对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。     

GnRH-a控制性超促排卵(COH)对小鼠着床期Hoxa-10基因表达的影响

目的:研究GnRH-a长方案控制性超促排卵(COH)对小鼠妊娠率、胚胎着床率及着床期HOXA-10基因表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制。方法:实验动物随机分为实验组(GnRH-a+hMG+hCG)和对照组(生理盐水),雌、雄合笼后观察小鼠阴栓率,于着床期取小鼠子宫,观察妊娠率及胚胎着床数,计算着床率;应用RT-PCR、Real-time PCR方法及免疫组织化学法分别检测小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10 mRNA及蛋白的表达。结果:实验组小鼠阴栓率及妊娠率均明显低于对照组(P<0.01),实验组胚胎着床数高于对照组(P<0.01),但胚胎着床率较对照组显著降低(P<0.05),着床期小鼠子宫内膜Hoxa-10mRNA及蛋白表达下降,与对照组比较均有明显差异(P<0.05)。结论:GnRH-a长方案COH可引起小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10表达下降,导致子宫内膜容受性降低,从而影响小鼠妊娠及胚胎着床。     

PCOS患者子宫内膜白血病抑制因子的表达及意义

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者不同组织学分期的子宫内膜白血病抑制因子(LIF)的表达与子宫内膜容受性的关系。方法:20例已婚PCOS患者(PCOS组)和26例已婚不孕症患者(对照组)在月经周期第5￣14日及排卵后7￣8 d采集其子宫内膜标本,经HE染色判定内膜组织学分期,采用免疫组织化学法检测内膜LIF的表达。结果:PCOS组间质反应不良和分泌反应欠佳的发生率均高于对照组,差异有统计学意义(χ2=5.000,P<0.05;χ2=7.219,P<0.01)。LIF的表达以腺上皮细胞的胞质为主,其在分泌中期子宫内膜的表达水平均高于增生期(P<0.01)。LIF在PCOS组增生期和分泌中期子宫内膜的表达水平均低于其相应的对照组(P<0.01)。结论:PCOS患者着床窗口期LIF的低表达可能影响着床的多个环节,参与了PCOS患者内分泌紊乱纠正后仍出现妊娠率低、流产率高的发生、发展过程。     

hMG对分泌晚期子宫内膜雌、孕激素受体基因表达的影响

目的:研究人绝经期促性腺激素(hMG)促排卵治疗对分泌晚期子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)基因表达的影响。方法:采用原位杂交技术,对9例hMG促排卵周期(实验组)分泌晚期子宫内膜ER、PRmRNA进行测定,并与11例自然周期(对照组)进行对照研究。结果:实验组分泌晚期子宫内膜腺体细胞内ER、PRmRNA水平明显低于对照组(P<0.05和P<0.005)。结论:hMG在转录水平降低分泌晚期子宫内膜腺体细胞ER、PRmRNA的表达。     

孕激素对人子宫内膜间质细胞moesin表达的影响

目的:探讨孕激素(P)对人子宫内膜间质细胞(hESC)中细胞骨架调节蛋白moesin的调节作用,为胚胎着床提供理论依据。方法:从因子宫肌瘤行全子宫切除术的妇女子宫标本中获取分泌期子宫内膜组织,分离、鉴定后建立人类子宫内膜间质细胞(hESC)体外模型。根据细胞培养液中添加激素不同分组为空白对照组(A组)、孕激素组(B组,P 10-5 mol/L)、雌、孕激素组(C组,E210-8 mol/L+P 10-5 mol/L)及米非司酮联合雌、孕激素组(D组,E210-8 mol/L+P 10-5mol/L+Mif 10-5 mol/L),培养3 d后应用细胞化学免疫方法和免疫印迹方法检测hESC moesin蛋白定位和定量的变化。结果:细胞化学荧光检测显示moesin主要分布于hESC的细胞胞质及胞膜突起、皱褶、细胞间接触等特殊细胞皮质膜部位,各实验组和对照组moesin定位无显著变化。免疫印迹方法显示B组、C组hESC中moesin表达显著均高于A组(P<0.05);B组和C组间表达无显著差异(P>0.05);D组hESC中moesin蛋白较C组表达显著降低(P<0.05)。结论:孕激素促进hESC的moesin表达上调,进一步通过调节细胞骨架重塑介导胚胎着床;米非司酮通过拮抗孕激素作用,抑制hESC moesin上调。     

