槲皮素对酒精性肝损伤的防护作用及其与I型血红素氧化酶关系的研究

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用及其与I型血红素氧化酶(HO-1)的关系。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。分别在酒精染毒前、后及同时用50μmol/L槲皮素作用,作用结束后检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;槲皮素预作用同时加入HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ),作用结束后测上述指标。结果酒精暴露前2 h经50μmol/L槲皮素干预,肝细胞LDH、AST和MDA水平较酒精组明显降低,GSH、SOD和CAT水平较酒精组明显升高;槲皮素预干预同时加ZnPPⅨ可抑制HO-1活性,LDH、AST和MDA水平较未加有明显升高,而GSH、SOD和CAT水平则明显降低。结论槲皮素预干预对肝细胞酒精性氧化损伤具有防护作用,其保护效应可能通过HO-1介导。     

姜黄素对乙醇诱导的大鼠原代肝细胞损伤的防护作用

目的 研究姜黄素对乙醇诱导的大鼠原代肝细胞氧化损伤的防护作用.方法 以二步胶原酶技术分离的SD大鼠原代肝细胞经不同剂量(0～200mmol/L)和不同时间(0～24 h)暴露于乙醇,确定乙醇对肝细胞损伤的敏感的暴露时间与剂量.乙醇暴露前用姜黄素进行不同暴露剂量(0～50 μmol/L)和暴露时间(0～5 h)的预暴露.检测细胞培养上清液中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活力及肝细胞的氧化抗氧化指标[谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]来观察姜黄素对肝细胞免受乙醇氧化损伤的保护效应.结果 与对照组相比,乙醇暴露组随着乙醇暴露浓度的增加和时间的增长,肝细胞培养液上清液中的LDH、AST活力和MDA水平升高,GSH含量和SOD活力下降.以100mmol/L暴露8 h最为明显.与乙醇100mmol/L暴露8 h组相比,姜黄素预暴露组(0～50μmol/L)随姜黄素剂量的增加,LDH、AST活力下降(P＜0.05),姜黄素预暴露剂量为15和30 μmol/L时接近对照组水平;MDA生成明显减少(P＜0.05);但SOD、GSH水平明显升高(P＜0.05),姜黄素预暴露剂量为15和30 μmol/L时,SOD基本回复到对照组水平.15 μmol/L姜黄素预暴露1和5 h,各个指标与乙醇组相比,差异均有统计学意义,1 b干预效果优于5 h.结论 姜黄素可能通过降低GSH消耗,提高抗氧化酶活力,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞的酒精性氧化损伤,保护作用与姜黄素剂量及暴露时间有关.     

白藜芦醇诱导HO-1对酒精性肝细胞的保护作用

目的白藜芦醇(resveratrol)是非黄酮类的多酚化合物,具有多种有益的生物学效应。本研究目的观察白藜芦醇对酒精导致的人原代肝细胞损伤的保护作用及机制。方法经体外灌流、分离培养人原代肝细胞。测定白藜芦醇20μmol/L对酒精致肝细胞LDH释放率的影响。人原代肝细胞给予不同受试物(100 mmol/L酒精,20μmol/L白藜芦醇,25μmol/L Znpp9(锌原卟啉Ⅸ:zinc protoporphyrin-IX))24h,观察HO-1酶活性变化,孵育上清液AST,LDH释放水平,肝细胞内MDA,GSH含量变化。结果白藜芦醇可显著升高酒精致肝细胞LDH释放率的EC50(从700 mmol/L上升至1050 mmol/L);白藜芦醇可使肝细胞HO-1酶活性明显增加,并可显著抑制酒精导致的肝细胞AST,LDH释放,降低肝细胞内MDA水平,提高GSH含量。但是HO-1抑制剂Znpp9却明显降低了白藜芦醇对酒精导致的肝细胞损伤的保护作用。结论白藜芦醇对酒精导致的人肝细胞损伤具有保护作用,这种保护作用与其诱导的HO-1酶活性升高有关。     

