蝙蝠葛碱对人膀胱癌T-24细胞株生长增殖的抑制作用

目的 探讨中药北豆根提取物蝙蝠葛碱(dauricine,Dau)对人膀胱癌T-24细胞株的增殖抑制作用及其作用机制.方法 应用MTT法测定了蝙蝠葛碱对泌尿系肿瘤细胞增殖反应的影响;采用流式细胞技术、荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳等技术测定和观察了蝙蝠葛碱对诱导肿瘤细胞凋亡的影响.结果 蝙蝠葛碱对膀胱癌T-24细胞株的增殖有较强的抑制作用,具有浓度依赖性特点.T-24细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性梯形条带.流式细胞分析,浓度为5～30μg/ml的蝙蝠葛碱具有诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用,且随着药物作用时间延长凋亡率逐渐增加,随药物浓度的增高细胞周期被阻滞在G0/G1期.T-24细胞的bcl-2基因表达受抑,而bax基因的表达上调.结论 蝙蝠葛碱可有效抑制人膀胱癌T-24细胞株的生长增殖,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起重要作用.     

辣椒素通过钙信号抑制感觉神经元的电压门控性钙离子通道

目的 研究辣椒素对大鼠背根神经节神经元的电压门控性钙离子通道的抑制效应及其信号机制.方法 在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,应用全细胞膜片钳技术记录电压激活性钙离子通道电流以及辣椒素诱导的电流,应用钙离子成像技术检测Ca2+浓度的变化.结果 辣椒素能够抑制大鼠DRG神经元的电压激活性钙离子通道电流.细胞外钾离子浓度显著升高引起细胞去极化并打开膜上电压门控性钙离子通道引起胞外Ca2+内流,辣椒素只在引起胞内Ca2+浓度显著升高的情况下才能抑制高钾诱导的电压门控性Ca2+内流.用咖啡因耗竭细胞内Ryanodine敏感性钙库以后,辣椒素引发的胞内钙浓度升高的效应被显著抑制,说明辣椒素可诱导胞内Ryanodine敏感性钙库释放Ca2+.结论 在辣椒素敏感性的大鼠DRG神经元中,辣椒索通过胞内钙信号抑制电压门控性钙离子通道.Ca2+信号部分来源于Ryanodine敏感性钙库.     

国内医学新闻

蝙蝠葛碱抗动脉粥样硬化作用的研究 同济医科大学党委宣传部(430050)袁立新报道 该校基础医学院博士研究生罗湘经多年研究首次证实,中药蝙蝠葛中的有效成分蝙蝠葛碱(Dau)具有明显的抗动脉粥样硬化(AS)作用。 Dau又称山豆根碱,是防己科植物蝙蝠葛(即中药北豆根)根茎中的一种单体成分。以往研究证明,Dau具有抗心律失常、抗心肌缺血、抗钙、抗血小板聚集等多种功效,提示其可能亦具有抗AS作用。罗湘与导师胡崇家、曾繁典教授对此进行了系列实验。结果发现,Dau能明显减少主动脉斑块的面     

苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙含量的影响

目的：观察苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙([Ca^2 ]i)含量的影响。方法：体外培养大鼠皮层神经细胞，加入谷氨酸观察细胞内[Ca^2 ]i,培养液一氧化氮（NO含量的变化及苯海索的干预作用。结果：加入谷氨酸后细胞内[Ca^2 ]i、细胞死亡数、NO含量显著升高，苯海索各浓度显著抑制[Ca^2 ]i及NO的升高，减少细胞死亡。结论：苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内[Ca^2 ]i、NO含量的升高具有抑制作用，其机制可能与钙拮抗作用有关。     

海嘧啶对SGC—07901人胃癌细胞凋亡的影响

目的 揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机制。方法 采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i;变化时Ca^2 的来源。结果 海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡,可升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。结论 海嘧啶的抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜鲺通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i,启动细胞凋亡机制,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

滨蒿内酯对豚鼠气管平滑肌细胞细胞内钙离子浓度的影响

目的：探讨滨蒿内酯（Scop)松弛豚鼠气管平滑肌的机制。方法：进行豚鼠气管平滑肌细胞分离。通过负荷钙离子荧光指示剂fluor-3-AM进行[Ca^2 ]i测定。结果：Scop可直接降低豚鼠气管平滑肌[Ca^2 ]ii，并且能抑制磷酸组织胺（His)和咖啡因（caffeine)对气管平滑肌[Ca^2 ]i的升高作用。结论：Scop松弛豚鼠气管平滑肌的主要作用机制是抑制细胞内钙浓度水平。     

