NF-κB和TNF-α在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中的表达

目的探讨核因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在小鼠抗烟曲霉菌早期感染中的作用。方法将小鼠分4组:正常组、免疫抑制组、正常+烟曲霉菌接种组和IPA模型组。小鼠鼻吸入烟曲霉菌48 h处死,取肺组织用western blot法检测胞核NF-κB p65蛋白和细胞中TNF-α的表达。结果正     

肺气虚模型大鼠介导TNF-α-MAPK信号途径对肾AQP2表达的影响

目的:通过观测肺气虚大鼠血浆中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,肾组织水通道蛋白2(AQP2),丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)和核因子-κB(NF-κBp65)表达的变化,探讨中医藏象中肺与肾在水液代谢之间关系的现代科学内涵。方法:将SPF级健康雄性Wistar大鼠20只随机分为正常组和模型组,采用ELISA法检测血浆TNF-α含量、Western法检测肾组织AQP2、免疫组化法检测肾组织p38MAPK和NF-κB p65表达变化。结果:与正常组比较,模型组血浆中TNF-α含量升高,肾组织AQP2、p38MAPK和NF-κB p65表达上调(P<0.01)。结论:肺气虚状态下肾组织AQP2表达变化可能是通过TNF-α-MAPK信号转导途径实现的。     

电刺激小脑顶核对局灶脑缺血再灌注大鼠脑组织核因子-κB/p65、TNF-α蛋白和基因表达的影响

目的观察电刺激小脑顶核干预对局灶性缺血再灌注大鼠脑组织核因子-κB/p65(NF-κB/p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白和基因表达的影响及其对中枢神经元保护的作用机制。方法 2014年9月—2015年9月在重庆医科大学神经病学实验室进行。Wistar大鼠60只随机分为假手术组(NC组)、缺血再灌注组(I/R组)、电刺激小脑顶核组(FNS组),每组20只,采用线栓法制作脑缺血再灌注动物模型,FNS组予以电刺激小脑顶核干预,造模或干预成功后处死大鼠取脑组织,分别采用免疫组织化学法和RT-PCR检测各组NF-κB/p65、TNF-α的表达。结果与NC组比较,I/R组NF-κB/p65、TNF-α蛋白表达增加(q=0.032、0.020,P<0.05);与I/R组比较,FNS组NF-κB/p65、TNF-α的表达明显降低(q=0.182、0.013,P<0.05)。与NC组比较,L/R组NF-κB/p65mRNA和TNF-αmRNA表达量明显增高(P<0.05);与I/R组比较,FNS组NF-κB/p65 mRNA和TNF-αmRNA表达量明显减少(P均<0.05)。结论电刺激小脑顶核抑制NF-κB/p65的活化和TNF-α的转录,NF-κB/p65的活化抑制和表达减少及所致的TNF-α表达下调可能是其发挥中枢神经源性保护作用的机制之一。     

参苓白术散联合美沙拉嗪对脾虚湿困型溃疡性结肠炎小鼠结肠组织NF-κB p65蛋白表达及炎症反应的影响

目的探讨参苓白术散联合美沙拉嗪对脾虚湿困型溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达及炎症反应的影响。方法随机选择20只小鼠作为空白对照组,82只小鼠使用TNBS法(三硝基苯磺酸)及环境和饮食干预法构建脾虚湿困型UC模型,选择2只小鼠判断造模是否成功,剩余80只随机分为模型组、西药组、中药组和联合组各20只,西药组给予美沙拉嗪0. 2 g/(kg·d),中药组给予参苓白术散煎剂12 g/(kg·d),联合组给予相同剂量的美沙拉嗪和参苓白术散煎剂联合治疗,模型组和空白对照组给予等量生理盐水,1次/d,连续21 d。取小鼠结肠组织制作病理切片,使用ELISA法检测血清中白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤杀伤因子-α(TNF-α)、白细胞介素-23(IL-23)水平,RT-PCR法检测NF-κB p65 mRNA表达量,免疫组化法检测NF-κB p65蛋白表达。结果西药组、中药组和联合组小鼠结肠黏膜形态均好于模型组。模型组结肠组织NF-κB p65 mRNA相对表达量、NF-κB p65蛋白表达、血清IL-17、TNF-α、IL-23均明显高于空白对照组(P 0. 05);西药组、中药组和联合组中结肠组织NF-κB p65 mRNA相对表达量、NF-κB p65蛋白表达、血清IL-17、TNF-α、IL-23均低于模型组(P 0. 05),联合组结肠组织NF-κB p65 mRNA相对表达量、NF-κB p65蛋白表达、血清IL-17、TNF-α、IL-23低于西药组和中药组(P 0. 05),西药组和中药组各项指标比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论参苓白术散联合美沙拉嗪通过调节NF-κB p65蛋白表达和炎症因子水平,从而促进结肠黏膜修复,改善脾虚湿困型溃疡性结肠炎小鼠症状。     

欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其机制研究

目的 探讨欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其作用机制。方法 将32只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、欧前胡素30?mg/kg组、欧前胡素60?mg/kg组。用欧前胡素预处理,脂多糖诱导进行模型复制,7?h后收集小鼠肺组织。测量肺湿/干重比,采用苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠肺组织病理学改变,检测小鼠肺组织中髓过氧化物酶（MPO）活力及活性氧类（ROS）的水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）,Western blotting检测小鼠肺组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、核转录因子κB（NF-κB）p65及基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠肺组织损伤评分、肺组织ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平升高（P?<0.05）,TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平升高（P?<0.05）;与模型组比较,欧前胡素组能够减轻肺组织损伤,降低肺损伤评分（P?<0.05）,降低小鼠肺组织中ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平（P?<0.05）,降低TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平（P?<0.05）;与欧前胡素30?mg/kg组比较,欧前胡素60?mg/kg组小鼠肺损伤评分、肺组织ROS水平、Akt及NF-κB p65蛋白磷酸化水平、TNF-α的释放及MMP-9蛋白表达水平降低（P?<0.05）,PI3K蛋白磷酸化水平及IL-1β的释放差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 欧前胡素对脂多糖诱导的急性肺损伤有保护作用,其作用机制可能与脂多糖诱导的急性肺损伤中ROS被抑制,以及ROS介导的PI3K/Akt/NF-κB通路被抑制有关。     

4-氨基水杨酸半乳糖苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞产生肿瘤坏死因子-α、核因子κB p65的作用

目的 观察4-氨基水杨酸半乳糖苷（4-ASA半乳糖苷）对脂多糖诱导RAW264.7细胞产生肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞核转录因子核因子κB（NF-κB p65）的作用.方法 实验设正常对照组、模型组（脂多糖组）、4-ASA半乳糖苷低、中、高剂量组,给药24 h后,酶联免疫吸附法（ELISA法）检测细胞上清中TNF-α的表达,细胞免疫法检测NF-κB p65的表达.结果 模型组TNF-α的表达显著高于正常对照组（P＜0.05）,而4-ASA半乳糖苷10、40、160 mg/L组与模型组相比,细胞上清中TNF-α的表达显著降低（P＜0.01）;模型组NF-κB p65的表达显著高于正常对照组（P＜0.01）,细胞核与细胞质中NF-κB p65的表达在10 mg/L组显著低于模型组（P＜0.05）,40、160 mg/L组的表达降低更显著（P＜0.01）.结论 4-ASA半乳糖苷在10、40、160 mg/L时可抑制细胞上清中TNF-α的表达,亦能抑制细胞质和细胞核中NF-κB p65的表达.     

肿瘤坏死因子α中和抑制脂多糖诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征肺组织细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨肿瘤坏死因子α（ TNF-α） 中和抑制脂多糖（ LPS） 诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征（ ARDS） 肺组织细胞凋亡的机制。方法 小鼠随机分为对照组、LPS 组和TNF-α中和组。采用LPS（ 5 mg/kg） 气道雾化造小鼠ARDS 模型, TNF-α中和组在滴入LPS 前24 h 腹腔注射依那西普（ 0. 4 mg/kg） , 滴入LPS 2 h 后收集标本。PCR 检测各组肺组织核转录因子κB（ NF-κB） p65、Bax、Bcl-2的表达水平,Western blot 检测NF-κB p65 和Erk1 /2 及二者磷酸化、Bax、Bcl-2 的蛋白水平; 测量各组肺组织干湿重比; HE 染色观察各组肺组织病理改变, 采用肺损伤半定量评分评估肺组织损伤程度。结果 LPS 组肺组织NF-κB 及Erk1 /2 活化水平升高、Bcl-2 与Bax 比降低（ P 〈0. 05） 。TNF-α中和能明显降低ARDS小鼠肺组织NF-κB 活化水平, Bcl-2 与Bax 比值升高。TNF-α中和组小鼠肺组织湿干重比及肺损伤半定量评分较LPS 组显著降低（ P 〈0. 05） 。结论 TNF-α中和抑制脂多糖诱导小鼠ARDS肺组织损伤, 其机制与抑制Erk1/2、NF-κB 活化, 上调Bcl-2/Bax 比值, 最终减少细胞凋亡密切相关。     

