抗P^185McAb的制备,鉴定及其在免疫组化检测的应用

本文以ＨＥＲ－２／ｎｅｕ癌基因表达产物为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，采用常规淋巴细胞杂交瘤技术立一株稳定分泌抗Ｐ＾１８５ＭｃＡｂ的杂交瘤株５Ｅ１２，ＭｃＡｂ５Ｅ１２属ＩｇＧ亚类，与ＳＫＢＲ－３，Ｔ４７Ｄ乳癌细胞系呈阳性反应，与ＨＴ２９，ＥＣ１０９，ＤＡＣ－１，ＳＰ２／０，成纤维细胞及小鼠ＮＩＨ３Ｔ３等细胞系列呈阴性反应，３０例乳癌组织石蜡切片同时以自制抗Ｐ＾１８５ＭｃＡｂ５Ｅ１２及进口ＭｃＡｂＣ－ｅ     

抗肺炎衣原体种特异性单抗制备及初步鉴定

以纯化的肺炎衣原体ＡＴＣＣＶＲ１３１０原体兔疫８周龄雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，并于第１４天加强免疫，第２４天将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合。杂交瘤细胞进行细胞与克隆的直接选择，在淘汰与沙眼衣原体Ｌ１、Ｌ２、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ鹦鹉热衣原体ＥＡＥ以及未感染的ＢＧＭＫ细胞有交叉反应的克隆后，最终获得２株分泌抗肺炎衣原体种特异性单克隆抗体（ＭＡｂ９）杂交瘤（Ｐ１７Ｃ２和Ｐ３３Ｃ），其免疫球蛋白类型均为ＩｇＧ２ａ。Ｗｅｓｔｅｍ印迹发现两株ＭＡｂｓ均与三个种的衣原体主要外膜蛋白反应，但ｍｉｃｒｏ－ＩＦ显示它们系肺炎衣原体种特异性单抗其腹水ＭＡｂｓ滴度＞１：２５６００。     

青霉烷砜酸和头孢哌酮复合剂体外抗菌效果的观察

作者对青霉烷砜酸（ＳＢＴ）与头孢哌酮（ＣＰＺ）的复合剂（ＣＰＺ－ＳＢＴ）进行体外ＭＩＣ和体内ＥＤ５０的测定。ＣＰＺ－ＳＢＴ对产β内酰胺酶的金黄色葡萄球菌１－９３株、大肠杆菌３－３９株和不产β内酰胺酶的金黄色葡萄球菌２５９２３株、大肠杆菌２５９２２株、肺炎链球菌９３０６２４株、铜绿假单胞菌９４０４１６株感染小鼠的ＥＤ５０分别为０．８３１２、１．０５２２、１．１９７７、１．５６３４、０．７７８３、１．２２０７ｍｇ／ｋｇ，ＣＰＺ分别为１．８４１８、２．５５３９、１．５７７８、１．８４１８、０．９７８１、１．４１５９ｍｇ／ｋｇ，ＳＢＴ几乎无任何抗菌活性。ＣＰＺ－ＳＢＴ对金黄色葡萄球菌１．９３株和大肠杆菌３９３株的ＭＩＣ分别为８和１６μｇ／ｍｌ，ＣＰＺ分别为３２和６４μｇ／ｍｌ，ＳＢＴ均＞１２８μｇ／ｍｌ。实验结果表明ＳＢＴ是活性很强的β内酰胺酶抑制剂，与ＣＰＺ合用对产β内酰胺酶的细菌有强大的体内、外抗菌作用。     

抗破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其中和效应的研究

采用破伤风类毒素（ＴＴ）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇（ＰＥＧ）ＷＭ４０００作用下进行配合，克隆化，通过ＥＬＩＳＡ法及毒素中和新价的检测获得两株（５Ｇ８，６Ｄ９）及多株亚株（５Ｇ８Ａ１０，５Ｇ８Ｂ９Ｃ１１，５Ｇ８Ｂ９Ｅ１等）有保护作用的细胞株，其中一株经过液氯冻存，复苏仍能正常分泌抗体。     

