不同剂量瑞芬太尼对缺血再灌注时大鼠肾细胞凋亡和bcl-2、bax表达的影响

目的观察不同剂量瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注后肾小管细胞凋亡及其调控基因bcl-2和bax表达的影响,探讨瑞芬太尼肾保护作用的分子生物学机制。方法用动脉夹夹闭大鼠双侧肾蒂45min再灌注6h方法制成急性肾缺血再灌注损伤模型。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DNA原位末端标记技术检测细胞凋亡的情况。免疫组化检测Bcl-2、Bax基因表达。结果缺血再灌注组较假手术组肾小管凋亡细胞数明显增多,Bcl-2、Bax表达均增强,Bax/Bcl-2比值增高;瑞芬太尼各剂量处理组较缺血再灌注组凋亡细胞数明显减少,Bcl-2表达进一步增强,而Bax表达减弱,Bax/Bcl-2降低。结论瑞芬太尼可能通过上调Bcl-2基因表达,下调Bax基因表达,抑制细胞凋亡,从而发挥对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用。     

鹿茸多肽对辐射诱导神经母细胞瘤细胞调亡后Bax和Bcl-2表达的影响

目的探讨鹿茸多肽对辐射诱导神经母细胞瘤细胞调亡后B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)基因表达的影响。方法将神经母细胞瘤经X射线2 Gy照射5 min,诱导细胞凋亡后,用400和800 mg/ml鹿茸多肽溶液处理细胞,同时设未处理细胞作为对照组。采用RTPCR法检测Bcl-2、Bax基因mRNA转录水平。结果与对照组相比,鹿茸多肽400、800 mg/ml处理组Bcl-2、Bax基因mRNA转录水平均上调(P均<0.05);800 mg/ml处理组Bcl-2基因mRNA转录水平高于400 mg/ml处理组,而800 mg/ml处理组Bax基因mRNA转录水平低于400 mg/ml处理组,但两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论鹿茸多肽对神经母细胞瘤细胞的凋亡具有明显的抑制作用,其抑制细胞凋亡的作用是通过上调Bcl-2表达、下调Bax表达实现的。     

联氨基姜黄素对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨联氨基姜黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测联氨基姜黄素对MCF-7细胞的抗增殖效应,Hochest33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞的周期分布和凋亡情况,Western blot检测MCF-7细胞中Bcl-2、Bax、Cyclin D1和Survivin蛋白的表达变化。结果联氨基姜黄素可抑制MCF-7细胞的增殖,IC50为2.56μmol/L,而姜黄素的IC50为21.22μmol/L;联氨基姜黄素染色24 h后,MCF-7细胞出现核荧光强度增强、颗粒状荧光等凋亡特征;凋亡细胞比率明显增加,并可阻滞细胞周期于G1期,且呈一定的剂量依赖性;联氨基姜黄素可使MCF-7细胞中Bcl-2、Cyclin D1、Survivin蛋白表达水平明显降低,而Bax表达增加。结论联氨基姜黄素具有抑制MCF-7细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期于G1期的作用,其机制可能与Bcl-2、Bax、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达改变有关。     

化脓隐秘杆菌对奶牛脾脏组织细胞凋亡的影响

目的观察化脓隐秘杆菌自然感染奶牛脾脏组织的病理学变化,并检测组织细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达,以确定化脓隐秘杆菌感染对奶牛脾脏组织细胞凋亡的影响。方法筛检2头化脓隐秘杆菌阴性健康奶牛(对照)和5头自然感染化脓隐秘杆菌的奶牛,收集脾脏组织样本,采用本课题组国家发明专利方法,进行石蜡制片和HE染色,观察脾脏组织病理学变化;采用免疫组织化学方法与本课题组国家发明专利方法相结合,检测奶牛脾脏组织中与细胞正负凋亡相关的调节基因Bax和Bcl-2及凋亡通路蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达情况。结果肉眼观察可见化脓隐秘杆菌自然感染奶牛脾脏肿大、柔软,有出血;病理组织学观察可见脾脏组织出血,水肿,淋巴细胞数量减少,有坏死;脾脏淋巴细胞Caspase-3、Caspase-9和Bax表达阳性,与对照组相比,差异有统计学意义(P <0.05),少量淋巴细胞Caspase-8和Bcl-2表达阳性,与对照组相比,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论化脓隐秘杆菌能够引起奶牛脾脏淋巴细胞发生坏死和凋亡;可通过调节脾脏中淋巴细胞Bcl-2家族的活性,引起其Bax和Bcl-2比率改变,增加淋巴细胞线粒体内外膜通透性,导致与凋亡相关因子的释放,激活Caspase-9,进一步激活Caspase-3,从而引起脾脏中淋巴细胞发生凋亡。     

