门静脉高压症脾亢患者外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞含量与免疫功能研究

目的 研究门静脉高压症(PHT)脾亢患者外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞(Treg)与CD3+、CD4+、CD8+T细胞的表达变化.探讨脾脏免疫功能改变及其可能的调节机制.方法 PHT脾亢患者20例(脾亢组),健康成人18例(对照组),采用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25+CD127low/-Treg及CD3+、CD4+、CD8+T细胞的表达变化.结果 脾亢组外周血中CD4+CD25+CD127low/-Treg占CD4+T细胞的比例为(5.3±3.0)%,明显高于对照组的(2.5±0.9)%(P<0.01).脾亢组CD3+、CD4+、CD8+T细胞含量均低于对照组(P<0.05).CD4+CD25+CD127low/-Treg的含量与CD3+T细胞比例呈负相关(r=-0.630,P<0.01),与CD4+T细胞比例呈负相关(r=-0.561,P<0.05).结论 PHT脾功能亢进患者CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞表达量增多,可能对脾脏免疫功能的调节有重要作用.     

门静脉高压症脾功能亢进患者CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞和Foxp3的表达及其意义

目前,对门静脉高压症脾功能亢进患者肿大脾脏的免疫功能状况及其调节机制尚不清楚.本研究采用流式细胞术和免疫组化法检测门静脉高压症脾功能亢进患者外周静脉血和脾脏组织中CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞及Foxp3的表达,目的在于探讨自然调节性T细胞与门静脉高压症脾功能亢进时脾脏免疫功能的关系,研究调节脾脏免疫功能的可能机制.     

肾病综合征患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达和意义

CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)数量或功能的降低可导致多种自身免疫性疾病发生.肾病综合征(NS)与T细胞免疫功能紊乱密切相关.本研究采用CD4、CD25和CD127三标法检测初诊及不同治疗阶段NS患者外周血中该群细胞,观察活化效应细胞/调节性细胞(CD127hi/CD127low)的改变,从而探讨CD4+CD25+Treg与NS发生、发展之间的关系.     

HBV携带者外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T淋巴细胞表达与病毒载量及肝脏病理的相关性

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)携带者外周血CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T淋巴细胞(Treg)的表达水平与HBV载量及肝脏病理的相关性.方法 连续选取2012年10月至2014年2月浙江省嘉兴市第一医院收治的46例慢性HBV携带者,并选择23名健康体检者作为对照组.用流式细胞术检测HBV携带者和健康体检者外周血CD4+ CD25+ CD127low/-Treg的表达.对46例HBV携带者在B型超声引导下行肝穿刺病理检查,同时采用实时荧光定量PCR法测定HBV DNA载量.组间差异比较采用独立样本t检验,相关性分析采用Spearman秩相关或Pearson直线相关.结果 46例HBV携带者的CD4+ CD25+ CD127low/-Treg水平为(5.11±1.47)％,健康对照组为(3.46±1.23)％,两组比较差异有统计学意义(￡=4.629,P＜0.01).HBV携带者外周血HBV DNA载量为(6.21±1.98)lg拷贝/mL,CD4+ CD25+ CD127low/-Treg水平与HBV DNA载量呈正相关(r=0.405,P＜0.01).46例HBV携带者肝穿刺病理显示,炎症分级≥G2者占45.65％ (21/46),纤维化分期≥S2者占34.78％ (16/46).HBV携带者外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg表达水平与肝组织炎症活动及纤维化程度呈负相关(r=-0.434和-0.452,P＜0.05).结论 CD4+ CD25+ CD1271ow/-Treg的表达与乙型肝炎病情的慢性化和肝组织损伤程度有关.     

免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞的应用研究

目的 研究免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的效果.方法 将C57BL/6(H-2b)小鼠脾脏剪碎、过滤、去除红细胞后离心洗涤,获得小鼠脾细胞悬液.用Ficoll法分离获得单个核细胞后,通过免疫磁珠阴性加阳性选择两步法分离获得CD4+CD2...     

调节性CD4~+CD25~+T细胞的分离纯化及免疫功能研究

目的 制备调节性CD~+ CD25~+T细胞(Treg)分析其免疫功能,诱导局部免疫耐受防治同种异体复合组织移植(CTA)排斥反应.方法 采用免疫磁珠法(MACS)从雄性大鼠脾脏细胞分离CD4~+CD25~+Treg(1×10~6),2%锥虫蓝染色检测活性、流式细胞术分析其纯度,在5 mg/L抗CD3的刺激下观察其反应性、增殖及其与200 U/ml细胞介素(IL)-2的关系.结果 从8只雄性大鼠脾脏分选出的CD4~+CD25~+Treg活性平均为(97.90±0.36)%及纯度为(96.05±0.41)%,CD3刺激呈低反应,按比例培养抑制率为89%,IL-2可使CD4~+CD25~-抑制逆转.结论 MACS能快速分选出较高纯度的CD4~+CD25~+Treg,并且活性良好在体外具有免疫无能及免疫抑制作用,能满足动物CTA排斥反应研究的需要.     

