不同封口方式对901杂交海带♂配子体的影响

传统的海带配子体种质资源保存是用锥形瓶保存,纸盖封口,但由于近些年来污染比较严重,所保存的海带配子体附着大量的细菌和各种杂藻,对克隆生长有很大的影响。为了更有效地保存海带种质资源,我们实验了三种不同的封口方式进行培养,探求其对克隆生长状态的影响。结果证明,最有效的封口方式为:滤纸膜的封口方式,不论是对配子体细胞状态,还是对克隆增殖都要好于其它方式。     

不同种类冷冻保护剂对海带配子体及孢子的毒性评价

为筛选用于海带超低温保存的冷冻保护剂，采用10%二甲基亚砜(DMSO)、10%甘油、10%蔗糖、10%乙二醇、10%DMSO+10%甘油、10%DMSO+8%葡萄糖、10%DMSO+10%蔗糖、10%DMSO+10%甘油+8%葡萄糖、10%DMSO+10%山梨醇等9种单一或复合冷冻保护剂，在0～4℃条件下分别对海带配子体和孢子进行处理，对配子体处理30 min、60 min、24 h,对孢子处理15、30、60 min,通过统计配子体细胞的存活率以及孢子萌发成配子体的比例，对不同种类的冷冻保护剂进行毒性评价。结果表明：9种冷冻保护剂均对海带配子体和孢子有一定的毒性作用，并且毒性随着处理时间的延长而增强。10%DMSO对海带配子体细胞的毒性最小，处理60 min后配子体细胞的存活率为100%;其次是10%乙二醇，处理30 min后配子体的存活率为100%;含10%甘油的单一或复合冷冻保护剂对配子体细胞毒性较大，处理后配子体的成活率显著低于DMSO和乙二醇组(P<0.05)。单一冷冻保护剂对海带孢子的毒性显著低于复合冷冻保护剂，除10%甘油组处理30、60 min外，其他单一冷冻保护...     

污染严重的海带配子体分离纯化

针对海带(Saccharina japonica)配子体保存过程中严重污染材料的分离纯化进行研究。(1)液相培养分离纯化法:将克隆材料经超声波细胞粉碎仪打碎后重新附着到90 mm培养皿中,利用微毛细吸管在显微镜下分离出状态好且无菌丝附着的细胞段,继续保存。(2)固相培养分离纯化法:将克隆材料4 000 r/min离心5～10 min,弃上清,加灭菌PESI培养液重新悬浮藻液,利用5 mL无菌注射器吸取2 mL粉碎后的配子体细胞,逐点注射入固相平板上,接种后利用Parafilm封口膜密封培养皿,平板培养约60～120 d后观察,将未长出菌落且藻斑直径达2 mm的克隆团挑出,然后在PESI液体培养基中复苏继续保存。     

海带种质保存技术

海带是中国重要的经济藻类,养殖产量连续多年居世界首位。丰富的种质资源是渔业生产的重要物质基础,保护和利用好海带种质资源将为提高海带品种质量、实现海带良种化生产提供重要保证,使我国这一具有传统优势的重要产业在新世纪仍然保持世界领先水平。海带的生活史分两个世代:孢子体和配子体。配子体是海带的单倍体阶段,在该阶段将雌配子体和雄配子体单个分离培养,可形成无性繁殖系。20世纪70年代,雌、雄配子体分离培养在我国首先获得成功,为保护海带种质资源奠定基础。本文将介绍海带种质的保存技术,为海带种质资源的保护提供保障。     

温度与照度对利尻海带配子体及幼孢子体的影响

利尻海带（LochotensisMiyabe）具有个体大、生长速度快、品质优良的特点,因此本实验主要进行了此种海带的室内培养,采用切碎的方法研究了不同温度、照度的相互作用对利夙海带配子体的生长、成熟及幼抱子体生长的影响,并取得了一定的结果。现报告如下：一、材料与方法1．材料利夙海带的配子体是直接从日本引进的,雌雄配子体分别装入三角烧瓶中,放于20CC恒温培养箱内保存,照度5（Xk－x000ltl,光照时间12h／d。所用培养液为自然海水经沉淀、砂滤再经玻璃丝2次过滤后,加入营养盐N8N03母液,N。HzPO‘母液,微量元素PI溶液各lffe…     