RhoC基因沉默对肝癌细胞Bel7402凋亡和迁移的影响

目的研究RhoC基因沉默对肝癌细胞Bel7402凋亡和迁移的影响。方法以RNAi沉默Bel7402细胞RhoC基因的表达,FACS和RT-PCR检测细胞凋亡和凋亡相关基因水平,细胞划痕损伤和软琼脂克隆形成试验检测细胞迁移和生长特性。结果RNAi组细胞凋亡率明显高于细胞对照组,RNAi组Bcl-2表达水平明显低于细胞对照组,只有RNAi组可检测到Bax基因的表达。两对照组细胞划痕损伤在48h内愈合,而RNAi组则不能修复。RNAi组软琼脂克隆形成能力明显低于两对照组。结论RhoC基因沉默能够促进肝癌细胞Bel7402凋亡并抑制细胞迁移和非锚定生长能力。     

秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

目的观察秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤细胞株Raji增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法体外培养Raji细胞,分别加入浓度为0.9、1.5、2.1、2.7 mg/mL的FA-2-b-β,对照组加入等量培养基。培养24、48、72 h后收集各组细胞,采用CCK-8法检测FA-2-b-β对Raji细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 FA-2-b-β能抑制Raji细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性(P 0.01);给药48 h后,各浓度FA-2-b-β组细胞凋亡率较对照组均显著上升,且呈剂量依赖性(P 0.05);各浓度FA-2-b-β组细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著低于对照组,且呈剂量依赖性(P 0.05),Bax蛋白表达水平显著高于对照组,同样呈剂量依赖性(P 0.05),Bax/Bcl-2比值增加。结论 FA-2-b-β呈时间-剂量依赖性诱导伯基特淋巴瘤凋亡,可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

RNA干扰Apg-2基因表达对BaF3-MIGR1和BaF3-p210细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰Apg-2基因表达对BaF3-MIGR1和BaF3-p210(Bp210)细胞凋亡的影响。方法取BaF3-MIGR1和Bp210、稳定抑制Apg-2表达的BaF3-MIGR1-Hspa42和Bp210-Hspa42细胞及阴性对照Bp210-HspaHK和BaF3-MIGR1-HspaHK细胞,采用瑞特染色法观察各组细胞的形态学变化;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;Western blot法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。结果干扰Apg-2基因表达后,细胞出现肿胀、胞浆空泡、核染色质聚集、核碎裂,部分细胞可见凋亡小体,处于有丝分裂中期细胞明显减少。与BaF3-MIGR1和Bp210细胞相比,BaF3-MIGR1-Hspa42和Bp210-Hspa42细胞的凋亡率显著增加(P<0.05);Bcl-2蛋白的表达水平下调,Bax蛋白的表达水平无明显变化。结论干扰Apg-2基因表达可促进BaF3-MIGR1和Bp210细胞凋亡增加,其可能是通过降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平来实现的。     

高浓度葡萄糖和亮氨酸联合作用对人脐带血间质干细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨高浓度葡萄糖和亮氨酸联合作用对人脐带血间质干细胞(human cord blood-derived mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs)增殖和凋亡的影响。方法贴壁培养法分离、纯化并传代培养hUCB-MSCs,采用流式细胞术检测第3代hUCB-MSCs表面抗原CD29、CD34和CD44的表达;将hUCB-MSCs分为葡萄糖组、亮氨酸组和联合刺激组,葡萄糖液和亮氨酸液终浓度分别为28和1.35 mmol/L,并设PBS对照组。37℃培养3 d后,采用MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术Annexin-V/PI染色法检测细胞的凋亡情况;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果 hUCB-MSCs呈CD29+CD44+CD34-。药物处理3 d后,与PBS对照组相比,葡萄糖组和亮氨酸组hUCB-MSCs的增殖活力、凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平均无明显变化(P>0.05);而联合刺激组hUCB-MSCs的增殖活力受到明显抑制,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白的表达水平明显降低,Bax蛋白的表达水平明显升高(P<0.01)。结论高浓度葡萄糖和亮氨酸联合作用可抑制hUCB-MSCs增殖,促进其凋亡。本研究在一定程度上为干细胞治疗糖尿病提供了实验依据。     

