Fas／FasL参与热诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的调控

目的：探讨睾丸局部加热致大鼠睾丸生精细胞凋亡及Fas/FasL信号通路在生精细胞凋亡调控中的作用。方法16只成年SD雄性大鼠随机均分为加热组和对照组。加热组进行大鼠睾丸43℃水浴15 min;对照组行大鼠睾丸22℃水浴15 min。24 h后进行灌流和内固定,取睾丸。制作5μm的组织切片,采用睾丸原位末端标记法（TUNEL）和免疫组化分析,检测生精细胞凋亡及 Fas 和 FasL 表达。化学发光法检测大鼠血清睾酮水平。结果加热组睾丸生精细胞凋亡率（15.8％±1.6％）较对照组（2.2％±0.5％）显著增加;加热后Fas和FasL在生精细胞和支持细胞表达水平也明显升高;对照组和加热组血清睾酮（T）水平无差异。结论睾丸局部加热诱导生精细胞凋亡,Fas和FasL系统为该凋亡过程的信号通路之一。     

锰对大鼠睾丸抗氧化能力及生精细胞凋亡的影响研究

目的:研究氯化锰对SD大鼠睾丸抗氧化能力和生精细胞凋亡的影响。方法:24只健康雄性SD大鼠随机分为3组。染锰组给予MnCl2.4H2O(15mg/kg、30mg/kg)4周,对照组给予生理盐水,各组给药途径均为腹腔注射,每天1次,每周5天。应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记技术检测睾丸生精细胞凋亡;化学比色法检测睾丸组织超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果:生精细胞凋亡指数染锰组明显高于对照组,且随染锰剂量的增加而升高(P<0.01);睾丸组织超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性均染锰组明显低于对照组(P<0.01)。结论:锰诱导的抗氧化能力下降可能是大鼠生精细胞凋亡增加的重要原因之一。     

谷胱甘肽拮抗锰致雄性大鼠生殖损伤的研究

目的:研究谷胱甘肽(GSH)对锰致雄性大鼠睾丸氧化损伤的拮抗作用。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机分为3组进行急性和亚急性染毒。染锰组腹腔注射30mg/kgMnCl2.4H2O染毒1周(急性染毒)和4周(亚急性染毒),GSH拮抗组染毒后再给予2周1mmol/kgGSH,对照组染毒后给予生理盐水。TUNEL法检测生精细胞凋亡;化学比色法检测睾丸丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果:急性锰染毒时,染锰组生精细胞凋亡指数和睾丸丙二醛含量高于对照组和GSH拮抗组(P<0.01);各组间谷胱甘肽过氧化物酶活性无差异。亚急性锰染毒时,染锰组生精细胞凋亡指数和睾丸丙二醛含量高于对照组和GSH拮抗组(P<0.01),GSH拮抗组高于对照组(P<0.01);染锰组睾丸谷胱甘肽过氧化物酶活性低于对照组和GSH拮抗组(P<0.01)。结论:及时补充谷胱甘肽可通过抑制脂质过氧化作用而拮抗锰引起的雄性大鼠生精细胞凋亡。     

大剂量吡哆醇对大鼠睾丸一氧化氮合酶和细胞凋亡的影响

为探讨大剂量吡哆醇(PN)对睾丸结构和功能损害的分子机制,研究其对睾丸一氧化氮合酶(NOS)和细胞凋亡的影响.实验采用吖啶橙荧光染色法显示睾丸细胞DNA和RNA,黄递酶(NADPH-d)组织化学法显示睾丸细胞NOS,采用原位缺口平移技术检测睾丸生精细胞凋亡的数目.结果表明 ,与对照组相比,注射PN 3 d,大鼠睾丸间质细胞NOS反应活性轻度增加;注射PN 7 d后,大鼠睾丸细胞DNA和RNA荧光显色明显减弱,间质细胞NOS活性明显增强,睾丸生精细胞凋亡数目(38.41±8.20)较相应对照组(11.39±4.86)明显增多,差异有显著性(P＜0.01).提示大剂量PN腹腔注射后,大鼠睾丸细胞NOS活性和凋亡细胞数目明显增加,这些变化可能是PN损害睾丸结构和功能的分子机制之一.     