控制性促排卵下凝血相关因素变化研究

控制性超促排卵(COH)是体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的关键步骤,但与自然周期相比较,其胚胎着床率和妊娠率仍低于自然周期,这可能和该过程中激素水平的波动有关,该过程中产生超生理剂量的雌、孕激素,可引起多种凝血相关因素的改变,与血栓的形成密切相关,由此继发的子宫内膜微循环障碍可能是影响子宫内膜容受性进而影响着床率和妊娠率的重要原因之一。COH过程中凝血和纤溶系统均有不同程度的激活,凝血因子、抗凝因子、纤溶因子、血液流变学及血管内皮功能等均有不同程度的改变,这些改变与COH中高雌、孕激素状态密切相关。     

超促排卵对不孕女性子宫内膜蠕动波的影响

目的:研究不孕女性自然周期与控制性超促排卵(COH)周期子宫内膜蠕动波的特点。方法:64名排卵正常的不孕女性分别于自然周期LH峰日、排卵日、排卵后2 d和COH周期hCG注射后1 d、采卵日、采卵后2 d阴道超声监测子宫内膜蠕动波,且同时测定血清雌、孕激素水平。结果:自然周期子宫内膜蠕动波频率是COH周期的1.31倍;COH周期与自然周期各个观测日的子宫内膜蠕动波类型分布不同;子宫内膜蠕动波频率与生理水平血清雌二醇(E2)呈正相关,与孕酮(P)呈负相关,与超生理剂量的雌、孕激素无相关性。结论:COH治疗显著地改变了子宫内膜蠕动波的自然运动模式,在胚胎移植前仍表现为较强烈的子宫内膜运动。     

雌、孕激素对人子宫内膜Pbx2蛋白表达的影响

目的:探讨人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞中雌、孕激素对Pbx2蛋白表达的影响。方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测人增生期、分泌中期和蜕膜期子宫内膜中Pbx2的表达和分布;体外培养人子宫内膜基质细胞和高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,分别加入雌激素、孕激素、雌、孕激素联合刺激48 h,并以不加雌、孕激素的基质细胞核和Ishikawa细胞为对照组,采用免疫组织化学、免疫印迹法测定各种条件下Ishikawa细胞中Pbx2蛋白的表达。结果:①在人各期子宫内膜组织中,Pbx2表达于腺上皮细胞和基质细胞的细胞核中;Pbx2在分泌中期和蜕膜期基质细胞中的表达显著高于增生期,但在腺上皮细胞中增生期组织的表达高于分泌中期和蜕膜期,差异均具有统计学意义(P<0.05)。②Western blotting结果显示,在孕激素和雌、孕激素联合处理Ishikawa细胞组中,Pbx2的表达显著低于对照组(P<0.05),雌激素处理后Pbx2的表达与其他各组间的表达无显著性差异(P>0.05),在人子宫内膜基质细胞(ESC)中,Pbx2的表达在雌、孕激素处理各组间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:在人子宫内膜腺上皮Ishikawa细胞中孕激素对Pbx2的表达具有下调作用,在人子宫内膜基质细胞中,Pbx2的调控可能是非雌、孕激素依赖性的。     

生长抑制因子1在子宫内膜异位症的表达

目的:探讨生长抑制因子1(ING1)在子宫内膜异位症(EMs)发病机制中的作用。方法:采用免疫组化SABC法检测40例患者(EMs)在位及异位子宫内膜组织ING1的表达,并与20例正常子宫内膜(对照组)进行比较。结果:ING1在EMs组异位腺体的表达分别低于在位腺体及对照组(P<0.05),在异位间质的表达低于对照组间质(P<0.05);ING1在EMs组、对照组增生期与分泌期的表达及在EMs组I-Ⅱ期与Ⅲ-IV期异位腺体和间质间的表达均无明显差异(P>0.05)。结论:ING1在异位内膜的腺体及间质中的低表达可能在EMs的发病中起重要作用。ING1表达量与EMs的严重程度无关。     

