虫草素对高糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨虫草素对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及其机制。方法原代培养HUVECs,实验分为空白对照组、模型组、对照组、抑制剂A组、抑制剂B组、干预A组、干预B组和低、中、高浓度虫草素组。空白对照组给予正常糖浓度(5.5 mmol·L^-1);模型组给予40 mmol·L^-1高糖孵育48 h;对照组给予10μmol·L^-1白藜芦醇+高糖;低、中、高浓度虫草素组分别给予1,10,20μmol·L^-1虫草素+高糖;抑制剂A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+高糖;抑制剂B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+高糖;干预A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+20μmol·L^-1虫草素+高糖;干预B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+20μmol·L^-1虫草素+高糖。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷-酶联免疫吸附法检测光密度值观察细胞增殖能力,用Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶流式细胞术检测细胞凋亡率,用实时荧光定量聚合酶链反应检测沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)mRNA的表达水平,用Western Blot检测SIRT1蛋白的表达水平。结果模型组、对照组和低、中、高浓度虫草素组以及干预A组、干预B组的增殖能力(光密度值)分别为(1.38±0.11),(1.86±0.06),(1.44±0.03),(1.60±0.05),(1.70±0.08),(1.85±0.04)和(1.85±0.06),细胞凋亡率分别为(6.72±1.00)%,(0.56±0.37)%,(3.86±0.16)%,(2.64±0.23)%,(2.16±0.15)%,(1.57±0.28)%和(0.86±0.20)%,SIRT1 mRNA表达相对倍数分别为(0.24±0.05),(2.97±0.41),(0.62±0.07),(1.37±0.18),(2.14±0.35),(3.45±0.76)和(3.02±0.79)。模型组、对照组、高浓度虫草素组、抑制剂B组和干预B组的SIRT1蛋白表达分别为(0.82±0.11),(1.14±0.29),(0.98±0.13),(0.74±0.19)和(1.30±0.20)。对照组和高浓度虫草素组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预A组和干预B组的细胞增殖力及SIRT1 mRNA表达水平与高浓度虫草素组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预B组细胞凋亡率与高浓度虫草素组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干预B组SIRT1蛋白表达与抑制剂B组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论虫草素可能通过促进SIRT1表达,从而起到保护高糖损伤的内皮细胞作用。     

新型精胺氧化酶抑制药对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响北大核心CSCD

目的研究新型精胺氧化酶抑制药SI-4650对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法将SGC-7901细胞分为空白组(正常培养)、低、高剂量实验组(40、80μmol·L^(-1)SI-4650)、自噬抑制药3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(2.5 mmol·L^(-1)3-MA)、3-MA+低、高剂量实验组(2.5 mmol·L^(-1)3-MA+40、80μmol·L^(-1)SI-4650),均处理48 h。用化学发光法检测细胞中精胺氧化酶(SMO)活性,用细胞计数8(CCK8)法和流式细胞术检测细胞增殖和周期,用碘化丙啶(PI)/异硫氰酸荧光素(FITC)-Annexin V双染法检测凋亡细胞情况,用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管结合蛋白轻链-3Ⅰ/Ⅱ(LC3-Ⅰ/Ⅱ)表达水平。结果空白组与低、高剂量实验组中人胃癌SGC-7901细胞中相对SMO酶活性分别为(7293±195)、(4506±195)、(989±115)RLU·(mg·s)^(-1),S期细胞比例分别为(28.83±1.17)%、(32.23±1.21)%、(36.50±0.73)%,低、高剂量实验组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。空白组与低、高剂量实验组以及3-MA组与3-MA+低剂量实验组、3-MA+高剂量实验组中可见,细胞生长抑制率分别为(0.00±2.09)%、(43.61±2.29)%、(52.16±2.49)%、(1.81±4.43)%、(27.50±1.88)%、(34.22±1.07)%,细胞凋亡率分别为(7.01±2.09)%、(13.16±1.59)%、(25.35±2.32)%、(7.13±2.09)%、(8.61±1.59)%、(11.35±2.32)%,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.01±0.03、0.58±0.04、2.73±0.03、0.03±0.01、0.06±0.02、0.23±0.03。低、高剂量实验组与空白组相比,低、高剂量实验组与对应浓度3-MA+低、高剂量实验组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论SI-4650能高效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,机制可能与干扰多胺代谢、阻滞细胞周期S期和诱导细胞自噬、凋亡相关。     

