丹参酮ⅡA抗心肌纤维化作用机制实验研究

目的：研究丹参酮ⅡA（TSN）对大鼠心脏成纤维细胞（CF）内转化生长因子β1（TGFβ1）信号转导的影响，探讨TSN抗心肌纤维化的作用机制。方法：采用胰酶消化法和差速贴壁法获取新生SD大鼠CF，应用5ng／ml TG即1刺激及不同浓度（10^-6、10^-5、10^-4mol／L）TSN预处理。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测纤维连接蛋白（FN）mRNA表达，western blot检测FN和Smads蛋白表达。结果：TGF^-在一定范围内以时间依赖方式诱导FN及Smads表达，刺激终末FNmRNA和蛋白表达量分别增加1．3倍和1．8倍（P〈0．01，P〈0．01），磷酸化Smad2／3（p-Smad2／3）蛋白表达量增加3．9倍（P〈0．01）。TSN预处理可下调FN和p-Smad2／3表达，而且效应呈剂量依赖性。10～mol／L TSN预处理对FN和p-Smad2／3表达几无影响（P〉O．05，P〉0．05）；1015和1014mol／LTSN预处理后，FNmRNA表达量分别下降32．7％、42．9％（P〈0．05，P〈0．01），FN蛋白表达量分别下降45．8％、57．1％（P〈0．01，P〈0．01），p-Smad2／3蛋白表达量分别下降40．5％、55．4％（P〈0．05，P〈0．01）。结论：TSN抗心肌纤维化作用可能与其抑制TGFβ1诱导的Smad2／3磷酸化，阻断CF内TGFβ1／Smads信号通路有关。     

褐藻多糖硫酸酯对 TGF-β1诱导 HK-2间质转分化过程中 Smad2/3、Smad7表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯对转化生长因子β1（TGF—β1）诱导肾小管上皮细胞（HK-2）间质转分化过程中细胞信号转导分子（Smad）2／3和Smad7表达的影响,并探讨其机制。方法HK-2细胞复苏后用RPMll640培养基加10％胎牛血清在37oC、5％CO：培养箱中培养。待细胞贴壁后分为3组,对照组加入等量RPMI1640细胞培养基,诱导组予5μg/L TGF-β1,药物组予5μg／LTGF—β1＋50μg／mL褐藻多糖硫酸酯。采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学法检测Smad2／3、Smad7表达,图像分析技术分析Smad2／3、Smad7表达阳性的平均光密度值。结果培养第3天,对照组HK-2细胞呈铺路石样上皮细胞形态特点;诱导组细胞呈长梭形,类似纤维细胞;药物组细胞以上皮细胞为主,少数细胞呈梭形。与对照组比较,诱导组细胞Smad2／3表达增强,Smad7表达减弱;与诱导组比较,药物组细胞Smad2／3表达减弱,Smad7表达增强。与对照组比较,诱导组细胞Smad2／3阳性细胞平均光密度值显著升高,Smad7阳性细胞平均光密度值显著下降;与诱导组相比较,药物组细胞Smad2／3阳性细胞平均光密度值显著下降,Smad7阳性细胞平均光密度值显著升高（P均〈0．05）。结论褐藻多糖硫酸酯可能通过影响TGF—β1信号转导通路中Smad2／3和Smad7的表达发挥抑制HK-2间质转分化作用。     

蓝莓对大鼠肝纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的观察蓝莓对大鼠肝纤维化的预防作用及对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子（transforminggrowthfactor,TGF）-β1／Smads信号通路的影响。方法45只健康sD大鼠被随机分为正常对照组、模型组、蓝莓预防组、丹芍化纤胶囊预防组、蓝莓＋丹芍化纤胶囊预防组。每组9只。用四氯化碳（cch）制作大鼠肝纤维化模型,共8周。测定肝脏指数及血清ALT、AST并进行肝组织病理学检查,采用实时荧光定量RT—PCR检测TGF-β1、Smad4mRNA的表达,免疫组织化学法检测肝脏组织TGF-β1、Smad4及Smad7蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1及Smad4的表达增高（P〈0．05）,而Smad7的表达降低（P〈0．05）。与模型组比较,各预防组血清ALT及AST均明显降低（P〈0．05）,TGF-β1及Smad4的表达均降低（P〈0．05）,而Smad7的表达均增高（P〈0．05）。结论蓝莓对GEL所致大鼠肝纤维化有一定的预防保护作用,其机制可能与蓝莓影响TGF-β1／Smads信号转导通路,从而下调TGF-β1及smad4的表达,同时上调Smad7的表达有关。     