镉暴露小鼠生精细胞DNA损伤与Bcl-2和Bax表达率及超微结构改变

目的研究镉暴露对小鼠睾丸生精细胞DNA的损伤作用、bcl-2和Bax蛋白表达率及超微结构的变化。方法取24只雄性ICR小鼠随机分为4组，每组6只，分别以1、5、10μmol／kg氯化镉腹腔注射，每天1次，连续5d，设阴性对照生理盐水组。于第6天用单细胞凝胶电泳（single-cell gel electrophoresis，SCGE）技术检测生精细胞DNA损伤情况，免疫组化法测定生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率，透射电镜观察生精细胞超微结构变化。结果腹腔注射1、5、10μmol／kg氯化镉组小鼠睾丸生精细胞DNA损伤率（分别为35．00％、61．25％、82．50％）明显高于对照组（14．75％），差异有统计学意义（P〈0．01），Bcl-2蛋白表达阳性细胞率明显低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01），5μmol/kg组Bax蛋白表达细胞阳性率明显高于对照组和1、10μmol／kg组。透射电镜观察显示，3种剂量处理组生精细胞核染色质、核膜、线粒体和内质网超微结构发生不同程度的病理改变，并随着处理浓度的升高，超微结构改变程度加重。结论小鼠镉暴露可导致生精细胞DNA断裂，Bcl-2和Bax蛋白表达率发生变化，细胞超微结构发生病理性改变。     

氯化镉对NRK肾细胞DNA损伤及细胞凋亡作用

目的 观察氯化锅对大鼠肾细胞(NRK)DNA损伤和细胞凋亡的影响.方法 用不同浓度氯化镉(0,2.5,5,10,20 μmol/L)染毒NRK细胞12 h,应用Hoechst/PI双荧光活性染色检测镉致NRK细胞的凋亡率;单细胞凝胶电泳法检测镉对NRK细胞DNA的损伤.结果 Hoechst/PI双染检测2.5,5,10和20μmol/L镉染毒组的细胞凋亡率分别为5.9%,12.4%,24.6%和46.2%,与对照组比较明显升高.单细胞凝胶电泳检测5,10和20μmol/L染镉组的尾部DNA含量和尾长,比对照组明显增加,且各染镉组与尾部DNA含量和尾长存在剂量-效应关系.结论 氯化镉可诱发大鼠NRK细胞凋亡,DNA损伤是镉致NRK细胞凋亡的主要原因.     

染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系

目的探讨染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为6组,即对照28d组、低剂量染毒28d组、高剂量染毒28d组、对照38d组、低剂量染毒38d组和高剂量染毒38d组。通过腹腔注射NaF溶液的方法建立氟中毒模型,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,放射免疫的方法检测血清雌二醇水平,采用TUNEL方法检测凋亡的生精细胞。结果随着染毒剂量加大和时间延长,染氟大鼠血清雌二醇水平显著下降(P<005),睾丸氟含量显著升高(P<005),生精细胞凋亡率显著升高(P<005),且血清雌二醇水平与睾丸氟含量和生精细胞凋亡率均呈负相关(P<005)。结论氟在一定剂量和作用时间内可致血清雌二醇水平紊乱,是导致生精细胞凋亡的重要原因之一。     