褐藻酸降解菌对海带配子体克隆的作用及其药物防治研究

通过回染实验，确认褐藻酸降解菌是海带配子体克隆病害的主要致病菌；观察了对其海带配子体克隆细胞侵染的现象，并研究了抗生素对海带配子体克隆细胞和褐藻酸降解菌的作用，发现0．5－100mg/L青霉素对配子体克隆细胞的生长有一定促进作用，实验范围内各浓度青霉素对褐藻酸降解菌均有较好的抑菌效果，且抑菌效果随浓度的提高而加强。其中100mg/L青霉素10d内可将褐藻酸降解菌浓度降低到初始浓度的1／20以下，可作为海带配子体克隆保存中有效的抑菌药物。     

关于海带染色体dE数目

海带是一种具有明显世代交替的两年生褐藻,它的生活史有无性世代的孢子体和有性世代的配子体两个阶段。孢子体世代的核相是2n,配子体世代的核相是n。在孢子体和配子体的世代交替过程中,伴随着发生核相的交替。这里所说的核相交替,很重要的一点是染色体数目的交替。上述记载,早为人们所知,但是海带的染色体数目到底是多少?这却是一直未能解决的问题,而这个问题的解决,对海带遗传育种工作,尤其是将来将近代遗传工程技术应用在海带育种上,有着十分重要的意义。本文     

关于海带染色体的数目

海带是一种具有明显世代交替的两年生褐藻，它的生活史有无性世代的孢子体和有性世代的配子体两个阶段。孢子体世代的核相是2n，配子体世代的核相是n。在孢子体和配子体的世代交替过程中，伴随着发生核相的交替。     

海带染色体的DAPI染色及核型初步分析

鉴于海带染色体比较小且数目存在分歧等原因,利用0.2%秋水仙素对海带配子体及孢子体处理10 h左右,经过卡诺试剂固定、多种酶组合处理及30 cm的高位滴片,可以获得质量比较高的海带染色体;使用灵敏度高、特异性强的DNA荧光染料DAPI进行染色,结果显示,海带雌、雄配子体的染色体各为31条,孢子体染色体为62条,大多为短杆状或者点状;雌配子体染色体的大小为0.78～2.61μm,稍大于雄配子体(大小为0.57～2.17μm)。根据染色体的大小,对海带配子体的染色体核型进行了初步分析。这些结果为分子标记的染色体定位等细胞学研究奠定了技术基础。     

重离子束辐射对海带配子体克隆的影响

利用~(12)C重离子束对东方海洋种质库保存的8个海带配子体克隆系进行3次辐射试验,辐射剂量分别为10、20、40、50、60、80、120、160、200和240 Gy。结果表明,使海带配子体克隆细胞发生变化的最低辐射剂量为60 Gy,随着剂量的增大,细胞死亡增多,240 Gy辐射剂量下仅有一个克隆系存活;80 Gy辐射剂量下细胞存活率约为50%～60%;不同海带配子体克隆系对重离子辐射的耐受度稍有差别;雄配子体比雌配子体耐受力稍强。     

海带配子体的室内保存方法

<正> 为了进一步提高海带的产量和质量,我国海藻科学工作者从六十年代就开展了海带遗传育种的研究,到七十年代先后培育出了“860”、“35X”、“243”等几个高碘海带。要开展海带的遗传育种,必须解决保种问题,这样就可以把各个品系保存下来,随用随取。海带的保种以保存配子体最为有利,孢子体藻体太大,而在室内长时间培养是十分困难     

海水不同消毒方式对海带配子体克隆生长发育的影响

通过5种海水不同消毒方式对海带配子体克隆生长发育进行试验,结果表明:无论是静置还是充气条件下,煮沸海水培养的配子体克隆生长最快,盐酸消毒的海水次之,次氯酸钠消毒海水最差,紫外线消毒和臭氧介于其间。煮沸和紫外线消毒海水中的海带配子体克隆发育率较高,2者非常接近,盐酸消毒和臭氧消毒海水中的海带配子体克隆发育也较高,而次氯酸钠消毒海水中的海带配子体克隆发育非常缓慢。试验证明除煮沸消毒外,盐酸消毒海水可以用于海带配子体克隆扩大培养。     