槲皮素拮抗酒精性肝损伤中胆红素的介导效应

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧合酶(heme Oxygenase-1,HO-1)及其代谢产物胆红素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应。方法二步胶原酶灌注技术分离培养SD大鼠原代肝细胞,在孵以200 mmol乙醇建立酒精性肝细胞氧化损伤模型的同时,加入槲皮素(100μmol)、hemin(20μmol)等及不同剂量(2-100μmol)的胆红素干预24 h后,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平及培养基中总胆红素水平。结果槲皮素明显抑制了乙醇孵育后细胞MDA和ROS水平的升高,有效维持了细胞内GSH水平和SOD活力;加入外源性胆红素也显示出相同的保护效应,且具有一定的剂量依赖性;锌原卟啉IX(ZnPP-IX)则明显抑制了上述槲皮素的保护效应。结论槲皮素诱导HO-1对酒精所致大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用,其机制与HO-1的代谢产物之一胆红素有关。     

银杏黄酮对雄性小鼠酒精性氧化损伤的保护

目的　研究银杏黄酮对小鼠肝脏慢性酒精性氧化损伤的保护效应。方法　雄性小鼠给予银杏黄酮 96mg/ (kg·bw) ,再给予乙醇 3 2g/ (kg·bw) ,同时设正常对照组和酒精对照组〔乙醇 3 2 g/ (kg·bw)〕 ,连续灌胃 75d后测定血清谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶 (AST)活性及血清与肝脏谷胱甘肽 (GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)、超氧化物岐化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)的活性及丙二醛 (MDA)的含量。结果　小鼠摄入酒精 75d后 ,血清ALT、AST水平与正常对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 0 1) ,肝脏及血清GSH -Px、SOD、CAT活性与GSH水平明显下降 ,MDA水平明显上升 (P <0 0 1) ;经银杏黄酮干预后 ,与酒精对照组相比 ,血清ALT、AST水平下降 ,肝脏与血清GSH-Px、SOD、CAT活性与GSH水平升高 ,MDA水平下降。结论　银杏黄酮对小鼠肝脏慢性酒精性氧化损伤具有一定的保护作用。     

槲皮素通过促进Nrf2转位拮抗人肝细胞酒精性氧化损伤

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧化酶(HO-1)对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应及相关信号通路。方法乙醇(100 mmol/L)孵育的人原代肝细胞经槲皮素(100μmol/L)处理24h后,测定细胞HO-1活性、Nrf2转位表达及细胞相应的氧化损伤程度;在此基础上,联合应用HO-1及各(MAPK)通路抑制剂,观察上述指标的变化。结果槲皮素处理使HO-1进一步升高,并明显减轻乙醇孵育所导致的细胞GSH耗竭、MDA升高及胞内门冬氨酸转氨酶(AST)与乳酸脱氢酶(LDH)的释放;HO-1诱导剂血红素也具有类似的效应,而HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ及p38与细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)抑制剂(SB203580与PD98059)则明显抑制了Nrf2的转位活化及槲皮素的保护效应。结论槲皮素通过诱导HO-1保护肝细胞免受酒精性氧化损伤,其信号通路与p38及ERK活化促使Nrf2转位入核启动HO-1表达有关。     

急性酒精暴露对人原代肝细胞HO-1 mRNA表达的影响

目的 :　研究急性酒精暴露对人原代肝细胞 HO- 1 m RNA表达的影响。方法 :　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察酒精对人原代肝细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放及 GSH含量的变化 ,用 RT- PCR方法检测酒精对人原代肝细胞 HO- 1 m RNA的表达。结果 :　急性酒精暴露导致人原代肝细胞上清液中释放的 AST增加 ,并呈明显的剂量效应和时间效应关系 ;此外 ,在 1 0 0 mmol/L乙醇 2 4 h暴露下 ,肝细胞中的 GSH明显降低 ,HO- 1 m RNA表达开始明显增加 ,3～ 9h之间达到最高峰 ,随后开始降低。结论 :　在 2 5～ 1 0 0 mmol/L范围内 ,急性酒精暴露导致人原代肝细胞明显的氧化损伤 ,且影响 HO- 1 m RNA表达。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞HO-1蛋白表达及活性的影响

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞中I型血红素氧化酶(HO-1)蛋白表达及酶活性的影响。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。用不同剂量(25、50、100、200 mol/L)槲皮素作用大鼠原代肝细胞12 h,或用50 mol/L槲皮素作用肝细胞不同时间(2～12 h)后,提取肝细胞微粒体,检测HO-1酶活性变化,并用WesternBlot方法检测HO-1蛋白表达水平的变化。结果大鼠原代肝细胞经50～200 mol/L槲皮素处理12 h,或用50 mol/L槲皮素处理4～12 h后,HO-1蛋白表达水平和酶活性与对照组比较明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够诱导大鼠原代肝细胞的HO-1蛋白表达,提高肝细胞内HO-1的酶活性。     