类固醇受体辅助活化因子-1和核受体辅阻遏子在子宫腺肌病中的表达

目的:通过检测子宫腺肌病组织芯片中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、类固醇受体辅助活化因子-1(SRC-1)和核受体辅阻遏子(NCoR)的表达,观察SRC-1、NCoR与ER、PR之间的关系,探讨其在子宫腺肌病发生、发展中的作用。方法:用组织芯片技术和免疫组化方法检测42例子宫腺肌病患者异位子宫内膜组织(异位内膜组)和15例因子宫肌瘤行子宫切除术患者非瘤区对照子宫内膜组织(对照内膜组)中ER、PR、SRC-1和NCoR的阳性细胞的平均光密度值(IOD),及两组子宫内膜组织的增殖期和分泌期的IOD值,并进行比较。结果:ER、PR在异位内膜组中的IOD值显著低于对照内膜组(P<0.05);SRC-1在异位内膜组中IOD值明显高于对照内膜组(P<0.05);NCoR在异位内膜组中IOD值明显低于对照内膜组(P<0.05);异位内膜组中SRC-1、NCoR、ER和PR的IOD值增殖期和分泌期的比较,差异无统计学意义(P>0.05);对照内膜组中SRC-1、NCoR、ER和PR的IOD值增殖期高于分泌期(P<0.05)。结论:低表达的ER存在时,SRC-1在异位内膜组织中表达增高,低表达的PR可能降低NCoR的表达,SRC和NCoR可能导致子宫腺肌病异位内膜组织增生活性增高,可能与子宫腺肌病的种植和侵袭有关。     

HOXA-10、PR在输卵管粘膜的表达与输卵管妊娠发生的关系

目的:探讨HOXA-10、PR在输卵管妊娠发生中的作用。方法:用免疫组化法分别检测20例输卵管妊娠患者异位着床部位粘膜组织,20例正常分泌期输卵管粘膜组织及20例正常宫内早孕期子宫蜕膜组织中HOXA-10基因、PR的蛋白表达水平。结果:(1)HOXA-10基因在输卵管妊娠患者异位着床部位的阳性表达明显高于正常分泌期输卵管粘膜的表达,两组差异有统计学意义(P<0.05);但接近正常早孕期子宫蜕膜组织中的表达,两组差异无统计学意义(P>0.05);(2)PR在输卵管妊娠患者异位着床部位上皮细胞中的阳性表达明显低于在正常分泌期输卵管的表达,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);但接近于在正常早孕期子宫蜕膜的表达,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)PR在输卵管妊娠患者异位着床部位间质中的阳性表达明显高于正常分泌期输卵管的表达,两组差异有统计学意义(P<0.05);但接近正常早孕期子宫蜕膜的表达,两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:输卵管妊娠异位着床部位HOXA-10基因表达增强,上皮细胞PR表达下降或缺失和间质细胞表达增强,与输卵管妊娠发生密切相关。     

米非司酮治疗子宫内膜增生症前后ER和AR的表达及意义

目的:探讨米非司酮抑制子宫内膜增生的机制。方法:37例子宫内膜增生症(不伴非典型增生)患者,连续口服米非司酮(剂量10mg/d)治疗3个月,刮取治疗前、后子宫内膜组织,采用免疫组织化学二步法分别检测其ER和AR的表达进行自身对比;另取10例正常增殖期子宫内膜标本作为正常对照组进行比较。结果:子宫内膜增生症治疗前ER表达、AR表达均显著高于正常对照组(P<0.05),ER在腺体和间质细胞中均有表达,AR主要表达于间质细胞,腺体中几乎无表达。米非司酮治疗后腺体和间质ER表达比治疗前均下降(P<0.05),而间质和腺体中AR表达均比治疗前增加(P<0.05)。结论:米非司酮可通过下调ER和上调AR,从而抑制子宫内膜增生。     

Histochemical localization of endometrial insulin-like growth factor binding protein-1 and -3 during the luteal phase in controlled ovarian hyperstimulation cycles: a controlled study

OBJECTIVE: To determine if controlled ovarian hyperstimulation (COH) affects the endometrial expression of IGFBP-1 and IGFBP-3. DESIGN: Prospective, controlled study. SETTING: Tertiary infertility clinic. PATIENT(S): Eighteen oocyte donors undergoing COH cycles and 17 natural cycle controls. INTERVENTION(S): Controlled ovarian hyperstimulation, endometrial biopsies. MAIN OUTCOME MEASURE(S): Immunohistochemical scoring of endometrial IGFBP-1 and -3 expression, morphological endometrial dating, and serum estradiol (E(2)), LH, and progesterone (P(4)) concentrations. RESULT(S): No statistically significant difference was observed between natural and stimulated cycles in change in IGFBP-1 or -3 over standardized cycle days throughout the window of embryo implantation (days 17-24). The IGFBP-1 and -3 expression was zero or near zero for both the natural and COH cycles until day 12-13. Both IGFBPs showed increased production throughout the secretory phase. Advanced endometrial histology (>/=1 day) in glands and stroma was noted in COH cycles. Significant positive correlations of E(2) and P(4) were noted with IGFBP-1 and -3 but not with advanced endometrial morphology in the COH cycles. CONCLUSION(S): The COH cycles have no significantly increased endometrial IGFBP-1 or -3 expression throughout the implantation phase of the luteal cycle compared with normal menstrual cycles. Both IGFBPs were absent in the proliferative phase and increased throughout the secretory portion of the embryo implantation window.     

