刺五加的体细胞胚胎发生研究

目的用不同质量浓度2,4-D和外植体类型对刺五加体细胞胚胎诱导进行研究,为刺五加的资源保护和遗传工程提供理论依据。方法以刺五加的萌发3周幼苗和层积处理种子合子胚的胚根、下胚轴和子叶为外植体,考察不同激素对刺五加体细胞胚胎发生的影响。结果来自层积处理种子合子胚的外植体接种于附加0.5 mg/L2,4-D的MS或1/2MS培养基中体细胞胚胎诱导率(57.1%)和数量(3.3)最高。体胚在原培养基中即可发育成熟,转入降低2,4-D质量浓度的培养基后更有利于新体胚的产生和原有体胚的成熟。刺五加体胚的发育历程与合子胚相似。结论刺五加可以通过来自合子胚的外植体实现体细胞胚胎发生,体胚诱导率取决于2,4-D质量浓度和外植体的发育程度。     

檀香体胚发生及影响因素的研究

目的　探讨檀香胚性细胞发生体胚的技术。方法　以檀香实生苗的下胚轴为材料 ,MT为基本培养基 ,附加不同种类的植物激素。结果　基本培养基以 MT或 MS为好 ;IAA与 BA结合有利于胚性愈伤组织的形成 ,诱导率可达 36 .7% ;体胚发生 ,以 MT+IAA(NAA) 0 .2 mg/ L+BA1mg/ L 培养基较好 ,能诱导体胚发育 ,长出正常茎叶 ;BA浓度为 0 .5～ 1.0 mg/ L 时 ,既有利于体胚发生 ,又能保证一定的增殖速度。结论　成功地诱导出檀香胚性愈伤组织 ,通过体细胞胚胎发生长出正常茎叶 ,为利用生物技术的手段进行檀香人工种子的研究奠定基础     

杜仲不同发育时期未成熟种胚离体培养研究

目的了解激素对杜仲不同发育程度完整未成熟种胚的影响。方法以杜仲三个不同发育时期的完整未成熟种胚为实验材料(分别标记为I#:心形胚早期,胚长约0.5 mm;II#:鱼雷形胚,胚长约1~2mm;III#:胚长约5mm,约为成熟胚的1/2),以MS为基本培养基,添加不同激素及组合(包括2,4-D、NAA、6-BA、TDZ、GA3)进行离体培养,观察不同激素对完整幼胚的影响。结果实验结果显示,I#材料接种后15天几乎全部死亡,显示简单的无机盐培养基不能满足发育早期种胚离体培养的营养需求;III#材料接种后生长迅速,在附加细胞分裂素的培养基中多数萌发形成了幼苗;II#材料在培养30天及60天进行结果统计显示:1 2,4-D促进疏松愈伤组织形成,抑制不定芽形成;2细胞分裂素类,包括6-BA、TDZ,均能诱导形成不定芽,培养60天诱导率显著增加;在6-BA 2mg/L中不定芽发生率达91%;3在附加0.5mg/L 2,4-D的培养基中,在培养约90天后40个外植体中有3个形成体细胞胚。结论 II#鱼雷形胚对激素的反应与杜仲成熟胚或幼苗离体培养结果相近,该发育状态的幼胚可能适合于诱导胚状体。     

檀香体胚发生及影响因素的研究

目的 探讨檀香胚性细胞发生体胚的技术。方法 以檀香实生苗的下胚轴为材料，MT为基本培养基，附加不同种类的植物激素。结果 基本培养基以MT或MS为好；IAA与BA结合有利于胚性愈伤组织的形成，诱导率可达36．7％；体胚发生，以MT＋IAA（NAA）0.2mg/L BA1mg/L培养基较好，能诱导体胚发育，长出正常茎叶；BA浓度为0.5-1.0mg/L时，既有利于体胚发生，又能保证一定的增殖速度。结论 成功地诱导出檀香胚性愈伤组织，通过体细胞胚胎发生生长出正常茎叶，为利用生物技术的手段进行檀香人工种子的研究奠定基础。     

刺五加叶柄的体细胞胚胎发生研究

目的 以来源广泛、原植物药用成分量可测定的刺五加叶柄为外植体,研究刺五加体细胞胚胎发生情况,为实现药用成分高产刺五加的快速繁殖奠定基础.方法 以3年生植株萌发15 d以内的刺五加复叶叶柄为外植体,考察2,4-D和BA对刺五加体细胞胚胎发生的影响.结果 28 d培养后,2,4-D 1.5 mg/L+BA 1.0 mg/L处理的叶柄外植体中71.4%直接产生或经由愈伤组织间接产生了8.5个体胚.两种产生方式均可在诱导培养基中进行,但间接发生比例较少.转入相同或降低2,4-D质量浓度的培养基后,体胚渐次发育成熟.同时新的体胚也在逐渐产生,经由间接途径产生的体胚所占比例也随之上升.结论 刺五加可以通过萌发15 d以内的复叶叶柄外植体实现体细胞胚胎发生,体胚诱导率取决于2,4-D和BA的质量浓度.     

