牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因 敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的 研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白（DSPP）和Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）表达的影响。方法 取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达。结果 野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达。小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变。结论 vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育。     

牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的 研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白（DSPP）和Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）表达的影响。方法 取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达。结果 野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达。小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变。结论 vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育。     

Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌第一磨牙自牙胚发育起始期至出生后2天不同发育阶段组织的Notch1分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育起始期和蕾状期牙板上皮上方或其包绕的口腔上皮中表达,在牙板上皮中没有表达。自帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中无表达。至牙釉质和牙本质分泌期,Notch1仍在颈环部位的中间层表达。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的牙上皮特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达研究

目的:检测Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达分布及变化规律,初步揭示Ddit3在小鼠牙胚发育中的作用。方法:取不同胚胎时间点的ICR妊娠小鼠,制备牙胚发育标本,通过免疫荧光和免疫组化的方法显示Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时间点的表达分布。结果:Ddit3在牙胚发育的早期主要表达于胞浆中,从钟状期开始,Ddit3不仅在胞浆中有阳性表达,同时也微弱地表达于细胞核中。分布如下:在小鼠下颌第一磨牙发育的板状期,Ddit3几乎没有表达。在蕾状期,Ddit3主要表达于釉上皮的细胞质中,在牙外胚间充质细胞中几乎无表达。在帽状期,Ddit3的表达模式基本和蕾状期相同。在钟状期早期,Ddit3在成釉细胞、前成牙本质细胞和牙乳头胞质中呈阳性表达,在部分细胞核中也检测到了Ddit3的表达。钟状期晚期,Ddit3在新形成的硬组织周围的高柱状成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的胞浆中有阳性表达,在大多数成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的细胞核中也有表达。结论:Ddit3可能会调节成釉细胞和成牙本质细胞的分化及其硬组织的生物矿化。     

Notch1蛋白在小鼠下颌切牙发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌切牙牙胚发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌切牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌切牙牙胚自牙胚发育起始期至钟状晚期不同发育阶段组织Notch1的分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌切牙发育蕾状期牙胚的口腔侧上皮中表达,而在和间充质相邻的牙胚上皮中没有表达。从帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中没有表达。钟状期的唇侧颈环部位星网状层和部分牙上皮细胞也表达Notch1。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌切牙发育过程中的牙上皮,特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

Pax9调控小鼠帽状期和钟状期牙乳头细胞的增殖和分化的初步研究

目的 观察Pax9对小鼠帽状期和钟状期牙胚牙乳头细胞的作用.方法 培养胚胎14.5d和16.5d小鼠下颌第一磨牙牙胚的牙乳头细胞.转染 Pax9 siRNA至牙乳头细胞中敲低 Pax9的表达,CCK8检测转染后24、48、72和96h细胞的增殖情况,Real-time PCR检测转染后Msx1、Bmp2、Bmp4的表达变化.在转染Pax9 siRNA的同时进行矿化诱导培养7d,然后检测Alp、Dmp1和Dspp的表达情况.结果 敲低Pax9表达后,牙乳头细胞的增殖能力减弱;Msx1的表达水平下降,而Bmp2和Bmp4的表达水平升高;牙本质形成相关基因-Alp、Dmp1和Dspp的表达水平升高,牙乳头细胞的矿化能力增强.结论 Pax9参与调控小鼠帽状期和钟状期牙乳头细胞的增殖和成牙本质分化,同时调控下游基因Msx1、Bmp2和Bmp4的表达.     