奈必洛尔对西地那非降低大鼠离体肺动脉环张力的影响北大核心CSCD

目的观察奈必洛尔与西地那非对大鼠离体肺动脉环和胸主动脉环的舒张特性并研究两药对肺循环和体循环的选择性和协同作用。方法制备离体肺动脉环和胸主动脉环。按照血管收缩剂不同,分为去氧肾上腺素(Phe)组和5-羟色胺(5-HT)组,Phe组用Phe 1×10^(-6)mol·L^(-1)预收缩血管环,加入奈必洛尔1×10^(-9)~1×10^(-4)mol·L^(-1)或西地那非1×10^(-9)~1×10^(-4)mol·L^(-1),或以奈必洛尔3×10^(-6)mol·L^(-1)孵化血管环后,再给予系列浓度的西地那非1×10^(-9)~1×10^(-4)mol·L^(-1),测定血管环的张力。5-HT组先给予60 mmol·L^(-1)KCl使血管环达到最大收缩,分别用奈必洛尔1×10^(-9)~1×10^(-4)mol·L^(-1)或西地那非1×10^(-9)~1×10^(-4)mol·L^(-1)孵育,再加入5-HT 1×10^(-6)~1×10^(-4)mol·L^(-1)或1×10^(-6)~5×10^(-4)mol·L^(-1),观察5-HT累积浓度-反应曲线的变化。对照组不加药物孵育,加入5-HT 1×10^(-6)~1×10^(-4)mol·L^(-1)或1×10^(-6)~5×10^(-4)mol·L^(-1),作其累积浓度-反应曲线;予或不予左旋-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)1×10^(-4)mol·L^(-1)孵育血管环后,加入奈必洛尔1×10^(-5)mol·L^(-1)或西地那非1×10^(-7)mol·L^(-1)或1×10^(-5)mol·L^(-1)孵育,得到5-HT 1×10^(-6)~1×10^(-4)mol·L^(-1)或1×10^(-6)~5×10^(-4)mol·L^(-1)累积浓度-效应曲线并比较。结果 Phe组,奈必洛尔或西地那非可以浓度依赖性地降低肺动脉环和胸主动脉环张力;奈必洛尔对两血管环的舒张作用差异无统计学意义(P>0.05);西地那非对肺动脉环的舒张作用较胸主动脉环强,差异有统计学意义(均P<0.01);奈必洛尔增强西地那非的舒张作用,与单用西地那非相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。5-HT组,低、高2个浓度(1×10^(-7),1×10^(-5)mol·L^(-1))或(1×10^(-5),1×10^(-4)mol·L^(-1))的奈必洛尔、低、高2个浓度(1×10^(-9),1×10^(-7)mol·L^(-1))或(1×10^(-5),5×10^(-5)mol·L^(-1))的西地那非分别浓度依赖性地减弱5-HT对肺动脉环或胸主动脉环的收缩作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),两药用于胸主动脉环的有效浓度比肺动脉环的高出100倍。L-NAME可减弱奈必洛尔或西地那非对5-羟色胺收缩的两血管环的舒张作用,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论奈必洛尔及西地那非浓度依赖性地降低肺动脉环和胸主动脉环的张力,奈必洛尔可增强西地那非的作用,两药对肺动脉环具有更高的选择性。     

PPARγ介导卡托普利改善高糖诱导血管内皮细胞胰岛素抵抗的作用

目的研究卡托普利(captopril,Cap)对高糖(high glucose,HG,33 mmol·L-1)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelium cells,HUVECs)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用及机制。方法首先观察Cap对HG(33 mmol·L-1)诱导的HUVECs IR的改善作用。实验随机分为5组,即正常对照(Control)组、IR组、IR+CapⅠ(1×10-6mol·L-1)组、IR+CapⅡ(1×10-5mol·L-1)组、IR+CapⅢ(1×10-4mol·L-1)组。其次证实Cap改善HG(33mmol·L-1)诱导HUVECs IR的作用是由PPARγ介导。实验随机分为6组,即Control组、IR组、IR+Cap(1×10-5mol·L-1)组、PPARγ抑制剂GW9662(PI,1.0μmol·L-1)组、IR+PPARγ抑制剂(IR+PI,1.0μmol·L-1)组、IR+Cap+PPARγ抑制剂(IR+Cap+PI,1.0μmol·L-1)组,除Control组和PI组外,所有各组先用含33 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养48 h,Cap各组再加不同浓度的Cap处理4 h,最后胰岛素(100 nmol·L-1)处理30 min,抑制剂组再加抑制剂(1.0μmol·L-1)处理1 h,最后进行指标检测。结果 IR组NO水平明显降低、ET-1含量明显升高,提示细胞已产生IR,但PPARγmRNA和蛋白表达水平与Control组相比差异无统计学意义(P>0.05);Cap呈浓度依赖性逆转HG诱导NO和ET-1水平的改变,明显增加磷酸化PPARγ(PPPARγ)水平,说明其可明显改善HG诱导的IR,但对PPARγmRNA和蛋白表达水平无明显影响(vs IR,P>0.05);加PI处理后,Cap改善IR的作用完全取消,提示Cap改善IR的作用是由PPARγ介导。结论Cap可通过PPARγ介导改善高糖所致血管内皮细胞IR,其机制可能与PPARγ表达水平无关,而与PPARγ激活有关。     

红车轴草总黄酮通过调控miR-99a-3p/CD36表达对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞的保护作用北大核心CSCD