基于均匀设计优化手参体细胞胚胎发生及植株再生体系

目的以手参茎尖为外植体,研究手参体细胞胚胎发生体系。方法应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果手参茎尖胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为:CM+6-BA 1.0 mg/L+IAA 2.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,诱导率为98%;体胚发育及植株再生最适宜的培养基为:CM+6-BA 1.00 mg/L+IAA 0.10 mg/L,体胚萌发率为100%,萌发的体胚在发育培养基上继续培养50 d后全部发育成完整植株。结论对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观察证明了手参体细胞胚胎的发育过程。     

竹节参离体培养及植株再生

目的:探索竹节参离体培养与植株再生技术及优化培养条件。方法:以竹节参的胚、茎、叶作为外植体,应用正交的方法,筛选出竹节参最佳的愈伤组织诱导和分化培养基。结果:竹节参不同外植体的最优消毒方法分别为,种子消毒采用75%酒精浸泡60 s,0.1%氯化汞浸泡12 min;茎和叶片采用75%酒精浸泡15 s,5%次氯酸钠浸泡5 min。光照条件下愈伤组织诱导的最佳培养基配方是,胚用MS+1.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT;茎用MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT,叶为MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT;黑暗条件下,胚为MS+1.0 mg/L NAA+1.5 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT,茎为MS+1.5 mg/L NAA+1.5mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT,叶为MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT。丛芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L GA3。生根诱导最佳培养基为MS+...     

不同激素组合对唐古特大黄愈伤组织的影响

目的通过研究不同激素对唐古特大黄愈伤组织的影响,探讨培养唐古特大黄愈伤组织最佳培养基。方法选用唐古特大黄种子萌发的无菌苗为材料,诱导愈伤组织,研究2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),6-苄基氨基乙酸(6-BA),萘乙酸(NAA)3种激素组合对唐古特大黄愈伤组织诱导及愈伤组织蒽醌产量的影响。结果 2,4-D对愈伤诱导起主导性作用,2 mg/L的2,4-D最有利于愈伤组织的形成,但更高质量浓度的2,4-D会影响诱导效果。2 mg/L的6-BA有利于愈伤组织的快速诱导。对于愈伤组织中的蒽醌产量,2,4-D在2 mg/L时效果最好,6-BA无明显作用,1.0 mg/L以上质量浓度的NAA对2,4-D有增效作用。结论唐古特大黄愈伤组织的最佳培养基是MS培养基(MS)+2,4-D(2 mg/L)+6-BA(2 mg/L)+NAA(1 mg/L),在此培养基上,愈伤组织的生长速率和蒽醌的产量都有较佳的表现。     

总序香茶菜的组织培养与快繁研究

目的对总序香茶菜进行组织培养和离体快速繁殖。方法以总序香茶菜带芽茎段为外植体,在附加有不同种类和不同浓度激素的MS培养基上进行培养。结果最佳芽诱导培养基:MS BA0.05～0.5mg/L NAA0.01～0.05mg/L;最佳芽增殖培养基:MS BA0.5mg/L NAA0.05mg/L(或IAA0.01mg/L);最佳生根培养基:MS NAA0.1mg/L 活性炭0.05%;最佳愈伤组织诱导与生长培养基为:MS 2,4-D1.0～2.0mg/L BA0.1～0.2mg/L。结论成功建立了快速无性繁殖系。     