免疫磁珠两步法分离大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞

目的探索利用磁性细胞分离(MACS)系统高效、快速地分离大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞.方法采用免疫磁珠两步法分离大鼠脾脏内的CD4+CD25+调节性T细胞, 首先采用"鸡尾酒"抗体和抗IgG磁珠阴性分选CD4+ T细胞,再用抗CD25-PE抗体和抗PE磁珠阳性分选获得CD4+CD25+T 细胞.分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度; 台盼蓝染色检测细胞存活率; 体外增殖实验检测其对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制作用.结果阴性分选获得的CD4+T细胞纯度为(83.6±2.5)%(79%～87%), 阳性分选后获得的CD4+CD25+T细胞纯度为(90.2±1.8)%(86%～93%), 细胞存活率为(92.8±3.4)%(92%～95%), 体外增殖实验表明,CD4+CD25+T细胞能明显抑制CD4+CD25-T 细胞的增殖(P＜0.01). 结论采用MACS系统阴性加阳性分选可以高效、快速地获得理想纯度和有免疫抑制功能的大鼠CD4+CD25+调节性T细胞.     

乙型病毒性肝炎肝硬化门静脉高压症患者脾切除后CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞的变化及意义

目的 观察乙型病毒性肝炎肝硬化门静脉高压症患者行脾切除术前后外周血中CD4＋CD25＋ CD127low/-调节性T细胞（Treg）的变化,探讨门静脉高压症患者行脾切除术对机体免疫功能的影响.方法 回顾性分析2012年5月至2013年5月河北医科大学第三医院收治的20例乙型病毒性肝炎肝硬化门静脉高压症合并脾功能亢进患者的临床资料,通过流式细胞仪分析乙型病毒性肝炎肝硬化门静脉高压症合并脾功能亢进患者（门静脉高压症组）脾切除术前1d、术后1周、1个月、3个月和来自河北医科大学第三医院的10例健康体检者（对照组）的外周血中CD4＋ CD25＋ CD127low/-Treg含量,分析Treg的变化对全身免疫系统造成的影响.组问比较采用t检验,手术前后数据比较采用重复测量方差分析.结果 门静脉高压症组患者术前和对照组受试者CD4＋ CD25＋ CD127low/-Treg比例分别为5.1％±3.5％和1.4％±0.2％,两组比较,差异有统计学意义（t=2.573,P＜0.05）.门静脉高压症组患者术后1周、1个月、3个月CD4＋CD25＋ CD127low/-Treg比例分别为9.2％±2.7％、5.6％±1.7％、2.5％±2.1％,其中术后1周与术前比较,差异有统计学意义（F=9.814,P＜0.05）;而术后3个月与术前比较,差异无统计学意义（F=2.364,P＞0.05）.结论 脾切除术后短期Treg水平明显升高,随时间延长逐渐下降.从Treg方面表明脾切除对机体免疫系统影响较小.     

调节性T细胞在前列腺癌患者外周血中表达的研究

目的:探讨不同分期前列腺癌患者外周血中CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞(Tregs)比例变化及临床意义。方法:将2018年5月—2019年11月期间杭州市第一人民医院泌尿外科收治的部分前列腺癌患者(共90例)进行分组并招募志愿者,采集外周血处理后行流式细胞术,分析前列腺癌患者与正常对照组,以及不同分级前列腺癌组CD4~+CD25~+CD127~(low/-)表达水平是否存在差异性。结果:前列腺癌患者组外周血中的CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Tregs表达水平与对照组比较差异有统计学意义(P0.01);随着危险分级升高CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Tregs的表达水平有升高趋势,且不同分级间表达水平差异有统计学意义(高危组vs.中危组,P0.05;高危组vs.低危组,P0.001;中危组vs低危组,P0.001)。结论:外周血中CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Tregs在前列腺癌患者中显著增加,且与前列腺癌的发生发展密切相关,其可为前列腺癌患者早期诊断和免疫治疗提供理论基础。     