β-连环蛋白和E-钙粘蛋白在小鼠磨牙牙胚发育中的研究

目的研究β-连环蛋白(β-catenin,β-cat)和E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达分布和意义。方法取胚胎13,15,16天(E13,E15,E16)和出生后1天、5天(P1,P5)的ICR小鼠,制备含上颌第一磨牙的各阶段牙胚发育标本,免疫组化二步法检测β-cat和E-cad在牙胚发育不同时期的表达。结果E13天牙胚处于蕾状期,E15天为帽状期,E16天为钟状早期,P1天处于钟状中期,P5天为钟状晚期。β-cat和E-cad在牙齿发育的各个阶段表达具有时空特异性,前者在各个阶段的成釉器上皮和其下方间充质中均表达,后者在釉质形成之前仅表达于成釉器上皮,之后在成牙本质细胞中也有表达。结论β-连环蛋白和E-钙粘蛋白参与牙胚发育的细胞形成与分化,表明细胞粘附和Wnt信号途径对牙胚发育具有调控作用。     

跨膜蛋白Syndecan-1在不同发育时期小鼠磨牙组织中的表达

目的以小鼠磨牙为发育模型,研究其不同发育时期跨膜蛋白Syndecan- 1的表达特点,进而分析Syndecan-1在牙齿发育中的作用。方法取不同胎龄的胎鼠,制作其下颌第一磨牙的切片,进行免疫荧光染色,并在荧光显微镜下观察Syndecan- 1的表达情况。结果Syndecan- 1的表达随牙胚发育的时期不同而变化：蕾状期时在牙源性上皮和间充质中有弱的阳性分布,帽状期时成釉器上皮阳性表达减弱,而牙乳头及周围的间充质的阳性反应明显增强,钟状期时成釉器上皮又呈阳性表达,并以在中间细胞层的反应更为强烈,而牙乳头间充质的染色则很弱,同时前成釉细胞以及下方的成牙本质细胞的顶端也呈Syndecan- 1的阳性表达。结论Syndecan- 1参与了成釉器和牙乳头的发育和分化过程的调节,并与牙胚细胞的增殖以及成釉细胞和成牙本质细胞的分化相关。     

TRAF6在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的 :研究肿瘤坏死因子受体相关因子 6(TRAF6)在大鼠牙胚发育过程中的表达并探讨其意义。方法 :制备大鼠牙胚发育各阶段标本 ,进行TRAF6的免疫组化研究。结果 :TRAF6在牙胚发育中呈动态时空表达。结论 :TRAF6可能是新发现的一种参与调控牙胚细胞的增殖分化和牙齿发育矿化的胞内信号转导分子。     

小鼠帽状期和钟状早期磨牙牙胚差异表达基因的初探

目的筛选小鼠帽状期(E14.5)和钟状早期(E18.5)磨牙牙胚的差异表达基因。方法分离小鼠E14.5和E18.5磨牙牙胚,采用基因芯片技术检测相关的差异表达基因。结果共得到76条差异表达基因,上调基因71条,下调基因5条。结论 E18.5磨牙牙胚,调控细胞代谢、分化、极性形成酶类,调控免疫应答相关基因,转录、翻译相关基因,信号通路的信号分子、受体以及应激反应相关基因等功能的基因表达都显著上调,而细胞凋亡相关基因、氨基酸代谢激酶等的表达下调。     

Ameloblastin and amelogenin expression in posnatal developing mouse molars

Ameloblastin and amelogenin are structural proteins present in the enamel matrix of developing teeth. Here we report the results of in situ hybridization analyses with DNA probes of ameloblastin and amelogenin expression in the mandibular first molars of ICR/Jcl mice from postnatal day 1 to day 15. Ameloblastin mRNA expression was observed in ameloblasts at day 2 while amelogenin mRNA was detected in secretory ameloblasts at day 3. Significant expression of both molecules was observed at days 4, 5 and 6, after which the levels decreased. Amelogenin expression ended on day 10, while ameloblastin mRNA was only weakly detected on day 12. Neither amelogenin nor ameloblastin expression was observed in day 15 mouse molars. Amelogenin and ameloblastin mRNAs were restricted to ameloblasts. We conclude that amelogenin and ameloblastin expression is enamel-specific, and suggest that these genes might be involved in the mineralization of enamel. It is possible that ameloblastin could participate in the attachment of ameloblasts to the enamel surface. In this case, the downregulation of expression may indicate the beginning of the maturation stage in which the ameloblasts tend to detach from the enamel layer.     

