重组日本血吸虫26 kDa GST抗原免疫水牛后抗体动态及免疫保护性效果

目的　观察重组日本血吸虫 2 6kDaGST抗原 (reSjc2 6GST)免疫役用放养水牛 (简称水牛 )后抗体动态及免疫保护性的效果。　方法　试验组 96头水牛 ,用reSjc2 6GST免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,3次剂量分别为 0 2、 0 2和 0 1mg。对照组 90头水牛不作免疫 ;观察 2组水牛免疫前及免疫后 2、 5、 9、 12、 15和 2 0个月的抗体水平及血吸虫感染率的变化。　结果　试验组机体产生特异性抗reSjc2 6GST抗体 ,其抗体水平呈明显的梯形升高趋势。试验组免疫后 2 0个月血吸虫感染率比免疫前下降了 62 2 % ,比同期对照组低 67 7%。　结论　用reSjc2 6GST免疫水牛能产生特异性抗体 ,在免疫后 2 0个月内维持较高水平 ,有一定的抗血吸虫自然感染的保护力。     

重组日本血吸虫26kDa GST抗原诱导水牛产生抗体及减少排卵的初步观察

目的　观察rSjc2 6GST抗原诱导水牛产生特异性抗体水平以及排卵数量的减少。　 方法　 2 0头水牛随机分为两组 ,每组 1 0头。试验组免疫rSjc2 6GST抗原 ,对照组注射佐剂 ,攻击感染日本血吸虫尾蚴后 ,定期检测抗rSjc2 6GST抗体、粪检虫卵和毛蚴。　 结果　水牛免疫rSjc2 6GST抗原后 1个月 ,产生抗rSjc2 6GST抗体 ,至 1 2个月一直维持较高水平。试验组水牛感染后 50～ 90d,粪便EPG和MPG几何均值明显低于对照组 ,但在 1 0 0d以后两组的EPG和MPG均逐渐降低 ,至 330d均为 0。结论　水牛免疫rSjc2 6GST抗原后能产生特异性抗体 ,维持较高水平至 1 2个月 ,在感染后 3个月内有显著的减卵效果 ,此后排卵量逐渐下降至阴性     

重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病效果的研究

目的　研究重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病的效果。方法　在洲垸亚型血吸虫病流行区 ,选择两个村居民役用水牛 ,试验组 96头水牛免疫重组GST抗原 ,对照组 90头水牛不免疫作对照 ;观察两组水牛血吸虫感染率、湖洲感染性钉螺密度等的变化。结果　试验组免疫 2 0个月后检测水牛 5 6头 ,感染率为 5 36 % ,比免疫前 (13 5 4 % )下降了6 0 4 1% ,比对照组同期 (16 6 7% )低 6 7 85 % ,试验组外洲易感地带感染性钉螺密度较免疫前降低了 71.4 3%。居民血吸虫感染率基本无变化。结论　水牛免疫重组GST抗原能产生一定的保护力 ,对降低水牛血吸虫病情有明显作用。     

日本血吸虫重组22kD表膜蛋白免疫水牛的效果观察

目的 用重组日本血吸虫22kD表膜蛋白（rSj22)免疫水牛,检测特异性IgG抗体的应答水平,并观察抗血吸虫的保护效果。方法 用抗原（rSj22)加佐剂（Quil-A)肌肉注射免疫水牛,以1000条日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后55d剖杀,计算减虫和减卵率,用免疫印斑和ELISA方法测定抗体反应。结果 免疫组每头牛血清均能特异地识别Quil-A对照组相比,减虫率仅8.5%肝卵EPG减少12.3%,粪卵EPG减少26.8%,但均无统计学意义,结论 用rSj22kD抗原免疫水牛诱导的特异性IgG抗体不能发挥免疫保护作用。     

紫外线减毒活尾蚴免疫水牛抗日本血吸虫感染的实验研究

以紫外线(400uW/min照射1min)减毒日本血吸虫尾蚴经皮肤免疫水牛3次,每次1000条/头,每次间隔4周,末次免疫后第6周实验组和对照组动物均以1000条正常日本血吸虫尾蚴攻击感染,所有水牛在攻击感染后第42d剖杀,检查免疫后水牛抗血吸虫感染的保护力。结果6头水牛平均减虫率为89.31％,每g肝组织虫卵减少率为86.63％。同时,观察到免疫实验组动物在攻击感染前及以后,其平均体重不断增加,而对照组感染后较感染前平均体重有所下降。体重的增减与水牛的组织病理学损伤的程度、成虫存活的多少和每g肝组织虫卵数的多少成员相关。实验结果提示紫外线减毒活虫苗,在中国有可能用以防止耕牛感染日本血吸虫或降低其感染度,从而减少对人的威胁。     

