RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及布地奈德对其抑制作用

目的：观察布地奈德（BUD）对支气管哮喘小鼠肺组织中Th17细胞的特异性转录因子RORγt表达的影响,探讨BUD治疗哮喘的机制。方法：采用卵清蛋白（OVA）致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;Balb/c雌性小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、BUD组,每组各10只。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）、血清中白细胞介素-17（IL-17）水平;对BALF中炎性细胞进行计数;苏木精-伊红（HE）染色评价各组小鼠气道炎症程度;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肺组织中RORγt mRNA表达水平。结果：哮喘组小鼠BALF、血清中IL-17水平较对照组明显升高（P<0.01）,BUD治疗后IL-17水平明显降低（P<0.01）。肺组织中RORγt mRNA在哮喘组较对照组明显升高（P<0.01）,BUP治疗后RORγt mRNA水平明显降低（P<0.01）。哮喘组细胞总数、中性粒细胞数和嗜酸性粒细胞数均较对照组明显增多（P<0.01）,BUD组细胞总数、中性粒细胞数和嗜酸性粒细胞数与哮喘组比较明显减少（P<0.01）,与对照组比较差异无统计学意义。HE染色表明BUD治疗后气管炎性反应明显缓解。结论：哮喘小鼠RORγt表达水平和IL-17水平增高,导致哮喘小鼠的全身和局部炎症反应增强,可能是导致哮喘发生的机制之一。BUD可通过抑制RORγt和IL-17的表达水平,发挥其免疫抑制功能而起到治疗哮喘的作用。     

白三烯受体拮抗剂抑制小鼠急性哮喘呼吸道炎症的研究

目的应用白三烯受体1拮抗剂孟鲁斯特(montelukast,MK)治疗小鼠急性哮喘呼吸道炎症,探讨MK对白细胞介素-5(IL-5)和嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)表达及血清总IgE水平的影响。方法卵清蛋白(OVA)致敏并激发Balb/c小鼠建立急性哮喘模型。静脉予MK(25 mg/kg)或Saline 3 d。瑞氏染色观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织、BALF和血清IL-5和eotaxin及血清总IgE水平。半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测IL-5和eotaxin的mRNA表达。液相色谱方法检测血MK水平。结果OVA激发后24 h,MK组BALF白细胞总数、嗜中性和嗜酸性粒细胞(EOS)分别为(26.0±18.9)×107/L(、5.92±8.09)×107/L和(0.74±0.88)×107/L,较Saline组相应数明显减少(P均<0.05)。EOS减少达80%以上。MK组BALF和肺组织IL-5分别为(48.52±14.45)ng/L和(27.40±9.62)ng/g蛋白,较Saline组相应值明显降低(P均<0.05);MK组血清IL-5和总IgE水平明显减低。MK组BALF中eotaxin水平也明显降低(P<0.05);MK组肺组织IL-5 mRNA显著降低,肺eotaxin及其mRNA水平无明显下降。结论MK可能通过抑制IL-5和IgE产生和分泌起抗炎作用。     

减毒卡介活菌疫苗干预对哮喘小鼠肺GATA-3表达的影响

目的研究减毒卡介活菌疫苗（BCG）干预对哮喘小鼠呼吸道炎症及肺组织GATA-3表达的影响。方法昆明小鼠24只随机分为哮喘组、BCG治疗组、正常对照组。以卵清蛋白（OVA）致敏激发建立哮喘模型,于OVA致敏前及后5 d分别以BCG皮内注射干预。计数肺泡灌洗液（BALF）中的细胞总数及嗜酸性粒细胞（EOS）个数。酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定BALF中IL-4水平。免疫组织化学法观察BCG对哮喘小鼠肺组织GATA-3表达的影响。结果1.哮喘组小鼠BALF中的细胞总数及EOS计数较正常对照组明显增高（Pa〈0.001）,而BCG治疗组BALF中的细胞总数及EOS的计数较哮喘组显著降低（Pa〈0.001）。2.哮喘组小鼠BALF中IL-4的水平较正常对照组明显上升,二组比较差异有显著性（P〈0.01）;而BCG治疗组小鼠BALF中IL-4的水平较哮喘组明显下降,差异有显著性（P〈0.01）。3.BCG治疗的哮喘小鼠其肺部组织GATA-3的表达较哮喘小鼠明显减弱。结论BCG能抑制哮喘小鼠肺组织GATA-3的表达,导致IL-4等TH2型细胞因子的减少,从而减轻呼吸道的炎症反应。     