目的研究红车轴草总黄酮对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞损伤的影响,及其潜在的分子机制。方法本实验分为对照组,模型组,低、中、高剂量实验组,miR-NC组,miR-99a-3p组,anti-miR-NC,anti-miR-99a-3p组,模型+miR-NC组,模型+miR-99a-3p组,模型+si-NC组,模型+si-CD36组,高剂量实验+anti-miR-NC组和高剂量实验+anti-miR-99a-3p组。对照组给予5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;模型组给予25 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;低、中、高剂量实验组分别给予12.5,25.0和50.0 mg·L^(-1)红车轴草总黄酮和25 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;miR-NC组、miR-99a-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-99a-3p组分别转染miR-NC、miR-99a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-99a-3p;模型+miR-NC组、模型+miR-99a-3p组、模型+si-NC组、模型+si-CD36组均给予25 mmol·L^(-1)葡萄糖处理,并分别转染miR-NC、miR-99a-3p、si-NC、si-CD36;高剂量实验+anti-miR-NC组、高剂量实验+anti-miR-99a-3p组均给予50.0 mg·L^(-1)红车轴草总黄酮+25 mmol·L^(-1)葡萄糖,并分别转染anti-miR-NC或anti-miR-99a-3p。用流式细胞术测定细胞凋亡率,用定量实时聚合酶链反应检测细胞中miR-99a-3p和CD36 mRNA的表达水平。结果模型组INS-1细胞中CD36 mRNA(2.74±0.27 vs 1.01±0.08)和细胞凋亡率[(27.63±2.71)%vs(5.69±0.58)%]均较对照组显著升高,miR-99a-3p(0.38±0.03 vs 1.00±0.09)较对照组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量实验组的上述结果相反。模型+miR-99a-3p组的细胞凋亡率[(12.48±1.19)%vs(26.84±2.41)%]较模型+miR-NC组显著降低,miR-99a-3p表达量(0.79±0.07 vs 0.34±0.03)较模型+miR-NC组显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型+si-CD36组INS-1细胞中CD36 mRNA(1.35±0.12 vs 2.81±0.26)及细胞凋亡率[(13.54±1.32)%vs(25.87±2.52)%]均较模型+si-NC组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高剂量实验+anti-miR-99a-3p组INS-1细胞中miR-99a-3p(0.43±0.14 vs 0.88±0.06)较高剂量实验+anti-miR-NC组显著降低,CD36 mRNA(2.51±0.22 vs 1.41±0.13)及细胞凋亡率[(20.45±2.03)%vs(10.56±1.02)%]均较高剂量实验+anti-miR-NC组显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红车轴草总黄酮可能通过调控miR-99a-3p/CD36以减轻高糖对大鼠胰岛β细胞INS-1的损伤,进而抑制细胞的凋亡。     

β-蜕皮甾酮对高糖诱导的大鼠成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的探讨β-蜕皮甾酮对高糖诱导的大鼠成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响及分子机制。方法将大鼠成骨细胞随机分为空白组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、模型组(25 mmol·L-1葡萄糖)、低、中、高剂量实验组(1,5,25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)、p38 MAPK激活组(10μmol·L-1 anisomycin+25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)、阴性对照组(与anisomycin等量的PBS+25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹法检测Run相关基因2(RunX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白表达。结果空白组、模型组、低、中、高剂量实验组、阴性对照组、p38 MAPK激活组大鼠成骨细胞活性分别为(102.41±5.34)%,(68.57±5.25)%,(75.36±7.06)%,(79.13±8.24)%,(83.20±8.89)%,(83.17±8.93)%,(71.11±6.16)%;细胞凋亡率分别为(4.23±0.56)%,(18.57±1.96)%,(13.08±1.34)%,(10.30±0.95)%,(8.25±1.08)%,(8.36±1.12)%,(16.48±1.56)%;RunX2蛋白表达水平分别为0.81±0.07,0.31±0.04,0.45±0.06,0.55±0.04,0.61±0.08,0.63±0.07,0.41±0.05;ALP蛋白表达水平分别为0.75±0.08,0.38±0.05,0.49±0.07,0.59±0.05,0.65±0.08,0.68±0.07,0.44±0.06;OCN蛋白表达水平分别为0.69±0.05,0.28±0.03,0.34±0.05,0.47±0.04,0.45±0.05,0.46±0.05,0.31±0.04;p-p38 MAPK蛋白表达水平分别为0.22±0.04,0.84±0.09,0.59±0.06,0.41±0.04,0.32±0.04,0.32±0.07,0.74±0.07;模型组与空白组相比,低、中、高剂量实验组与模型组相比,p38 MAPK激活组与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论β-蜕皮甾酮可能通过抑制p38 MAPK信号通路促进大鼠成骨细胞增殖、分化,抑制细胞凋亡。     