氟化钠对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用

目的　探讨氟化钠 (NaF)对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用。方法　采用原代培养的方法 ,观察氟化钠对原代培养大鼠肝细胞存活率和肝细胞培养液中谷草转氨酶 (AST)和谷丙转氨酶 (ALT)活性的影响。结果　氟化钠可使原代培养大鼠肝细胞存活率下降 ,且呈现明显的剂量 -效应关系 ,其IC50 为 3 5 8mmol/L ;肝细胞培养液中ALT和AST的活性随染毒剂量的增加而逐渐升高 ,2和 4mmol/L染氟组肝细胞培养液中ALT和AST的活性与对照组相比显著升高 (P <0 0 5 )。结论　氟化钠对原代培养大鼠肝细胞有明显的毒作用。     

铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响

为观察铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响 ,对原代大鼠肾小管上皮细胞提取、纯化、鉴定、培养后 ,采用 3× 3析因设计方法进行染毒实验 ,A组 :醋酸铅 0 0 2mmol L ;B组 :醋酸铅 0 1mmol L ;C组 :氯化镉 0 0 0 1mmol L ;D组 :氯化镉 0 0 0 4mmol L ;E组 :醋酸铅 0 0 2mmol L +氯化镉 0 0 0 1mmol L ;F组 :醋酸铅 0 0 2mmol L +氯化镉 0 0 0 4mmol L ;G组 :醋酸铅 0 1mmol L +氯化镉 0 0 0 1mmol L ;H组 :醋酸铅0 1mmol L +氯化镉 0 0 0 4mmol L。染毒时间为 6小时。经超声波粉碎细胞后 ,测定细胞内谷胱甘肽 (GSH)和丙二醛 (MDA)的含量 ,以及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和超氧化物歧化酶 (SOD)的活性。与对照组比较 ,联合染毒组GSH、GSH Px、SOD水平显著降低 ,MDA水平显著升高 ,析因分析表明 ,铅镉联合作用在对大鼠肾小管上皮细胞GSH、SOD、MDA改变方面有交互作用 (P <0 0 5 ) ,即铅镉联合作用呈现增毒作用 ;在对GSH Px改变方面未见交互作用     

不同形态砷化合物对非致瘤性人源性肝细胞的毒性作用

目的探讨不同形态砷化合物对非致瘤性人源性肝(QSG7701)细胞的毒性及氧化应激作用。方法将处于对数生长期的QSG7701细胞分别暴露于亚砷酸钠(砷浓度为1、5、25、100μmol/L)、砷酸钠(砷浓度为10、25、100、500μmol/L)及MMA和DMA(砷浓度均为100、500、1 000、2 000μmol/L)培养24 h,并设对照(含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活性;检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、谷草转氨酶(AST)活力、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果一定浓度的As~(Ⅲ)(≥1μmol/L)、As~Ⅴ(≥10μmol/L)、MMA(≥100μmol/L)和DMA(≥2 000μmol/L)均能显著降低QSG7701细胞的存活率,差异有统计学意义(P0.05);且随着As~(Ⅲ)、As~Ⅴ及MMA和DMA染毒浓度的升高,QSG7701细胞的存活率呈逐渐降低的趋势。经计算,QSG7701细胞暴露于As~(Ⅲ)、As~Ⅴ、MMA和DMA 24 h的IC_(50)分别为170.89、863.73、2 235.67、4 045.31μmol/L,对QSG7701细胞生长的抑制作用依次为As~(Ⅲ)As~ⅤMMADMA。在当As~(Ⅲ)浓度为5~100μmol/L、As~Ⅴ浓度为10~500μmol/L及MMA中的砷浓度为1 000、2 000μmol/L和DMA中的砷浓度为2 000μmol/L时,QSG7701细胞的LDH释放率均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);另外,当As~(Ⅲ)浓度为1~100μmol/L、As~Ⅴ浓度为10~500μmol/L及MMA和DMA中的砷浓度为100~2 000μmol/L时,QSG7701细胞培养液中的AST活力均高于对照组;且随着As~(Ⅲ)、As~Ⅴ及MMA和DMA染毒浓度的升高,QSG7701细胞的LDH释放率和细胞培养液中的AST活力呈上升的趋势。与对照组比较,当As~(Ⅲ)浓度为5~100μmol/L、As~Ⅴ浓度为10~500μmol/L时,QSG7701细胞中的MDA含量均较高,而T-SOD活力均较低;与对照组比较,当MMA和DMA中的砷浓度均为500~2 000μmol/L时,QSG7701细胞中的MDA含量均较高;而当MMA中的砷浓度为100~2 000μmol/L和DMA中的砷浓度为100、500μmol/L时,QSG7701细胞中的T-SOD活力均较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论在本实验条件下,4种砷化合物均可不同程度地损伤肝细胞膜,破坏肝细胞的氧化平衡状态,产生氧化应激并导致脂质过氧化,对人肝细胞QSG7701的毒性作用依次为As~(Ⅲ)As~ⅤMMADMA。     