日本血吸虫重组抗原rSj14-3-3免疫保护作用的初步研究

目的　初步探讨重组信号蛋白 14 3 3及 14 3 3与GST融合蛋白抗日本血吸虫尾蚴感染和抗血吸虫病的免疫保护作用。　方法　用rSj14 3 3和rSj14 3 3 /SjGST免疫BALB/c小鼠 ,日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤攻击感染 ,收集实验组与对照组成虫和虫卵 ,计算减虫率和减卵率 ;间接ELISA法测定实验组与对照组小鼠免疫前、后血清中特异性IgG抗体水平的变化 ;显微镜下测量并比较实验组与对照组肝脏切片上单个虫卵肉芽肿大小 ,观察两种重组抗原对小鼠肝脏肉芽肿形成的影响。　结果　上述两种重组抗原在尾蚴攻击感染后的减虫率分别为 3 1.93 %和 3 4.3 9% ;每克肝组织减卵率分别为 5 3 .2 4%和 60 .0 6% ,每对成虫减卵率分别为 3 3 .3 9%和 40 .48% ;免疫前各组血清IgG抗体A值差异无显著性 ,免疫后实验组血清IgG抗体A值明显高于对照组 ;实验组小鼠肝脏虫卵肉芽肿平均直径比对照组分别下降3 5 .2 3 %和 46.13 %。　结论　信号蛋白 14 3 3在抗感染和抗病免疫中具有保护作用 ,复合多价疫苗的免疫保护作用可能优于单价疫苗。     

重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团对小鼠免疫保护作用的研究

目的探讨重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团融合蛋白（GST-TSP2HD）抗血吸虫感染免疫保护效果。方法采用Glutathione sepharose 4B胶亲和层析法大量制备GST-TSP2HD蛋白。实验组以GST-TSP2HD融合蛋白的福氏佐剂抗原免疫C57BL/6J小鼠,同时设置佐剂对照组及GST蛋白免疫对照组,每2周加强免疫1次。加强免疫2次后每只小鼠经腹部皮肤感染（45±2）条血吸虫尾蚴。感染42 d后剖杀小鼠,经生理盐水静脉灌注收集成虫,计数减虫率,用KOH溶液消化肝组织收集虫卵,计算减卵率。组织切片观察小鼠肝组织病理变化,通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中的抗体水平。结果与佐剂对照组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组的减虫率为27.10%,减卵率为32.30%;与GST蛋白免疫组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组可获得39.57%的减虫率,43.53%的减卵率。GST-TSP2HD融合蛋白免疫组肝组织中的虫卵肉芽肿数量明显减少,单个虫卵肉芽肿平均直径比佐剂对照组、GST蛋白免疫组分别下降了27.08%（P〈0.05）和40.53%（P〈0.01）,差异均有统计学意义。GST-TSP2HD能诱导高水平抗TSP2HD蛋白的特异性抗体IgG,其中IgG1、IgG2b和IgG2c亚类可能在小鼠抗血吸虫感染保护性免疫中发挥重要作用。结论日本血吸虫四跨膜蛋白是一个有效的日本血吸虫病疫苗候选分子。     

重组日本血吸虫26kDaGST抗原免疫家兔后抗体动态观察

目的： 探讨重组日本血吸虫２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后抗体水平动态变化。方法： 家兔随机分为免疫组与佐剂对照组,免疫组用纯化重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原加福氏佐剂免疫;佐剂对照组用０．８５％ 盐水加福氏佐剂免疫。免疫后,每兔逐周取耳静脉血,采用酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 检测血清中特异性抗体水平。结果： 免疫组家兔从免疫后第４ ｗ ｋ 起血清中特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体升高,且维持在较高的水平达６５ ｗ ｋ。结论： 重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后,特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体水平较对照组明显升高,且至少能维持 １ 年。     

日本血吸虫DNA疫苗proVAX/GMCSF-SjFer的构建及免疫保护性效果的观察

目的 构建日本血吸虫铁蛋白proVAX/GMCSF-SjFer DNA疫苗,观察其诱导小鼠产生抗攻击感染的免疫保护性效果. 方法 小量制备pGMC/SjFer重组质粒DNA,PCR扩增GMCSF-SjFer基因,将此目的 片段亚克隆到真核表达载体proVAX中,构建重组真核表达质粒proVAX/ GMCSF-SjFer.雌性昆明鼠随机分为对照组、免疫组和空质粒组.空质粒组小鼠股四头肌注射proVAX,免疫组同法注射重组质粒proVAX/GMCSF-SjFer,对照组注射生理盐水.按0、2、6周设计接种3次.末次接种后第2周,感染血吸虫尾蚴(40±2)条/鼠.感染后第42 d剖杀小鼠,灌注法冲虫,计数虫荷和克肝卵数.免疫前和免疫后2周留取小鼠血清,用ELISA法检测抗血吸虫成虫抗体水平. 结果 经PCR和双酶切鉴定,获得1条约为960 bp的目的 片段和2条酶切片段.免疫组小鼠的减虫率及减卵率分别为22.46%和29.40%,空质粒对照组分别为3.11%和7.79%,差异有统计学意义(P<0.05).ELISA检测免疫组小鼠血清特异性IgG抗体水平增高. 结论 构建的DNA疫苗proVAX/GMCSF-SjFer能诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫.     

