胰岛素样生长因子-1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对氯化钴（CoCl2）诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤 PC12细胞凋亡的作 用及机制。方法 取对数生长期的 PC12细胞,分别以 10、20、40、80 μmol/L的 CoCl2溶液和 100、200、400 μg/L的 IGF- 1溶液处理细胞,CCK-8法检测细胞活力,得出 CoCl2和 IGF-1最佳干预浓度。根据选定的实验条件,应用 CoCl2处理 PC12细胞建立 HIE细胞模型,实验分为对照组、CoCl2处理组、IGF-1+CoCl2处理组。分组处理 24 h后采用 CCK-8法 检测细胞存活率;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞 Bax、Bcl-2及 Caspase-3的蛋白的表达 水平。最后在上述实验的基础上,设 CoCl2处理组、CoCl2+IGF-1处理组、HIF-1α抑制剂 2-甲氧雌二醇（2-MeOE2）+ CoCl 2组和 CoCl2+2-MeOE2+IGF-1组,Western blot观察 IGF-1、2-MeOE2及两者共用对 PC12细胞 HIF-1α及 Bax的表 达水平的影响。结果 CCK-8检测结果显示,40 μmol/L CoCl2和 200 μg/L IGF-1为最佳干预浓度。利用以上浓度分 组干预细胞 24 h后,与 CoCl2组相比,IGF-1+CoCl2处理组细胞存活率明显提升,TUNEL阳性细胞数和细胞比例降低, 同时抗凋亡蛋白 Bcl-2表达上调,促凋亡蛋白 Bax、Caspase-3,HIF-1α表达下调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。 应用 2-MeOE2对细胞进行预处理后,CoCl2+2-MeOE2组与 2-MeOE2+IFG-1组 HIF-1α和 Bax蛋白表达差异无统计 学意义,但均较 CoCl2+IGF-1组明显下调（P＜0.01）。结论 IGF-1可抑制 CoCl2诱导的 PC12细胞凋亡,其保护作用 可能与 HIF-1α表达下调有关。     

脂多糖对小胶质细胞血管内皮生长因子表达的影响

摘要： 目的 探讨脂多糖（LPS）是否能够通过低氧诱导因子-1α（HIF-1α）调节小胶质细胞血管内皮生长因子（VEGF） 的表达。方法 培养 BV2 小胶质细胞系, 分为 4 组： 对照组、 LPS （100 µg/L） 刺激组、 LRS 干预组 （LPS 100 µg/L及脂多糖拮抗剂 200 µg/L）, HIF-1α抑制剂干预组 （LPS 100 µg/L 及 FM19G11 10 mmol/L）。分别采用免疫荧光、 Western blot、 ELISA 检测 VEGF 和 HIF-1α 的表达情况。结果 与对照组比较, LPS 可显著增加 BV2 细胞 VEGF 表达, 脂多糖拮抗剂可明显抑制 LPS 的这一作用。HIF-1α的表达在 LPS 刺激 8 h 后明显增加。HIF-1α抑制剂 FM19G11 可减少 LPS 引起的 BV2 细胞 VEGF 表达增加。结论 LPS 促进小胶质细胞 VEGF 的表达, HIF-1α参与这一调节过程。     

缺氧诱导因子1α与核因子κB在炎症缺氧环境中相互作用研究进展

慢性炎症是一系列临床难治疾病（包括心血管损伤、炎性肠病、癌症等）的病理学基础,而缺氧是慢性炎症引起组织损伤的重要病理生理学机制。缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对组织适应缺氧具有调节作用。缺氧时,HIF-1α通过激活适应性转录反应以协调低氧组织中的氧供应和代谢活性,此过程涉及血管生成因子和血管活性物质等细胞因子的上调。调节免疫应答和细胞凋亡的核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）具有与HIF-1α类似的功能,即在低氧条件下通过改变氧依赖性羟脯氨酸化酶活性来调节缺氧状态。此文讨论了在多种炎症性疾病中HIF-1α与NF-κB激活通路之间的相互作用,以及HIF-1α和NF-κB通路作为炎症性疾病治疗靶点的潜力。     