白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对细胞周期和凋亡的影响;应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达水平。结果 Res作用24 h时,与空白对照组及DMSO组比较,20和40μmol/L Res组的细胞增殖抑制率、G0/G1和G2/M期的细胞比例、细胞凋亡率、Caspase-3酶活性显著升高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05);20μmol/L Res组U-2OS细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论 Res通过诱导提高Caspase-3酶活性,上调促凋亡基因Bax、Caspase-3及下调抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,从而抑制U-2OS细胞的增殖,促进其凋亡,为Res治疗骨肉瘤提供了实验依据。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导隐睾对SD幼鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响

目的探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[D(i2-ethylhexy1)phthalate,DEHP]作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只。玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组自妊娠第12.5～19.5天分别每日灌胃玉米油(2 ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药。取各组出生后第20天的雄性幼鼠睾丸组织,采用Q-PCR法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2基因的水平,流式细胞术检测睾丸生殖细胞的凋亡情况。结果 DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸组织中Bax基因mRNA的水平显著高于两对照组(P<0.000 1),Bcl-2基因mRNA的水平显著低于两对照组(P<0.01);DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸生殖细胞凋亡百分率显著高于两对照组(P<0.000 1)。结论孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,且隐睾鼠睾丸生殖细胞凋亡率增加,隐睾子代睾丸组织中凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有改变,推测其改变可能参与了生殖细胞的凋亡过程,并可能与隐睾继发的远期不育有关。     

乙型肝炎病毒X蛋白对小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白(HBx)对小鼠胚胎肝干细胞(embryonic liver stemcell,ELSC)凋亡及相关蛋白Bcl2、Mcl1、Bax表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的腺病毒载体系统将HBx基因转入小鼠胚胎肝干细胞ELSC14.5中,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中HBx基因mRNA的转录和蛋白的表达;Hoechst33342染色法观察细胞核的改变;TUNEL法和流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Real-time PCR和Western blot法检测抗凋亡因子Bcl2、Mcl1和促凋亡因子Bax基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果重组腺病毒Ad-GFP-HBx能有效感染ELSC14.5细胞,HBx基因和蛋白均能特异性表达;感染的ELSC14.5细胞核呈现固缩,且边缘化的细胞数减少,细胞凋亡率降低;细胞中Bcl2和Mcl1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均增高,而Bax的表达降低。结论 HBx可通过调节Bcl2家族中抗凋亡因子和促凋亡因子的比例失衡,来抑制小鼠胚胎肝干细胞的凋亡,促进其存活。     

柴胡愈伤组织提取物抗肝癌作用的基因表达研究

目的:对柴胡的愈伤组织中有效成分进行检测,研究柴胡愈伤组织提取物促进肝癌细胞凋亡相关基因的差异表达情况。方法:对柴胡愈伤组织提取物(BSW-ws)进行高效液相检测,分析其有效成分;再使用柴胡愈伤组织提取物对肝癌细胞SMMC-7221给药,经Realtime-PCR实验检测凋亡相关基因的表达情况。结果:(1)分析高效液相检测结果可确定柴胡愈伤组织提取物中含有有效成分柴胡皂苷d;(2)Realtime-PCR试验结果表明与内参基因β-actin相比:Bcl-2表达量下调,Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bcl-2比率上调,Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9表达均上调。结论:柴胡愈伤组织提取物BSW-ws中含有有效成分为柴胡皂苷d,并且柴胡愈伤组织提取物BSW-ws促进了凋亡相关基因的表达,进而促进肝癌细胞SMMC-7221的凋亡。     