重组日本血吸虫超氧化物歧化酶融合蛋白对小鼠免疫保护作用的研究

目的 探讨重组日本血吸虫胞浆内超氧化物歧化酶（SOD）融合蛋白在抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法采用亲和层析方法制备纯化表达的重组SOD融合蛋白。用重组SOD融合蛋白加福氏佐剂,免疫C57BL／6J小鼠,4周后用（45±2）条日本血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,组织切片观察小鼠肝脏的病理变化。结果实验组减虫率为35．63％,减卵率为31．17％。实验组小鼠肝脏虫卵肉芽肿数比对照组少,单个肉芽肿的平均直径比对照组小22．32％,血清抗SOD融合蛋白特异性抗体亚类IgG1、IgG2a、IgG2b水平明显高于对照组（P均〈0．05）。结论重组SOD分子能诱导一定水平的抗日本血吸虫感染免疫保护作用。     

Field assessment of recombinant Schistosoma japonicum 26 kDa glutathione S-transferase in Chinese water buffaloes

We have shown previously that anti-fecundity immunity can be induced experimentally against recombinant 26 kDa glutathione S-transferase (reSjc26GST) in Chinese water buffaloes (Bos buffelus), important reservoir hosts for Schistosoma japonicum in China. In the field study described here, we immunized buffaloes with reSjc26GST to induce protective immunity against S. japonicum and to evaluate its effectiveness in controlling schistosomiasis japonica. We selected two villages as test and control groups in inside-embankment areas endemic for schistosomiasis japonica. The buffaloes in the test village were vaccinated with reSjc26GST, whereas those in the control village were not. The indicators of the effect of the vaccine included the generation of specific IgG antibodies in the vaccinated buffaloes, changes in the prevalence and infection intensity in buffaloes and village children, changes in the density of infected snails, and changes in the infectivity of water bodies (assessed by sentinel mice) in transmission areas adjacent to both villages. Twenty months after vaccination, the infection rate of buffaloes in the test village was decreased by 60.4% (from an initial prevalence of 13.5% to 5.4%), and 67.9% when compared with that in the control village (initial prevalence of 16.7%). However, the infection rate in village children remained unchanged. The density of infected snails decreased by 71.4%, from 0.0049/0.11 m2 to 0.0014/0.11m2 in the high transmission area outside the embankment in the test village. There was no change in the infectivity of the water body transmission areas between the test and control villages. The levels of specific antibodies to reSjc26GST showed a continuous increase after vaccination. These results indicate that protective immunity was induced and maintained in buffaloes after vaccination with reSjc26GST. The vaccine could thus play a significant role in reducing S. japonicum transmission caused by water buffaloes in the Lake region of China.     

日本血吸虫重组谷胱甘肽-S-转移酶诱生的保护性免疫应答特征的研究

目的：研究日本血吸虫重组谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ）在不同品系小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及Ｃ５７ＢＬ／６小鼠）诱生免疫应答的差异。方法：将ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ（弗氏佐剂）经皮下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,收集免疫前和免疫后血清及取小鼠脾脏,分析ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫小鼠诱生的特异性抗体、脾脏淋巴细胞特异性增殖能力及细胞因子种类等。结果：ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠所诱生的抗体总ＩｇＧ及ＩｇＧ亚类均较明显高于免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。抗体ＩｇＧ亚类分析显示,ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠诱生较高滴度的ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ及ＩｇＧ２ｂ（血清按１∶４００稀释,Ａ４９２ｎｍ值分别为＞３．０、１．１２７、＞３．０）,而在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠主要诱生较低滴度的ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ及ＩｇＧ２ｂ（血清按１∶４００稀释,Ａ４９２ｎｍ值分别为１．１８９、０．３９、０．６２５）;ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫能够诱导小鼠Ｔｈ细胞激活。细胞因子分析显示ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠既能诱生较高水平的ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ,又能诱生ＩＬ－５。而ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠仅     

Anti-fecundity immunity induced in pigs vaccinated with recombinant Schistosoma japonicum 26kDa glutathione-S-transferase