氯化钴低氧对黑色素瘤细胞系迁移能力及FSTL1表达分泌的影响

目的 探讨氯化钴（CoCl2）化学模拟低氧对黑色素瘤细胞系B16F10迁移的影响,以及Follistatin-like 1（FSTL1）蛋白在此过程中的转录、表达和分泌情况。方法 CoCl2模拟低氧作用于小鼠B16F10细胞,实验分为3组：0 μmol/L CoCl2对照组、50 μmol/L和100 μmol/L CoCl2处理组。用MTT法测定细胞活力;用Transwell法测定细胞迁移能力;qRT-PCR检测Fstl1 mRNA表达;Western blot检测细胞内外FSTL1蛋白表达。结果 CoCl2模拟低氧可以导致B16F10细胞存活率显著下降,并呈浓度和时间依赖性;50 μmol/L CoCl2处理组（0.158±0.006）、100 μmol/LCoCl2处理组（0.203±0.002）B16F10细胞迁移能力均明显高于对照组（0.107±0.001,均P<0.05）;50 μmol/L CoCl2处理组（1.573±0.114）、100 μmol /L CoCl2处理组（2.219±0.085）Fstl1 mRNA表达均显著高于对照组（0.962±0.054,均P<0.05）,而胞内FSTL1蛋白表达与Fstl1 mRNA表达趋势一致。同时也发现,CoCl2处理组细胞外FSTL1蛋白表达均低于对照组,且100 μmol/L CoCl2处理组几乎检测不到FSTL1表达。结论 CoCl2模拟低氧促进黑色素瘤细胞迁移,可能与FSTL1的表达和分泌有关,但其功能和作用机制还需进一步探讨。     

缺氧诱导因子-1α对结直肠癌细胞上皮间质转化及 侵袭迁移的影响

摘要： 目的 探讨缺氧是否能促进不同分化程度结直肠癌细胞上皮间质转化 （EMT）, 并分析缺氧对结直肠癌细 胞侵袭、 迁移的影响。方法 分别选取 HCT116（低度分化）和 HT-29（高度分化）结直肠腺癌细胞。观察 0、 10、 25、 50、 100 及 150 mg/L 氯化钴 （CoCl2） 诱导 2 种细胞 48 h 后的形态变化。分析 0、 10、 25、 50 及 100 mg/L CoCl2 处理 48 h 后缺氧诱导因子 （HIF） -1α蛋白表达变化, 筛选出 CoCl2诱导细胞缺氧的最适合浓度。MTT 实验检测不同时间点 （0 、 24 、 48 、 72 及 96 h） CoCl2诱导 2 种结直肠癌细胞的增殖情况, 筛选出 CoCl2诱导缺氧的最佳时间。最佳浓度和时间 条件下, 对 HCT116 和 HT-29 细胞分别进行缺氧 （缺氧组） 和常氧 （常氧组） 处理, Transwell 侵袭和划痕实验检测 2 组 2 种细胞的侵袭、 迁移情况; Western blot 实验和 RT-PCR 实验检测 2 组 HIF-1α、 E-cadherin 及 Vimentin 的蛋白及 mRNA 表达水平。结果 50 mg/L CoCl2作用 48 h 时 2 种细胞均出现明显的形态改变。2 组 HCT116、 HT-29 细胞的 HIF-1α蛋白表达水平随 CoCl2浓度增加均呈先增后减趋势, 50 mg/L 为最适宜浓度 （P < 0.05）。0~96 h 时 2 种细胞不 论有无缺氧, 细胞增殖能力均呈先增后减趋势 （P＜0.05）, 48 h 为最佳作用时间。HCT116 和 HT-29 细胞系中缺氧组 穿膜细胞数和细胞迁移率均明显高于常氧组 （P＜0.05）。HCT116、 HT-29 细胞系中缺氧组 HIF-1α、 Vimentin 的蛋白 和 mRNA 表达水平均高于常氧组, 而 E-cadherin 的蛋白和 mRNA 表达水平低于常氧组（均 P＜0.05）。结论 缺氧 能诱导不同分化程度结直肠癌细胞均发生 EMT, 并能增强 2 种结直肠癌细胞的侵袭、 迁移能力。     