铁皮石斛原球茎的诱导与增殖影响因素研究

目的:研究铁皮石斛原球茎诱导与增殖的最适培养基配方。方法:以铁皮石斛种胚为材料,以MS培养基为基本培养基,研究不同植物激素6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和激动素(KT)或其组合及马铃薯提取液(PE)、香蕉提取液(BE)、苹果提取液(AE)和椰乳(CM)等有机添加物对铁皮石斛原球茎诱导和增殖的影响。结果:6-BA与NAA配比不利于种胚萌发,萌发度均低于MS培养基;添加10%的PE、CM有利于原球茎诱导;2,4-D对原球茎的生长和增殖不利,一定浓度的BA、KT和NAA有利于原球茎的增殖;KT浓度为1.0 mg/L时,原球茎40 d增殖倍数最高,达9.0;PE、CM、AE都能不同程度的促进原球茎的增殖,以10%的CM效果最好。结论:适宜铁皮石斛原球茎的诱导培养基为MS+10%CM+1.0 g/L AC;适宜铁皮石斛原球茎增殖的培养基为MS+1.0mg/L KT+0.2mg/L NAA+10%CM。     

黄连的组培再生及遗传转化研究

目的 建立黄连的组培再生及遗传转化体系.方法 以黄连子叶和下胚轴为外植体,用不同的基本培养基添加不同种类及浓度的植物生长调节剂进行组培再生研究;利用基因枪转化法研究黄连胚性愈伤组织和遗传转化.结果 子叶和下胚轴在MS培养基上愈伤诱导率分别可达86.31％和54.34％;与MS培养基相比6,7-V培养基可获得更高的愈伤诱导率和增殖率;诱导愈伤组织最适宜的激素组合为0.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT;不同细胞分裂素培养的愈伤组织颜色和质地差异明显;0.5 mg/L KT+0.5 mg/L IAA与1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA组合可诱导出胚性愈伤组织,产生体细胞胚;无激素的6,7-V培养基可维持胚性愈伤组织的不断生长;含1 mg/L GA3+0.5 mg/L IBA的6,7-V培养基可使体细胞胚萌发成苗;转化后的胚性愈伤组织经3 mg/L除草剂Basta筛选,检测到β-葡萄糖苷酸酶(GUS)阳性,PCR检测再生植株膦丝菌素乙酰转移酶基因(bar)阳性.结论 建立并完善了黄连的组织培养再生体系,并在此基础上利用转基因技术获得了具有相关性状的植株,实现了黄连的遗传转化,为黄连性状的遗传改良奠定了基础.     

产生高水平人乳铁蛋白的转基因人参细胞系

〔英〕/Kwon S…∥Planta Med.-2003,69(11).-1005～1008 为了从植物培养细胞中产生高水平的人乳铁蛋白(hlf),应用氧化应激诱导过氧化物酶启动子(SWPA2)对韩国产人参(Panax ginseng)细胞系进行开发,并对其培养细胞中的人乳铁蛋白产物进行了鉴定。 材料与方法:将去壳的成熟合子胚人参子叶与含有双载体SWPA2pro::ER-hLf/pCGN1578的根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)置于含有1mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的MS液体培养基中共同培养48h,培养物在培养基中洗涤3或4次后,将其置于添加有1mg/L 2,4-D、200mg/L卡那霉素和300mg/L…     

外源激素配比对药用植物锁阳愈伤组织诱导的影响

目的 筛选最佳激素组合,提高锁阳组织培养效率.方法 以锁阳肉质茎维管组织作为外植体,以MS为基本培养基,基于正交实验设计研究三种外源激素配比(NAA、2,4-D和6-BA)以及蔗糖和琼脂浓度对锁阳愈伤组织诱导的影响.结果 NAA、2,4-D和6-BA三种激素对锁阳愈伤组织诱导均有显著影响,不同激素之间对出愈率的作用效应大小为2,4-D ＞NAA＞6-BA,诱导锁阳愈伤组织最佳激素配比为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA(2.0mg/L).培养基中琼脂浓度和蔗糖浓度对锁阳愈伤组织诱导率有一定影响,蔗糖浓度以30g/L,琼脂浓度以4.5g/L时愈伤组织诱导率最高.结论 锁阳愈伤组织诱导最适培养基为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA (2.0mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(4.5 g/L).     

灵发素对三七胚状体发生及其成苗的影响

以MS为基本培养基,加入适量的2,4-D和灵发素(LFS),于暗处培养,三七茎段愈伤组织可诱导出胚状体,2～3个月内发生机率可达90%左右.MS 2,4-D 1.5 mg/L LFS 2mg/L于光下培养,约有30%以上的胚状体能发育成健壮的全苗.     

