铁离子对海带配子体克隆系生长发育的影响

为了探究Fe³⁺在不同氮、磷条件下对海带（）配子体生长发育的影响,以海带''黄官1号''雌、雄配子体克隆系为材料,以含有不同浓度的氮（N）、磷（P）营养盐的灭菌海水为培养液,添加不同浓度（0μmol/L、0.36 μmol/L、3.60 μmol/L、8.90 μmol/L、17.80 μmol/L）的铁离子（Fe³⁺）,通过测定光系统Ⅱ的最大荧光产量（）观察配子体营养生长状况,通过计算发育率（包括卵囊形成率、排卵率、幼苗形成率）观测配子体发育与生殖状况。结果显示,N、P浓度分别为0.825 mmol/L、0.0336 mmol/L的条件下,浓度为3.60 μmol/L的Fe³⁺对海带配子体营养生长阶段的促进作用最大;在不同N、P浓度条件下,Fe³⁺浓度为3.60~17.80 μmol/L时能够提高海带配子体的最大荧光产量,且各浓度组之间没有显著性差异（3+能够促进海带配子体由营养生长转向生殖生长,Fe³⁺浓度为3.60~17.80 μmol/L时可显著促进海带配子体的生殖生长,且各浓度组之间没有显著性差异（>0.05）;即使N、P浓度达到0.825 mmol/L、0.0336 mmol/L,在无铁条件下所有的海带配子体维持在营养生长状态;即使Fe³⁺浓度达到3.60 μmol/L,在N、P浓度0.007 mmol/L、0.0003 mmol/L条件下,大部分海带配子体（65%）维持在营养生长状态,虽然小部分海带配子体（35%）进入了生殖生长状态,但生殖生长明显滞后于实验中的其他各个N、P浓度组。本研究表明,铁和N、P营养盐对海带配子体的营养生长和生殖生长具有协同促进作用,铁是海带配子体由营养生长到发育成熟再到有性生殖过程中的关键因素;在添加适宜浓度的氮（0.275 mmol/L）、磷营养盐（0.0112 mmol/L）条件下,浓度为3.60 μmol/L的Fe³⁺对海带配子体的生长发育促进作用最大。该结果可为提高海带育苗效率提供理论依据。     

不同pH和培养方式对海带配子体生长发育的影响

为了解决海带配子体人工高密度培养过程中因海水中游离CO₂减少及pH升高而导致生长受限的问题,本研究以海带’奔牛’(Sacchatina japonica)雌雄配子体为材料,以不用pH的富营养灭菌海水(10 mg/L N,1 mg/L P)为培养液,通过测量配子体长度,计算相对生长率,比较不同pH对配子体生长的影响,结果显示,pH(P<0.001)、性别(P=0.016<0.05)对海带’奔牛’配子体生长有显著影响,长期处在pH<7培养条件下的雌雄配子体相对生长率显著低于其他2组,雌配子体的相对生长率(4.61%)显著高于雄配子体(3.35%)。初始pH为7.0的处理组与对照组相比,雌雄配子体的相对生长率均无显著差异(P>0.05)。在此基础上,采用在通空气悬浮培养同时补充CO₂的方式进行配子体扩增培养,利用纯CO₂压力罐(出气量120 L/h),15 L培养液每2d补充CO₂ 1～2 min,培养液pH范围即可控制在7.0～8.4,以此排除pH对配子体生长不利影响,并避免频繁...     

利用深井海水进行海带配子体克隆育苗试验

以海带配子体克隆为试验对象,研究了深井海水对海带配子体克隆生长、发育的影响,并利用深井海水进行了克隆育苗试验.试验结果表明,利用深井海水培养海带配子体克隆,配子体生长速度较自然海水稍慢,但深井海水可促进配子体发育,加快孢子体的形成,缩短育苗时间,而且利用深井海水进行克隆育苗可取得较好效果.综合考虑克隆培养效果及降低育苗成本,克隆育苗可采取自然海水与深井海水交替使用的模式进行.     

光照强度对海带配子体克隆生长的影响

本试验研究了在充气悬浮培养及静置培养条件下，不同光照强度对海带配子体克隆生长的影响。结果表明：在4500lx光照强度、充气悬浮培养条件下，海带配子体克隆具有较高的瞬时生长率。     

海水不同消毒方式对海带配子体克隆生长发育的影响

通过5种海水不同消毒方式对海带配子体克隆生长发育进行试验,结果表明:无论是静置还是充气条件下,煮沸海水培养的配子体克隆生长最快,盐酸消毒的海水次之,次氯酸钠消毒海水最差,紫外线消毒和臭氧介于其间。煮沸和紫外线消毒海水中的海带配子体克隆发育率较高,2者非常接近,盐酸消毒和臭氧消毒海水中的海带配子体克隆发育也较高,而次氯酸钠消毒海水中的海带配子体克隆发育非常缓慢。试验证明除煮沸消毒外,盐酸消毒海水可以用于海带配子体克隆扩大培养。     