结缔组织生长因子诱导大鼠前体细胞(WB-F344)向肝脏实质细胞分化

目的观察结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）对大鼠肝脏前体细胞（WB—F344）分化的影响,进一步观察细胞外基质的变化。方法采用MTF法检测CTGF对WB—F344细胞活性的影响。采用Wester Rblotting方法分别检测CTGF诱导WB—F344细胞后胆管细胞标志物CK-19及肝细胞标记物AFP、ALB的变化。采用Western blotting和实时荧光定量PCR检测细胞外基质相关指标金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinase．TIMP）-1在mRNA水平和蛋白水平的变化。结果作用于WB—F344细胞24h后,CTGF组的细胞活性大于转化生长因子-β组（P〈0．05）。5ng／ml CTGF作用于WB—F344细胞24h后,可以明显改变WB—F344细胞表面标记物在蛋白水平的表达。幼稚肝细胞标记物AFP的表达是对照组的0．38倍（P=10．002）,成熟肝细胞标记物ALB和胆管细胞标记物CK-19的表达均增加,分别为对照组的3．5倍和1．58倍（P分别为0．000、0．002）。同时,5ng／ml CTGF可以上调WB—F344细胞TIMP-1在mRNA水平和蛋白水平的表达,分别为对照组的2．47倍和3．36倍（P=0．000、0．002）。结论5ng／ml CTGF有诱导肝脏前体细胞向肝脏实质细胞分化的趋势,并伴有WB—F344细胞外基质相关指标TIMP-1表达的上调。     

基因芯片研究甘草酸对大鼠肝星状细胞转化生长因子-β信号通路的影响

目的应用基因芯片技术探讨甘草酸对大鼠肝星状细胞（HSC）转化生长因子（TGF）-β信号转导通路相关基因表达的作用。方法体外分离、培养大鼠HSC，分为对照组、TGF-β1组（5ng／ml）、TGF-β1（5ng／ml）＋甘草酸（100μmol／L）组，10h后分别收集细胞抽提总RNA。应用针对于TGF-β/BMP信号转导通路的GEArray^TM Q基因芯片技术，筛选出甘草酸作用后HSC中TGF-β信号通路表达发生明显改变的相关基因。结果经TGF-β1作用后上调，再经甘草酸作用后下调的基因有16项，占16．7％（如Smad蛋白2，Smad蛋白3，Smad蛋白7，a1Ⅲ型前胶原，a2 Ⅰ型前胶原，纤溶酶原激活物抑制剂1）；经TGF-β1作用后下调，再经甘草酸作用后上调的基因有5项，占5．2％（如骨成型蛋白7，胰岛素生长因子结合蛋白3等）；经TGF-β1作用后上调，再经甘草酸作用后上调更显著的基因有2项，占2．1％（转化生长因子2型受体，转化生长因子受体3）。并用RT-PCR法验证了部分基因（Smad蛋白2，Smad蛋白3，Smad蛋白7）mRNA的表达与基因芯片中变化趋势的一致性。结论甘草酸可能通过干预大鼠HSC中TGF-β信号通路，减少胶原合成，促进细胞外基质降解而发挥抗纤维化的分子机制。     