We have recently reported (Liu et al. 1995) that immunization of mice with recombinant 26kDa GST (reSjc26GST) induces a pronounced anti-fecundity effect after experimental infection with Chinese Schistosoma japonicum. A similar vaccination trial was thus carried out on pigs, important reservoirs for schistosomiasis japonica, using purified, reSjc26GST and reSjp26GST from Schistosoma japonicum with alum as adjuvant; in general, similar results were obtained with the two sources of recombinant 26 kDa GST. Some protection in terms of worm reduction, significant with males, against challenge infection was observed in vaccinated pigs. Moreover, prior to challenge, levels of specific anti-re26GST antibodies in the vaccinated pigs were significantly higher than in non-vaccinated pigs as determined by GST-ELISA. The most striking feature of the vaccine trial was the significant reduction in the number of eggs, especially mature eggs, in the livers of vaccinated animals. The results indicate that immunization with recombinant Sj26GST can provide some reduction in worm burden following exposure of pigs to reinfection with S. japonicum. In addition, reSj26GST can induce an anti-fecundity effect, thereby reducing pathology, coupled with a delay or interruption of the development of immature to mature eggs in the liver. As a consequence, vaccination with SJ26GST would also prove useful in affecting the transmission of schistosomiasis japonica.     

负载GST抗原的树突状细胞疫苗联合CpG ODN抗日本血吸虫感染的保护性研究

目的研究负载GST抗原的树突状细胞(DC)疫苗联合非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(CpGODN)免疫小鼠抗日本血吸虫感染的作用。方法将GST抗原纯化后负载树突状细胞株DC2.4,免疫荧光染色法检测GST的负载情况,并进行动物保护性实验。35只C57BL/6小鼠随机均分7组(每组5只),分别作免疫注射:A组为未处理的DC,B组为牛血清白蛋白(BSA)处理的DC,C组为GST负载的DC,D组为GST+CpGODN共刺激的DC,E组为CpGODN刺激的DC,F组为GST蛋白,G组为空白对照组。A～E各组DC经0.25%胰蛋白酶消化后用PBS调整密度至107/ml,每鼠皮下注射0.1ml,每次间隔2周,共免疫3次。F组首次每鼠免疫50μgGST蛋白加福氏完全佐剂,第2、3次分别免疫50μg、10μgGST蛋白加福氏不完全佐剂,均为皮下注射。各组于末次免疫后10d收集血清,ELISA方法分析血清中的特异性抗体。各组小鼠于末次免疫后2周每鼠经腹部感染尾蚴30±1条。6周后剖杀小鼠,计算减虫率。结果 DC经GST负载后可在荧光显微镜下观察到抗GST的特异荧光,表明抗原已被DC摄取。各组小鼠免疫后,F组抗体水平最高,为2.1270±0.4115,另外C组(0.5552±0.0789)和D组(0.7150±0.0523)的抗体水平均高于G组(0.2358±0.0889),差异有统计学意义(P0.05)。免疫后攻击感染,D组小鼠的减虫率最高为53.3%,其次为F组(24.0%)和C组(21.3%),但D组与两组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 CpGODN联合GST抗原负载的树突状细胞疫苗具有一定的抗日本血吸虫感染作用。     

日本血吸虫(中国大陆株)26kDa基因重组蛋白(rSjc26GST)对虫卵肉芽肿形成的影响

用日本血吸虫虫卵肉芽肿的小鼠肺模型进行研究。ＩＣＲ雄性小鼠３２只,分成免疫组和佐剂对照组各１６只,免疫组小鼠经ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫。免疫结束后第５天两组小鼠均由尾静脉注射新鲜日本血吸虫虫卵悬液０．２ｍｌ（内含活卵１５００－２０００个）,于注卵后第８天、１６天和２１天分批剖杀小鼠,观察肺部形成的虫卵肉芽肿病变。结果发现免疫鼠肺内肉芽肿大小受到明显抑制,免疫后第８天、１６天、２１天肺肉芽肿平均直径分别为１００．００±１２．６μｍ,１０６．４３±１１．４μｍ,１０５．７０±１１．８μｍ,对照鼠在相应时间分别为１４１．９０±２３．４μｍ,１７６．６７±３４．９μｍ,１９９．５３±２１．７μｍ,抑制率从８天的２９．５％、１６天的３９．８％到２１天的４７．０％逐渐增加,并且免疫组肺相对湿重也较佐剂对照组有所减少,证实ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ具有明确的抗肉芽肿病变效应。     

自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫cDNA文库

目的　采用自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库并寻找日本血吸虫疫苗新候选抗原。　方法　用感染日本血吸虫后的自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,将阳性重组子克隆、测序,对核酸序列进行分析,确定目的基因。　结果　从大陆株日本血吸虫成虫λZAPIIcDNA文库筛到26个阳性克隆,经初步鉴定获3种编码蛋白分子的基因:副肌球蛋白,谷胱甘肽S转移酶,羟基类固醇脱氢酶。　结论　感染日本血吸虫后的自愈水牛血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,可用于寻找日本血吸虫疫苗新候选抗原。