雌、孕激素受体表达与宫腔粘连分离术后雌孕激素治疗疗效的相关性研究

目的:研究宫腔粘连(IUA)患者子宫内膜组织中雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)的表达,探讨其与术后雌孕激素治疗疗效的关系。方法:采用免疫组化法检测55例中重度IUA患者子宫内膜组织的ER、PR表达;患者均行宫腔镜下IUA分离术,术后给予雌孕激素周期治疗。随访患者的月经改善情况,结合宫腔镜复查结果,分析PR、ER受体与预后的相关性。结果:ER、PR在腺体及间质中的表达均无显著差异(P=0.727,P=0.453);PR低表达组、高表达组患者术后雌孕激素治疗的有效率分别为63.64%和54.55%,两组比较无显著差异(P=0.503);ER低表达组、高表达组患者术后雌孕激素治疗的有效率分别为33.33%和70.27%,两组比较差异显著(P=0.018)。结论:患者子宫内膜PR的表达不能预测预后;ER表达水平与疗效呈正相关,其可能成为IUA术后雌孕激素治疗疗效的预测指标。     

雌激素受体ERα36在子宫内膜癌组织中表达及临床意义的初步研究

目的:分析新型雌激素受体ERα36在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理特征的关系。方法:免疫组织化学方法检测73例子宫内膜癌、20例正常子宫内膜、9例不典型增生子宫内膜组织切片ERα36的表达,并分析其与临床病理特征间的关系。结果:ERα36在子宫内膜癌组织中阳性表达率(32.9%,24/73)显著低于正常子宫内膜组织(85%,17/20)(P<0.01);ERα36阴性表达者较阳性表达者出现更多宫颈受侵(48.9%vs 20.8%,P<0.05);ERα36阳性表达者无疾病生存时间短于阴性表达者(P<0.01);ERα36表达与患者年龄、临床分期、组织学分级、肌层浸润、淋巴结转移和病理类型的差异无统计学意义(P>0.05);ERα36表达与ER、PR、PTEN、p53无显著相关性(P>0.05)。结论:ERα36在子宫内膜癌组织的表达明显低于正常子宫内膜组织;ERα36表达与ER无明显相关性,可能是子宫内膜癌预后的一个指标。     

Endometrial glycodelin-A expression in the luteal phase of stimulated ovarian cycles

OBJECTIVE: To determine if controlled ovarian hyperstimulation (COH) affects the endometrial expression of glycodelin-A (GdA). DESIGN: Prospective, controlled study. SETTING: Tertiary infertility clinic. PATIENT(S): Fifteen oocyte donors undergoing COH cycles and 19 natural-cycle control patients. INTERVENTION(S): COH, endometrial biopsies. MAIN OUTCOME MEASURE(S): Immunohistochemical scoring of endometrial GdA expression, morphologic endometrial dating, and serum E2, LH, and P4 concentrations. RESULT(S): GdA was detected in all subjects throughout the implantation window period. Immunolocalization was demonstrated in the endometrial glands and not in the stroma or on the surface. A significantly increased proportion of GdA-staining endometrial cells were noted in COH cycle patients as compared with natural-cycling control patients throughout the window of embryo implantation. Both cycle types demonstrated increasing GdA expression throughout the late luteal phase. A significant positive correlation was noted between GdA expression and serum E2 levels (r = 0.5, P<.001) in natural cycles and advanced histology in COH cycles (r = 0.63, P=.01). Neither LH nor P4 were correlated with endometrial GdA expression. CONCLUSION(S): COH cycles have a significantly increased endometrial GdA expression throughout the implantation phase of the luteal cycle when compared with normal menstrual cycles. The increased expression may affect implantation during COH cycles.     