五味子酯乙通过下调Bcl-2表达增强内在耐药肝癌Bel7402细胞对顺铂诱导的凋亡敏感性

目的:研究探讨五味子酯乙对内在耐药肝癌Bel7402细胞对顺铂诱导的凋亡敏感性的影响及机制。方法:MTT法检测顺铂、五味子酯乙单独或两药联用对Bel7402细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色和DNA Ladder检测顺铂、五味子酯乙单独或两药联用对Bel7402细胞凋亡的影响,PI染色检测Bel7402细胞凋亡百分率和细胞周期变化,Westen blot检测Ble7402细胞Caspase-3、Bax和Bcl-2表达水平。结果:低浓度顺铂(2. 5μM)单独作用对Ble7402细胞增殖和凋亡无影响,五味子酯乙与低浓度顺铂联用后剂量依赖性增强对Ble7402细胞的抗增殖作用,诱导Ble7402细胞发生典型凋亡形态学特征变化,显著增加Ble7402细胞凋亡率和S期细胞占比,并显著上调活化Caspase-3水平和降低Bcl-2蛋白表达。结论:五味子酯乙与低浓度顺铂联用通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,增强内在耐药肝癌Bel7402细胞的凋亡敏感性。     

脑出血灶周组织Bax、Bcl-2的表达与神经元凋亡关系的实验研究

目的检测脑出血灶周组织Bax、Bcl-2的表达,探讨与神经元凋亡的关系。方法对健康家犬30只在DSA介入下刺破大脑中动脉制作脑出血模型,选择出血后6h、12h、24h、48h、72h及96h共6个时间点,每点5只,均于相应时间点处死后取脑,检测出血灶周Bax、Bcl-2及神经元凋亡的表达。结果Bax及神经元凋亡的表达均于48h达高峰,至96h皆明显下降(与48h比较,P<0.01);Bcl-2出血后72h达高峰,至96h末见明显下降(与72h比较,P>0.05);Bax的表达与神经元凋亡呈正相关(P<0.05);Bcl-2与神经元凋亡的表达出血后48h前均呈正相关(P<0.05),48h后均呈负相关倾向,但无统计学差异(P>0.05)。结论Bax及Bcl-2参与了ICH后出血灶周神经元凋亡的过程,前者诱导和加重了神经元凋亡,后者有抑制凋亡作用,但显示其强度不足。     

白藜芦醇对人腺泡横纹肌肉瘤细胞株PLA-802增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人腺泡横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)细胞株PLA-802增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养PLA-802细胞,用不同浓度的Res(25、50、100、200μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)。MTT法检测Res对PLA-802细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对PLA-802细胞周期和凋亡的影响;采用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶的活性;Western blot法检测PLA-802细胞中与凋亡密切相关的Bax、Bcl-2、Survivin和Caspase-3酶蛋白的表达水平。结果 Res可明显抑制PLA-802细胞的增殖(P0.05)及提高Caspase-3酶活性(P0.001),且呈剂量-时间依赖性;同时可明显提高处于G0/G1及G2/M期的细胞比例(P0.01),减少S期细胞比例(P0.001),促进PLA-802细胞的凋亡,且可显著增加促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平(P0.05),降低抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达水平(P0.05)。结论 Res可通过上调Bax、Caspase-3及下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平及激活Caspase-3酶活性,诱导PLA-802细胞的凋亡并抑制其增殖,为治疗RMS提供了实验依据。     

过表达BRIT1基因对鼻咽癌HNE-1细胞凋亡的影响及其机制

目的研究BRIT1(BRCT-repeat inhibitorof h TER expression)基因对鼻咽癌HNE-1细胞凋亡的影响,并初步探讨其相关的分子机制。方法利用免疫组织化学法检测30份鼻咽癌组织及30份鼻咽正常组织中BRIT1蛋白的表达;利用质粒pc DNA3.1(-)/BRIT1及pc DNA3.1转染HNE-1细胞,TUNEL法、Hoechst33342染色法及流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western blot法检测转染细胞中BRIT1蛋白及caspase-3、active caspase-3、Bax、bcl-2蛋白的表达。结果 BRIT1在鼻咽癌组织中的BRIT1蛋白表达水平低于鼻咽正常组织(P0.05);转染质粒pc DNA3.1(-)/BRIT1的HNE-1细胞中,BRIT1蛋白水平明显上调(P0.05);过表达BRIT1明显促进HNE-1细胞的凋亡,并导致抗凋亡蛋白caspase-3、bcl-2表达下调(P0.05),促凋亡蛋白active caspase-3、Bax表达上调(P0.05)。结论BRIT1基因通过调控线粒体凋亡途径相关基因的表达,促进鼻咽癌细胞HNE-1凋亡的发生。     