刺五加离体培养中胚状体的诱导

目的：研究2，4-D及BA两种植物激素相互配比以及不同的外植体在刺五加胚状体诱导中的作用。方法：采用组织培养方法。以MS为基本培养基，附加2，4-D及BA。以刺五加种胚及无菌苗的子叶、叶柄、胚轴、胚根等不同外植体为材料。定期观察记录胚状体的发生及生长情况。结果：子叶及胚轴较易产生胚状体(1～2个月)。诱导胚状体的最佳培养基为MS 2，4-D0．5mg／L。结论：不同的外植体及激素水平诱导胚状体的效果不同，2，4-D起主导作用；培养务件以黑暗比在光照下效果好。     

党参花药愈伤组织诱导及植株再生体系的建立北大核心

目的:建立党参花药培养的植株再生体系,为党参单倍体育种提供基础研究。方法:以党参花药为外植体,研究不同浓度2,4-D、低温预处理对愈伤组织诱导的影响,并对愈伤组织进行继代培养及体细胞胚胎发生再生植株研究。结果:确定了花粉发育时期与花蕾外部形态的相关性,药瓣比(花药长/花瓣长)为0.83~0.89的党参花蕾,其花粉处于单核中央期或单核靠边期;党参花药愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+1.0~2.0 mg/L 2,4-D+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L,诱导率为37.50%~47.50%;低温预处理对愈伤组织诱导的效果不明显;合适的愈伤组织继代、胚状体分化再生植株的培养基分别为MS+0.5 mg/L 2,4-D+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L、MS+0.5 mg/L 2,4-D+椰乳100 g/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L。结论:初步建立了通过体细胞胚胎发生再生植株的党参花药培养技术体系,为党参新品种选育奠定了基础。     

滇杠柳茎段和顶芽组织培养及植株再生研究

目的:建立滇杠柳(Periploca forrestii Schlt)茎段和顶芽快速繁殖体系,为其推广种植提供可行性。方法:利用植物组织培养技术,将滇杠柳茎段和顶芽插入含有不同浓度6-BA(6-苄基腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)和2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的MS培养基中培养,诱导其成为完整植株。结果与结论:顶芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,其中芽的诱导率可达到86.29%;茎段诱导的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L,芽的诱导率可达到56.67%;增殖的最佳培养基配方都为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,增殖系数达到2.10;生根培养基最好为1/2 MS+IBA(吲哚丁酸)0.5 mg/L,生根率达到53.33%。     

巫山淫羊藿离体胚培养的研究

目的:研究药用植物巫山淫羊藿组织培养技术,为工厂化育苗提供科学根据。方法:以巫山淫羊藿的种胚为外植体,采用MS培养基,附加不同浓度2,4-D,6-BA,IBA,NAA进行正交试验。结果:诱导愈伤组织的最优培养基为:MS+2,4-D2 mg.L-1+IBA 2 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1;愈伤组织分化的最优培养基为:MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1+IBA 1 mg.L-1;诱导芽的最优培养基为:MS+IBA 2 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1;芽增殖的最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1。结论:通过诱导愈伤组织途径和丛生芽途径,建立了巫山淫羊藿种胚外植体诱导和培养方法,达到快速繁殖的目的。     

滇黄芩快速繁殖研究

滇黄芩幼嫩茎作外植体,用MS IAA 0.1 mg/L BA 0.5(0.2)mg/L培养基上可诱导成苗,在MS BA0.2(1.5)mg/L IAA 0.1 mg/L NAA 0.1 mg/L 2,4-D 0.5(1.5)mg/L培养基上可增殖、继代培养。分化苗在1/2 MS NAA 0.1(0.2)mg/L IBA 0.1(0.2)mg/L PP3331.0 mg/L培养基上可迅速生根,生根率达100%。     

渐危药用植物珊瑚菜胚状体途径再生植株的研究

目的:研究离体条件下珊瑚菜种子休眠的原因,建立胚状体途径再生植株的方法。方法:研究离体条件下胚乳因素和外源激素在解除珊瑚菜种子休眠过程中的作用,以及激素浓度对胚性愈伤组织诱导及胚状体再生植株的影响。结果:保留1/3胚乳的珊瑚菜种子萌发率最高,可以达到31%。而TDZ,6-BA,GA3处理不仅对解除珊瑚菜种子休眠的作用不大,同时容易导致出现畸形苗。在附加1.0 mg.L-1 2,4-D的MS培养基上,胚性愈伤的诱导率可以达到57%。将培养20 d左右胚性愈伤组织转入MS培养基上40 d左右就可分化形成子叶期胚状体,然后再继代培养20 d即可得到再生植株。结论:建立一套有效的珊瑚菜再生植株体系。