硼替佐米联合5-杂氮胞苷抑制JAK/STAT信号通路对T细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究硼替佐米联合5-杂氮胞苷对T细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡及机制。方法对照组Jurkat细胞以3μmol·L^(-1)5-杂氮胞苷处理,低、中、高剂量实验组以10,30,50 nmol·L-1的硼替佐米+3μmol·L^(-1)5-杂氮胞苷处理,空白组加等量生理盐水。用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡,用蛋白免疫印迹法检测细胞JAK/STAT信号通路蛋白表达。结果干预72h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞增殖抑制率分别为(39.05±2.63)%,(31.26±2.43)%,(60.12±3.05)%,(72.16±3.64)%。干预24,48,72 h后,中、高剂量实验组细胞增殖抑制率均高于对照组,且随硼替佐米浓度增大及作用时间延长逐渐升高(P<0.05)。干预48 h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞凋亡率均显著高于空白组。对照组和低、中、高剂量实验组细胞增殖指数低于空白组,凋亡率高于空白组(均P<0.05);且实验组增殖指数均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组(均P<0.05)。空白组、对照组和低、中、高剂量实验组Janus激酶1(JAK1)蛋白相对表达量为2.68±0.22,2.15±0.31,1.82±0.25,1.53±0.15,0.89±0.14,TYK2蛋白相对表达量为3.84±0.56,2.25±0.46,2.37±0.39,2.26±0.33,1.28±0.26;对照组和低、中、高剂量实验组Janus激酶1(JAK1)、TYK2蛋白相对表达量均低于空白组(均P<0.05),低、中、高剂量实验组JAK1蛋白及高剂量实验组TYK2蛋白相对表达量低于对照组(均P<0.05)。结论硼替佐米可协同增强5-杂氮胞苷抑制T细胞淋巴瘤细胞的增殖,并促其凋亡,其作用机制与显著抑制JAK/STAT信号通路中蛋白表达有关。     

JQ-1联合小豆蔻明对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨JQ-1与小豆蔻明(CAR)联用对乳腺癌细胞MCF-7增殖和细胞凋亡的影响。方法将MCF-7细胞实验分为空白组(不给药)、对照组(10.00μmol·L^(-1)CAR)、实验组(25.00μmol·L^(-1)JQ-1)及联合组(10.00μmol·L^(-1)CAR+25.00μmol·L^(-1)JQ-1)。4组细胞均培养48 h。用CCK-8法检测细胞的增殖能力,用Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和活化后胱天蛋白酶7(Cleaved Caspase7)的表达水平。结果联合组、实验组、对照组和空白组的增殖率分别为(47.79±11.27)%、(66.75±26.56)%、(74.57±13.59)%和(100.00±0)%,细胞晚期凋亡率分别为(24.17±1.27)%、(7.07±0.80)%、(14.70±3.12)%和(4.98±2.98)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.87±0.02、1.11±0.06、1.09±0.03和1.00±0.00,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.31±0.05、0.96±0.06、0.96±0.16和1.00±0.00,Cleaved Caspase7蛋白相对表达水平分别为2.70±0.04、1.51±0.03、1.28±0.01和1.00±0.00。联合组的上述指标与空白组、对照组、实验组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论JQ-1与CAR联用对乳腺癌细胞MCF-7具有增强抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,其作用机制可能与调控PI3K/AKT通路相关。     

白杨素对高糖损伤血管内皮的影响

目的探讨急性高糖条件下,白杨素(chrysin,Ch)对血管内皮舒张功能的影响。方法 (1)采用离体血管环实验,设立正常对照组(control)、白杨素处理组(Ch),观察正常糖浓度时,白杨素对大鼠离体主动脉的舒张作用;设立正常糖浓度组(NG,11 mmol·L~(-1) Glu)、高糖实验组(HG,44 mmol·L~(-1) Glu)、甘露醇对照组(M,11 mmol·L~(-1) Glu+33 mmol·L~(-1) Man)和白杨素急性给药组(HG+Ch,44 mmol·L~(-1) Glu+chrysin 1.0μmol·L~(-1) ),观察急性高糖孵育后,白杨素对大鼠离体主动脉舒张功能的影响。(2)采用HUVEC细胞系,设立正常糖浓度组(NG,5.5 mmol·L~(-1) Glu)、高糖实验组(HG,33.3 mmol·L~(-1) Glu)、甘露醇对照组(M,5.5 mmol·L~(-1) Glu+27.8 mmol·L~(-1) Man)以及不同浓度白杨素处理组(Ch 25、50μmol·L~(-1) ),观察白杨素对高糖孵育HUVEC细胞存活率的影响,并检测各组NO释放量。结果 (1)正常糖浓度时,白杨素能浓度依赖性地舒张大鼠主动脉环,其Emax和EC50为(58.94±9.61)%、51.9μmol·L~(-1) (P<0.01);高糖浓度时,HG组ACh诱导的血管舒张反应性明显降低,其Emax与EC50值分别下降至(32.12±3.92)%、78.0μmol·L~(-1) (P<0.01),但硝普钠(SNP)诱导的血管舒张无变化;白杨素急性干预后,可以明显改善高糖对ACh诱导的血管内皮依赖性舒张功能的损伤,其Emax与EC50值分别为(70.7±3.87)%和0.852μmol·L~(-1) (P<0.01)。(2)HUVEC高糖处理后,细胞存活率降低至(82.56±3.97)%,白杨素(25、50μmol·L~(-1) )干预后能浓度依赖地增强HUVEC的细胞存活率,其细胞存活率可分别增至(103.4±4.78)%、(107.6±11.58)%;并且能提高高糖处理后细胞培养液NO的释放量。结论白杨素可以保护急性高糖损伤的血管内皮舒张功能,并增加内皮NO释放。     

