CCL7过表达促进肺癌细胞A549的增殖和侵袭

目的:通过上调CCL7的表达,观察其对肺癌细胞A549增殖、迁移及侵袭等生物学功能的影响,探讨CCL7在肺癌转移中发挥的作用。方法:慢病毒包装CCL7过表达载体感染A549细胞系,分别进行MTT、划痕实验和Transwell小室细胞侵袭实验。结果:MTT实验显示CCL7过表达促进了A549细胞增殖(P<0.01)。划痕实验表明CCL7过表达可以促进A549细胞迁移（P<0.01）。同时Transwell小室侵袭实验证实过表达CCL7的A549细胞具有更强的侵袭能力（P<0.05）。结论:CCL7的过表达可以促进肺癌细胞系A549的增殖、迁移和侵袭,对CCL7的进一步研究可以为肺癌基础研究及诊断治疗提供新的方向。     

PHA-767491对结直肠癌Colo320细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨PHA-767491对结直肠癌细胞系Colo320侵袭和转移的作用.方法:配置不同浓度的PHA-767491作用于Colo320细胞.利用CCK-8法检测细胞的增殖能力确定IC50.Westem blot法检测PHA-767491对Colo320细胞Cdc-7表达的影响.利用划痕实验检测细胞的迁移能力.Transwell小室法检测细胞的侵袭能力.结果:CCK-8法结果显示PHA-767491能显著抑制Colo320细胞的增殖能力,24小时IC50为4.51 μmol./L.Western blot结果显示PHA-767491能显著抑制Colo320细胞Cdc-7的表达.划痕实验结果显示PHA-767491能显著抑制Colo320细胞的迁移能力.Transwell结果显示PHA-767491能抑制Colo320细胞的侵袭能力.结论:PHA-767491能够抑制Colo320细胞的迁移和侵袭.     

番茄红素对人肺癌H520细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨番茄红素对体外培养的人非小细胞肺癌H520细胞增殖、侵袭和迁移等生物学行为的作用.方法:采用MTT法检测不同浓度番茄红素对H520细胞作用24、48及72小时后细胞的存活率,Transwell小室实验检测7μmol/L番茄红素对H520细胞侵袭能力的影响,划痕试验检测7μmol/L番茄红素对H520细胞迁移能力的影响.实时定量PCR检测不同浓度番茄红素作用于H520细胞24小时后金属基质蛋白酶(MMP)-2和-9的表达变化.结果:番茄红素能够抑制人非小细胞肺癌H520细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性(P＜0.05).同时番茄红素减少侵入Transwell系统下室的细胞数目(P＜0.05)并抑制H520细胞向划痕区域的迁移距离(P＜0.05).番茄红素剂量依赖性地降低细胞中MMP-2和MMP-9的表达(P＜0.05).结论:番茄红素能够抑制H520细胞的增殖,并且通过抑制MMP-2和-9的表达抑制其侵袭和迁移能力.     

下调ALK2对人乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:通过表达siALK2的重组腺病毒Ad-siALK2，下调人乳腺癌MDA-MB-468细胞ALK2的表达，研究其对MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:以重组腺病毒Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞为实验组，空载病毒（RFP）作为感染对照，并设空白对照组，通过倒置荧光显微镜观察和RT-PCR检测病毒在MDA-MB-468细胞中的表达水平，通过MTT、平板集落形成、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果:倒置荧光显微镜观察显示Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞的荧光效率高；RT-PCR证实Ad-siALK2感染的MDA-MB-468细胞ALK2的mRNA表达显著下降；MTT法、平板集落形成实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验证实MDA-MB-468细胞Ad-siALK2组相比对照组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低（P<0.05），穿膜细胞数也明显减少（P<0.05）。结论:下调ALK2表达后可以在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖、迁移与侵袭，为后续实验研究奠定了基础。     