穿心莲内酯磺化物对支气管哮喘小鼠肺泡灌洗液炎性细胞、白细胞介素-12及白细胞介素-13表达的影响

目的探讨穿心莲内酯磺化物对哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF)内炎性细胞、IL-12及IL-13表达的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为哮喘组、穿心莲内酯磺化物干预组和对照组。以卵清蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘小鼠模型。计数BALF炎性细胞总数及分类,双抗体夹心ELISA法测定BALF中IL-12、IL-13水平,实时荧光定量PCR检测肺组织中IL-12 mRNA、IL-13 mRNA相对表达量。结果哮喘组、穿心莲内酯磺化物干预组、对照组BALF中白细胞总数分别为(203.09±43.60)×104L-1、(123.90±35.10)×104 L-1、(20.69±3.68)×104 L-1;嗜酸性粒细胞(EOS)数分别为(160.78±31.62)×104 L-1、(67.44±20.00)×104 L-1、(1.72±0.68)×104 L-1;巨噬细胞数分别为(33.85±2.29)×104 L-1、(14.12±2.10)×104 L-1、(17.24±1.97)×104 L-1;BALF中IL-12水平分别为(60.45±7.91)ng.L-1、(92.27±18.67)ng.L-1、(278.48±36.78)ng.L-1;BALF中IL-13水平分别为(570.20±62.98)ng.L-1、(299.71±31.64)ng.L-1、(230.22±27.83)ng.L-1;肺组织IL-12 p40 mRNA相对表达量分别为0.43±0.24、0.93±0.28、1.04±0.28;IL-13 mRNA相对表达量分别为44.80±9.51、11.27±5.47、1.07±0.47。上述指标,三组间比较差异均有统计学意义(Pa<0.01)。结论穿心莲内酯磺化物可抑制哮喘小鼠炎性细胞浸润和IL-13表达,促进IL-12表达拮抗哮喘呼吸道炎症。     

新生期卡介苗接种对实验性哮喘小鼠肺Th17细胞和IL-17的影响

目的：通过实验性哮喘小鼠模型探讨新生期卡介苗（bacillus Calmette-Guérin,BCG）接种对肺Th17细胞和IL-17的影响。方法：新生期小鼠分3组：对照组,卵白蛋白组（OVA）,BCG干预组（BCG/OVA）。除对照组外,其余两组均给予OVA致敏和激发。观察支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中细胞总数及分类,ELISA法检测BALF中IFN-γ、IL-17含量,流式细胞术检测肺Th17细胞。结果：两哮喘组BALF中细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞比例均明显高于对照组,而BCG/OVA组上述细胞均显著低于OVA组。两哮喘组BALF中IFN-γ水平明显低于对照组,IL-17显著高于对照组,同时BCG/OVA组IL-17水平明显低于OVA组。流式细胞术显示,两哮喘组Th17细胞比例均明显高于对照组,但两哮喘组间差异无统计学意义。结论：Th17细胞/IL-17在实验性哮喘小鼠发病中起作用,新生期BCG接种可抑制气道IL-17的产生,其抑制的IL-17可能并非主要由Th17细胞产生,而来源于其他细胞。［中国当代儿科杂志,2010,12（8）：650-653］     

锌对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞趋化蛋白、单核细胞趋化蛋白-1及白介素8的影响

目的探讨锌对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞趋化蛋白(eotaxin)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及白介素8(IL-8)的影响。方法建立哮喘大鼠模型,SD大鼠32只,按体质量随机分为4组,A组为缺锌饲料+卵清蛋白(OVA)激发组,B组为补锌饲料+OVA激发组,C组为正常锌饲料+OVA激发组,D组为正常锌饲料+生理盐水激发组。诱喘后24 h取BALF进行细胞分类,酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中eotaxin、MCP-1及IL-8。结果与C组相比,A组大鼠BALF中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及单核细胞数均明显增加(P0.05),而B组则明显减少(P0.05);B组上述炎性细胞较D组仍有明显增加(P0.05)。A组大鼠BALF中eotaxin[(178.97±23.40)pg/ml]及MCP-1[(3.11±0.86)ng/ml]较C组[eotaxin(147.20±39.35)pg/ml,MCP-1(2.39±0.59)ng/ml]明显增加(P0.05),而B组eotaxin[(112.85±27.62)pg/ml]及MCP-1[(1.66±0.74)ng/ml]则明显减少(P0.05);A、B、C三组BALF中IL-8差异无统计学意义(P0.05)。结论锌对哮喘大鼠气道eotaxin及MCP-1具有抑制作用,但对IL-8无明显影响。     