人IL—1,IL—1ra及IL—6在胸腺上皮细胞中的表达

应用ＭＴＴ及原位杂交技术对本室建立的人胸腺上皮样细胞株（ＴＥＣ１）分泌的细胞因子活性蛋白及其ｍＲＮＡ的表达进行了测定。结果表明，ＴＥＣ１细胞自发性分泌ＩＬ－１及ＩＬ－６活性蛋白，ＴＥＣ１细胞的起始浓度为５×１０４／ｍｌ，培养５天后，ＴＥＣ１细胞培养上清液中ＩＬ－１的活性平均为８４．６±１２．０Ｕ／ｍｌ；ＩＬ－６的活性平均为６５．４±１４．０Ｕ／ｍｌ；经原位杂交发现ＴＥＣ１具有ＩＬ－１、ＩＬ－１ｒａ及ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达。提示：ＴＥＣ１细胞分泌的上述三种细胞因子对Ｔ细胞的发育具有重要意义。     

牡丹皮流浸膏对实验性癫痫及小鼠自发活动的影响

目的研究牡丹皮流浸膏（ｅｘｔｒａｃｔｏｆｍｏｕｔａｎｃｏｒｔｅｘ，ＥＭＣ）对多种实验性癫痫模型及小鼠自发活动的影响。方法采用最大电惊厥（ｍａｘｉｍａｌｅｌｅｃｔｒｏｓｈｏｃｋｓｅｉｚｕｒｅ，ＭＥＳ）及戊四唑、士的宁、氨基脲等惊厥模型。结果ＥＭＣ（１１，相当于生药量３７５ｍｇｋｇ－１，５００ｍｇｋｇ－１，ｉｇ）可剂量依赖性对抗小鼠ＭＥＳ及戊四唑、士的宁、氨基脲所致小鼠惊厥作用。ＥＭＣ作用峰时为１～２ｈ；ＥＭＣ（２５０ｍｇｋｇ－１）可增强苯巴比妥抗ＭＥＳ作用。此外ＥＭＣ（２５０ｍｇｋｇ－１，ｉｇ）可剂量依赖性抑制小鼠自发活动。结论ＥＭＣ具有明显抗癫痫作用并可抑制小鼠自发活动。     

大鼠抗小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体的研制与鉴定

采用脾内免疫法，制备出两组大鼠抗小鼠胸腺基质细胞的大一小鼠Ｂ细胞杂交瘤，已获４０个单抗分泌细胞株。小鼠胸腺切片免疫组织化学染色结果：（１）髓质ＴＳＣ反应阳性，皮质ＴＳＣ反应阴性；（２）皮，髓质ＴＳＣ反应均呈阳性且强度相似；（３）髓质ＴＳＣ反应强于皮质ＴＳＣ；（４）皮质ＴＳＣ反应强于髓质ＴＳＣ；（５）胸腺细胞的反应呈弥漫性。本实验结果不仅有利于鉴别ＴＳＣ亚群并且对研究Ｔ细胞发育有重要意义。     

大鼠抗小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体的研制与鉴定

采用脾内免疫法，制备出两组大鼠抗小鼠胸腺基质细胞（Ｔｈｙｍｉｃｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，ＴＳＣ）的大－小鼠Ｂ细胞杂交瘤，已获４０个单抗分泌细胞株。小鼠胸腺切片免疫组织化学染色结果：（１）髓质ＴＳＣ反应阳性，皮质ＴＳＣ反应阴性；（２）皮、髓质ＴＳＣ反应均呈阳性且强度相似；（３）髓质ＴＳＣ反应强于皮质ＴＳＣ；（４）皮质ＴＳＣ反应强于髓质ＴＳＣ；（５）胸腺细胞的反应呈弥漫性。本实验结果不仅有利于鉴别ＴＳＣ亚群并且对研究Ｔ细胞发育有重要意义。     

分泌抗——HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬＩＳＡ效价的分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染     

分泌抗人早期T细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以胎儿胸腺细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术产生了两种单克隆抗体，分别命名为ＳＭＵ１３、ＳＭＵ１４。初步鉴定的结果表明，１）ＳＭＵ１３，ＳＭＵ１４是抗早期Ｔ淋巴细胞的单克隆抗体，但与浆细胞也发生反应；（２）两株单抗的特性，反应谱与ＣＤ３８抗原相似；（３）ＳＭＵ１３，ＳＭＵ１４在白血病免疫学分型中可以明确判断白血病细胞的来源，具有结合补体的能力，在急性Ｔ淋巴细胞白血病的治疗中可发挥     