转化生长因子-β1、Smad3、Smad4和Smad7在结直肠癌发生中的作用

结直肠腺瘤-腺癌序列是目前公认的结直肠癌发生学说，但关于结直肠腺瘤，特别是高危型结直肠腺瘤中转化生长因子（TGF）-β1通路蛋白表达的临床研究较少。目的：探讨TGF—β1、Smad3、Smad4和Smad7在结直肠癌发生中的作用。方法：选取2000年8月-2006年12月六安市人民医院结直肠息肉标本110例（包括腺瘤性和非腺瘤性息肉）、结直肠癌40例和正常结直肠组织20例，以免疫组化染色检测TGF—β1、Smad3、Smad4和Smad7在各组中的表达．并分析高危型腺瘤中TGF-IM、Smad3、Smad4和Smad7表达与临床病理特征的关系。结果：TGF-IM、Smad3、Smad4、Smad7在息肉组、结直肠癌组和对照组中的表达有显著差异（P〈0．05），其表达与高危型腺瘤患者的临床病理特征均不相关。高危型腺瘤和DukesA期结直肠癌中TGF-IM、Smad3、Smad7的表达有显著差异（P〈0．05），而Smad4表达无显著差异。结论：TGF—β1通路可能参与了结直肠癌的发生过程，TGF—β1、Smad3和Smad7可能在结直肠腺瘤的癌变早期起作用。     

全反式维甲酸对转化生长因子诱导的肾小球系膜细胞环氧化酶2表达的影响

目的:研究仝反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)刺激系膜细胞环氧化酶2(COX-2)及Smad3,Smad7蛋白表达的影响,探讨ATRA在TGF-β/Smad信号通路中对系膜细胞表达COX-2的影响作用. 方法:取培养第4代的大鼠肾小球系膜细胞分组:(1)对照组;(2)TGF-β刺激组(5、10 ng/ml);(3)TGF-β+NS398[COX-2抑制剂组(10 μmol/L NS398+10 ng/m 1TGF-β)];(4)TGF-β+Staurosporine(Smad抑制剂)组(5 nmol/ml Staurosporine+10 ng/ml TGF-β);(5)药物组:ATRA(10~(-3)、10~(-6)、10~(-9)moL/L)组,在不同的作用时间(4h,12h,24h),Western Blot印迹法测定各组COX-2、Smad3、Smad7蛋白的表达变化. 结果:(1)在外源性TGF-β刺激下,COX-2、Smad3、Smad7蛋白的表达明显增加,各组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)加入COX-2抑制剂NS-398和Smad抑制剂Staurosporine后,COX-2、Smad3、Smad7表达均减少,与TGF-β组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)ATRA各浓度组和TGF-β组比较COX-2、Smad3、Smad 7蛋白的表达明显减少(P<0.05),呈时间和浓度依赖性.(4)COX-2蛋白的表达与Smad3、Smad7蛋白的表达均呈显著正相关(r=0.978,r=0.942,P<0.05). 结论:ATRA可能通过TGF-β/Smad信号通路抑制系膜细胞COX-2的表达,显示其具有良好的抗纤维化和抗细胞增殖作用.     

罗格列酮阻止非酒精性脂肪性肝纤维化进展作用机制的研究

目的观察PPARγ靶向性激动剂罗格列酮对高脂、蛋氨酸-胆碱缺乏（MCD）饮食诱导的非酒精性脂肪性肝纤维化模型肝组织中转化生长因子（TGFβ1）及其下游效应因子结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，以明确其阻止脂肪性肝纤维化进展的作用及作用机制。方法采用MCD饮食8周建立C57BL6／J小鼠非酒精性脂肪性肝纤维化模型，以蛋氨酸-胆碱充足饮食设立对照组，干预组小鼠采用MCD饮食加罗格列酮（每日50mg／kg）喂养。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）采用全自动生化仪测定。HE染色、Masson染色观察肝脂肪变、炎症及纤维化程度。TGFβ1、CTGFmRNA及蛋白表达分别应用RT—PCR、免疫组织化学染色方法检测。结果模型组肝组织出现重度肝细胞脂肪变，伴有点、灶状肝细胞坏死及炎细胞浸润、汇管区纤维组织增生及窦周纤维化，ALT水平和TGFβ1、CTGFmRNA及蛋白表达均较对照组明显升高（P〈0．05和P值均〈0．01），罗格列酮干预组肝组织学改变较模型组明显减轻，ALT水平及TGFβ1、CTGF表达明显下降（P值均〈0．05）。结论在MCD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝纤维化模型中，罗格列酮可通过靶向激活PPARγ下调TGFβ1及其下游效应因子CTGF表达，从而缓解或阻止疾病的进展。     