新化合物OSU-03012对结肠癌细胞增殖、迁移以及凋亡的影响

摘要： 目的 在细胞水平上初步探讨新化合物OSU-03012抗结肠癌的机制。方法 分别用1、 3、 5和10 μmol/L OSU-03012化合物干预的人结肠癌细胞株HCT-116作为研究对象, 以等体积二甲基亚砜 （DMSO） 处理的HCT-116 细胞作为对照组。CCK-8法检测各组细胞干预24、 48、 72 h时的抑制率, 划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移能力, 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况, 免疫荧光、 Western blot检测各组细胞Bcl-2、 Caspase-3蛋白表达情况, Real-time PCR检测各组细胞Bcl-2、 Caspase-3 mRNA表达情况。结果 对照组、 1 μmol/L组、 3 μmol/L组、 5 μmol/L 组和10 μmol/L组的细胞抑制率、 凋亡率呈逐渐升高趋势, 而细胞迁移距离、 细胞迁移数目呈逐渐减小或降低趋势, 组间多重比较差异均有统计意义 （均P＜0.05）; 3、 5、 10 μmol/L组Bcl-2 mRNA和蛋白表达量低于对照组, 而Caspase-3 mRNA和蛋白表达量高于对照组 （均P＜0.05）。结论 新化合物OSU-03012可抑制结肠癌细胞增殖与迁移, 并促进结肠癌细胞凋亡, 且呈剂量依赖效应。     

灯盏乙素对缺氧缺血性新生大鼠脑缺氧诱导因子-1α和水通道蛋白9表达水平的影响

目的：研究灯盏乙素对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和水通道蛋白9（APQ9）表达水平的影响。方法：建立HIBD新生大鼠模型，将新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组（sham组）、缺氧缺血组（HIBD组）、灯盏乙素高、中和低剂量组、地塞米松阳性对照组。于缺氧缺血7 d后，观察大鼠体质量增长率，脑组织HE染色观察脑组织病理改变，测定脑含水量，免疫荧光法检测脑HIF-1α蛋白表达，逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测脑HIF-1α、APQ9mRNA表达，ELISA法检测脑caspase-3活性。结果：灯盏乙素能显著升高HIBD大鼠体质量增长率，降低脑组织含水量，抑制脑组织HIF-1α和AQP9mRNA表达，降低脑caspase-3活性。结论：灯盏乙素可减轻HIBD大鼠脑组织水肿，降低HIF-1α和AQP9表达，抑制神经细胞凋亡，发挥脑保护作用。     

白藜芦醇对H2O2 及TGF-β2诱导人小梁网细胞的影响及机制探讨

摘要： 目的 观察过氧化氢 （H2O2 ） 及转化生长因子 （TGF） -β2 诱导人小梁网细胞 （HTMCs） 后对纤维连接蛋白（FN）、 胶原蛋白 1 型 （COL1）、 核因子 （NF） -κB P65 蛋白和白细胞介素 （IL） -1β基因表达的影响及白藜芦醇 （RSV） 的干预作用。方法 （1） 选取汇合度 70%～80%的 HTMCs 分为 5 组。实验组于无血清培养基中分别加入浓度为 150、 300、 450、 800 μmol/L 的 H2O2 处理, 对照组的培养基中不加 H2O2。Western blot 法检测各组 FN、 COL1、 NF-κB P65、 NF-κB P65 磷酸化 （P-NF-κB P65） 蛋白的表达, 实时定量 PCR 法检测 IL-1β基因的表达。（2） HTMCs 细胞分为 3 组。对照组以不含 H2O2 及 RSV 的无血清培基处理, H2O2 组以 300 μmol/L 的 H2O2 处理, H2O2+RSV 组同时加入 300 μmol/L 的 H2O2 及 25 μmol/L 的 RSV 处理。检测各组上述蛋白和基因的表达情况。免疫荧光检测各组 NF-κB P65 在 HTMCs 中的定位。（3） HTMCs 细胞分为 3 组。对照组以不含 TGF-β2 及 RSV 的无血清培基处理, TGF-β2 组以 5 μg/L 的 TGF-β2 处理, TGF-β2+RSV 组为同时加入 5 μg/L 的 TGF-β2 及 25 μmol/L 的 RSV 处理。检测各组上述蛋白和基因的表达情况。结果 （1） 与对照组比较, 150、 300、 450、 800 μmol/L 组 FN 和 P-NF-κB P65 蛋白表达水平均增高, 300、 450、 800 μmol/L 组 COL1 蛋白和 IL-1β基因表达水平增高 （P < 0.05）, 其他指标比较差异均无统计学意义。（2） H2O2 组较对照组 FN、 COL1、 P-NF-κB P65 蛋白和 IL-1β基因表达水平均增高, 而 H2O2+RSV 组较 H2O2 组上述指标均降低, H2O2+RSV 组较对照组仅 IL-1β降低 （P < 0.05）。对照组仅细胞质表达 NF-κB P65, H2O2 组细胞胞质及核中均有 NF-κB P65 表达, 且核中表达较多; H2O2+RSV 组细胞胞质中表达 NF-κB P65 较核中多。（3） TGF-β2 组较对照组 FN、 COL1、 P-NF-κB P65 的蛋白和 IL-1β基因水平表达均增高 （P < 0.05）, TGF-β2+RSV 组较 TGF-β2 组上述指标均降低 （P < 0.05）。 结论 H2O2 和 TGF-β2 能上调 HTMCs 的 FN、 COL1、 P-NF-κB P65 蛋白及 IL-1β基因的表达, 可能参与青光眼的发生发展过程。RSV 能抑制H2O2和 TGF-β2对HTMCs 的影响, 对青光眼发挥一定的保护作用。     