IL-17和TGF-β1在支气管哮喘患儿血清及支气管肺泡灌洗液中的变化及临床意义

目的：探讨白细胞介素-17（IL-17）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在哮喘患儿血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的变化及临床意义。方法：56例哮喘患儿为哮喘组,依据病情严重程度分为中重度组（37例）和轻度组（19例）;18例非哮喘患儿为对照组。显微镜下计数各组BALF中细胞数,采用ELISA法检测血清与BALF中IL-17和TGF-β1含量。结果：中重度、轻度哮喘组患儿与对照组患儿BALF中细胞总数及巨噬细胞百分比的差异无统计学意义（P>0.05）,中重度、轻度哮喘患儿与对照组患儿中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及上皮细胞百分比差异有统计学意义（P<0.05）;哮喘患儿血清与BALF中IL-17和TGF-β1水平较对照组高,差异有统计学意义（P<0.05）,中重度哮喘患儿血清与BALF中IL-17和TGF-β1水平高于轻度哮喘患儿,差异有统计学意义（P<0.05）;哮喘患儿血清中IL-17和TGF-β1与相应的BALF中IL-17和TGF-β1呈正相关（均P<0.05）,血清IL-17与BALF中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及上皮细胞百分比呈正相关（均P<0.05）,血清中IL-17与TGF-β1亦呈正相关（P<0.05）。结论：哮喘患儿血清与BALF中IL-17和TGF-β1水平明显升高,IL-17、TGF-β1可能参与了哮喘的发生发展,在哮喘的急性发作与加重中起重要作用。     

黄芪对哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液白细胞介素-4、-12表达的影响

目的研究哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞介素-4（IL-4）和IL—12水平变化及黄芪对其影响。方法雄性SD大鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组和黄芪组（AM组）。以卵蛋白（OVA）致敏激发法制备大鼠哮喘模型．对PALF进行嗜酸性粒细胞（EOS）计数和分类计数；应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4、-12水平。结果1．哮喘组BALF细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数百分比（EOS％）均高于对照组（P均〈0．01），AM组上述指标均低于哮喘组（P均〈0．01）；2．BALF中IL-4水平哮喘组显著高于对照组（P〈0．01），AM组显著低于哮喘组（P〈0．01）；3．IL-12水平哮喘组显著低于对照组（P〈0．01），AM组最著高于哮喘组（P〈0．01）。结论IL-4高表达、IL-12低表达参与哮喘的病理生理过程；黄芪下调IL-4、上调IL-12表达水平，可能为其抑制哮喘呼吸道炎症的重要作用机制之一。     

哮喘小鼠气道IL-6、信号转导和转录激活因子3的表达与活化及其与气道炎症的关系

目的研究气道IL-6、信号转导和转录激活因子3(STAT3)在哮喘小鼠气道中的表达与活化,及其与气道炎症的关系。方法 30只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘未干预组和AG490干预组,每组10只。建立小鼠哮喘模型,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),进行炎性细胞分类计数,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5、IL-6水平,免疫组织化学染色检测各组肺组织中STAT3表达,蛋白免疫印迹法检测肺组织STAT3和p-STAT3水平。应用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果 HE染色显示哮喘未干预组可见明显气道炎症改变,AG490干预组炎症改变较轻;AG490干预组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)以及IL-4、IL-5水平均低于哮喘未干预组(P<0.05)。哮喘未干预组气道STAT3表达水平、肺组织STAT3和p-STAT3水平明显高于对照组(P<0.05),AG490干预组肺组织p-STAT3水平明显低于哮喘未干预组(P<0.05)。哮喘小鼠气道STAT3表达水平及肺组织p-STAT3水平分别与BALF中EOS计数、IL-4、IL-5、IL-6水平等...     