沉默结缔组织生长因子对鼠转化生长因子β/Smads信号的影响

目的 研究小干扰RNA(siRNA)沉默结缔组织生长因子(CTGF)对大鼠转化生长因子(TGF)β/Smads信号通路的影响.方法 将化学合成CTGF siRNA转染肝星状细胞(HSC)T6和经门静脉注入CCl4诱导6周的肝纤维化大鼠,设空白及随机siRNA对照,抽提HSC T6及大鼠肝组织总RNA和蛋白质,应用Western blot和RT-PCR检测HSC T6及肝组织CTGF及TGF β1,Smad2、3、7蛋白质和基因表达. 结果与空白对照组相比,siRNA能显著下调HSC T6 CTGF蛋白表达,以48 h最明显,CTGF蛋白表达下调94%±4%(t=46.196,P<0.01),而TGF β1、Smad2,3,7 mRNA表达差异无统计学意义;模型组及对照siRNA组,CCl4诱导的大鼠肝组织CTGF和TGF β1蛋白表达明显上调,与模型组相比,CTGF siRNA组大鼠肝组织CTGF及TGF β1蛋白表达分别下调95%±2%(F=21.234,P<0.01)和74%±8%(F=13.464,P<0.05),但Smad2和Smad7蛋白表达无明显改变. 结论沉默CTGF基因表达对大鼠肝TGF β/Smads信号具有阻抑作用.     

外源Smad7基因对原代肝星状细胞活性和基因表达调控的影响

目的研究外源Smad7基因对原代肝星状细胞（HSC）活性和基因表达调控的影响。方法采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC，并予转化生长因子口。（TGFβ1）刺激，同时分别以重组腺病毒AdSmad7和对照病毒AdGFP感染原代HSC，RT—PCR法检测TGFβ1、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA在HSC中的表达，免疫细胞化学法检测HSC中a一平滑肌肌动蛋白（a—SMA）和Smad7表达。结果RT—PCR显示，与TGFβ1对照组比较，AdSmad7组Smad7 mRNA表达显著上调（P〈0．05），但TGFβ1、和Smad3 mRNA表达差异无统计学意义。免疫细胞化学染色显示，与其他各组比较，AdSmad7组HSC胞质中Smad7表达最高，α—SMA表达则明显降低（P〈0．01）。结论重组复制缺陷型腺病毒AdSmad7可在HSC中高效表达；外源Smad7基因可阻断TGFβ1，对HSC的活化作用，但对Smad3和TGFβ1，mRNA表达无明显影响。     

转化生长因子-β1对大鼠脑膜间皮细胞结缔组织因子表达的影响

目的 观察转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠软脑膜间皮细胞（RLMCs）结缔组织生长因子（ CTCF）表达的影响.方法 体外培养RLMCs,并将其分为4组：（1）0组（正常对照组）：用无血清培养基（FSM）培养细胞;（2）1组：用含TGF-β11 ng/ml培养细胞;（3）2组：用含TGF-β1 2 ng/ml培养细胞;（4）3组：用含TGF-β14 ng/ml培养细胞;各组分别在TCF-β1刺激6、12及24 b后,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定CTCF mRNA水平;蛋白免疫印迹（Westem blot）测定CTCF蛋白表达.数据以平均值±标准差（-χ±s）表示,各个浓度点组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）,两两比较采用最小显著法（LSD）检验,以P〈0.05有统计学意义.结果 在6、12及24 h分别以TCF-β1 1ng/mL、2 ng/mL、4 ng/mL处理,CTGF mRNA表达水平与对照组比较,差异有显著性（F6h=46.549、F12h= 287.098、F24h=109.202,P均〈0.001）,呈剂量依赖性,以TGF-β1处理12 h组CTGF mRNA表达差异明显.western blotting：正常对照组RLMCs细胞和不同浓度的TGF-β1刺激后均表达CTGF蛋白,在TGF-β1刺激6、12及24 h后,各组均随着浓度的增加而增加,差异有显著性（F6h= 52.988、F12h= 95.331、F24h=157.107,P均〈0.001）,呈剂量依赖性,以TGF-β1处理6h组CTGF蛋白表达差异明显.结论 TGF-β1能诱导RLMCs中CTGF通路激活.TGF-β1刺激RLMCs中CTGF mRNA和蛋白的表达,而且随浓度增加而显著.CTGF可能作为神经系统疾病中抑制脑膜纤维化的靶点而进一步研究.     