低氧对HTR-8/SVneo细胞增殖及HIF-1α、VEGF、MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的 采用二氯化钴（CoCl2）模拟体外低氧环境,探讨低氧状态对滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞增殖及缺 氧诱导因子（HIF）-1α、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子 1 （TIMP-1）蛋白表达的影响。方法 采用0、50、100、200、400、800、1 000、1 200 μmol/L的CoCl2处理HTR-8/SVneo细 胞,建立化学缺氧模型,CCK8法检测以上浓度培养24 h、48 h后对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响;根据CCK8实验结 果拟定 CoCl2低、中、高浓度组,Western blot 检测 CoCl2低、中、高浓度组作用 48 h 对 HTR-8/SVneo 细胞中 HIF-1α、 VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响。结果 CCK8实验提示低氧状态激活HTR-8/SVneo细胞增殖,CoCl2作用于 HTR-8/SVneo细胞48 h后,OD值随浓度增加而上升;同一CoCl2浓度作用下,作用48 h较作用24 h的OD值均上升。 选择100、200、400 μmol/L的CoCl2作为CoCl2低、中、高浓度组。与空白组对比,CoCl2低、中、高浓度组HTR-8/SVneo 细胞中HIF-1α、MMP-9蛋白表达水平上调（P＜0.05）,MMP-9/TIMP-1比例上升,呈浓度依赖性（P＜0.05）,CoCl2中、 高浓度组的VEGF的蛋白表达水平上调（P＜0.05）,CoCl2低、中、高浓度组的TIMP-1蛋白表达水平下降,但随CoCl2浓 度增加而呈上升趋势。结论 低氧状态可增强 HTR-8/SVneo 细胞的增殖能力,并可能通过 HIF-1α 的介导上调 VEGF的表达与MMP-9/TIMP-1比值。     

CoCl2所致化学缺氧促进脂肪组织缺血缺氧耐受相关基因表达的研究

目的探讨脂肪组织中是否存在缺氧预适应现象,构建CoCl2致缺氧的缺氧模型。方法不同浓度的CoCl2大鼠腹股沟区皮下层浸润注射,分别用免疫组织化学法和RT-PCR法检测该区脂肪HIF-1α蛋白和HIF-1αmRNA的表达情况。结果用不同浓度的CoCl2行化学缺氧后在不同时间点观察有不同程度的HIF-1α蛋白和HIF-1αmRNA表达,其中,在浓度为20～40mg/kg,时间为3h时脂肪组织中HIF-1α表达达高峰。结论脂肪组织存在缺氧预适应现象;CoCl2的浓度选择20～40mg/kg,时间选择3h时缺氧预适应效果较佳。     