门静脉高压症患者脾切除后外周血B7-1/CD28表达的变化

目的探讨B7-1/CD28对门静脉高压症（portal hypertension,PHT）患者免疫功能的影响和作用。方法采用流式细胞分析技术对30例门静脉高压症患者进行研究,检测门静脉高压症患者行脾切除前后外周血淋巴细胞中以及脾脏中B7-1/CD28的表达情况,分析其与患者淋巴细胞亚群以及免疫功能的关系。对患者外周血B7-1/CD28和淋巴细胞进行检测。利用免疫组化方法检测B7-1/CD28在脾脏中的表达,与10例外伤性脾破裂行脾切除之脾脏组织进行比较。结果门静脉高压症患者外周血中淋巴细胞亚群和B7-1/CD28表达较低,脾切除后短期内升高。其脾脏中表达的B7-1/CD28较正常人群高。结论门静脉高压症患者全脾切除后外周血B7-1/CD28通路被激活,患者免疫功能得到部分恢复。     

小鼠CD4+CD25+T调节细胞的分离、纯化及其功能检测

目的 探讨小鼠CD4+CD25+T调节细胞(Treg)的分离培养、纯化及其部分功能检测.方法 采用免疫磁珠分离法(MACS)对分离小鼠的脾淋巴细胞进行分选CD4+CD25+Treg细胞,锥虫蓝细胞染色检测其活性,流式细胞仪检测分选所得活性细胞的纯度,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中白细胞介素(IL)-2、IL-10水平的浓度.结果 MACS分离的CD4+CD25+Treg细胞的纯度达83%～96%.体外培养中Treg组、T组和混合组IL-2和IL-10的平均水平分别为:(10.25±2.31)、(40.32±8.05)ng/L;(5 8.21±13.05)、(11.52±3.01)ng/L;(39.54±12.82)、(31.25±4.36)ng/L,数据差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 采用MACS系统两步法,可获得高纯度、具有免疫抑制功能的Treg细胞,该细胞对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制作用可能是通过IL-10对IL-2的调节作用实现的.     

动脉粥样硬化患者外周血CD4 T 细胞及CD4+CD25highCD127- 调节性T 细胞的变化

目的：探讨动脉粥样硬化（AS）患者外周血CD4 T细胞及调节性T细胞（CD4+CD25highCD127- Treg）比例及功能的变化。 方法：选择AS患者（AS组）及健康体检者（健康对照组）各40例,抽取外周静脉血,用流式细胞术测定CD4 T细胞、CD8 T细胞、IFN-γ+ CD4 T细胞、IFN-α+ CD4 T细胞和CD4+CD25highCD127- Treg细胞比例,以及各自的CD4+CD25highCD127- Treg细胞与CD4 T细胞共培养后,CD4 T细胞增殖能力以及CD4 T细胞分泌炎症因子能力的变化。 结果：与健康对照组比较,AS组外周血CD4 T细胞比例及CD4 T/CD8 T比值明显升高、IFN-γ+ CD4 T及IFN-α+ CD4 T细胞比例明显升高（均P<0.05）,而CD8 T细胞比例与CD4+CD25highCD127- Treg细胞比例差异无统计学意义（均P>0.05）。健康对照组CD4 T细胞的增殖能力、IFN-γ及IFN-α分泌能力在与CD4+CD25highCD127- Treg细胞共培养后较其单独培养均明显降低（均P<0.05）,而AS组CD4 T细胞的以上指标在与CD4+CD25highCD127- Treg细胞共培与单独培养间差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：AS患者外周血CD4+CD25highCD127- Treg细胞功能的丧失,导致外周血CD4 T细胞比例升高、分泌炎症因子能力增强,从而引发AS的炎症状态。     

信号转导和转录激活因子5在小鼠CD4+CD25+调节性T细胞中的表达

目的:观察信号转导和转录激活因子5(STAT5)在小鼠CD4+CD25+调节性T细胞中的表达情况.方法:免疫磁珠法分离C57BL/6J小鼠脾脏中的CD4+CD25+调节性T细胞,共聚焦荧光法检测细胞内STAT5的分布并进行初步定位,进一步采用Western blot技术从蛋白水平检测细胞内STAT5的表达.结果:激光共...     