柴胡皂苷D通过NOB1影响血管瘤内皮细胞凋亡北大核心CSCD

目的研究柴胡皂苷D对血管瘤内皮细胞凋亡的影响和机制。方法将人血管瘤内皮细胞分成对照组、实验组、pcDNA-NC组、pcDNA-NOB1组、实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组。对照组细胞正常培养;实验组在0 h时给予80μmol·L^(-1)的柴胡皂苷D处理;pcDNA-NC组、pcDNA-NOB1组在实验前24 h分别转染pcDNA-NC、pcDNA-NOB1;实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组转染后在0 h时用80μmol·L^(-1)的柴胡皂苷D处理。以MTT实验检测细胞增殖,以流式细胞术检测凋亡,以蛋白质印迹法(Western blot)检测NOB1、细胞色素C(Cyt C)蛋白表达。结果对照组、实验组血管瘤内皮细胞中NOB1蛋白表达量分别为0.78±0.10和0.40±0.05,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、实验组、实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组血管瘤内皮细胞增殖活力(OD值)分别为0.53±0.06,0.26±0.04,0.27±0.03和0.34±0.02;这4组的凋亡率为(6.35±0.58)%,(20.34±2.62)%,(19.87±1.94)%和(8.61±1.05)%;这4组的胞浆中Cyt C蛋白表达量分别为0.22±0.03,0.45±0.05,0.42±0.05和0.30±0.03。上述指标,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验组+pcDNA-NOB1组与实验组+pcDNA-NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柴胡皂苷D通过下调NOB1激活线粒体凋亡途径诱导血管瘤内皮细胞凋亡。     

大黄素对重症胰腺炎肾损伤模型大鼠血清缺氧诱导因子-1α及糖原合酶激酶-3β水平的影响北大核心CSCD

目的研究大黄素对重症胰腺炎肾损伤大鼠血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)水平影响。方法将60只大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、对照组和实验组,每组12只。模型组和试验组注入牛磺胆酸钠0.1 mL/100 g建立重症胰腺炎肾损伤大鼠模型;假手术组和对照组打开腹腔后仅轻轻翻动十二指肠以及胰腺;空白组大鼠未作任何处理。空白组、假手术组、模型组均予以腹腔注射5μL·g-10.9%Na Cl q6 h;对照组和实验组均按25μg·g-1剂量予以腹腔注射5 g·L^(-1)大黄素q6 h。术后3,6,12h,比较各组大鼠的血清肌酸酐(SCr)、尿素氮(BUN)、HIF-1α和GSK-3β水平。结果空白组、假手术组、对照组和实验组的胰腺组织病理学评分分别为(1.30±0.14),(1.39±0.14),(1.40±0.15)和(2.73±0.30)分,与模型组的胰腺组织病理学评分(9.84±1.05)分相比,差异均有统计学意义(均P<0.05),且实验组的胰腺组织病理学评分与空白组、假手术组、对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。术后3 h,空白组、假手术组、对照组、模型组和实验组的SCr分别为(60.46±6.78),(61.52±6.78),(60.38±6.74),(120.57±13.43)和(95.35±9.85)μmol·L^(-1),BUN分别为(7.47±0.79),(8.02±0.92),(7.93±0.83),(12.49±1.53)和(8.56±0.89)mmol·L^(-1),HIF-1α分别为(225.46±23.57),(210.57±23.58),(229.67±6.74),(160.46±17.47)和(144.57±14.85)μg·L^(-1),GSK-3β分别为(6.59±0.69),(6.57±0.69),(6.74±0.68),(19.95±2.13)和(10.56±1.39)μg·L^(-1)。术后6 h,空白组、假手术组、对照组、模型组和实验组的SCr分别为(60.57±6.79),(60.55±6.76),(59.50±6.76),(143.57±15.47)和(110.57±12.55)μmol·L^(-1),BUN分别为(7.65±0.84),(8.11±0.93),(8.29±0.92),(15.46±1.64)和(12.35±1.37)mmol·L^(-1),HIF-1α分别为(226.46±24.04),(222.46±23.57),(230.57±24.05),(155.36±15.74)和(127.57±12.84)μg·L^(-1),GSK-3β分别为(6.25±0.67),(6.71±0.69),(6.82±0.71),(25.34±2.64)和(11.56±1.27)μg·L^(-1)。术后12 h,空白组、假手术组、对照组、模型组和实验组的SCr分别为(60.61±6.79),(61.68±6.79),(61.54±6.78),(166.45±17.05)和(131.45±13.46)μmol·L^(-1),BUN分别为(8.03±0.85),(7.98±0.82),(8.79±0.93),(18.66±19.46)和(15.35±1.63)mmol·L^(-1),HIF-1α分别为(219.57±23.63),(226.35±24.04),(220.25±24.04),(148.46±18.94)和(117.46±12.04)μg·L^(-1),GSK-3β分别为(6.77±0.69),(6.70±0.70),(6.86±0.70),(35.02±3.76)和(20.35±2.13)μg·L^(-1)。空白组、假手术组、对照组术后3,6,12 h的SCr、BUN、HIF-1α、GSK-3β与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),且实验组与模型组术后3,6,12 h的SCr、BUN、HIF-1α、GSK-3β比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论大黄素可能通过上调血清HIF-1α和GSK-3β水平,提高肾细胞耐缺氧的能力,从而发挥对重症急性胰腺炎肾损伤的保护作用。     