黄体期促排卵方案在卵巢低反应患者中的初步研究

目的:探索黄体期促排卵方案在卵巢低反应患者中应用的可行性及其初步效果。方法:分析77例接受黄体期促排卵的不孕症患者的卵泡期和黄体期促排卵时血清激素水平及获卵数、胚胎情况和助孕结局。结果:经过卵泡期和黄体期2次取卵,77例均有取卵机会,且获得卵子的患者数和有胚胎冻存的患者数均比仅接受卵泡期取卵的患者数显著增加(P0.001和P0.05);卵泡期与黄体期扳机日内分泌水平亦有统计学差异(P0.001),黄体期促排卵周期的回收卵子数、冷冻胚胎数均显著多于卵泡期(P0.001);已接受了冻融胚胎移植(FET)的34例患者中20例获得了临床妊娠。结论:在卵巢低反应患者中实施黄体期促排卵取卵是可行的,可以增加获卵数及获得胚胎的机会,从而为提高妊娠率提供可能。     

Androgen, estrogen and progesterone receptor expression in the human uterus during the menstrual cycle

Cyclic changes in steroid receptor expression in endometrial cells are considered a reflection of its differential functions. Besides estrogen and progestogens, androgens have also been suggested to affect the biological function of the female reproductive tract. We investigated the distribution and intensity of immuno-cytochemical estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and androgen receptor (AR) staining in the various cell types of human endometrium and myometrium during the different menstrual cycle phases in 30 paraffin-embedded sections.AR expression in endometrial stromal cells decreased gradually from early proliferative till mid secretory phase. In the late secretory phase, AR expression in all cell types distinguished. Staining of epithelial cells was moderate. The disappearance of AR expression before cyclic separation of endometrial tissue may be causally related or just an epiphenomenon. Due to local competition for 5alpha-reduction of testosterone and the excess of progesterone in the secretory phase, the level of dihydrotestosterone (DHT) will be diminished. Hypothetically, if AR synthesis in endometrium would be DHT-dependent, it would explain the lack of AR expression in the late secretory phase.     

补肾调经方、逍遥丸对小鼠卵母细胞GDF-9表达的比较研究

目的:观察补肾法、疏肝法对小鼠卵母细胞生长分化因子-9(growth differerntiation factor-9,GDF-9)蛋白及mRMA表达的影响。方法:将300只小鼠随机分为6组:补肾高、低剂量组;疏肝高、低剂量组;控制性超促排卵(COH)组和空白对照组,每组50只,应用Western blotting和Real-time PCR方法分别测定卵母细胞中GDF-9蛋白和mRNA的表达,并对比各组小鼠卵母细胞数量及优质卵泡率。结果:各治疗组卵母细胞中GDF-9蛋白及mRNA表达显著高于空白对照组及COH组,其中高剂量组优于低剂量组(P0.05),COH组的GDF-9蛋白及mRNA表达较空白对照组降低(P0.05);各治疗组及COH组卵母细胞数量高于空白对照组(P0.05),治疗组中高剂量组卵母细胞数量高于低剂量组(P0.05);各治疗组及空白对照组优质卵泡率优于COH组(P0.05),治疗组中高剂量组的优质卵泡率优于空白对照组(P0.05)。结论:补肾调经方、逍遥丸在促性腺激素应用的基础上能增加卵母细胞数量及优质卵泡率,其机制可能与调控卵母细胞中GDF-9的蛋白及mRNA表达有关。     

米非司酮对离体异位与在位子宫内膜雌、孕激素受体含量的影响

目的　探讨子宫内膜异位症(内异症)的异位与在位内膜雌、孕激素受体(ER、PR)含量,及米非司酮对其影响。方法　采用免疫细胞化学法,分析22例内异症患者的在位内膜细胞和其中12例患者的异位内膜细胞体外培养后的ER、PR含量,观察不同浓度米非司酮(1×10-6mol/L和1×10-4mol/L)作用后的变化,并以13例正常子宫内膜作对照。结果　内异症的在位内膜ER、PR含量呈明显周期性变化,分泌早期腺体PR含量显著高于正常子宫内膜［组织化学评分(下同)为2.77±0.32与2.20±0.26,P<0.05］。内异症的异位内膜,增殖期ER(腺体0.65～2.17,间质0.45～1.03)、PR含量(腺体0.55～1.77,间质0.40～1.27)显著低于在位内膜(ER腺体1.50～3.23,间质0.80～1.96;PR腺体1.55～3.34,间质0.98～2.50,P<0.05～0.01);分泌早期无差异;分泌晚期腺体ER含量(3.27±0.31)、PR含量(3.33±0.23)与间质ER含量(1.87±0.31)显著高于在位内膜(分别为0.28±0.11、0.36±0.23和0.26±0.15,P<0.01),而间质PR含量无差异。米非司酮可明显降低内异症的异位和在位内膜ER、PR含量(P<0.01),且米非司酮浓度越高,ER、PR含量降低越明显。结论　内异症的异位和在位内膜ER、PR含量明显不同,米非司酮可下调异位和在位内膜ER、PR的含量。