P38MAPK 抑制剂 SB203580对高糖诱导HK-2细胞转分化的影响

摘要： 目的 探讨不同浓度 P38 丝裂原活化蛋白激酶 （P38MAPK） 抑制剂 SB203580 在高糖诱导肾小管上皮细 胞-肌成纤维细胞转分化 （TEMT） 过程中的机制及其较佳作用浓度。方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞 （HK- 2） 并分为对照组 （5.5 mmol/L GS）、 DMSO 组 （5.5 mmol/L GS + 30 μmol/L SB203580 等体积的 DMSO）、 高糖组 （30 mmol/L GS）, 以及 30 mmol/L GS +5、 10、 20、 30 μmol/LSB203580 处理的 S5、 S10、 S20 及 S30 组, 干预 48 h。四甲基偶 氮唑蓝 （MTT） 法检测细胞增殖情况, 计算半数抑制浓度 （IC50 ）; 选取对照组、 高糖组、 S30 组, Western blot 法检测 P38MAPK、 P-P38MAPK 及α-平滑肌肌动蛋白 （SMA） 的表达、 免疫荧光法检测α-SMA 的表达。结果 （1） 与对照组 相比, DMSO 对 HK-2 细胞增殖无显著抑制作用 （P > 0.05）; 高糖组、 S5 组 HK-2 细胞增殖增多 （P < 0.05）; S20、 S30 组 HK-2 细胞增殖减少 （P < 0.05）。与高糖组相比, S5、 S10、 S20、 S30 组细胞增殖均受到抑制 （P < 0.05）。（2） 与对照 组相比, 高糖组、 S30 组 P-P38MAPK 表达量增高 （P < 0.05）。与高糖组相比, S30 组 P-P38MAPK 的表达量降低 （P < 0.05）。3 组 P38MAPK 表达量无显著差异 （P > 0.05）。（3） 与对照组相比, 高糖组、 S30 组α-SMA 表达量增高 （P < 0.05）。与高糖组相比, S30 组α-SMA 表达量降低 （P < 0.05）。结论 30 mmol/L GS 可以诱导 HK-2 细胞 TEMT;30 μmol/L SB203580 是抑制 HK-2 细胞 TEMT 的较佳抑制浓度, SB203580 可能通过下调 P-P38MAPK 表达, 从而抑制 HK-2细胞增殖及胞浆中α-SMA 的表达, 延缓 TEMT 进程。     

全反式维甲酸对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

摘要： 目的 探讨全反式维甲酸 （ATRA） 对高糖诱导人 HK-2 细胞增殖及凋亡的影响, 以期延缓糖尿病肾病（DN）。方法 体外培养 HK-2 细胞, 随机分为 6 组： 空白组 （未加任何刺激物）、 高糖组 （加 D-葡萄糖 30 mmol/L）、 高渗组 （加入甘露醇 24.5 mmol/L）、 低浓度 ATRA 组 （加入 ATRA 1×10-7 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）、 中浓度 ATRA 组（加入 ATRA 1×10-6 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）、 高浓度 ATRA 组 （加入 ATRA 1×10-5 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）。各组细胞培养 48 h。MTT 法检测各组细胞增殖情况, 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 空白组与高渗组细胞光密度 （OD） 值和凋亡率差异无统计学意义。高糖组较空白组、 高渗组细胞增殖减少, 凋亡率增加; 低浓度、 中浓度、 高浓度 ATRA 组细胞增殖均较高糖组增加, 且低、 中及高浓度 ATRA 组依次增加, 凋亡率较高糖组减少, 且低、 中及高浓度 ATRA 组依次减少 （均 P＜0.05）。结论 ATRA 可促进高糖诱导的 HK-2 细胞增殖, 抑制其凋亡, 并与 ATRA 浓度可能具有一定的依赖性。     

Toll样受体4在棕榈酸诱导RAW264.7巨噬细胞 炎症反应中的作用及机制

目的 探讨 Toll 样受体 4（TLR4）在棕榈酸诱导 RAW264.7 巨噬细胞炎症反应中的作用及可能机制。方 法 观察正常对照组（正常饮食）和高脂饲料组（高脂饮食诱导肥胖小鼠模型）C57BL/6J 小鼠血清自由脂肪酸（FFA） 水平及内脏脂肪组织炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP- 1）的表达;采用棕榈酸（150 μmol/L 组和 300 μmol/L 组）刺激小鼠 RAW264.7 巨噬细胞,观察这 2 组和空白对照 （Control）组、无 FFA 牛血清白蛋白（BSA）组的 TNF-α、IL-6 和 MCP-1 的表达和分泌,同时检测 TLR4 的蛋白表达和 核因子-κB（NF-κB）的激活情况;利用 siRNA 干扰实验抑制 TLR4,观察在 Control 组、BSA 组、棕榈酸（300 μmol/L） 组、棕榈酸（300 μmol/L）+Control siRNA 组、棕榈酸（300 μmol/L）+TLR4 siRNA 组中棕榈酸诱导巨噬细胞炎症因子的 表达和分泌。结果 高脂饲料组体质量和 Lee’s 指数高于正常对照组,血清中 FFA 水平升高,内脏脂肪组织中 TNF-α、IL-6 和 MCP-1 的表达明显增加（P＜0.05）。与 BSA 组比较,棕榈酸 150 μmol/L 组和棕榈酸 300 μmol/L 组 炎症因子 TNF-α、IL-6 和 MCP-1 的表达和分泌均明显增加,TLR4 和 NF-κB p65 磷酸化蛋白水平均增加（P＜0.05）。 与 BSA 组比较,棕榈酸 300 μmol/L 组 NF-κB p65 的核转运水平和细胞内水平明显升高（P＜0.05）。TLR4 被抑制 后,棕榈酸+TLR4 siRNA 组的 TLR4、TNF-α、IL-6 和 MCP-1 的 mRNA 表达和分泌水平明显低于棕榈酸组（P＜ 0.05）。结论 TLR4 可能参与棕榈酸诱导的 RAW264.7 巨噬细胞炎症反应,诱导炎症因子 TNF-α、IL-6 和 MCP-1 的释放,且其介导的炎症反应与 NF-κB 的激活有关。     