胸腺基质细胞研究方法的进展

胸腺基质细胞（ｔｈｙｍｉｃｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ,ＴＳＣ）是指胸腺内的非胸腺细胞,主要由上皮细胞（ｔｈｙｍｉｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＴＥＣ）、成纤维细胞（ｔｈｙｍｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌ,ＴＦＣ）、巨噬细胞（ｔｈｙｍｉｃｍａｃｒｏｐｈａｇｅ,ＴＭ）、树突状细胞（ｔｈｙｍｉｃｄｅｕｔｒｔｉｃｃｅｌｌ,ＴＤＣ）组成［１,２］。近来还发现有肥大细胞（ｍａｓｔｃｅｌｌ）［３］和Ｂ细胞（ｔｈｙｍｉｃＢｃｅｌｌ,ＴＢＣ）［４］。由于胸腺微环境是由胸腺基质细胞和胸腺细胞共同构成［５,６］,而胸腺…     

内毒素对呼吸道上皮分泌内皮素、血栓烷素、前列腺素E_2的影响及氧自由基的介导作用

目的探讨内毒素对培养小牛呼吸道上皮分泌内皮素－１（ＥＴ－１）、血栓烷素（ＴＸＡ２）、前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的影响，并探讨氧自由基的介导作用。方法大肠杆菌内毒素（ＬＰＳ）与培养小牛呼吸道上皮细胞孵育４小时后，测定培养呼吸道上皮细胞上清液中ＥＴ－１、ＴＸＡ２、ＰＧＥ２的含量。结果内毒素可明显促进小牛呼吸道上皮细胞ＥＴ－１、ＴＸＡ２的分泌，抑制ＰＧＥ２分泌，并呈浓度依赖性，用氧自由基清除剂ＳＯＤ、Ｃａｔ预处理呼吸道上皮细胞可拮抗内毒素的作用。结论内毒素诱发支气管高反应性形成，可能与其促进呼吸道上皮分泌ＥＴ－１、ＴＸＡ２，抑制ＰＧＥ２分泌有关，氧自由基可能参与其诱发支气管高反应性过程。     

抗沙眼衣原体主要外膜蛋白种特异性单克隆抗体

用人工合成沙眼衣原体主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）氨基端１／４肽链免疫８周龄雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠３只，第１４天用Ｌ１／４４０／Ｂｕ原体加强免疫，第２４天将免疫反应良好的１只小鼠脾细胞与ＮＳ－１瘤细胞融合。用１／４ＭＯＭＰ和Ｌ１原体抗原包被的聚丙乙烯板检测上清中抗体，淘汰与鹦鹉热衣原体种（ＥＡＥ株）、肺炎衣原体种（ＡＴＣＣＶＲ１３１０株）以及正常组织培养细胞（ＢＧＭＫ）有交叉反应的克隆，最后得到４株抗沙眼衣原体特异性单克隆抗体（ＭＡｂｓ），其抗体属ＩｓＧ１和ＩｇＧ２ａ亚类。微量免疫荧光试验（ｍｉｃｒｏ－ＩＦ）发现４株ＭＡｂｓ均与本实验室制备的沙眼衣原体Ｌ１、Ｌ２、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ原体及Ｌ２包涵体抗原发生反应，并与沙眼衣原体所有１５个标准血清型结合，其腹水ＭＡｂｓ滴度≥１：１２８００。免疫印迹试验显示４株ＭＡｂｓ均与沙眼衣原体分子量为４００００的ＭＯＭＰ反应。     

小鼠胸腺基质细胞单抗体特性及生物功能研究

应用细胞ＥＬＩＳＡ用间接荧光染色技术，分析多种胸腺基质细胞（ＴＳＣ）单克隆抗体，结果表明不同的单抗与不同ＴＳＣ呈不同的阳性反应，其中Ｐｆ１８－３和Ｒｓ２１－Ｃ６单抗与小鼠胸腺基质细胞１－７（ＭＴＳＣ１－７）等多种细胞均呈强阳性反应，但荧光染色显示Ｐｆ１８－３和Ｒｓ２１－Ｃ６染色特征不一。将Ｐｆ１８－３或Ｒｓ２１－Ｃ６单抗加入ＴＳＣ与胸腺细胞共培养，发现两种单克隆抗体对胸腺基质细胞和胸腺细胞结合有明显抑制作用：Ｐｆ１８－３、Ｒｓ２１－Ｃ６对ＭＴＳＣ１与胸腺细胞结合的抑制率分别为６４．３％、４１．３％；对ＭＴＳＣ４与胸腺细胞结合的抑制率分别为６０．４％和３８．８％。试验表明Ｐｆ１８－３、Ｒｓ２１－Ｃ６两种单抗分别识别胸腺基质细胞表面抗原分子，且其识别的抗原分子参与了胸腺基质细胞与胸腺细胞的结合。     