心脏收缩力调节对转化生长因子β1/结缔组织生长因子信号通路的影响

目的观察心脏收缩力调节(CCM)对心力衰竭(心衰)兔转化生长因子β1(TGFβ1)/Smad/结缔组织生长因子(CTGF)信号通路影响。方法 30只新西兰大白兔经升主动脉根部套扎建立心衰模型,分为假手术组、心衰组、CCM组(心衰模型成功后,给予4周CCM治疗),每组10只。采用天狼猩红染色法分析心肌组织Ⅰ型及Ⅲ型胶原纤维;比色法测定心肌组织羟脯氨酸含量;蛋白印迹法检测心肌组织TGFβ1、Smad3、Smad7、CTGF蛋白表达水平。结果与假手术组比较,心衰组Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维及羟脯氨酸含量增加(P0.05),CCM组较心衰组减轻心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维及羟脯氨酸含量[(13.19±5.96)%vs(16.31±7.01)%,(7.39±2.13)%vs(11.57±5.02)%,(0.69±0.05)μg/mg vs(0.98±0.04)μg/mg,P0.05]。与假手术组比较,心衰组TGFβ1、Smad3、CTGF蛋白表达升高,Smad7蛋白表达下降(P0.05)。与心衰组比较,CCM组TGFβ1、Smad3、CTGF蛋白表达下调(0.49±0.03 vs 0.67±0.04,0.43±0.06 vs 0.59±0.06,0.45±0.08 vs 0.75±0.09,P0.05),Smad7蛋白表达上调(0.43±0.08 vs 0.26±0.04,P0.05)。结论 CCM可下调TGFβ1、Smad3、CTGF蛋白表达,上调Smad7蛋白表达,改善心衰兔心肌纤维化。     

日本血吸虫病小鼠肝纤维化肝脏CTGF、TGF-β1的表达及意义

目的 研究结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）与转化生长因子β1（transforming growth factor-betal，TGF-β1）在日本血吸虫病小鼠肝纤维化肝脏中的表达状况及意义。方法 用昆明小鼠感染尾蚴建立日本血吸虫病小鼠肝纤维化模型，随机分为模型组和对照组，感染后6、10、14、18周杀鼠；HE染色观察肝脏病理变化，免疫组化法检测肝内CTGF、TGF-β1蛋白的表达水平。结果 模型组小鼠10周时形成血吸虫病肝纤维化，此时肝内CTGF表达达高峰。且10、14、18周时的表达量均显著高于同期对照组（P〈0．01）；模型组TGF-β1蛋白定量和CT—GF有相同的变化趋势，但18周时与同期对照组比较差异无显著性（P〉0．05）；模型组CTGF和TGF-β1蛋白表达水平具有直线相关性。结论 CTGF与TGF-β1的表达与日木血吸虫病小鼠肝纤维化形成有密切关系，TGF-β1的致纤维化作用可能部分通过CTGF的生物学作用介导，阻断CTGF的传导通路可能是血吸虫病肝纤维化治疗的有效靶点。     

脂质与糖尿病大鼠肾小球TGF-β/Smad信号通路的关系

目的 探讨脂质对糖尿病大鼠肾小球TGF-β／Smad信号通路的影响。方法 糖尿病大鼠随机分成普通饲料组，高脂饲料组、高脂饲料加辛伐他汀干预组（辛伐他汀组）和正常对照组。16周后，采用RT-PCR、免疫组化和Western印迹法检测大鼠肾小球转化生长因子β1（TGF-β1）、转化生长因子Ⅱ型受体（TβRⅡ）、Ⅵ型胶原（ColⅥ）mRNA和蛋白和磷酸化Smad2（p—Smad2）表达的变化。结果 与正常对照组比较，普通饲料组、高脂饲料组、辛伐他汀组肾小球TGF-β1、TβRⅡ、ColⅥmRNA和蛋白及p-Smad2表达均上调，高脂饲料组上调最为明显；与高脂饲料组比较，辛伐他汀组TGF-β1、TβRⅡ、ColⅥ和p-Smad2表达明显下调。结论 脂质通过激活TGF-β／Smad信号通路，加剧糖尿病肾脏病变；辛伐他汀抑制TGF-β／Smad通路的激活，延缓糖尿病肾病的进展。     