氯化钴对乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的确定萌化钴(CoCl2)对乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用达氏修正依氏(DMEM)/F12(1∶1)培养基原代培养乳鼠心肌细胞,3d后分别给予浓度200、400、600μmol/L的CoCl2培养24h,对照组不加CoCl2。锥虫蓝染色检测细胞存活力,Hochest33258荧光染色检测细胞凋亡,用Western Blot检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白水平。结果与对照组比较,CoCl2培养组细胞存活率明显下降(P<0.01),凋亡率明显增加(P<0.01),且心肌细胞存活率下降程度及细胞凋亡率睁加程度均随着氯化钴浓度增加而升高。HIF-1α蛋白水平亦随CoCl2浓度升高而增加。结论CoCl2可模拟缺氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡。     

右美托咪定对布比卡因所致神经细胞毒性的保护作用

摘要： 目的 探讨右美托咪定对布比卡因所致神经细胞毒性的保护作用。方法 体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞株 N2a 细胞, 取对数期细胞分为 4 组： 对照组细胞培养液不加任何药物; 布比卡因组细胞中加入 1 000 µmol/L 布比卡因; 50、 200 µmol/L 右美托咪定浓度组细胞中加入 1 000 µmol/L 布比卡因后, 再分别加入 50、 200 µmol/L 右美托咪定。各组细胞加入药物后继续培养 24 h, 以 MTT 法检测细胞存活率; 流式细胞术检测细胞凋亡、 活性氧 （ROS）水平、 线粒体膜电位及 Caspase-3 的表达。结果 在 1 000 µmol/L 布比卡因作用下, 各药物组 N2a 细胞的存活率明显降低, 同时线粒体膜电位显著下降, 而细胞的凋亡率、 胞内 ROS 水平和 Caspase-3 表达则显著升高; 50、 200 µmol/L 右美托咪定可抑制布比卡因引起的 N2a 细胞毒性, 使细胞的存活率及线粒体膜电位均明显升高, 同时降低细胞的凋亡率、 胞内 ROS 水平和 Caspase-3 表达, 200 µmol/L 右美托咪定的变化较 50 µmol/L 更为明显。结论 右美托咪定可减轻布比卡因对 N2a 细胞的毒性作用, 其可能是通过抑制 ROS 的生成、 改变线粒体膜电位、 降低 Caspase-3 的表达, 从而抑制细胞的凋亡来实现的。     

靶向抑制HIF-1α基因对舌癌细胞增殖活性的影响

【摘要】目的 研究靶向抑制乏氧诱导因子（HIF）-1α基因对Tca8113及Tscca舌癌细胞株增殖的影响。方法 将HIF-1α基因的短发夹干扰RNA（shRNA）的表达载体与空载质粒分别转染人舌癌细胞中作为siHIF-1α组和空载组,半定量RT-PCR及Western blot法检测HIF-1α的mRNA及蛋白表达。软琼脂克隆形成实验观察细胞的增殖;细胞计数法检测活细胞的数量;流式细胞分析术检测细胞周期的分布;同时将舌癌细胞接种至裸鼠皮下,观察体内的成瘤情况。结果 HIF-1αshRNA质粒转染舌癌细胞株后,HIF-1α的mRNA及蛋白表达明显下降。siHIF-1α组细胞在软琼脂中形成克隆的能力显著下降。细胞计数表明siHIF-1α组活细胞数量减少。转染后乏氧培养48h si?HIF-1α组细胞周期阻滞于G0/G1期。舌癌细胞移植到裸鼠体内数天后siHIF-1α组成瘤体积明显小于空载组（P＜0.05）。结论 HIF-1α基因能够促进舌癌细胞增殖活性,有可能成为未来治疗舌癌的一个潜在作用靶点。