川芎嗪对子宫内膜异位症细胞侵袭和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨川芎嗪调控长链非编码RNA(lncRNA)UBOX5-AS1对子宫内膜异位症细胞侵袭、凋亡和基质金属蛋白酶9(MMP-9)/基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)信号通路的影响。方法 分离人子宫内膜异位症细胞,分成对照组、实验低剂量组(12μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验中剂量组(24μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验高剂量组(48μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验高剂量+NC组(48μmol·L^(-1)川芎嗪、阴性对照载体处理)、实验高剂量+UBOX5-AS1组(48μmol·L^(-1)川芎嗪、UBOX5-AS1过表达载体处理)。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测UBOX5-AS1表达,以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞术测定细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、MMP-9、TIMP-3蛋白表达,以Transwell小室检测细胞侵袭。结果 对照组、实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组、实验高剂量+NC组、实验高剂量+UBOX5-AS1组子宫内膜异位症细胞中UBOX5-AS1表达水平分别为1.00±0.07,0.84±0.14,0.67±0.05,0.45±0.06,0.44±0.06和0.92±0.09;细胞存活率分别为(100.00±4.38)%,(83.87±5.45)%,(68.86±2.85)%,(52.17±4.64)%,(51.15±3.54)%和(79.92±5.99)%;凋亡率分别为(2.41±0.27)%,(9.60±0.93)%,(14.89±1.15)%,(17.54±0.96)%,(17.27±1.71)%和(9.75±1.28)%;Bax蛋白表达水平分别为0.26±0.04,0.33±0.03,0.40±0.02,0.53±0.03,0.54±0.04和0.34±0.03;细胞侵袭数目分别为105.32±5.66,79.05±7.80,64.59±4.09,51.50±3.28,50.61±5.13和72.08±9.37;上述指标之间比较,实验低、中、高剂量组和对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验高剂量+UBOX5-AS1组与实验高剂量+NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 川芎嗪下调UBOX5-AS1抑制子宫内膜异位症细胞侵袭,诱导细胞凋亡,抑制MMP-9/TIMP-3信号激活。     

柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶通路的调控效应研究

目的探讨柚皮素对体外培养的Aβ_25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关信号通路的调控机制。方法将生长至对数期的PC12细胞接种于培养瓶培养24 h,弃掉旧培养液后,随机分为空白组(培养液)、模型组(150μmol·L-1 Aβ_25-35)、实验组-1(4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35)和实验组-2(10μmol·L-1 U0126+4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35),使每组细胞浓度为20μmol·L-1(除空白组),给药24 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测各组细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)的蛋白表达量。结果空白组、模型组、实验组-1、实验组-2的细胞总凋亡率分别为(4.13±0.55)%,(34.70±1.66)%,(11.26±0.77)%,(23.52±0.80)%;Bax蛋白表达量分别是0.24±0.06,0.76±0.03,0.21±0.02,0.68±0.04;Bcl-2蛋白表达量0.61±0.04,0.20±0.04,0.55±0.03,0.34±0.02;Caspase-3蛋白表达量0.13±0.03,0.40±0.03,0.21±0.04,0.31±0.02;p-ERK1/2蛋白表达量0.86±0.03,0.48±0.06,0.78±0.04,0.50±0.07。模型组与空白组、实验组与模型组和实验组-2与实验组-1比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.01)。结论柚皮素可通过丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase, ERK)信号通路改变Bax、Caspase-3、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达量,抑制细胞凋亡,对Aβ_25-35损伤的PC12细胞有保护作用。     