镉致大鼠前体精原干细胞-支持细胞共培养系损伤的形态变化

[目的]通过对大鼠前体精原干细胞．支持细胞共培养系进行镉染毒,探讨镉对前体精原干细胞和支持细胞共培养系早期效应的形态学变化。[方法]从3天龄的SD大鼠睾丸中分离前体精原干细胞和支持细胞并进行24h共培养后,再分别给予0、2．5、5．0、10．0、20．0μmol／L的氯化镉（CdCl2）染毒12h,然后用碱性磷酸酶和油红O染色分别鉴定前体精原干细胞和支持细胞,观察不同细胞的形态,并用原位末端标识法（TUNEL方法）进行细胞凋亡的原位检测。[结果]2．5μmol／LCdCl2染毒未显著改变共培养中精原干细胞和支持细胞的形态。5．0μmol／L以上浓度CdCl2染毒可致支持细胞（由油红O染色确认）的结构呈现明显变化,具有浓度依赖趋势,用TUNEL法检测发现前体精原干细胞和支持细胞均发生凋亡,和对照组相比差别有统计学意义。[结论]CdCl2染毒12h可诱导支持细胞的形态改变,以及前体精原干细胞和支持细胞的凋亡。     

N-乙酰半胱氨酸对镉致人胚肾细胞凋亡拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl cysteine,NAC）对氯化镉所致人胚肾（human embryonic kidney,HEK）细胞凋亡的拮抗作用。方法应用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测不同CdCl2浓度（0,10,20,40,80μmol/L）处理以及不同浓度NAC（1,2,4,8mmol/L）和镉联合作用对HEK细胞相对存活率和凋亡率的影响。结果单纯染镉时,与对照组（0μmol/L）比较,20,40,80μmol/L CdCl23组HEK细胞相对存活率明显降低（P〈0.01）,HEK细胞凋亡率明显升高（P〈0.01）;NAC与镉联合作用时,与40μmol/L CdCl2比较,40μmol/L CdCl2＋4,8 mmol/L NAC2组HEK细胞相对存活率明显提高,40μmol/L CdCl2＋2,4,8 mmol/L NAC3组HEK细胞凋亡率明显降低。结论一定浓度氯化镉可引起HEK细胞凋亡增加,NAC可以拮氯化镉引起的细胞凋亡。     

镉对小鼠睾丸的毒作用

为探讨镉对睾丸组织的毒性及其作用机制,研究了腹腔注射氯化镉对小鼠睾丸系数、睾丸脂质过氧化物（ＬＰＯ）值、血清乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性、睾丸中镉、钙、铁等浓度及镉对雄性小鼠生殖能力的影响。结果提示染镉组小鼠上述各指标与对照组相比差异均有显著性,表明镉对小鼠睾丸有明显毒性,脂质过氧化作用及其所致的组织损伤和出血性炎症可能是镉对睾丸损害的重要病理过程。     

金属硫蛋白在镉致睾丸氧化损伤中的保护作用

应用不同剂量的氯化镉（０,２,０．４和０。．８ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）对成年雄性ＳＤ大鼠进行腹腔染毒,连续染毒７天后将动物处死,分离睾丸,测定其中金属硫蛋白（ＭＴ）含量,超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）等抗氧化酶活性和脂质过氧化产物丙二醛（ＤＭＡ）含量,结果显示,低剂量组ＭＴ含量虽有所升高,但与对照组比较差异无显著性,中剂量组ＭＴ含量显著升高,高剂量组ＭＴ含量反而显著降低。     

镉对大鼠睾丸的影响

本文报告饮水中含镉对大鼠睾丸的慢性损害实验，并作有关酶组织化学活性检查。结果：大鼠连续饮用含ＣｄＣｌ２（氯化镉）３００ｍｇ／Ｌ水，其睾丸曲精小管内各级生精细胞损害严重。曲精小管和附睾内精子完全消失；曲精小管各级生精细胞核呈固缩状，残留甚少且难以区别。腔内可见较多多核聚体，嗜伊红团块和网状结构等坏死组织产物。糖原ＰＡＳ反应减弱；ＳＤＨ（琥珀酸脱氢酶）、Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ（镁激活三磷酸腺苷酶）的活性明显减弱；ＬＤＨ（乳酸脱氢酶）、ＡＣＰ（酸性磷酸酶）的活性增强。提示：以含ＣｄＣｌ２３００ｍｇ／Ｌ染毒饮水已引起睾丸曲精小管上皮严重损坏。     