蒺藜总皂甙抑制培养的牛脑微血管内皮细胞表达E选择素

目的：观察蒺藜总皂甙（ＧＳＴＴ）对牛脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）表达Ｅ选择素的影响。方法：流式细胞仪测定白细胞介素１β（ＩＬ－１β）诱导ＢＣＭＥＣ粘附大鼠血单核细胞（ＭＮＣ）和中性粒细胞（ＮＴＰ）的数目；应用ＥＬＩＳＡ法检测ＢＣＭＥＣ表达Ｅ选择素的量。结果：ＢＣＭＥＣ经ＩＬ－１β诱导后，明显增加细胞表面Ｅ选择素的表达；ＢＣＭＥＣ与白细胞的粘附率亦明显增加，对ＭＮＣ的粘附率从（１２．９±０．４）％增至（４５．７±０．６）％，对ＮＴＰ的粘附率从（１４．７±０．３）％增至（４４．９±０．６）％。抗Ｅ选择素单克隆抗体（ＡＥｍＡｂ）能显著降低ＩＬ－１β的诱导作用。在ＩＬ－１β处理前，用ＧＳＴＴ（０．０１～１．００ｇ／Ｌ）与ＢＣＭＥＣ共孵育，则ＧＳＴＴ可浓度依赖性地抑制ＩＬ－１β的诱导作用，降低Ｅ选择素的表达量。结论：ＧＳＴＴ能抑制ＢＣＭＥＣ表达Ｅ选择素     

分泌抗—HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬ／ＩＳＡ效价分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染色体数为９５～１１０条。结果证明，此细胞株为特异性分泌抗—Ｈｋｅ单克隆抗体细胞株。     

小鼠胸腺基质细胞单抗特性及生物功能研究

应用细胞ＥＬＩＳＡ用间接荧光染色技术，分析多种胸腺基质细胞（ＴＳＣ）单克隆抗体，结果表明不同的抗与不同ＴＳＣ呈不同的阳性反应，其中Ｐｆ１８－３和Ｒｓ２１－Ｃ６单抗与小鼠胸腺基质细胞１－７（ＭＴＳＣ１－７）等多种细胞均呈强阳性反应，但荧光染色显示Ｐｆ１８－３和Ｒｓ２１－Ｃ６染色特征不一。将Ｐｆ１８－３或Ｒｓ２１－Ｃ６单抗加入ＴＳＣ与胸腺细胞共培养，发现两种单克隆抗体对胸腺基质细胞和胸腺细胞结合有明显     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组ＨＣＶＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２Ｄ２,１Ｄ６,２Ｇ２,１Ｆ５和１Ｆ１０。这６株ＭｃＡｂ与ＮＳ５重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的ＥＩＡ抗体滴度为１∶４００～１∶１６００,其中１株诱生的同系小鼠腹水滴度为１∶８００００。这６株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１亚型。结论该ＭｃＡｂ的制备,可为ＨＣＶ感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。     

T—AK细胞上清液抑瘤活性的研究

本文应用ＭＴＴ比色法检测了ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗共同诱导激活的Ｔ－ＡＫ细胞培养上清液对Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制效应，并观察了Ｔ－ＡＫ上清液抑瘤活性与Ｔ－ＡＫ细胞杀伤活性的相关性，结果表明：（１）Ｔ－ＡＫ细胞能够自发分泌一些抑制Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制因子，但活性很低；（２）Ｔ－ＡＫ细胞在杀伤Ｋ５６２细胞过程中释放的抑制肿瘤细胞生长的物质，抑瘤活性比较高，共     

抗丙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初…

用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区合成肽作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细节与骨髓瘤细胞ＳＰ＾２／０进行融合。经有限稀释法克隆３代后获得一株抗ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株３Ｅ７，并对其分泌抗体进行初步鉴定。杂交瘤细胞培养上清的抗体滴度为１：３２０，诱生同系小鼠腹水的滴度为１：１２８００，该ＭｃＡｂ能与ＣＰ１０特异性结合，杂交瘤细胞染色体数目为１０６条。分泌的抗体为ＩｇＧ