吸入性糖皮质激素对哮喘小鼠核因子-kB及Th2类细胞因子的影响

目的探讨糖皮质激素对哮喘小鼠核因子-kB（YF-kB）表达及Th2类细胞因子的影响。方法30只BALB／c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德治疗组．采用ELISA法测定其支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IL-5、IFN-γ的含量，免疫组织化学检测肺组织NF-kB表达。结果哮喘组与正常组、治疗组比较肺组织NF-kB表达及BALF中IL-4、IL-5含量均有显著差异（P均〈0．01）。NF-kB活化细胞百分比与BALF中IL-4、IL-5含量呈显著正相关（r=0．79，0．68P〈0．01）。结论惰皮质激素抑制肺组织NF-kB激活．NF-kB与IL-4、IL-5的产生相关，糖皮质激素通过抑制Th2类细胞功能来增强Th1反应。     

甲磺司特对哮喘大鼠气道炎症及IL-5的影响

目的 探讨甲磺司特（suplatast tosilate, IPD） 对哮喘大鼠IL-5 水平及气道炎症的影响。方法 50 只雄性成年Sprague-Dawley 大鼠（4 周龄）随机分为5 组：对照组、模型组、布地奈德组、IPD 早期干预组和IPD 晚期干预组,每组10 只。采用卵清白蛋白（OVA）致敏、激发,建立支气管哮喘大鼠气道炎症模型。观察肺泡灌洗液（BALF）炎性细胞总数和EOS 百分比,RT-PCR 检测肺组织IL-5 mRNA 的表达,ELISA测定BALF 上清液中IL-5 的含量。结果 模型组BALF 中炎性细胞总数及EOS 百分比、IL-5 含量及肺组织IL-5mRNA 表达量均较对照组明显增高（PP结论 IPD 可减轻哮喘气道炎症反应,可能与其抑制 IL-5 mRNA 的转录有关。     

Rock2和TGF-β1在哮喘大鼠中的表达及药物干预

目的：探讨Rho激酶2（Rock2）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在哮喘急性发作期的作用及糖皮质激素干预对其表达的影响。方法：48只大鼠随机分为哮喘组（AST组）、对照组（CON组）、地塞米松治疗组（DXM组）和布地奈德治疗组（BUD）4组,每组12只。用改良卵白蛋白进行致敏和激发制备大鼠哮喘模型,观察大鼠肺组织病理变化、分析支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞计数。采用免疫组织化学法测定Rock2蛋白质表达和原位杂交法测定TGF-β1 mRNA表达。结果：BUD组和DXM组大鼠病理变化较哮喘组明显减轻。哮喘组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞（EOS）、多形核粒细胞（PMN）和淋巴细胞（Lym）百分率均显著高于CON组（P﹤0.01）,巨噬细胞（Mф）百分率显著低于对照组（P﹤0.01）,而BUD和DXM组中BALF中细胞总数及EOS、Lym百分率低于哮喘组,Mф百分率显著高于哮喘组。哮喘组肺组织中Rock2及TGF-β1 mRNA表达显著高于CON、BUD和DXM组（P﹤0.01）,而BUD、DXM组与对照组相比,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：哮喘急性发作期Rock2和TGF-β1的表达显著增加;糖皮质激素干预可降低Rock2和TGF-β1的表达水平,从而减轻哮喘气道炎症。［中国当代儿科杂志,2010,12(11)：877-881］     

槐杞黄对哮喘大鼠模型的作用及其机制研究

目的 探索槐杞黄在哮喘大鼠模型中的作用及相关机制。方法 将40只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、哮喘模型组、布地奈德组和槐杞黄组（n=10）。通过卵白蛋白致敏并激发建立哮喘大鼠模型,布地奈德组在每次激发前以布地奈德2 mg雾化,槐杞黄组在每次激发前以槐杞黄4 g/kg溶于水中灌胃。苏木精-伊红染色观察各组大鼠肺组织病理变化;计数肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞比例;ELISA法检测各组BALF中细胞因子IL-3、IL-4、IL-5、IL-10、INF-γ及IgE浓度;流式细胞术检测外周血及脾脏中Th1/Th2细胞比例;RT-PCR法检测肺组织中T-bet、GATA-3 mRNA表达;应用Western bolt检测肺组织中T-bet、GATA-3蛋白表达。结果 与对照组相比,哮喘组大鼠气道炎症程度明显增加;BALF中嗜酸性粒细胞比例显著升高;IL-3、IL-4、IL-5、IgE浓度显著升高,而IL-10、INF-γ浓度明显下降;外周血及脾脏Th1细胞比例明显降低,Th2细胞比例明显升高;肺组织T-bet mRNA及其蛋白表达水平明显降低,GATA-3 mRNA及其蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）。槐杞黄及布地奈德均能明显改善哮喘大鼠气道炎症及上述指标水平（P < 0.05）,且效果相当;但与对照组比较,差异仍有统计学意义（P < 0.05）。结论 槐杞黄能改善哮喘大鼠气道炎症,缓解哮喘症状,其机制可能与调节相关细胞因子水平及Th1/Th2比例有关,这一作用可能经T-bet和GATA-3通路进行调控。     