双硫仑对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:研究双硫仑对胰腺癌细胞MIAPaCa-2、PANC-1增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:体外培养胰腺癌细胞MIAPaCa-2和PANC-1，以CCK-8法检测不同浓度（0、2、4、8、12、16、20、24、32 μg/ml）双硫仑处理24 h对胰腺癌细胞增殖能力的影响。以双硫仑处理组为实验组，无药物组作为对照组，通过划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验检测双硫仑对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:CCK-8实验结果显示:不同浓度（2、4、8、12、16、20、24、32 μg/ml）双硫仑处理组的胰腺癌细胞活力均低于 0 μg/ml双硫仑的对照组；细胞划痕实验结果显示:双硫仑处理组MIAPaCa-2、PANC-1细胞划痕面积改变率（S%）明显低于对应的对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；Transwell 迁移实验结果显示:双硫仑处理组MIAPaCa-2、PANC-1穿膜的细胞数明显少于对应的对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；Transwell 侵袭实验结果显示:双硫仑处理组MIAPaCa-2、PANC-1穿膜细胞数也明显少于对应的对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:双硫仑可以明显抑制胰腺癌细胞MIAPaCa-2和PANC-1的增殖、迁移及侵袭能力。     

塞来昔布对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、侵袭及黏附性的影响

背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)由于其高侵袭和高转移特性,是目前乳腺癌中预后最差的一种亚型.大量研究表明塞来昔布(celecoxib)具有很好的抗肿瘤活性,可以抑制肿瘤生长、减少肿瘤血管发生,防止肿瘤的早期转移.为了进一步明确塞来昔布与TNBC细胞侵袭活性之间的关系,本实验研究塞来昔布作用下人TNBC细胞MDA-MB-231黏附、迁移及体外侵袭能力的变化,并初步探讨其可能的机制.方法:以不同浓度的塞来昔布(0、40、80、120 μmol/L)作用MDA-MB-231细胞24 h后,采用细胞基质黏附实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞黏附能力的影响;采用细胞划痕实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞平面迁移能力的影响;采用Transwell侵袭小室实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的影响;RT-PCR检测塞来昔布作用前后基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-2和MMP-9 mRNA的表达情况.结果:经80、120 μmol/L塞来昔布作用24 h后,MDA-MB-231细胞与基质的黏附能力分别为(50.2±7.3)%和(31.5±2.2)%,与对照组(96.8±10.9)%相比显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05).Transwell侵袭小室实验结果显示,经80、120 μmol/L塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞趋化运动明显减少,穿过人工基底膜的细胞较对照组显著降低(P<0.05).划痕实验结果显示,经塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞平面迁移到损伤区的细胞数明显减少(P<0.05).RT-PCR结果显示,经塞来昔布作用MDA-MB-231细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05).结论:塞来昔布能显著地抑制MDA-MB-231细胞黏附、细胞体外的迁移和侵袭能力,该作用可能与抑制MMP-2和MMP-9 mRNA的表达有关.     

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D，SSD）对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响，并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation，EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中，SSD显著抑制SW480的迁移能力（P<0.05）。在Transwell侵袭实验中，SSD显著抑制SW480的侵袭能力（P<0.05）。SSD处理后，细胞E-cadherin的表达增高，N-cadherin和Vimentin的表达降低（P<0.05），同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成（P<0.05）。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。     

MIIP对肾癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:利用质粒转染技术制备过表达迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)的肾癌786-0/MIIP细胞系,观察MIIP对细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法:构建携带MIIP基因的质粒,通过脂质体质粒转染技术上调肾癌786-0细胞系MIIP基因表达.Western-blot、Real-time PCR检测转染效果;利用MTT实验检测MIIP对786-0细胞增殖能力的影响;Transwell实验、划痕实验检测MIIP对786-0细胞侵袭、迁移能力的影响.结果:Westem-blot、Real-time PCR检测发现实验组786-0/MIIP细胞MIIP蛋白及mRNA表达量有效上调.MTT实验显实验组786-0/MIIP细胞增殖能力明显减弱(P＜0.01).Transwell实验显实验组786-0/MIIP细胞侵袭能力减弱,穿透小室细胞数明显减少(P＜0.01).细胞划痕实验显实验组786-0/MIIP细胞迁移能力显著下降(P＜0.01).结论:通过质粒转染技术能够制备过表达MIIP的肾癌细胞系.转染成功的肾癌786-0/MIIP细胞系MIIP表达量增加,有效抑制了肾癌细胞的增殖、侵袭与迁移.     

shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用

背景与目的: 肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(eyclinE1)的过表达与预后密切相关.为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cycl inE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用.方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株.RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力.结果: shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclihE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.884±0,04)及未转染组(0.904±0.03)(P<0.05).经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.154±4.00)%(P<0.05).生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05).Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05). 结论: 肾癌cycl inE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据.     