垂柳叶挥发油成分及抗肿瘤活性研究

目的:本文对垂柳叶中挥发油的成分进行分析并筛选其抗肿瘤活性。方法:采用水蒸汽蒸馏法提取垂柳叶中挥发油,GC-MS法对其化学成分进行分析,MTT法对人宫颈癌He La细胞活性筛选,Hoechst 33342法观察其凋亡状态,Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达。结果:从垂柳叶中挥发油鉴定出24个色谱峰,占总含量90.64%,主要成分为棕榈酸(34.18%)、正二十四烷(9.43%)、叶绿醇(8.12%)、正庚烷(6.75%)、7-亚甲基十三烷(5.69%)、邻苯二甲酸二辛酯(3.72%)、2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(2.38%)、鲸蜡烷(2.36%)等,并且垂柳叶挥发油对He La具有抑制活性,Hoechst 33342染色表明挥发油对细胞有凋亡作用,凋亡关键蛋白Bcl-2下调,而Bax上调。结论:对垂柳叶中挥发油定性表明成分中含较高脂肪族化合物,并发现其抑制He La细胞增殖并对凋亡有影响。     

人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制

目的研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法取对数生长期的CNE2细胞,用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),并设对照组(正常培养),采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;用最适作用浓度的Rh2分别处理CNE2细胞24、48、72 h,采用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、周期分布以及膜电位的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、CyclinD1、P53的表达水平。结果 Rh2对CNE2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,60μmol/L Rh2作用72 h为最适作用浓度和时间。经60μmol/L的Rh2作用48、72 h后,凋亡细胞数目增多,凋亡细胞体积变小,细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂,边集程度增大等现象。与对照组比较,经60μmol/L的Rh2作用24、48、72 h,CNE2细胞的凋亡率逐渐增加(P0.01);G0/G1期细胞比例逐渐升高(P0.01),S期(P0.01)和G2/M期细胞比例逐渐下降;细胞的膜电位逐渐降低(P0.05);促凋亡蛋白Bax、激活型Caspase-3和P53蛋白表达上调(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期相关蛋白CyclinD1表达下调(P0.05)。结论人参皂苷单体Rh2具有抑制CNE2细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能是通过Caspase/CyclinD1信号通路实现的。     

左旋卡尼汀对大鼠缺血心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察左旋卡尼汀对大鼠缺血心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法将SD大鼠随机分成3组:空白对照组、缺血组和左旋卡尼汀组。缺血组及左旋卡尼汀组给予异丙肾上腺素建立心肌缺血模型,左旋卡尼汀组提前经腹腔注射左旋卡尼汀。原位末端标记(TUNEL)法测定凋亡的心肌细胞,免疫组化法测定Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达。结果左旋卡尼汀组与缺血组相比,心肌组织Bcl-2蛋白表达率显著升高,细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达率显著降低。结论左旋卡尼汀在异丙肾上腺素所致的心肌缺血大鼠模型中,对缺血缺氧心肌有保护作用,其机制可能是通过调节Bcl-2和Cas-pase-3介导的细胞凋亡而实现的。     

Survivin启动子调控的EGFP基因真核表达质粒的构建及其在肺癌细胞中的特异性表达

目的构建由Survivin启动子调控的EGFP基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达。方法以A549细胞基因组DNA为模板,PCR扩增Survivin启动子,替换pEGFP-C1载体中的CMV启动子,构建携带Survivin启动子的pEGFP-C1真核表达质粒pEGFP-C1/Surp,转染A549细胞及人胚肺成纤维细胞MRC-5,在荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果重组表达质粒pEGFP-C1/Surp经双酶切和测序鉴定,证明构建正确。转染A549细胞和MRC-5细胞后,在荧光显微镜下可见A549细胞有较强的绿色荧光,而MRC-5细胞则未见绿色荧光。结论已成功构建以Survivin启动子为调控序列、EGFP为标示蛋白的真核表达质粒,且具有较强的肿瘤特异性启动活性,为进一步开发肿瘤靶向性基因治疗载体奠定了基础。