姜黄素逆转食管癌Eca-109/VCR细胞耐药性的研究

目的探讨姜黄素(Cur)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路对人食管癌耐药Eca-109/VCR细胞耐药的逆转作用。方法实验分为空白组、实验A组、实验B组、联合组和低、中、高剂量对照组。空白组给予不含药物的完全培养基进行培养;实验A组给予含20μmol·L^-1 Cur的完全培养基进行培养;实验B组给予含2μg·mL^-1长春新碱(VCR)的完全培养基进行培养;联合组给予含20μmol·L^-1 Cur和2μg·mL^-1VCR的完全培养基进行培养;低、中、高剂量对照组分别给予含10,20和40μmol·mL^-1 SB203580的完全培养基进行培养。干预24 h后,用蛋白质印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、切除修复交叉互补蛋白1(ERCC1)和P糖蛋白(P-gp)的表达情况。结果实验A组、实验B组、联合组和低、高剂量对照组的p38MAPK蛋白灰度值分别为1.94×10^4±2927.88,2.09×10^4±651.32,1.50×10^4±1101.53,1.99×10^4±1520.01和1.95×10^4±1875.74,p-p38MAPK蛋白灰度值分别为1.56×10^4±1829.24,1.78×10^4±1718.27,7049.47±1609.40,1.56×10^4±1178.13和4802.11±1842.59,ERCC1蛋白灰度值分别为1.79×10^4±1180.51,1.98×10^4±1245.39,1.34×10^4±1151.07,1.45×10^4±1273.49和6475.16±1293.79,P-gp蛋白灰度值分别为1.42×10^4±996.42,1.64×10^4±1349.59,9614.54±664.98,1.28×10^4±1164.95和6793.34±911.56。实验A组、实验B组和联合组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、高剂量对照组的p-p38MAPK、ERCC1和P-gp蛋白表达量与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);联合组的上述指标与实验B组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论有Cur逆转食管癌细胞多药耐药的作用可能与下调p38MAPK通路相关的p38MAPK、p-p38MAPK、ERCC1和P-gp蛋白表达有关。     

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。     

依托咪酯对垂体瘤细胞迁移能力影响的研究北大核心CSCD

目的研究依托咪酯对垂体瘤细胞迁移能力的影响及其作用机制。方法将实验分为空白组、对照组、实验A组和实验B组,分别用0.9%Na Cl、4mmol·m L^(-1)丙泊酚、10μmol·m L^(-1)依托咪酯和10μmol·m L^(-1)依托咪酯+荷包牡丹碱原液(DIDS)处理72 h。用电流钳技术观察垂体瘤细胞的表面氯离子通道电流,用Western blot法检测垂体瘤细胞中Akt蛋白表达,用划痕实验检测垂体瘤细胞的迁移能力。结果与空白组相比,对照组和实验A组可以显著增高同一电压刺激下垂体瘤细胞表面的氯离子通道电流的影响,差异均有统计学意义(均P<0.05),但空白组和实验B组对垂体瘤细胞表面的氯离子通道电流的影响,差异均无统计学意义(均P>0.05)。空白组、对照组、实验A组和实验B组的Akt蛋白表达量分别为(0.73±0.19),(0.32±0.08),(0.35±0.10)和(0.71±0.17)单位,Akt磷酸化水平分别为(0.68±0.17),(0.29±0.07),(0.31±0.09)和(0.65±0.14),迁移能力分别为(2.82±0.37),(1.26±0.15),(1.29±0.17)和(2.74±0.45)×10~5个,对照组和实验A组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论依托咪酯可以抑制垂体瘤细胞的迁移,其可能的机制是通过与细胞表面γ-氨基丁酸受体的结合刺激细胞表面氯离子通道开放,进而抑制Akt蛋白的表达,下调PI3K/Akt信号通路的活性,最终抑制垂体瘤细胞的迁移。     

香橙素通过PPARγ介导改善血管内皮细胞胰岛素抵抗

目的 研究鬼箭羽提取物香橙素(Aromadendrin,Aroma.)对高糖(High-Glucoes,HG)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelium cells,HUVECs)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用及机制.方法 实验随机分为5组,分别为对照组(Control),模型组(IR),香橙素处理组I(1×10-6mol·L-1)(IR+Aroma I)、香橙素处理组II(1×10-5mol·L-1)(IR+Aroma I-I)、香橙素处理组III(1×10-4mol·L-1)(IR+AromaⅢ).其次证明Aroma改善IR由PPARγ介导,实验分为6组,即对照组(Con-trol)、模型组(IR)、香橙素处理组(1×10-5mol·L-1)(IR+AromaⅡ)、PPARγ 抑制剂GW9662(PI,1.0μmol·L-1)组、IR+PI组(1.0μmol·L-1)组、香橙素处理II+PI(IR+AromaII+PI,1×10-5mol·L-1,1.0μmol·L-1)组,除Control组和PI组(采用含5.5mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养48h)外,剩余各组先用含33mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养48h后,Aroma各组再分别用上述浓度的Aroma处理4h,抑制剂组再加抑制剂PI(1.0μmol·L-1)处理1h,最后所有各组均用胰岛素(100nmol·L-1)处理30min,收集细胞上清液并提取蛋白,分别进行指标检测.结果 IR组NO水平显著下降、AngⅡ水平显著上升,说明IR模型建立成功;Aroma处理能显著逆转HG所致的NO与AngⅡ水平的改变,说明其可以改善HG诱导的IR,Aroma处理组p-PPARγ 蛋白表达量与PPARγmRNA表达量较IR组明显上升.加入PI处理后,Aroma改善IR情况则被逆转.结论 Aroma可以通过PPARγ介导改善HG诱导的IR.     