镉诱导大鼠腺垂体细胞凋亡及与p38 MAPK&ERK1/2途径介导机制关系的初步研究

目的了解CdCl2对腺垂体的损伤以及细胞凋亡发生与p38MAPK、ERK12表达的关系,为了解镉致腺垂体毒作用的分子机制提供科学依据。方法采用健康雄性SD大鼠进行整体试验(n=12),分别每天经口灌胃给予0、1.0、2.0、4.0mgkgbwCdCl2,6周后取腺垂体进行指标检测;离体试验采用酶解分离大鼠之原代腺垂体细胞,分别以0、1.56、3.12、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μmolLCdCl2处理,收获细胞进行检测;特异性阻断剂阻断凋亡效应的试验采用2.65μmolLp38MAPK的特异阻断剂SB203580或10μmolLERK12激酶的特异阻断剂U0126处理细胞,然后以3.12μmolL或100.00μmolL的CdCl2处理细胞后进行相应的检测。检测指标包括:TUNEL法和流式细胞术等检测凋亡。结果整体实验和离体实验结果均显示CdCl2以剂量依赖方式诱导腺垂体细胞发生凋亡(P<0.05);特异性阻断剂效应的研究结果显示2.65μmolLSB203580和10μmolLU0126对TUNEL阳性细胞的相对灰度和凋亡细胞率均有一定的影响。结论在一定的剂量条件下,CdCl2影响腺垂体激素分泌水平,并导致发腺垂体细胞凋亡,MAPKs家族成员p38MAPK和ERK12激酶通路在凋亡发生过程中可能发挥一定的作用。     

The tissue disposition of zinc and copper following repeated administration of cadmium and selenium to rats

Female rats were divided into four groups of five rats each including one control group (C). The animals were administered Na2SeO3 (Se), (CdCl2 Cd), and Na2SeO3 + CdCl2 (Cd + Se). Sodium selenite was given intragastrically at a dose of 0.5 mg Se/kg every day and cadmium chloride was injected subcutaneously every other day at a dose of 0.3 mg Cd/kg for 2 weeks. Exposure of rats to Cd caused an increase in the concentration of copper in the kidneys, blood, and liver and a decrease in the lung, but increased the concentration of zinc in the liver and brain and diminished it in the muscles and bones. In animals exposed to Se an increase in the copper concentration was observed in blood and brain; zinc was increased in the blood, heart, brain, and stomach, but decreased in the kidneys. Exposure of rats to Cd + Se resulted in an increase of copper in the kidneys and a decrease in the spleen, lungs, stomach, muscles and bones. Se prevented the cadmium-induced diminution of the zinc levels in the muscles and bones.     

绞股蓝总皂甙对氯化镉所致睾丸生殖细胞毒性的影响

目的：观察绞股蓝总皂甙（GPS）对雄性小鼠染镉后对睾丸生殖细胞的保护作用。方法：预先灌服GPS200mg/kg／d，连续16d后，腹腔注入氯化镉（Cd)3mg/kg/d 5d，观察睾丸病理切片和精子畸形率。结果：预服GPS的小鼠染镉后，其精子畸形率 比单纯染镉组下降53．01％（P＜0．01）。睾丸病理切片单纯染镉组出现病理改变，与预服GPS组相比未见明显差别。表明GPS对Cd所致小鼠精子畸形率有较好的抑制作用。结论：GPS可用于防治Cd对生殖系统的损害作用。     

应激活化蛋白激酶介导氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡作用探讨

目的 了解氯化镉（CdCl2)对豚鼠肾上腺皮质细胞应激活化蛋白激酶（stress activated protein kinase,SAPK）活性的影响及与凋亡的可能关系。方法 以0．625、1．25和2．50mg/kg CdCl2整体腹腔注射染毒雄性豚鼠,分别于染毒1h和12h处死动物,取肾上腺皮质进行SAPK活性测定（免疫沉淀－蛋白印迹杂交－化学发光法）和电镜观察细胞凋讯。结果 整体染毒1h、SAPK活性随CdCl2染毒剂量的增加呈增加的趋势;染毒12h,各组SAPK活性变化不明显。电观察染毒1h肾上腺皮质细胞未见凋亡征象;但染毒12h可见早期细胞凋亡。结论 SAPK活化在CdCl2诱导肾上腺皮质细胞凋亡过程中可能起重要作用。     