Tristetraprolin通过NF-?B通路抑制肺腺癌细胞自噬

目的研究RNA结合蛋白tristetraprolin在肺腺癌中的表达及抑制自噬作用的分子机制。方法瞬时转染tristetraprolin过 表达质粒,分别在转染tristetraprolin 24、48 及72 h 后采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot 检测肺腺癌细胞中 tristetraprolin表达及自噬相关分子Beclin1、LC3II/LCI及p62的表达变化。瞬时转染tristetraprolin过表达质粒及加入TNF-α,将 肺腺癌细胞分为空载组、tristetraprolin 组、空载+TNF-α组及tristetraprolin+TNF-α组,应用免疫荧光和Western blot检测NF-ĸB p65、c-rel、p50分子在细胞核中表达情况。共转染tristetraprolin过表达质粒及IκBα-mut质粒,将肺腺癌细胞分为tristetraprolin 空载组、IκBα-mut 空载组、tristetraprolin 组、IκBα-mut 组及tristetraprolin+IκBα-mut 组,采用RT-qPCR 和Western blot 检测 tristetraprolin表达及自噬相关基因表达变化。结果Tristetraprolin在肺腺癌细胞中RNA及蛋白水平表达低（P<0.001）。过表达 tristetraprolin 后,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达均较空载组降低（P<0.001）。同时,过表达 tristetraprolin后,细胞核内的p65及c-rel蛋白表达较空载组及空载+TNF-α组减少（P<0.05）,但p50表达无明显变化（P>0.05）。 过表达tristetraprolin后,p65及c-rel核移位较空载组减少。共转染IκBα突变质粒及tristetraprolin过表达质粒后,NF-κB信号通 路被阻断,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达较tristetraprolin过表达组升高（P<0.05）,NF-ĸB信号 通路被阻断后tristetraprolin对自噬的抑制作用减弱。结论Tristetraprolin在肺腺癌细胞中低表达,过表达tristetraprolin可能通 过抑制NF-ĸB p65及c-rel核移位而抑制肺腺癌细胞自噬。     

核因子κB"诱饵"寡核苷酸对小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎的影响

目的 探讨核因子κB“诱饵”寡核苷酸（NF-κB Decoy ODN）对葡聚糖硫酸钠（DSS）结肠炎的影响,为寻找一种治疗溃疡性结肠炎（UC）的新药提供实验依据.方法36只BALB/C小鼠按编号抽签随机分为：正常对照组;DSS＋NF-κB“诱饵”ODN组;DSS＋错配物ODN组;DSS＋生理盐水组,每组9只.方法（1）测定各组小鼠血清中尿素氮、肌酐、随机血糖、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶浓度.（2）取小鼠结肠组织进行大体及组织形态学观察.（3）免疫组织化学染色观察NF-κB p65在结肠黏膜细胞内的表达.（4）酶联免疫吸附法（ELISA）测定结肠黏膜组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量.（5）共聚焦显微镜观测NF-κB“诱饵”ODN在小鼠结肠黏膜内的分布.结果（1）5%DSS处理的3组小鼠的DAI评分和组织学评分及肠黏膜组织内TNF-α表达均明显高于正常对照组（均P＜0.05）;而NF-κB“诱饵”ODN组的上述指标均明显低于错义NF-κB“诱饵”ODN组和生理盐水组（均P＜0.01）.（2）5%DSS处理的3组小鼠其肠黏膜组织NF-κB p65的表达以胞核为主,而且这3组间NF-κB p65胞核表达差异无统计学意义.相反,正常对照组小鼠NF-κB p65以胞质表达为主.（3）NF-κB诱饵ODN可有效进入小鼠结肠黏膜层和黏膜下层组织.（4）各实验组小鼠肝、肾功能及血糖比较差异无统计学意义.结论NF-κB“诱饵’ODN对小鼠DSS结肠炎有较好的保护作用.     

欧前胡素抑制compound48/80介导的肥大细胞脱颗粒作用机制研究

[目的]探讨欧前胡素抑制compound48/80介导的肥大细胞脱颗粒作用机制.[方法]取雄性SD大鼠的腹腔肥大细胞进行体外培养,利用compound48/80诱导肥大细胞活化,治疗组分别加入10,20,40μmol/L的欧前胡素.利用ELISA法检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平,利用Western blot法检测NF-κB p65水平.[结果]与正常对照组比较,compound48/80可激活实验大鼠腹腔肥大细胞,增加细胞核内NF-κB p65表达量,减少胞浆中NF-κB p65表达量,促进NF-κB p65核转位;与正常对照组比较,模型对照组TNF-α,IL-6水平均明显升高(P<0.05).与模型对照组比较,欧前胡素各剂量组细胞核内NF-κB p65表达量明显减少,胞浆中NF-κB p65表达量明显增加,欧前胡素抑制NF-κB p65核转位,并明显降低肥大细胞TNF-α,IL-6水平(P<0.05),且作用效果呈浓度依赖性增强.[结论]欧前胡素可通过调节NF-κB激活抑制肥大细胞脱颗粒,从而抑制炎性细胞因子的释放.     