钟状期小鼠磨牙牙胚组织中蛋白聚糖类型的检测分析

目的:检测分析钟状期小鼠磨牙牙胚组织中蛋白聚糖的类型。方法:建立钟状期小鼠磨牙牙胚体外培养模型,用核素标记,凝胶层析,碱处理及酶消化的方法分析体外培的养牙胚组织中蛋白聚糖的类型。结果:体外培养的小鼠钟状期磨牙牙胚、成釉器与牙乳头中[35S]标记的大分子经Superose 6层析柱层析后,均得到3个洗脱峰。其中第1个洗脱峰经硫酸软骨素酶ABC消化后完全消失,第2、第3个洗脱峰在硫酸软骨素酶ABC消化后峰值降低,继续用乙酰肝素酶消化后则基本消失。只用硫酸角质素酶处理,上述3个洗脱峰均未发生改变。碱处理后3个洗脱峰均消失,并在有效分配系数Kd=0.47处出现1个新的洗脱峰。结论:小鼠钟状期磨牙牙胚、成釉器与牙乳头组织含有大分子硫酸软骨素蛋白聚糖、小分子硫酸软骨素蛋白聚糖以及硫酸乙酰肝素类蛋白聚糖,但不存在硫酸角质素蛋白聚糖。     

Shh、Ptch1及Ptch2基因在小鼠磨牙发育过程中的表达

目的通过原位杂交的方法研究Sonic Hedgehog（Shh）、Patched1（Ptch1）及Patched2（Ptch2）在小鼠下颌磨牙发育过程中的表达，以探讨该信号通路在牙胚发育中的作用。方法制备小鼠下颌第一磨牙发育各期标本，原位杂交检测Shh、Ptch1及Ptch2的表达部位及强度。结果Shh在帽状期表达于釉结，钟状早期表达于内釉上皮，钟状晚期表达于成釉细胞；Ptch1在帽状期表达于牙囊、外釉上皮及星网状层，钟状早期表达于牙囊、外釉上皮及牙乳头，钟状晚期表达于成牙本质细胞及牙乳头；Ptch2在帽状期表达于釉结，钟状早期表达于内釉上皮，钟状晚期无表达。结论Shh信号系统在牙胚发育各期有各自的表达特点，提示可能在牙胚形态的调控，成釉细胞、成牙本质细胞分化的诱导中起重要作用。     

ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:研究ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空分布。方法:采用免疫组织化学方法和图像分析技术观察ADAM28在小鼠牙胚发育各期的表达分布及差异。结果:ADAM28在牙胚发育各时期均有不同程度的表达。帽状期开始即在口腔上皮及成釉器星网层细胞、基底膜、牙乳头细胞和牙囊细胞表达强阳性,到钟状晚期,成釉细胞、釉基质、上皮根鞘和牙乳头细胞阳性表达;至冠根硬组织发育期,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、成牙骨质细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞阳性表达。结论:ADAM28作为上皮和间充质间重要的信号分子,参与了从蕾状期到钟状晚期、从基质分泌到硬组织形成的牙冠、牙根形态发生过程,它可能在牙源性间充质细胞的早期形成、增殖与分化启动中发挥重要作用。     

组蛋白去甲基化酶JMJD3在小鼠牙发育中的表达

目的 研究组蛋白去甲基化酶JMJD3在牙发育过程中的表达.方法 采用免疫组织化学方法观察小鼠胚胎E14~18天及出生后P1~P3磨牙牙胚中组蛋白去甲基化酶JMJD3的表达.结果 JMJD3表达于细胞核内,包括上皮性细胞和间充质细胞.在小鼠磨牙牙胚发育的蕾状期(E14)和帽状期(E16),JMJD3在牙蕾上皮,成釉器内釉细胞、外釉细胞、星网状细胞中弱表达.在小鼠磨牙牙胚发育的钟状期(E18),JMJD3在成釉器的外釉细胞层,内釉细胞层,中间层、星网状层及邻近间充质细胞内呈强阳性表达.在小鼠磨牙牙胚发育钟状晚期(P3), JMJD3在成釉细胞、成牙本质细胞及邻近间充质细胞呈强阳性表达.结论 JMJD3在小鼠牙发育过程中呈时空特异性表达,提示JMJD3参与小鼠磨牙的发育.     