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞相互作用的影响

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对调节性T细胞(Treg)与CD4+CD25-T细胞相互作用的影响,并初步探讨其影响Treg抑制功能的机制.方法 免疫磁珠法分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg及CD4+CD25-T细胞.采用固相包被抗CD3/可溶性抗CD28进行辅助活化,以不同时间及浓度HMGB1刺激Treg,ELISA法分析HMGB1刺激对Treg分泌IL-10的影响.将HMGB1(1000μg/L)刺激后的Treg与CD4+CD25-T细胞共培养,MTT法观察其对Treg抑制CD4+CD25-T细胞反应的作用,并分析HMGB1刺激后的Treg对CD4+CD25-T细胞IL-2生成及细胞功能极化的影响.结果 经抗CD3/CD28辅助活化的CD4+CD25+Treg在HMGB1作用下IL-2生成无显著差异(P＞0.05),但随时间延长及剂量增加,IL-10生成明显减少(P＜0.05).经HMGB1刺激的Treg对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制反应减弱,同时诱导CD4+CD25-T细胞IL-2产生及细胞功能极化的能力均下降(P＜0.05).结论 HMGB1可通过诱导Treg抑制功能的下调,从而影响CD4+CD25-T细胞功能,进而调节炎症反应过程.     

微波定量消融脾组织治疗脾大脾亢对患者免疫功能的影响

目的 探讨脾大、脾亢微渡部分消融脾脏组织对机体免疫功能的影响.方法 对脾大、脾亢患者在腹腔镜下或超声引导下经皮行脾组织微波定量消融治疗,治疗前、后分别检测患者外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞.结果 治疗后1个月外周血T淋巴细胞亚群CD3、CD4+细胞水平明显升高.B细胞水平每个检测时间点均较治疗前明显升高.脾脏微波消融体积≤20%组CD3,CD4+细胞水平治疗后1个月较治疗前升高.治疗后3个月时较1个月有所下降;CD8+细胞水平治疗后1个月、3个月均高于治疗前;CD4+/CD8+比值治疗后呈下降趋势;B淋巴细胞水平呈上升趋势:NK细胞治疗后较治疗前降低.脾脏微波消融体积20%-40%组CD3、CD4+、CD4+/CD8+比值、B细胞、NK细胞水平治疗后1个月、3个月均高于治疗前水平,呈上升趋势;CD8+细胞水平治疗后1个月、3个月低于治疗前水平,并一直呈下降趋势.其中治疗后3个月,该组CD4+T淋巴细胞水平明显高于消融体积≤20%组.结论 微波定量消融脾脏治疗脾大、脾亢的疗法是一种微创的相当于部分手术切除脾脏的治疗方法,不仅维持了脾脏免疫功能还可提高机体免疫水平;微波消融脾脏体积大小与治疗后机体免疫功能的恢复和维持有关.     

门脉高压症患者脾切除术后免疫功能的改变及其与脾组织免疫细胞的关系

目的　研究门脉高压症脾亢患者脾切除前后免疫功能的改变 ,以及巨脾组织免疫活性细胞的数量变化。探讨门脉高压症脾亢患者脾脏切除术合理性的免疫学基础。方法　对门脉高压症脾切除术患者 ,术前检测静脉血T淋巴细胞亚群 (CD3 、CD4 、CD8 、CD2 0 )及NK细胞 ;白介素 2(IL 2 )和白介素 10 (IL 10 ) ;γ干扰素 (IFN γ) ;免疫球蛋白 (IgG、IgM、IgA)及补体C3、C4。脾切除术后 1周、1月再次检测上述指标。切除的巨脾组织制成石蜡切片 ,检测CD3 、CD8 、CD2 0 、CD6 8 阳性细胞数量及分布 ,与正常脾组织进行比较。结果　①脾切除术后 1月免疫球蛋白IgG、补体C3、C4均升高 (P <0 .0 5 ) ,IgM、IgA呈增高趋势 ,但无统计学意义。②脾切除术后 1月IL 2、IFN γ明显升高 ,但仍低于正常人 ;IL 10明显降低 ,但仍高于正常人。③脾切除手术前后外周血CD4 、CD8 、CD4 /CD8 、CD2 0 细胞变化均无统计学意义。仅CD3 、NK细胞术后 1月明显升高 (P <0 .0 1)。④门静脉高压症巨脾与正常脾脏比较 ,CD3 、CD8 、CD2 0 、CD6 8 细胞数均减少。结论　经部分免疫学指标检测 ,门脉高压症脾亢患者免疫功能降低 ,脾切除术能使门脉高压症患者免疫功能得到一定改善。     