海带(Laminaria japonica Aresch)胚孢子萌发和配子体生长与光照波长间关系的研究

研究了紫外光和可见光谱内不同波长光及白光（全色光）与我国养殖海带（ＬａｍｉｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａＡｒｅｓｃｈ）胚孢子萌发和配子体生长之间的关系,结果发现：不同波长光照（３００～７００ｎｍ）对海带胚孢子的萌发率、萌发管的生长及雌、雄配子体的生长均有显著影响,其影响特点是因个体生长发育时期的不同而有所不同。试验还表明,在海带配子体世代,细胞内光合色素的功能随着个体的生长发育渐趋完全。     

盐度对笼目海带配子体生长发育的影响

通过设置培养液的不同盐度,在实验室条件下检验了笼目海带(Saccharina sculpera)在不同盐度的培养液中配子体生长发育情况。结果显示,在盐度20～30的条件下,笼目海带配子体大部分(60%～80%)进入了生殖生长状态,且其中50%以上为多细胞孢子体；在盐度35的条件下,大部分(80%～90%)笼目海带配子体维持在营养生长状态,虽然有小部分(7.30%)配子体进入了生殖生长状态,但生殖生长明显滞后于盐度20～30处理组。在盐度为40和45的培养条件下,所有海带配子体维持在营养生长状态。根据试验结果,建议将笼目海带配子体育苗的盐度保持在20～30。     

不同培养与操作条件对海带配子体培养效果的影响

本文研究了不同培养操作条件对海带配子体培养效果的影响,结果如下:(1)培养瓶3种封口方式:封口膜(Parafilm)显著抑制配子体生长(P0.05),滤纸和滤纸膜无显著差异;(2)利用5种不同消毒方式处理的海水配制培养液:煮沸海水和抽滤煮沸海水试验组海带配子体团直径最大,两者之间差异不显著。抽滤煮沸双抗(青霉素+链霉素)海水、抽滤生海水和抽滤双抗生海水配子体团直径三者之间无显著差异,但均显著小于煮沸海水和抽滤煮沸海水试验组(P0.05),抽滤生海水和抽滤双抗生海水试验组出现明显染菌;(3)设置2种不同的环境条件放置培养箱:常规实验室和无菌室对海带配子体生长无显著影响;(4)设置3种操作环境下进行培养液更换:在无菌室超净台和常规实验室超净台更换培养液,海带配子体生长无显著差异,无染菌。在常规实验室实验台更换培养液试验组配子体生长显著低于无菌室超净台和常规实验室超净台试验组(P0.05),且染菌率超过60%。     

海带(Laminaria japonica Aresch)胚孢子萌发和配子体生长与光照波长间关系的研究

研究了紫外光和可见光谱内不同波长光及白光与我国养殖海带胚孢子萌发和配子体生长之间的关系。结果发现：不同波长光照对海带胚孢子的萌发率，萌发管的生长及雌，雄配子体的生长均有显著影响，其影响特点是因个体生长发育时期的不同而有所不同。试验还表明，在海带配子体世代，细胞内光合色素的功能随着个体的生长发育渐趋完全。     

不同封口方式对901杂交海带♂配子体的影响

传统的海带配子体种质资源保存是用锥形瓶保存,纸盖封口,但由于近些年来污染比较严重,所保存的海带配子体附着大量的细菌和各种杂藻,对克隆生长有很大的影响。为了更有效地保存海带种质资源,我们实验了三种不同的封口方式进行培养,探求其对克隆生长状态的影响。结果证明,最有效的封口方式为:滤纸膜的封口方式,不论是对配子体细胞状态,还是对克隆增殖都要好于其它方式。     

海带种质保存技术

海带是中国重要的经济藻类,养殖产量连续多年居世界首位。丰富的种质资源是渔业生产的重要物质基础,保护和利用好海带种质资源将为提高海带品种质量、实现海带良种化生产提供重要保证,使我国这一具有传统优势的重要产业在新世纪仍然保持世界领先水平。海带的生活史分两个世代:孢子体和配子体。配子体是海带的单倍体阶段,在该阶段将雌配子体和雄配子体单个分离培养,可形成无性繁殖系。20世纪70年代,雌、雄配子体分离培养在我国首先获得成功,为保护海带种质资源奠定基础。本文将介绍海带种质的保存技术,为海带种质资源的保护提供保障。     

4-碘苯氧乙酸在海带夏苗培育中的应用

本文报道了4-碘苯氧乙酸(4-IPOAA)在海带夏苗培育中应用的试验结果。4-IPOAA对海带配子体和幼孢子体的生长发育有着明显的影响，高剂量的4-IPOAA(500mg／L)对配子体的发育有明显的抑制作用；解除4-IPOAA对配子体的抑制，配子体在短期内即能正常排卵、排精并受精形成孢子体；低浓度的4-IPOAA（25mg／L以下)能促进幼孢子体的生长。这项试验结果表明，有可能利用4-IPOAA对配子体的抑制特性，来改进目前所采用的低温、自然光条件下培育海带夏苗的工艺。作者建议把海带夏苗培育工艺改为以下步骤：(1)在常温下采苗；(2)在18℃以下水温条件下培育配子体；(3)在配子体成熟前用4-IPOAA处理，使其停止发育，在较高水温(20℃左右)条件下静水培养被抑制的配子体；(4)在计划夏苗出库前40—50天，解除4-IPOAA对配子体的抑制，恢复最适条件下流水培育；(5)肉眼见苗后及时下海暂养。     