沙美特罗／丙酸氟替卡松对支气管哮喘患者转化生长因子β1／Smad通路的影响

目的观察沙美特罗／N酸氟替卡松对中重度持续支气管哮喘（简称哮喘）患者转化生长因子p1（transforminggrowthfactor—β1,TGF-β1）／Smad通路的影响。方法中重度持续哮喘患者30例,对照组20例。哮喘组给予规律吸入沙美特罗／N酸氟替卡松50／250／xg,2次／d,持续6个月。酶联免疫吸附试验（ELISA法）定量测血清TGF-β1、Smad2表达,宝石能谱高分辨率CT（HRCT）扫描测量气道壁厚度／气道外径（T／D）、气道壁面积占气道总面积百分比（WA％）评估气道重塑程度。结果哮喘组（治疗前）血清TGF-β1（301．5±27．3）ng／L、Smad2（1182．1±50．6）ng／L与对照组TGF—β1（55．2±12．8）ng／L、Smad2（796．4±56．2）ng／L比较差异有统计学意义（t=8．52,t=5．90,P值均〈0.05）,哮喘组（治疗后）TGF-β1,（96．1±25．6）ng／L、Smad2（853．4±49．7）ng／L与哮喘组（治疗前）比较差异具有统计学意义（t=7．21,t=3．13,P值均〈O．05）,哮喘组（治疗后）血清Smad2与对照组比较差异无统计学意义（t=0．24,P〉o．05）;哮喘组（治疗前）T／D（23．66士4．06）％较对照组（19．79士3．37）％增加,差异有统计学意义（t=3．45,P〈O．05）,哮喘组（治疗前）wA％（69．24±6．03）‰值与对照组（51．67±4．55）％比较差异有统计学意义（t=3．77,P〈O．05）。规律吸入沙美特罗／丙酸氟替卡松6个月后,哮喘组（治疗后）T／D（20,43±3．00）％、WA％（58．40±3．85）％下降,与哮喘组（冶疗前）比较差异有统计学意义（t=2．96,t=3．05．P值均〈0．05）,哮喘组（治疗后）T／D与对照组比较差异无统计学意义（t=0．95,P〉0．05）,气道重塑减轻。结论哮喘患者气道重塑伴随血TGF-β1、Smad2蛋白的表达增加,规律吸入沙美特罗j丙酸氟替卡松可以通过减少血清TGF-β1、Smad2蛋白的表达,从而减轻哮喘患者气道重塑。调节TGF-β1／Smad通路可能是治疗哮喘气道重塑的新策略。     

人重组骨形成蛋白-7对高糖诱导的肾系膜细胞转化生长因子-β1及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达及细胞外基质(ECM)成分Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为四组:正常对照组(DMEM培养基含1 000 mg/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖)、rhBMP-7低剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+50 nmol/L rhBMP-7)、rhBMP-7高剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+100 nmol/L rhBMP-7).RT-PCR技术检测TGF-β1和CTGF基因表达水平,ELISA技术检测上清液中TGFβ1、ColⅣ、FN含量.结果 高糖组系膜细胞TGF-β1和CTGF mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.01),TGF-β1、ColⅣ和FN分泌增多,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与高糖组比较,rhBMP-7不同剂量(50、100 ng/ml)TGF-β1和CTGF mRNA表达明显降低,培养上清中TGF-β1、ColⅣ及FN分泌量亦明显减少,且差异显著(P<0.05).结论 RhBMP-7通过抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、CTGF基因表达和ECM的分泌可能起到抗纤维化作用.     