胎脑低分子抑瘤物对白血病细胞作用的研究

目的：探讨人胎脑低分子肿瘤抑制物对白血病细胞的作用机制及其细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)的变化。方法：通过超滤技术分段提取胎脑低分子抑瘤物，采用光镜、相差显微镜和流式细胞仪检测凋亡，Fura-2荧光负荷技术测[Ca^2 ]i。结果：胎脑低分子抑瘤物可明显抑制K562白血病细胞的增殖，作用4h后可出现典型的凋亡改变，白血病细胞凋亡过程中，胞内[（Ca^2 ]i明显升高。结论：胎脑低分子抑瘤物可能有是通过诱导白血病细胞凋亡而抑制其增殖，在白血病细胞凋亡过程中[Ca^2 ]i升高。     

苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙含量的影响

目的：观察苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙含量的影响。方法：体外培养大鼠皮层神经细胞。加入谷氨酸观察细胞内[Ca^2 ]i，培养液一氧化氮含量的变化及苯海索的干预作用。结果：加入谷氨酸后细胞内[Ca^2 ]i、细胞死亡数、一氧化氮含量显著升高，苯海索各浓度显著抑制[Ca^2 ]i及一氧化氮的升高，减少细胞死亡。结论：苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内[Ca^2 ]i、一氧化氮含量的升高具有抑制作用，其机制可能与钙桔抗作用有关。     

α-黑素细胞刺激素对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度的影响

目的：探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i)的影响。方法：从正常人包皮分离并纯培养黑素细胞，用α-MSH处理纯培养的人表皮黑素细胞，用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移，激光共聚焦扫描显微镜检测[Ca^2 ]i。结果：α-MSH可诱导黑素细胞迁移，并使[Ca^2 ]i浓度升高。结论：α-MSH可能通过诱导黑素细胞内的Ca^2 浓度升高，从而促进黑素细胞的迁移。     

5-羟色胺对培养胃底平滑肌细胞内游离钙动员的影响

目的　研究 5 - HT诱导胃底平滑肌细胞内钙动员的机制 .方法　采用 Ca2 +指示剂 Fluo- 3/ AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的胃底平滑肌细胞 ,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化 .结果　基础状态下 SFSMC[Ca2 + ]i 荧光强度 (FI)为 2 6 4± 15 ,5 - HT 10μmol· L- 1 使荧光强度的变化 ΔFI为 16 .5± 2 .6 ;细胞外无钙时 ,5 - HT升高[Ca2 + ]作用被减弱 ,但除去细胞外钙 ,并使用内罗啶 (ryan-odine)孵育后 ,5 - HT 不再引起荧光强度的变化 ;10μmol· L- 1 米安舍林 (mianserin)可部分拮抗 5 - HT升高[Ca2 + ]i 的作用 ,赛更定 (cyprohetadine)不能抑制 5 - HT升高的胞内钙 ;Mn92 0 2和拉西地平 (lacidipine)均能完全抑制 5 -HT升高 [Ca2 + ]i 的作用 .结论　 5 - HT可通过促进外钙内流及钙池 (SR)释放使 [Ca2 + ]i 升高 ;在胃底平滑肌 5 - HT升高胞内钙部分通过 5 - HT2 受体 ,而不是通过 5 - HT1 C受体 ;5 -羟色胺通过 L型钙通道促外钙内流 ;二氢吡啶类钙拮抗剂能通过阻滞 L 型钙通道 ,而完全抑制 5 - HT促胞内钙升高的作用     

瘦素减轻鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的 探讨瘦素对鱼藤酮（rotenone） 所诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡的抑制作用。 方法 建立鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型,用瘦素进行干预,采用MTT 比色法检测细胞存活率,锥虫蓝检测细胞死亡率,细胞形态学观察,并用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、p-GSK-3β（Ser9） 和GSK-3β 的表达水平,免疫荧光检测α-synuclein 的表达水平。 结果 成功建立了鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型。在模型的基础上,瘦素干预后,细胞状态改善,细胞存活率提高约14%（P ＜ 0.05）,细胞死亡率降低约17%（P ＜ 0.05）,α-synuclein 的浓度下降,Bcl-2 和p-GSK-3β 的表达显著提高。 结论 瘦素对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤具有明显的抑制作用,可能是通过抑制GSK-3β 的活性上调Bcl-2/Bax 的比率和降低α-synuclein 的表达而得以实现。     