温度对“901”海带配子体克隆生长的影响

温度是影响“901”海带配子体克隆生长最重要的环境因子之一。试验结果表明，在15％条件下，配子体克隆的生长速度最快，其致死温度为25℃。在相同的环境条件下，细胞数基本相同的雌、雄配子体克隆的生长速度相近。     

褐藻酸降解菌对海带配子体克隆的作用及其药物防治研究

通过回染实验，确认褐藻酸降解菌是海带配子体克隆病害的主要致病菌；观察了对其海带配子体克隆细胞侵染的现象，并研究了抗生素对海带配子体克隆细胞和褐藻酸降解菌的作用，发现0．5－100mg/L青霉素对配子体克隆细胞的生长有一定促进作用，实验范围内各浓度青霉素对褐藻酸降解菌均有较好的抑菌效果，且抑菌效果随浓度的提高而加强。其中100mg/L青霉素10d内可将褐藻酸降解菌浓度降低到初始浓度的1／20以下，可作为海带配子体克隆保存中有效的抑菌药物。     

海带种质固相保存技术

将海带种质的无菌采集与配子体固相保存相结合,对种海带的处理、游孢子的采集、配子体的分离与固相接种等关键步骤进行了研究和改进,建立了一种高效的海带配子体固相保存方法,此方法从源头降低了细菌的污染,减少了配子体保存过程中污染细菌的机会,简化了常规固相保存的菌处理流程,提高了保种效率,有利于固相保存方法的大规模应用。     

光照强度和光照周期对笼目海带配子体发育的影响

通过设置不同的光照强度和光照周期,在实验室条件下检测了笼目海带(Kjellmaniella crassifolia Miyabe)配子体的发育情况。结果显示:光照强度及光照周期均对笼目海带配子体的发育率有显著的影响(P0.05)。结果表明:1)在光照强度条件不同、其他培养条件相同的情况下,经过4周的发育,5～80μmol·m~(-2)s~(-1)条件下大部分配子体进入了生殖生长状态,发育率为60%～80%,其中20～40μmol·m~(-2)s~(-1)光照强度条件下生殖生长明显快于其他组。2)在光周期不同、其他培养条件相同的情况下,培养第12～25天时,20L∶4D条件下发育率为6.68%～69.87%,发育率与16L∶8D实验组差异不显著,但显著大于其余组。培养第32天,光照时间最长的处理组即20L∶4D的发育率(74.54%)最高,且孢子体细胞列数最多。本研究为笼目海带配子体规模化扩增及育苗提供了数据参考。     

海带配子体克隆大规模培养技术的研究

控制适宜条件使海带配子体克隆正常生长，根据生长情况拟合出鲜重增长曲线，并回归分析出鲜重与生长时间关系方程。定期测定培养液中N、P含量，分析出N6g/m^3，P 1g/m^3，每周换水1次可满足较小密度克隆生长需要；N10g/m^3，P2g/m^3，每周换水1次，可满足较大密度克隆生长需要。通过不同接种密度瞬时生长率比较，证明克隆密度越低，生长速度越快，分瓶数量越多，总重量增长越多，大规模培养结果：起始重量48g，2个月达到12276g，生长速度约每周翻1番，结束培养时平均密度达22.8g/L。     

海带配子体克隆育苗的关键技术

海带配子体克隆育苗生产技术工艺包括克隆的扩增培养、采苗及幼苗培育3部分。从生产应用的角度总结并探讨了海带克隆育苗工艺中各环节的关键技术。     

海带染色体的DAPI染色及核型初步分析

鉴于海带染色体比较小且数目存在分歧等原因,利用0.2%秋水仙素对海带配子体及孢子体处理10 h左右,经过卡诺试剂固定、多种酶组合处理及30 cm的高位滴片,可以获得质量比较高的海带染色体;使用灵敏度高、特异性强的DNA荧光染料DAPI进行染色,结果显示,海带雌、雄配子体的染色体各为31条,孢子体染色体为62条,大多为短杆状或者点状;雌配子体染色体的大小为0.78～2.61μm,稍大于雄配子体(大小为0.57～2.17μm)。根据染色体的大小,对海带配子体的染色体核型进行了初步分析。这些结果为分子标记的染色体定位等细胞学研究奠定了技术基础。     

海带配子体的室内保存方法

<正> 为了进一步提高海带的产量和质量,我国海藻科学工作者从六十年代就开展了海带遗传育种的研究,到七十年代先后培育出了“860”、“35X”、“243”等几个高碘海带。要开展海带的遗传育种,必须解决保种问题,这样就可以把各个品系保存下来,随用随取。海带的保种以保存配子体最为有利,孢子体藻体太大,而在室内长时间培养是十分困难