原发性肝癌患者体内的CD4+CD25+ T细胞变化及其意义

目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)患者体内CD4+CD25+T细胞变化的及其意义。 方法:实验分HCC组（n=20）与正常人对照组(n=10)，采用免疫荧光标记法，流式细胞仪分离出外周血CD4+CD25+T细胞，分析两组CD4+CD25+T细胞所占T细胞的比例。计算并比较癌组织与癌旁组织中CD4+CD25+T细胞所占T细胞的比例。结果:HCC组机体的CD4+CD25+T 细胞比例为(19.3±3.0) %，明显高于对照组(5.2±1.6) % (P<0.05)。癌组织中CD4+CD25+T 细胞比例为(6.5±2.9) %，癌旁组织中CD4+CD25+T 细胞比例为(5.8 ±2.1) %， (P>0.05)。结论:原发性肝细胞癌患者机体免疫功能降低的原因之一可能是外周血CD4+CD25+T 细胞数明显增加。     

胰腺癌荷瘤鼠吲哚胺2,3-双加氧酶表达和CD4~+CD25~+Treg细胞数的变化

目的 观察吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达以及调节性T细胞(Treg)数量在胰腺癌荷瘤鼠中的变化,并探讨胰腺肿瘤细胞免疫逃逸的机制.方法 建立小鼠胰腺癌模型,荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Western blot分析肿瘤组织周嗣引流淋巴结(TDLNs)IDO表达水平;并利用流式细胞术检测荷瘤鼠TDLNs及脾脏中CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T比例;荧光定虽PCR测量Foxp3在TDLNs及脾脏mRNA水平.结果 胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO在mRNA(1.670±0.099比1.123±0.243),蛋白表达水平(1.401±0.079比0.872±0.193),高于正常对照组.差异均有统计学意义(P<0.05);荷瘤鼠和脾细胞中CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T细胞的比例明显高于对照鼠[TDLNs分别为(25.00±2.16)%和(11.02±1.31)%,P<0.05;脾脏分别为(22.14±2.33)%和(12.11±0.93)%,P<0.05];荷瘤鼠Foxp3 mRNA表达水平显著高于对照鼠,荷瘤鼠分别为:TDLNs 3.427±0.164、脾细胞2.098±0.112,而对照鼠分为:0.933±0.253、1.137±0.343(P<0.05).结论 胰腺癌荷瘤鼠癌组织周围引流淋巴结IDO表达明显增高,且TDLNs及脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞的数量增加.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞诱导同种异体复合组织移植免疫耐受功能的研究

目的 探讨供体抗原特异性CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg),对同种异体复合组织 移植(CTA)受体大鼠细胞免疫耐受功能的影响.方法 采用免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg,将数 量1×10~6的CD4~+CD25~+Treg输注入CTA受体的大鼠,术后30 d采取外周血,尼龙毛柱分离T、B细 胞,检测在IgM 抗体刺激下的增殖放射强度的液体闪烁测定(CPM)值及血清lgG和IgA水平,判断 CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能的影响及CTA的存活情况,并进行统计学分析.结果 分选的CD4~+CD25~+Treg纯度为95.6%.T、B细胞CPM值:正常对照组分别为2436±358、2418±348,Treg 局部干预组为2273±136、2252±127,Treg全身干预组分别为2338±228、2315±218,Treg未干预组分 别为3749±245、3720±224;Treg 未干预组与其三组比较差异均有统计学意义(P<0.01).血清IsG、IgA水平:Treg 局部和全身干预组分别为(12.56±1.30)g/L、(2.38±0.21)g/L和(13.48±1.23) g/L、(2.86±0.24)g/L,与正常对照组(12.35±1.28)g/L、(2.36±0.12)g/L比较差异无统计学意 义(P>0.05),三组与Treg未干预组(16.58±1.12)g/L、(3.75±0.37)g/L比较差异有统计学意义 (P<0.01).Treg 局部和全身干预组CTA存活时间分别为(97±13)和(63±lO)d,显著长于Treg未 干预组的(22±8)d(P<0.01).结论 供体抗原特异性CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能有明显的 抑制作用,能诱导CTA免疫耐受,延长其存活时间,且局部应用效果优于全身.     

肝癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及其意义

目的 探讨应用流式细胞术检测肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及意义.方法 应用三色免疫荧光流式细胞仪测定37例肝癌患者及30例肝硬化患者外周血T细胞亚群CD4~+CD25~+/CD~+比值.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血中转化生长因子β1(TGF-B1)的表达水平.结果 肝癌患者外周血CD4~+CD25~+/CD4~+比值较肝硬化患者显著增高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+T细胞水平与肝癌原发肿瘤的大小、TGF-βl呈正相关(P<0.05).结论 肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞增多,对肝癌患者具有免疫抑制作用.