盐度对笼目海带配子体生长发育的影响

通过设置培养液的不同盐度,在实验室条件下检验了笼目海带(Saccharina sculpera)在不同盐度的培养液中配子体生长发育情况。结果显示,在盐度20～30的条件下,笼目海带配子体大部分(60%～80%)进入了生殖生长状态,且其中50%以上为多细胞孢子体；在盐度35的条件下,大部分(80%～90%)笼目海带配子体维持在营养生长状态,虽然有小部分(7.30%)配子体进入了生殖生长状态,但生殖生长明显滞后于盐度20～30处理组。在盐度为40和45的培养条件下,所有海带配子体维持在营养生长状态。根据试验结果,建议将笼目海带配子体育苗的盐度保持在20～30。     

不同培养与操作条件对海带配子体培养效果的影响

本文研究了不同培养操作条件对海带配子体培养效果的影响,结果如下:(1)培养瓶3种封口方式:封口膜(Parafilm)显著抑制配子体生长(P0.05),滤纸和滤纸膜无显著差异;(2)利用5种不同消毒方式处理的海水配制培养液:煮沸海水和抽滤煮沸海水试验组海带配子体团直径最大,两者之间差异不显著。抽滤煮沸双抗(青霉素+链霉素)海水、抽滤生海水和抽滤双抗生海水配子体团直径三者之间无显著差异,但均显著小于煮沸海水和抽滤煮沸海水试验组(P0.05),抽滤生海水和抽滤双抗生海水试验组出现明显染菌;(3)设置2种不同的环境条件放置培养箱:常规实验室和无菌室对海带配子体生长无显著影响;(4)设置3种操作环境下进行培养液更换:在无菌室超净台和常规实验室超净台更换培养液,海带配子体生长无显著差异,无染菌。在常规实验室实验台更换培养液试验组配子体生长显著低于无菌室超净台和常规实验室超净台试验组(P0.05),且染菌率超过60%。     

利用深井海水进行海带配子体克隆育苗试验

以海带配子体克隆为试验对象,研究了深井海水对海带配子体克隆生长、发育的影响,并利用深井海水进行了克隆育苗试验.试验结果表明,利用深井海水培养海带配子体克隆,配子体生长速度较自然海水稍慢,但深井海水可促进配子体发育,加快孢子体的形成,缩短育苗时间,而且利用深井海水进行克隆育苗可取得较好效果.综合考虑克隆培养效果及降低育苗成本,克隆育苗可采取自然海水与深井海水交替使用的模式进行.     

裙带菜配子体与孢子体的附生微生物群落组成分析

裙带菜(Undaria pinnatifida)是一种重要的大型褐藻,具有较高的经济和食用价值。藻类的附生微生物既能通过代谢产物调控宿主藻类的生长发育,特定条件下又可能导致病害。了解裙带菜附生微生物群落组成对研究裙带菜与附生微生物间的相互作用、种质资源的有效保存以及防治藻类病害等有重要意义。现有研究大多集中于海带和紫菜,关于裙带菜的附生微生物,特别是不同生活史的对比研究还很少。本研究通过16S rRNA基因高通量测序发现,裙带菜配子体和孢子体的附生细菌群落组成有明显差异,配子体样品中的细菌群落丰度和多样性均大于孢子体。配子体中变形菌门(Proteobacteria)(66.67%)为第一优势菌门,其次为拟杆菌门(Bacteroidetes)(13.48%)和蓝细菌门(Cyanobacteria)(11.13%),α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)(34.58%)为第一优势菌纲,其次为γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)(31.01%);而孢子体中蓝细菌门(95.67%)占绝对优势,其次为放线菌门(Actinobacteria)(1.65%)和厚壁菌门(Firmicutes)(1.48%)。裙带菜样品经18S rRNA基因测序检测出链形植物(Streptophyta)、纤毛虫门(Intramacronucleata)、担子菌门(Basidiomycota)、顶复亚门(Apicomplexa)、节肢动物门(Arthropoda)、硅藻门(Bacillariophyta)、脊索动物门(Chordata)、腹毛动物门(Gastrotricha)、子囊菌门(Ascomycota)和毛霉菌门(Mucoromycota),其中,担子菌门、子囊菌门和毛霉菌门属于真菌,孢子体的真核微生物群落丰度大于配子体。本研究确定了裙带菜配子体和孢子体附生微生物群落组成以及不同细菌和真核微生物的相对丰度,结果表明,2个世代之间存在显著差异,为后续研究藻类宿主与微生物之间的相互作用、提高海带目褐藻种质保存技术提供了基础的数据支持。     

二氧化锗对底栖硅藻及海带配子体的影响

自我所重新引进日本真海带以来,为我国各地的海带养殖提供了一个新的品种.随着海带人工育苗的不 断创新,尤其是以海带配子体克隆育苗技术的出现,使育苗技术达到了一个新的水平.该技术表现出育苗周 期短、投入少、成本低、产出大的特点,在海带保种方面,也较利于保持海带的种质,解决了遗传退化的问 题.但是随着该技术的应用,产生了一些新的问题,比如敌害生物的问题也成了一个影响保种及海带配子体 克隆育苗成败的关键因素之一.     