RANTES在哮喘大鼠肺组织中的表达及维生素D的干预作用

目的：探讨维生素D对哮喘大鼠肺组织中调节正常T细胞表达和分泌的趋化因子（RANTES）表达的影响及维生素D参与控制哮喘气道炎症及与激素协同作用的作用机制。方法：40只雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、哮喘组、维生素D干预组、布地奈德干预组、布地奈德联合维生素D干预组,每组8只。采用苏木精-伊红染色观察肺组织病理改变;免疫组化方法测定肺组织RANTES蛋白的表达;ELISA检测肺泡灌洗液（BALF）中RANTES的含量;实时定量PCR测定RANTES mRNA的表达。结果：哮喘组大鼠气道炎症反应最明显,出现炎症细胞浸润、气道狭窄变形及平滑肌的断裂,各个干预组较哮喘组有不同程度的缓解,其中布地奈德干预组的缓解程度优于维生素干预D组;联合干预组的病理改变最轻,与正常对照组相近。哮喘组大鼠肺组织及BALF中RANTES蛋白的表达明显高于正常对照组（P＜0.05）,各干预组的表达较哮喘组有不同程度下降,除维生素D干预组与哮喘组BALF中RANTES蛋白的表达差异无统计学意义外,其余各干预组与哮喘组之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）,且联合干预组肺组织及BALF中RANTES蛋白表达量均低于单独使用布地奈德及维生素D组（P＜0.05）;哮喘组RANTES mRNA的表达较正常对照组显著升高（P＜0.05）,各干预组较哮喘组有不同程度的下降（P＜0.05）,但各干预组间差异无统计学意义,且联合干预组RANTES mRNA表达的下降幅度最大,与正常对照组比较差异无统计学意义。结论：哮喘大鼠BALF、肺组织中的RANTES蛋白及其mRNA的表达水平明显增高;维生素D干预可以降低其表达水平,提示维生素D可以通过调节RANTES的表达来减轻气道炎症反应;且维生素D可以协同布地奈德进一步降低RANTES蛋白及mRNA的表达水平。     

黄芪对哮喘大鼠肺组织信号转导子和转录激活子4表达的调控

目的观察黄芪对大鼠哮喘模型肺组织信号转导子和转录激活子4（STAT4）蛋白及其mRNA表达的影响。方法用卵清白蛋白建立哮喘模型,SD大鼠随机分成4组：正常对照组、哮喘组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组,每组10只鼠。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行嗜酸性粒细胞（EOS）计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4和IL-12浓度;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT4蛋白和STAT4 mRNA的表达。结果（1）哮喘组BALF中EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比[（EOS％）（35．8±7．3）×10^7／L,（8．20±1．75）％]均显著高于正常对照组[（1．5±1．0）×10^7／L,（0．70±0．48）％]（P〈0．01）,黄芪组上述指标[（14．9±2．4）×10^7／L,（4．70±0．82）％;（11．0±1．8）×10^7／L,（3．56±0．53）％]均低于哮喘组（P〈0．01）;（2）BALF中IL-4浓度（ng／L）哮喘组（25．70±7．36）显著高于对照组（8．55±2．97）（P〈0．01）,黄芪组[（13．87±3．61）,（11．67±3．05）]均显著低于哮喘组（P〈0．01）;BALF中IL-12浓度（ng／L）哮喘组（16．10±3．38）显著低于对照组（42．33±9．66）（P〈0．01）,黄芪组[（31．89±5．46）,（35．26±6．03）]均显著高于哮喘组（均为P〈0．01）;（3）免疫组化和原位杂交显示,哮喘组肺组织STAT4蛋白和STAT4 mRNA表达的强度[（0．096±0．012）,（0．098±0．011）]均低于对照组[（0．216±0．034）,（0．228±0．032）],黄芪组[（0．176±0．012）,（0．185±0．023）;（0．183±0．011）,（0．201±0．019）]较哮喘组均明显升高（均为P〈0．01）,其主要表达细胞是气道平滑肌细胞和肺细小动脉的血管平滑肌细胞及内皮细胞;（4）肺组织中STAT4及其mRNA表达分别与BALF中的IL-12浓度呈显著正相关（r=0．897、0．910,P〈0．01）;而与BALF中的IL-4浓度、EOS数量均分别呈显著负相关[（r=-0．693、-0．668,P〈0．01）,（r=-0．891、-0．897,P〈0．01）]。结论黄芪有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,上调气道平滑肌细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞STAT4蛋白及其mRNA表达,使IL-12合成增加可能为其作用机制。     