氯化钾对神经母细胞瘤细胞系谷氨酸释放的影响

利用高效液相方法观察了氯化钾对培养人神经母细胞瘤细胞系（ＳＨ ＳＹ５Ｙ）细胞谷氨酸释放的影响。发现：当培养液中存在钙离子时，一定浓度的氯化钾（１０～３０ｍｍｏｌ／Ｌ）可使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放增加，但氯化钾浓度超过４０ｍｍｏｌ／Ｌ时，谷氨酸释放增加不明显；当培养液中没有钙离子时，氯化钾不能使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放明显增加。结果表明氯化钾对ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞释放谷氨酸的作用与钙离子相关     

丙烯酰胺对SH-SY5Y神经细胞凋亡和 miR-21表达的影响

目的:探讨丙烯酰胺(AA)对人SH-SY5Y神经细胞凋亡和miR-21表达的影响?方法:不同浓度丙烯酰胺作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定丙烯酰胺对SH-SY5Y细胞活力的影响,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡,real-time PCR检测miR-21表达水平,Western blot检测PTEN?p-AKT?AKT?Bcl-2?Bax?caspase 9 和caspase 3蛋白表达?结果:丙烯酰胺剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活性,Hoechst 33258染色显示明显细胞凋亡形态变化;丙烯酰胺显著降低SH-SY5Y细胞miR-21的表达,同时升高PTEN?Bax?caspase 9?caspase 3水平并降低p-AKT和Bcl-2表达?结论:丙烯酰胺可通过线粒体途径诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡,其机制可能与丙烯酰胺引起miR-21表达下调有关?     

稳定表达野生型PINK1蛋白SH-SY5Y细胞株的建立

目的构建常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征(AREP)PINK1基因真核表达载体,建立稳定表达PINK1蛋白的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞株。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增PINK1基因全长cDNA编码区序列,重组DNA技术定向插入真核表达质粒pcDNA3.1-myc-his(-)B,经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,挑选出稳定转染的单克隆株,经提取gDNA进行PCR扩增、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测PINK1基因在DNA、mRNA水平及蛋白水平的表达。结果成功构建了PINK1-pcDNA3.1-myc-his-(-)B真核表达载体,稳定转染SH-SY5Y细胞后,经提取gDNA扩增、RT-PCR及Westernblot检测到了野生型PINK1基因在基因组的整合、转录和蛋白水平表达。结论构建了PINK1基因真核表达载体和稳定表达PINK1蛋白的SH-SY5Y细胞株,为进一步研究PINK1基因功能及AREP发病机制提供了一个转基因细胞模型。     

β淀粉样肽对神经母细胞瘤细胞Notch信号通路的影响

目的：研究β淀粉样肽（Aβ）处理SH-SY5Y细胞以及α3神经型尼古丁受体（α3nAChR）沉默细胞后细胞Notch信号通路的变化.方法：2μmol/L Aβ处理SH-SY5Y细胞以及α3nAChR沉默细胞,用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time PCR）和蛋白印迹（western blot）方法分别检测细胞中Notch信号通路中Notch1和Hes1的mRNA及蛋白水平的变化,评价Aβ对细胞Notch信号通路的影响.结果：Aβ处理的SH-SY5Y细胞以及α3 nAChR沉默细胞中Notch1和Hes1的mRNA及蛋白水平表达均增加,且在α3 nAChR沉默细胞中增加更为明显,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：Aβ可增加细胞Notch信号通路基因表达,αα3 nAChR沉默会增强Aβ对Notch信号通路基因表达的影响,这可能与阿尔茨海默氏病（AD）的发病有一定的关系.     

14-3-3蛋白过表达对SH-SY5Y细胞的保护作用

目的探讨14-3-3蛋白过表达对神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y）的保护作用和可能机制。方法利用脂质体转染的方法在SH-SY5Y细胞株中瞬时表达14-3-3蛋白。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Ho-echst 33342染色法、流式细胞仪和荧光显微镜分别检测14-3-3蛋白过表达对神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的细胞活性、细胞凋亡、细胞内活性氧类物质（ROS）水平的影响。结果 14-3-3蛋白过表达可促进SH-SY5Y细胞的增殖;抑制SH-SY5Y细胞内ROS的产生。结论 14-3-3过表达对SH-SY5Y起神经保护作用,其机制可能是通过抑制细胞内ROS的产生而实现的。     