甘草酸联合Notch1 siRNA对肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究甘草酸(GA)联合Notch1小干扰RNA(siRNA)对肺癌细胞(HCC827)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法将HCC827细胞分为对照组(正常培养的细胞)、GA组(5.0 mmol·L^(-1) GA处理)、GA+si-NC组(5.0 mmol·L^(-1) GA处理转染si-NC的细胞)、GA+si-Notch1组(5.0 mmol·L^(-1) GA处理转染si-NC细胞)。用细胞计数(CCK-8)法、流式细胞术、Transwell实验检测各组细胞增殖、凋亡、迁移侵袭情况。结果对照组、GA组、GA+si-NC组、GA+si-Notch1组HCC827细胞活力(72 h)为1.00±0.12,0.70±0.09,0.63±0.04,0.46±0.06,迁移细胞数为136.00±8.88,60.00±8.96,66.00±6.08,34.00±3.21,侵袭细胞数为106.00±7.51,45.00±5.56,48.00±3.21,29.00±3.51,凋亡率分别为(6.31±0.83)%,(15.07±0.65)%,(14.87±0.47)%,(20.61±1.64)%,对照组与GA组比较、GA+si-NC组与GA+si-Notch1组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论甘草酸联合Notch1 siRNA1可抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。     

鸦胆子苦醇联合长波紫外线辐射对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的影响研究北大核心CSCD

目的观察鸦胆子苦醇联合长波紫外线(UVA)辐射对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的影响及机制。方法人恶性黑色素瘤A375细胞分为空白组、对照组和实验组。空白组细胞不做任何处理,对照组用75 k J·m^(-2)长波紫外线处理,实验组在75 k J·m^(-2)长波紫外线处理2 h后分别加入10,20,50,100,200nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇。检测各组细胞活性、细胞周期及凋亡率,检测人转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)通路及线粒体凋亡途径相关蛋白表达情况。结果对照组和实验组细胞活性均显著低于空白组,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞活性均显著低于对照组,且随鸦胆子苦醇作用浓度增大而逐渐降低(P<0.05或P<0.01)。对照组和10,20,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞凋亡率分别为(3.21±0.24)%,(3.45±0.26)%,(5.86±0.42)%,(12.62±1.12)%,(13.02±2.24)%,(16.15±2.78)%,均显著高于空白组的(0.89±0.12)%,20,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞凋亡率均明显高于对照组(均P<0.01)。对照组和实验组与空白组比较,人恶性黑色素瘤A375细胞G0/G1期细胞比例逐渐升高,G2/M和S期细胞比例逐渐降低(P<0.05或P<0.01)。空白组、对照组和50 nmol·L^(-1)实验组Nrf2蛋白相对表达量分别为1.69±0.23,1.23±0.24,1.03±0.15,谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)蛋白相对表达量分别为2.43±0.16,2.89±0.18,2.78±0.21,B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量分别为0.59±0.14,1.05±0.21,1.59±0.24,胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白相对表达量分别为2.63±0.15,2.71±0.26,2.63±0.28。与空白组比较,对照组和实验组人恶性黑色素瘤A375细胞Nrf2蛋白表达相对量降低,Bax和GSTP1蛋白表达相对量升高,caspase-3无明显变化。结论鸦胆子苦醇联合UVA辐射可抑制人恶性黑色素瘤A375细胞增殖,且存在一定的量效关系,与抑制Nrf2信号通路及激活线粒体凋亡途径相关蛋白,加速细胞凋亡有关。     

红景天苷对过氧化氢诱导SHSY-5Y细胞氧化应激损伤的影响北大核心CSCD

目的探究红景天苷通过沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,Sirt1)抑制过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y氧化应激损伤的机制。方法将对数生长期的人神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y随机分为空白组、模型组和低、中、高剂量实验组。空白组给予生理盐水处理,模型组给予100μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理,低、中、高剂量实验组先分别用1,10,100μmol·L^(-1)红景天苷处理后,再用100μmol·L^(-1)过氧化氢处理。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,以流式细胞术检测细胞凋亡率,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫荧光技术及蛋白质印迹(Western blot)法检测Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平。结果空白组、模型组和低、中、高剂量实验组的细胞活力分别为(100.00±5.99)%,(22.89±4.17)%,(30.75±6.01)%,(60.69±9.37)%,(80.81±4.38)%;凋亡率分别为(6.77±0.72)%,(68.53±11.07)%,(57.01±6.33)%,(46.41±8.54)%,(20.12±3.60)%;NOS水平分别为(0.41±0.08),(4.99±0.32),(4.24±0.24),(2.95±0.19),(2.33±0.25)ng·mL^(-1);SOD水平分别为(24.15±1.92),(10.65±0.78),(13.62±1.52),(17.01±1.63),(21.38±0.54)U·mg^(-1);MDA水平分别为(6.31±0.89),(15.40±1.03),(11.77±0.90),(9.95±1.01),(7.51±1.13)ng·mL^(-1);8-OHdG水平分别为(3.67±0.30),(10.99±1.04),(9.72±1.35),(6.89±0.33),(4.62±0.66)μmol·mg^(-1);模型组和空白组的上述指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、中、高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红景天苷对过氧化氢诱导SHSY-5Y细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与Sirt1蛋白激活相关。