C-Met在ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚中的表达

目的探讨c-Met在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达情况。方法采用孕12d、13d、14d、16d、18d ICR胎鼠及出生后2d ICR仔鼠的头部制作冰冻切片,以抗小鼠c-Met多克隆抗体对冰冻切片进行免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察。结果 c-Met在牙胚蕾状期、帽状期的上皮、钟状期的内釉上皮、成釉细胞和成牙本质细胞中有表达;牙胚和口腔黏膜连接区域两侧的间充质中、牙乳头及蕾状早期颊侧下方下颌的间充质中c-Met也有表达。结论 C-Met对于牙齿的形态发生,成釉细胞和成牙本质细胞的分化,牙乳头细胞的发育可能具有重要作用。     

Sonic hedgehog在小鼠胚胎下颌突Meckel＇s软骨发育过程中的表达

目的：研究Sonic hedgehog（Shh）基因在小鼠胚胎颌面部Meckel＇s软骨发育不同阶段的表达,探讨Shh基因在下颌骨体发育骨化中的功能。方法：利用原位杂交和免疫组化技术检测Shh基因mRNA在小鼠胚胎11～14.5 dpc（days post coitum）阶段下颌突Meckel＇s软骨中的表达情况。结果：在颌面形成的早期阶段（11～12.5 dpc）,Shh基因mRNA和蛋白在Meckel＇s软骨有表达且有增强趋势,但在颌面发育完成（14.5 dpc）后表达消失。结论：Shh基因可能参与下颌骨体早期发育。     

Myelin basic protein is temporospatially expressed in developing rat molars

Tooth development occurs through a complex and intricate set of gene-expression cascades. Although its early events have been examined extensively, there are fewer reports on the late events, such as dental hard-tissue formation. This study searched for genes involved in the late stages of tooth development. Differential display-polymerase chain reaction revealed myelin basic protein (MBP) mRNA to be expressed differentially in the second molar root stage germs compared with the third molar cap/early bell stage germs. The MBP expressed during hard tissue formation was confirmed to be a 21.5 kDa molecule by Western blotting. Immunoreactivity of MBP in the third molar (cap/early bell stage) germs was barely detectable in the dental papilla and inner enamel epithelia, whereas strong reactivity was noted in the differentiating and differentiated ameloblasts and odontoblasts in a temporospatial pattern. However, after complete formation of the full-thickness enamel, no reactivity was observed in the maturation-stage and protection stage ameloblasts. Myelin basic protein immunoreactive nerve fibers were also observed near the developing molar germs. This is the first report showing the presence of MBP in dental hard tissue cells, and its functional implications should be studied further.     

牙齿发育中程序性细胞死亡的研究

目的：阐明程序性细胞死亡在牙齿发生、发育过程中的意义。方法：采用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）及ＨＥ染色技术，对纯系ＳＤ大鼠牙胚发育不同阶段的程序性细胞死亡现象进行观察。结果：在牙齿发育的蕾状期、帽状期、钟状期均有程序性细胞死亡现象。蕾状期主要出现在上皮细胞增殖内陷形成的蕾状突起的顶端，帽状期、钟状早期集中出现在细胞增殖生长中心（原发性釉结节，颈环）处，钟状晚期及牙体组织形成后成釉器星网层及牙乳头细胞中多见，外釉上皮及已分化的成釉细胞、成牙本质细胞中散在。结论：在牙齿发育形成过程中，程序性细胞死亡参与上皮－间充质相互作用。控制着不同状态下细胞增生的数量，及时清除多余细胞，完成其对牙齿发育的重要塑形作用。