Src激酶抑制剂PP2对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨Src激酶抑制剂PP2对人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响.方法:通过Western印迹法检测PP2作用对SGC-7901细胞中Src激酶活化的影响;分别采用MTT法、划痕实验、Transwell小室法和体外诱导血管形成分析实验观察PP2对SGC-7901细胞生长、迁移、基质侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响.结果:MTT法检测结果提示,15 μmol/L PP2作用人胃癌SGC-7901细胞12 h时能明显抑制细胞的增殖;5和10 μmol/L PP2均能抑制SGC-7901细胞的迁移、侵袭和诱导血管的形成,且其抑制能力随PP2浓度的增加而逐渐增强.结论:Src激酶抑制剂PP2具有抑制人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成的能力,可能对胃癌具有一定的治疗效果.     

siRNA沉默YAP1对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭的影响

目的:用小干扰RNA(siRNA)沉默宫颈癌Hela细胞中YAP1基因的表达,观察YAP1表达降低对细胞增殖和侵袭能力的影响,初步探讨YAP1在宫颈癌中的作用。方法:qRT-PCR和Western blot方法检测宫颈癌Hela细胞及正常宫颈上皮细胞H8中YAP1的表达,siRNA YAP1转染Hela细胞沉默YAP1表达,并以转染control siRNA的细胞作为对照,转染48h后,分别用qRT-PCR和Western blot方法检测沉默效果。用MTT法检测沉默后细胞增殖情况。Transwell 检测细胞侵袭能力。结果:YAP1在宫颈癌细胞中高表达。siRNA能够有效沉默Hela细胞中YAP1的mRNA 及蛋白的表达。沉默YAP1表达能够明显抑制Hela细胞的增殖及侵袭能力。结论:YAP1蛋白在宫颈癌细胞中高表达并具有促进细胞增殖及侵袭的能力。     

lncRNA HEIG对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响及其分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HEIG在宫颈癌组织和细胞中的表达及其生物学功能。方法:采用实时荧光定量PCR检测患者癌组织和癌旁组织、正常宫颈上皮细胞HCerEpic、宫颈癌细胞Hela和C33A中lncRNA HEIG的表达；敲低Hela细胞中HEIG表达，MTT法和流式细胞术分别检测Hela细胞的增殖、凋亡情况；Transwell小室法检测Hela细胞的迁移侵袭能力；Western blot检测AKT信号通路的变化。结果:lncRNA HEIG在宫颈癌组织和细胞中高表达；敲低HEIG可显著抑制宫颈癌细胞Hela的细胞增殖，促进细胞凋亡，抑制细胞迁移和侵袭能力，同时抑制AKT信号通路的活化。结论:lncRNA HEIG有可能作用于AKT信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移侵袭。     

LPS诱导宫颈癌上皮间质转化的作用

目的:探讨LPS在宫颈癌细胞株Hela细胞增殖和上皮间质转化中的作用。方法:体外培养Hela细胞,以LPS(10μg/ml)诱导后,利用MTT法检测细胞的增殖情况。qPCR检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的RNA水平上的表达。Western blot检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白水平上的表达。Transwell检测LPS对Hela细胞迁移能力的影响。结果:在LPS诱导后能够明显的促进Hela细胞的增殖。E-cadherin在RNA和蛋白水平上都明显下降,N-cadherin、Vimentin在RNA和蛋白水平上都明显升高;LPS诱导后,明显促进Hela细胞的迁移能力。结论:LPS能够诱导宫颈癌细胞株Hela细胞的增殖和上皮间质转化。     

柴胡皂苷D通过逆转EMT抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D对人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其潜在分子机制.方法:运用MTT试验检测柴胡皂苷D对细胞增殖的影响,划痕试验和Transwell迁移试验检测柴胡皂苷D细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭试验研究柴胡皂苷D对细胞侵袭能力的影响,Western-blot检测柴胡皂苷D对EMT相关蛋白的影响.结果:对MG-63增殖无明显影响浓度的柴胡皂苷D显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.001),柴胡皂苷D上调E-cadherin的表达而下调N-cadherin和Vimentin的表达.结论:柴胡皂苷D通过逆转EMT改变抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭.     