染锰大鼠生精细胞Caspaes-3和Ki-67表达

目的 研究氯化锰对大鼠生精细胞半胱天冬酶(Caspase-3)和抗霍奇金淋巴瘤细胞核抗体(Ki-67)表达的影响及意义.方法 48只雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组,15和30 mg/kg MnCl2组,锰与生理盐水均为腹腔注射,1次/d,5 d/周,分别染锰4和6周.用免疫组化法检测睾丸生精细胞Caspase-3与Ki-67表达.结果 与空白对照组比较,各染锰组Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01);染锰剂量相同,染锰6周组与4周组比较,Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01);染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2与15 mg/kg MnCl2组比较,Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01).与空白对照组比较,染锰15 mg/kg MnCl24周组Ki-67阳性细胞率降低(P<0.05);染锰30 mg/kg MnCl2 4周组,15 mh/kg MnCl2 6周组,30 mg/kg MnCl2 6周组Ki-67阳性细胞率均显著降低(P<0.01);染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2组与15 mg/kg MnCl2组比较,Ki-67阳性细胞率显著降低(P<0.01).各组大鼠生精细胞Caspase-3阳性细胞率与Ki-67阳性细胞率呈明显负相关(r=-0.798,P<0.01),结论染锰15 mg/kg 4周即可促进大鼠生精细胞Caspase-3表达和抑制大鼠生精细胞Ki-67表达,且存在一定的剂量-效应和时间-效应关系,锰的这种双重作用可能是导致大鼠生精障碍的主要机制.     

枸杞多糖对镉致大鼠肝抗氧化酶损伤的保护作用

目的探讨枸杞多糖（LBP）对染镉大鼠肝抗氧化酶损伤的拮抗作用。方法实验动物为健康雄性Wistar大鼠,随机分为5组,为对照组,单纯染镉组,干预1组,干预2组和干预3组,对照组灌胃0.9%NaCl,2h后腹腔注射0.9%NaCl,单纯染镉组灌胃0.9%NaCl,2h后腹腔注射氯化镉1.5mg/kg,干预1、2、3组LBP灌胃剂量分别为5、10和20mg/kg,2h后各组腹腔注射氯化镉1.5mg/kg。连续5d,第6天取肝脏测定超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮合酶（NOS）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。结果与对照组相比,镉染毒组的SOD、NOS、GSH-Px活力下降;干预1、2、3组肝脏SOD分别是镉染毒组的101.8%、113.2%、114.6%,NOS分别是镉染毒组的94.4%、157.1%、131.0%,GSH-Px分别是镉染毒组的111.6%、160.3%、158.8%。结论 LBP对镉染毒致大鼠肝抗氧化酶系损伤有一定的保护作用。     

亚稀褶红菇对大鼠致死毒性分级研究

目的 为了解亚稀褶红菇对大鼠的半数致死量（LD50）,进行毒性分级。方法 采用急性毒性试验经典方法寇氏法,设亚稀褶红菇175、248、350、495、700 mg/kgBW共 5个剂量组和阴性对照组(等体积生理盐水),每组大鼠12只,雌雄各半,腹腔注射,连续观察14 d大鼠的毒性反应和死亡情况。并对试验大鼠进行病理组织学检查。结果 根据试验结果,经计算,亚稀褶红菇对SD大鼠腹腔注射LD50为406 mg/kgBW,95%可信限为348～473 mg/kgBW。病理学检查显示大鼠心脏、肝脏、肾脏均有损害,随剂量增加损害程度加重。结论 按照大鼠急性毒性（LD50）剂量分级亚稀褶红菇为中等毒性,相当于人的致死量为5 g/人。