转化生长因子β1反义寡核苷酸抑制单侧肾切除糖尿病大鼠系膜增生

目的 探讨转化生长因子（TGF）β1反义寡核苷酸对单侧肾切除糖尿病大鼠系膜增生的作用。方法 采用人工合成TGF－β1反义、正义及错配的3组寡核苷酸经脂质体包裹柏转染单侧肾切除糖尿病大鼠肾小球系膜细胞（MC）。用细胞计数检测转染后MC的生长抑制率，用RT－PCR和ELISA方法检测TGF－β1 mRNA和蛋白的表达水平，并检测IV型胶原mRNA表达水平的变化。结果 TGF－β1反义寡核苷酸可抑制MC的存活，TGF－β1 mRNA及蛋白的表达水平下降，IV型胶原mRNA的水平也下降。结论 TGF－β1反义寡核苷酸不仅抑制TGF－β1 mRNA及蛋白的表达，而且还可抑制细胞外基质IV型胶原mRNA的表达，抑制MC的肥大，从而抑制单侧肾切除糖尿病大鼠系膜的增生。     

转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞表达β-连环蛋白的影响

目的研究转化生长因子β1（TGF—β1）对大鼠肝星状细胞（HSC）表达β-连环蛋白（β-catenin）的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）比较经不同浓度的TGF-β1刺激不同时间后HSC表达β-catenin、smad3和α-SMA mRNA的变化,并比较三者之间的关系。结果1ng／ml TGF—β1刺激2h后,HSC表达β—catenin mRNA、smad3 mRNA和α—SMA mRNA量最大,β—catenin mRNA表达与两者均具有明显的相关关系（r=0．947,P〈0．01;r=0．950,P〈0．01）。结论β—catenin在TGF—β1活化HSC的过程中发挥重要作用。     

重组转化生长因子β3基因对大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察转化生长因子D3基因（TGFβ3）对大鼠肝星状细胞株（HSC—T6）Ⅰ型胶原合成的影响。方法TGFβ3表达质粒[pcDNA3．1（＋）-TGFβ31和TGFβ1表达质粒[pcDNA3．1（＋）-TGFD11的构建。通过脂质体介导方法，将pcDNA3．1（＋）-TGFβ1、pcDNA3．1（＋）-TGFβ3分别及共同转染体外培养的HSC—T6细胞，荧光定量PCR法及Westernblot法分别检测转染后TGFβ1、TGFD3、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质的表达。将pcDNA3．1（＋）-TGFD1转染HSC—T6细胞，经G418筛选建立高表达TGFD1的HSC～T6细胞克隆，pcDNA3．1（＋）-TGFD3转染克隆细胞，荧光定量PCR法检测转染后TGFβ3、TGFβ1及Ⅰ型胶原mRNA的表达，Westernblot法检测TGFβ1、Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果构建的pcDNA3．1（＋）TGFD3、pcDNA3．1（＋）-TGFD1质粒可转染HSC—T6细胞，转染率28．2％。pcDNA3．1（＋）TGF侈3转染细胞后，Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达较空白组及对照组增加，以72h增高最为明显（P〈0．05）；共转染组Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质的表达较pcDNA3．1（＋）-TGFβ1转染组明显降低（P〈0．05）。TGF侈3转染克隆细胞后，TGFD1mRNA表达较克隆组无明显改变（P〉0．05），而蛋白质表达明显下降（P〈0．05），Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质表达均较克隆组明显降低（P〈0．05）。结论TGFD3基因转染正常培养的HSC—T6细胞，增加Ⅰ型胶原的表达；转染高表达TGFβ1的克隆组HSC—T6细胞，Ⅰ型胶原表达明显降低，提示TGFβ3对肝纤维化的发生有抑制作用。     

霉酚酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增生和高糖诱导的TGF-β、CTGF表达的影响

目的探讨霉酚酸（MPA）对高糖诱导的大鼠系膜细胞（MC）增生和转化生长因子β（TGF-β）、结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法以大鼠MC为受试对象，以不同浓度MPA分别干预24h、48h、72h，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增生情况。用Western blot法测定干预72h时细胞内TGF-β和CTGF蛋白表达水平。结果MPA能抑制高糖诱导的MC增生，且随浓度升高和时间延长，抑制作用逐渐增强。MPA能抑制高糖诱导的MC内TGF-β和CTGF表达。结论MPA可通过抑制MC增生活化及TGF-β和CTGF表达，从而延缓糖尿病肾病肾小球肥大及肾小球硬化的进展。