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞损伤的拮抗作用

目的:研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝细胞株L-02损伤的拮抗作用。方法:观察5、10、25mg/L的LSPC与200mmol/L乙醇共同作用于肝细胞L-0224h后,对细胞的生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量、凋亡率以及DNA损伤等指标的影响。结果:与乙醇组相比,5mg/L和10mg/LLSPC使细胞的生存率由73.14%上升到84.79%和90.52%,提高了细胞SOD、CAT、GSH的含量(P<0.01),降低MDA的生成;有效降低细胞的凋亡率,降低细胞p53和生长抑制DNA损伤基因(GADD)34、45β、153的表达,但高剂量组(25mg/L)对乙醇的拮抗作用不明显。结论:适量浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的损伤有拮抗作用。     

Dual effect of ethanol on cell death in primary culture of human and rat hepatocytes

AIMS: In-vivo and in-vitro studies have shown that ethanol induces hepatocyte damage. The aim of the present study was to evaluate the effect of a broad range of ethanol concentrations on apoptosis and necrosis in primary culture of human and rat hepatocytes. METHODS: Human and rat hepatocytes were isolated from human hepatectomies and male Wistar rats (200-250 g) using the classical collagenase perfusion method. After stabilization of cell culture, ethanol (0-10 mmol/l) was administered and the parameters were measured 24 h after ethanol addition. Apoptosis was studied by DNA fragmentation, iodide propidium-DNA staining, caspase-3 activity and annexin V binding in hepatocytes. Necrosis was evaluated by lactate dehydrogenase (LDH) release. Malondialdehyde (MDA) and GSH/GSSG were used as parameters of oxidative stress. RESULTS: Ethanol enhanced dose-dependently all the parameters associated with apoptosis in human and rat hepatocytes. Low or high ethanol concentrations induced an opposite action against cell necrosis in cultured hepatocytes. Low concentrations of ethanol (1-2 mmol/l) reduced LDH release from human and rat hepatocytes. However, the highest ethanol concentration (10 mmol/l) induced a sharp increase in cell necrosis. The effect of ethanol on cell necrosis was related to lipid peroxidation in hepatocytes. CONCLUSIONS: Ethanol differentially regulates apoptosis or necrosis in cultured hepatocytes. Although ethanol exerted a dose-dependent induction of apoptosis, low ethanol concentrations were able to reduce basal lipid peroxidation and necrosis in hepatocytes. The highest ethanol concentration (10 mmol/l) induced apoptosis and necrosis in human and rat cultured hepatocytes.     

银杏叶提取物预防大鼠酒精性肝损伤的机制研究

目的:观察银杏叶提取物(EGB)对大鼠酒精性肝损伤的预防作用,并研究其可能的分子机制。方法:无水乙醇灌胃13w,EGB采用预防性给药的方法,检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性;肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量;采用RT-PCR检测肝组织中血红素氧化酶-1(HO-1)mRNA表达水平。结果:与酒精组相比,EGB组ALT、AST活性均显著降低(P<0.05),MDA含量非常显著降低(P<0.01);SOD、GSH-Px活性和GSH含量较酒精组均显著升高(P<0.05);此外,EGB可以诱导HO-1mRNA高表达。结论:EGB通过减少酒精所致GSH的耗竭,增加抗氧化物质活性或含量,抑制脂质过氧化反应从而预防酒精性肝损伤,其机制可能与诱导HO-1表达有关。