海带配子体保存过程中污染菌的分离纯化及药敏试验

该论文通过对海带配子体保存中污染菌的分离纯化及药敏试验,分离获得一些主要的污染菌群并探索有效的抗生素及使用浓度。将污染的样本涂板,待长出菌落后,反复3区划线,分出单个菌落,得到纯培养。该试验分出2株真菌(粗丝和细丝)和1株细菌,然后再接种于液体培养基增菌,收集细菌或真菌用相应的方法提取DNA。真菌用18 s r DNA通用引物,细菌用16 s r DNA通用引物进行PCR反应,最后将PCR反应产物送基因公司测序,将测序结果在GeneBank中比对。结果表明:粗丝18 s r DNA序列与Fusarium proliferatum同源性最高,为100%;细丝18 s r DNA序列与Nectria mauritiicola同源性最高,为99%;细菌16 s r DNA序列与Halomonas sp.同源性最高,为99%。通过药敏试验观察发现粗丝的制霉菌素敏感抑菌圈直径为13～15 mm;细丝的先锋霉素敏感抑菌圈直径为14～16 mm;细菌的盐酸青霉素较敏感,其抑菌圈为15～17 mm。     

海带“东方6号”

<正>培育单位:山东东方海洋科技股份有限公司品种简介:该品种是以分布于韩国沿海的野生海带个体的雌配子体单克隆作为母本,以长期保存在山东烟台海带良种场种质资源库中的福建栽培海带个体的雄配子体单克隆为父本,杂交获得的F1,即为海带"东方6号"。     

铁离子对海带配子体克隆系生长发育的影响

为了探究Fe³⁺在不同氮、磷条件下对海带（）配子体生长发育的影响,以海带''黄官1号''雌、雄配子体克隆系为材料,以含有不同浓度的氮（N）、磷（P）营养盐的灭菌海水为培养液,添加不同浓度（0μmol/L、0.36 μmol/L、3.60 μmol/L、8.90 μmol/L、17.80 μmol/L）的铁离子（Fe³⁺）,通过测定光系统Ⅱ的最大荧光产量（）观察配子体营养生长状况,通过计算发育率（包括卵囊形成率、排卵率、幼苗形成率）观测配子体发育与生殖状况。结果显示,N、P浓度分别为0.825 mmol/L、0.0336 mmol/L的条件下,浓度为3.60 μmol/L的Fe³⁺对海带配子体营养生长阶段的促进作用最大;在不同N、P浓度条件下,Fe³⁺浓度为3.60~17.80 μmol/L时能够提高海带配子体的最大荧光产量,且各浓度组之间没有显著性差异（3+能够促进海带配子体由营养生长转向生殖生长,Fe³⁺浓度为3.60~17.80 μmol/L时可显著促进海带配子体的生殖生长,且各浓度组之间没有显著性差异（>0.05）;即使N、P浓度达到0.825 mmol/L、0.0336 mmol/L,在无铁条件下所有的海带配子体维持在营养生长状态;即使Fe³⁺浓度达到3.60 μmol/L,在N、P浓度0.007 mmol/L、0.0003 mmol/L条件下,大部分海带配子体（65%）维持在营养生长状态,虽然小部分海带配子体（35%）进入了生殖生长状态,但生殖生长明显滞后于实验中的其他各个N、P浓度组。本研究表明,铁和N、P营养盐对海带配子体的营养生长和生殖生长具有协同促进作用,铁是海带配子体由营养生长到发育成熟再到有性生殖过程中的关键因素;在添加适宜浓度的氮（0.275 mmol/L）、磷营养盐（0.0112 mmol/L）条件下,浓度为3.60 μmol/L的Fe³⁺对海带配子体的生长发育促进作用最大。该结果可为提高海带育苗效率提供理论依据。