ZNF488基因对鼻咽癌细胞HONE1生物学行为的影响

[目的]探讨ZNF488基因对鼻咽癌细胞HONE1生物学行为的影响。[方法]构建携带空载体、人ZNF488基因的逆转录病毒质粒pMSCV和pMSCV—ZNF488．以磷酸钙法转染293FT细胞并收集病毒液,感染鼻咽癌细胞株HONE1,经嘌呤霉素筛选及WesternB1ot鉴定,建立稳定表达ZNF488的HONE1-pMSCV-ZNF488和空载体HONE1-pMSCV的细胞株。应用噻唑盐（MTr）法、平板克隆形成实验检测ZNF488过表达对HONE1细胞生长增殖的影响,同时应用流式细胞术检测ZNF488对细胞周期增殖指数的影响。划痕实验及Transwell体外侵袭实验观察zNF488对HONE1迁移侵袭能力的影响。WesternB1ot检测上皮-间质转化（EMT）相关蛋白及抑癌基因门EⅣ的表达情况。[结果]成功建立稳定表达ZNF488的HONE1-pMSCV-ZNF488细胞株,MTT法及平板克隆形成实验结果显示,与空载体组HONE1-pMSCV细胞相比,HONE1-pMSCV—ZNF488细胞增殖及克隆形成能力均增强。流式细胞术显示过表达ZNF488细胞S期百分比较空载体组高,增殖指数增加。划痕实验、Transwe11体外侵袭实验示ZNF488能够显著增加细胞的迁移、侵袭能力。WesternB1ot检测发现上皮标志E-Cadherin、α-Catenin表达降低,间质性标志Fibronectin、Vimentin表达升高,同时抑癌因子PTEN表达下降。[结论]过表达ZNF488可通过诱导鼻咽癌细胞HONE1发生上皮间质转变及下调抑癌基因PTEN,促进细胞的增殖及迁移侵袭能力。     

脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移的抑制作用及相关机制研究

目的:探究脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成能力、侵袭及迁移能力以及细胞周期、细胞凋亡的影响。方法:选取宫颈癌细胞系SiHa,利用不同浓度脂肪抑制素进行培养。通过MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell实验及流式细胞术检测实验分别检测脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成能力、侵袭/迁移能力以及细胞周期/细胞凋亡的影响,探究脂肪抑制素对宫颈癌细胞的抗肿瘤作用。结果:MTT实验显示,脂肪抑制素对SiHa细胞的增殖/生长具有明显抑制作用,存在时间和剂量依赖性(P＜0.05);根据细胞增殖率得出72 h时SiHa细胞的IC50为16.98 μmol/L。平板克隆形成实验显示,脂肪抑制素明显降低了SiHa细胞的克隆形成能力,具有剂量依赖性（P＜0.01）。Transwell实验显示,脂肪抑制素也明显降低SiHa细胞侵袭/迁移能力,具有剂量依赖性（P＜0.001）。流式细胞术检测实验显示,较高浓度脂肪抑制素可诱导宫颈癌细胞SiHa的细胞周期停滞在G2/M期,促进其细胞凋亡（P＜0.05）。结论:脂肪抑制素对宫颈癌细胞具有明显抗肿瘤作用,可作为宫颈癌治疗的新药物。     

川芎嗪对人肺腺癌 A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用与机制

目的：探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肺腺癌 A549细胞增殖及侵袭的影响。方法：川芎嗪治疗组分别用0.1μg/ ml、1μg/ ml、10μg/ ml、100μg/ ml、250μg/ ml 浓度的川芎嗪干预 A549细胞,同时设无药的阴性对照组及加顺铂的阳性对照组。24、48、72、96小时后,MTT 法检测川芎嗪对 A549细胞株增殖的抑制作用,划痕实验和 Transwell 法观测川芎嗪对 A549细胞株迁移侵袭能力的影响,采用细胞流式术检测川芎嗪对 A549细胞周期和凋亡的干预作用。结果：川芎嗪显著抑制 A549细胞的增殖,抑制 A549的迁移和侵袭,流式细胞术显示川芎嗪诱导 A549细胞发生 G1期阻滞和早期凋亡（P <0.05）。结论：川芎嗪对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用可能是通过诱导 G1期细胞阻滞和早期凋亡引起的。