哮喘大鼠信息传递与转录活化因子6的表达和地塞米松对其表达的影响

目的研究哮喘大鼠支气管信息传递与转录活化因子6(STAT6)的表达和地塞米松(DXM)对其表达的影响。方法30只体重120～180g的二级幼年雄性SD大鼠,随机分为3组:正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松组(DXM组)。对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF和血清中白细胞介素4(IL4)浓度;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测支气管STAT6蛋白和STAT6mRNA的表达。结果(1)B组支气管STAT6蛋白和STAT6mRNA表达[(0.171±0.025),(0.180±0.013)]均高于A组[(0.082±0.022),(0.091±0.012)]和DXM组[(0.114±0.013),(0.114±0.010)](均为P<0.01),其主要表达细胞是上皮细胞;(2)支气管STAT6蛋白、STAT6mRNA分别与BALF中的IL4浓度呈显著正相关(r=0.664、0.785,P<0.01),STAT6蛋白、STAT6mRNA分别与BALF中的EOS绝对值呈显著正相关(r=0.869、0.884,P<0.01)。结论哮喘大鼠支气管有STAT6的较强表达,上皮细胞是其主要表达细胞;地塞米松可以下调STAT6的表达,可能为其抑制哮喘气道炎症形成的重要作用机制。     

Galectin-9及其受体Tim-3 在哮喘小鼠肺组织中的表达

目的：探讨半乳糖凝集素-9（Galectin-9）及其受体T 细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-3（Tim-3）在哮喘小鼠肺组织中的表达及 PPAR-γ激动剂罗格列酮（ROS）对其表达的影响。方法45 只清洁级雌性 BALB/c 小鼠随机分为对照组、哮喘组、ROS干预组。观察卵清蛋白激发及ROS干预治疗后哮喘小鼠肺组织的病理变化;应用 RT-PCR 方法检测肺组织 Galectin-9 和 Tim-3 mRNA 的表达;采用酶联免疫吸附测定法检测外周血 IL-4 及 IFN-γ的表达水平。结果哮喘组肺组织 Galectin-9 和 Tim-3 mRNA 表达显著高于对照组及 ROS 干预组（P<0.05）。哮喘组外周血 IL-4 的表达量较对照组及 ROS 组明显升高,而 IFN-γ表达量较对照组及 ROS 组明显降低（P<0.05）。Galectin-9 和 Tim-3 mRNA 表达量与 IL-4 呈正相关（r=0.792,0.794,P<0.05）,与 IFN-γ呈负相关（r=-0.692,-0.757,P<0.05）。结论 哮喘小鼠气道肺组织中 Galectin-9 和 Tim-3 mRNA 表达有明显升高,并且其改变与 Th1/Th2 细胞因子表达量具有相关性,ROS干预治疗后 Galectin-9 和 Tim-3 mRNA 表达下调。     

血管活性肠肽对哮喘小鼠气道炎症及Th17/Treg平衡的影响

目的探讨血管活性肠肽(VIP)对哮喘小鼠气道炎症的影响,以及对Th17细胞/调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法将30只BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组、VIP组,每组10只。利用卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作急性哮喘小鼠模型;对照组致敏和激发阶段均以生理盐水代替OVA;VIP组每次OVA激发前,先以VIP溶液(20μg/m L)雾化吸入30 min。留取各组小鼠支气管肺泡灌洗液、肺组织等标本。利用苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中Th17/Treg相关细胞因子水平;免疫组化及Real-time PCR检测肺组织中Th17细胞特异性转录因子RORγt及Treg特异性转录因子Foxp3表达情况。结果病理组织学结果显示VIP组小鼠肺组织气道炎症表现较哮喘组减轻。哮喘组小鼠BALF中IL-17浓度高于对照组(P0.01),VIP组IL-17浓度较哮喘组降低(P0.01),但仍高于对照组(P0.01)。哮喘组BALF中IL-10浓度低于对照组(P0.01),VIP组IL-10浓度较哮喘组升高(P0.01),但仍低于对照组(P0.01)。哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA及蛋白表达高于对照组(P0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达低于对照组(P0.01);VIP组肺组织RORγt mRNA及蛋白表达水平低于哮喘组(P0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达水平高于哮喘组(P0.05)。结论哮喘小鼠存在Th17/Treg免疫失衡,VIP可通过调控Th17/Treg免疫失衡而改善哮喘小鼠气道炎症。