，观察温补肾阳、延缓衰老代表方金匮肾气丸的抗ＤＮＡ损伤作用。结果：金匮肾气丸对由环磷酰胺所致ＤＮＡ损伤具有良好的拮抗作用。结论：提高机体抗ＤＮＡ损伤能力可能是金匮肾气丸延缓衰老作用的主要机理所在。     

天然药物抗辐射损伤作用机制的研究现状与进展

辐射对生物体具有相当大的危害,其可以直接作用于DNA、蛋白质及酶类,引起电离激发化学键断裂,使分子变性和细胞结构破坏;也可以作用于机体内水分子,使其发生水解,产生大量具有强氧化性的自由基,间接使组织细胞变性、坏死,以致机体代谢紊乱,引起免疫、神经和内分泌等系统的调节功能障碍。在研究中发现许多天然药物具有明显的抗辐射作用,其机制可能与保护DNA、抗免疫损伤、保护造血系统、清除自由基等方面有关。近年来,天然药物抗辐射作用已逐步成为研究热点,对其抗辐射的效果、药理、活性成分的研究也在不断深入。因此,加强对天然药物抗辐射作用及机制的研究,对开发新的抗辐射药物具有重要意义。     

硒对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤的作用研究

目的:探讨硒对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤的拮抗作用。方法:小鼠成釉细胞未经氟化钠处理为对照组;以氟化钠浓度分别为0.25,0.50,1.00,2.00,4.00mmol/L处理作为单独染氟组;以2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3为单独染硒组;以2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+0.25,0.50,1.00,2.00,4.00mmol/L氟化钠为联合作用组。细胞作用24h后,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA单链断裂情况。结果:与对照组相比,单独染硒组小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值显著性升高(P<0.05),而单独染硒组以上指标均明显下降(P<0.05)。2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+氟化钠联合作用小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值明显低于对照组和相同剂量单独染氟组(P<0.05),且高于相应剂量的单独染硒组(P<0.05)。与2.50μmol/L Na2SeO3+氟化钠联合染毒组比较,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+各剂量氟化钠联合作用组Olive尾矩均升高(P<0.05)。结论:过量摄入氟化物可导致小鼠成釉细胞DNA损伤,而适量的硒对氟致DNA损伤有一定的拮抗作用,且实验浓度为2.50μmol/L时其拮抗效果较好。     

Complexes of ferric nitrilotriacetate show higher potential to induce oxidative DNA damgage than ferric salts alone

目的 :比较单纯三价铁盐 (Fe)〔包括 Fe Cl3、Fe NH4 (SO4 ) 2 和 Fe(NO3) 3〕与三价铁盐次氮基三乙酸复合物 (Fe- NTA)诱导 DNA损伤的能力。方法 :通过 DNA结合溴乙锭后的荧光损失和DNA琼脂糖凝胶电泳的迁移率来测定 DNA的损伤程度。结果 :在过氧化氢和抗坏血酸存在的条件下 ,铁盐能够诱发小牛胸腺 DNA损伤 ,DNA损伤的程度与铁盐和过氧化氢呈剂量依赖关系 ,单纯铁盐 (Fe)所造成的 DNA损害程度远远低于 Fe- NTA。谷胱甘肽对于 Fe- NTA诱发的 DNA损伤具有保护作用。结论 :这一发现有助于我们理解 Fe- NTA诱发肾脏肿瘤的机理 ,有助于防治Fe- NTA的致癌作用。     

Caffeine Suppresses Apoptosis of Bladder Cancer RT4 Cells in Response to Ionizing Radiation by Inhibiting Ataxia Telangiectasia Mutated-Chk2-p53 Axis

Background:

Caffeine suppresses ataxia telangiectasia and Rad3 related and ataxia telangiectasia mutated (ATM) activities; ATM is the major kinase for DNA damage detection. This study aimed to investigate the effects of caffeine on DNA damage responses in cells from the bladder cancer cell line RT4 those were exposed to ionizing radiation (IR).

Methods:

Immunofluorescent staining was performed to investigate changes in the proteins involved in DNA damage responses with or without caffeine. A mouse xenograft model was used to study the effects of caffeine on the DNA damage responses. Western blotting was used to investigate the effects of caffeine pretreatment on the ATM-Chk2-p53-Puma axis, while real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assessed changes in messenger RNA levels of p53 and downstream targets responding to IR. Finally, terminal deoxynucleotidyl transferase-dUTP nick end labeling assay. Western blotting and colony formation assay were used to measure the effects of caffeine on radiation-related apoptosis. All of the data were analyzed with a two-tailed Student''s t-test.

Results:

Immunofluorescent staining showed that caffeine pretreatment profoundly suppressed the formation of γH2AXand p53-binding protein 1 foci in RT4 cells in response to irradiation. Cellular and animal experiments suggested that this suppression was mediated by suppression of the ATM-Chk2-p53-Puma DNA damage-signaling axis. RT-PCR indicated caffeine also attenuated transactivation of p53 and p53-inducible genes. The colony formation assay revealed that caffeine displayed radioprotective effects on RT4 cells in response to low-dose radiation compared to the radiosensitization effects on T24 cells.

Conclusion:

Caffeine may inhibit IR-related apoptosis of bladder cancer RT4 cells by suppressing activation of the ATM-Chk2-p53-Puma axis.