全反式维甲酸诱导分化对SH-SY5Y细胞拮抗细胞毒性研究的影响

[目的]观察全反式维甲酸(RA)诱导分化对以人神经母细胞瘤SH-SY5Y作为体外神经毒性研究模型的影响。[方法]RA诱导SH-SY5Y细胞分化并于相差显微镜观察细胞形态学变化;采用MTT法检测细胞活力;通过测定细胞内乳酸脱氢酶(LDH)的释放量观察毒性物质对SH-SY5Y细胞的作用;硝基蓝四氮唑(NBT)还原法检测细胞的还原能力;荧光探针(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)荧光强度。[结果]MTT检测和LDH测定发现,RA诱导SH-SY5Y细胞分化,提高了细胞活力,使SH-SY5Y细胞拮抗其对毒性物质的反应。NBT还原实验和DCFH-DA测定显示,RA诱导分化可降低H2O2诱导的细胞内ROS的水平。[结论]RA通过提高细胞活力而拮抗毒性物质对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其作用机制可能与细胞内ROS水平有关。未分化型SH-SY5Y细胞是进行PD疾病的神经毒性实验和神经保护研究的良好细胞模型。     

五味子乙素对谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制

目的: 探讨五味子乙素(Sch B)对谷氨酸(Glu)致人神经母瘤细胞SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,阐明其对ATR信号通路的影响。 方法: 将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分为对照组、DMSO组、模型组、Sch B1组、Sch B2组和Sch B3组。对照组SH-SY5Y细胞不做任何处理;DMSO组SH-SY5Y细胞用17 mmol·L^-1 DMSO作用24h;模型组SH-SY5Y细胞用20 mmol·L^-1 Glu孵育24h造成细胞损伤模型;Sch B1、Sch B2和Sch B3组采用0.05、 0.10和1.00 μmol·L^-1浓度Sch B预处理SH-SY5Y细胞24 h后再用Glu(20 mmol·L^-1 )继续孵育24 h。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting法检测ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达情况。 结果: MTT法检测,与模型组比较,Sch B1、Sch B2和Sch B3组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01),且Sch B2组细胞存活率最高,故选取Sch B2组作为Sch B组进行后续实验。细胞周期检测,与对照组比较,模型组G₀/G₁期细胞所占百分比降低(P<0.05),S期和G₂/M 期细胞所占百分比升高(P<0.05);与模型组比较,Sch B组G₀/G₁期细胞所占百分比升高(P<0.05),S期和G₂/M 期细胞所占百分比降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,模型组细胞中ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,Sch B组细胞中ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达水平均降低(P<0.05)。 结论: Sch B对Glu致SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与下调ATR信号通路、减少细胞周期阻滞有关。     

黄杞苷对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨黄杞苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用与分子机制。方法 黄杞苷(5、10、20、40、80和160 μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h,MTT法检测黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后细胞活力的影响;通过氮蓝四唑(NBT)法总超氧化物歧化酶(SOD)活力检测试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶(NADPH)检测试剂盒测定黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响;通过流式细胞术对SH-SY5Y细胞进行活性氧(ROS)水平的测定。黄杞苷(20 μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h,H₂O₂孵育6、12和24 h或用黄杞苷(5、10和20 μmol·L^-1)预处理细胞12 h,H₂O₂孵育12 h,采用Western blot法分别检测Nrf2及HO-1表达情况。结果 与模型组比较,黄杞苷能够提高SH-SY5Y细胞的活力,显著提高SOD和GSH水平,减少ROS产生(P<0.05)。黄杞苷能够促进Nrf2蛋白由细胞质向细胞核内转移,黄杞苷(20 μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h时转移达到顶峰。H₂O₂损伤模型下,黄杞苷浓度依赖性地促Nrf2的核内转移(P<0.05),并促进下游蛋白HO-1的表达(P<0.05)。结论 黄杞苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其作用机制与抗氧化,促进Nrf2、HO-1的表达有关。     

康寿灵含药血清对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的观察康寿灵含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用。方法采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。通过观察细胞形态,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,检测康寿灵含药血清对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用。结果同模型组比较,体积分数为0.05、0.10、0.15的康寿灵含药血清能减轻H2O2引起的SH-SY5Y神经细胞的损伤,明显提高细胞的存活率,减少LDH的释放量。结论康寿灵含药血清对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤具有明显的保护作用。