锌指蛋白A20及其相关炎症因子在椎间盘髓核细胞退变前后的表达变化

目的 检测椎间盘髓核细胞退变前后锌指蛋白A20及其相关炎症因子的表达变化.方法 获取我院骨科患者术中切除的椎间盘组织,分为正常组和退变组,采用阿辛蓝染色观察人椎间盘髓核细胞的退变情况,免疫组化观察人椎间盘髓核细胞A20、TNF-α、IL-1β及NF-κB p65蛋白的表达.体外培养胚胎小鼠髓核细胞,分为对照组(只加入等量的PBS)、内毒素(LPS)刺激组和NF-κB抑制组,分别以Real-time PCR检测LPS刺激细胞和加入NF-κB抑制剂后,A20、TNF-α、IL-1β、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMST-4)、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMST-5)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达变化;Western blot检测A20、TNF-α、IL-1β、ADAMTS4、ADAMTS-5、MMP-13、p65、磷酸化p65(p-p65)的表达变化.结果 退变组髓核细胞数量显著少于正常组,并有明显的聚集现象;退变组髓核细胞中A20、TNF-α、IL-1β、p65蛋白表达明显高于正常组;LPS刺激胚胎小鼠髓核细胞后,LPS刺激组A20、TNF-α、IL-1β、ADAMST-4、ADAMST-5、MMP-13mRNA与蛋白的表达均高于NF-κB抑制组与对照组(P＜0.05),A20、TNF-α、IL-1 β、ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-13、p65、p-p65蛋白含量也较NF-κB抑制组与对照组显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 髓核细胞炎症反应与椎间盘退变的发生、发展密切相关,A20可能通过NF-κB信号通路对抑制髓核细胞退变时炎症反应起到关键作用.     

重组人Elafin对慢性高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良中炎性因子及NF-κB信号通路的影响

目的：探讨重组人Elafin对慢性高氧致新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）中炎性因子和核因子-κB p65（nuclear factor-κB,NF-κB）蛋白的影响。方法：将30只C57BL/6J新生24 h内小鼠随机分成空气组、高氧+L/R组及高氧+Elafin组（n=10）。高氧+L/R 组、高氧+Elafin组暴露于85%氧气中。21 d时进行基础肺功能测定,采用HE染色观察小鼠肺组织形态学改变,RT-PCR检测肺组织炎症因子的表达,Western blot检测NF-κB p65蛋白表达情况。结果：与空气组[（7.85±0.24） g]比较,高氧+L/R组小鼠体质量[（5.33±0.63） g]显著下降（P=0.000）,肺发育受阻;TNF-α mRNA、IL-1β mRNA （P=0.000） 和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达增加,抗炎因子IL-4、IL-13 mRNA（P=0.000）表达降低。与高氧+L/R组比较,高氧+Elafin组小鼠体质量升高（P=0.014）,肺泡形态趋于正常;TNF-α（P=0.011）、IL-1β（P=0.000） mRNA和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达降低,IL-4（P=0.047）、IL-13（P=0.000） mRNA表达增加。结论：Elafin能有效减轻高氧诱导的小鼠肺损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB活化及炎症因子释放密切相关。     

羟基红花黄色素A对小鼠肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响

目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠H22肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响.方法 建立H22移植性肝癌小鼠模型50只,随机分为HSYA高剂量组(4.5 mg/kg)、HSYA中剂量组(2.25 mg/kg)、HSYA低剂量组(1.125 mg/kg)、阳性对照组(50 mg/kg)和生理盐水对照组,给药14 d.免疫印迹检测核转录因子-κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB-α)及NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的水平.结果 HSYA高、中、低剂量组能够下调细胞核p65蛋白的表达,抑制活化p65核移位,抑制IκB-α的磷酸化和胞质内IκB-α的降解即降低NF-κB的转录活性,尤以中剂量组效果最显著.结论 HSYA能抑制小鼠肝癌移植瘤NF-κB的转录活性.     

Exendin-4降低高糖联合TNF-α诱导的血管内皮细胞损伤的机制

目的观察exendin-4对于高糖联合肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC-12损伤的影响并探讨其可能机制。方法体外培养HUVEC-12细胞至对数生长期,根据干预措施分为正常对照组、高糖+TNF-α组(HT组)、高糖+TNF-α+exendin-4(1 nmol/L)组(HT+E1组)和高糖+TNF-α+exendin-4(10 nmol/L)组(HT+E10组),采用硝酸还原酶法检测NO含量,实时荧光定量PCR法检测细胞ICAM-1 mRNA表达,细胞免疫荧光法检测NF-κB p65核转位,Western blotting检测p38 MAPK蛋白表达。结果处理组细胞培养液中NO含量无明显差异;与对照组相比较,HT组核NF-κB p65荧光强度及p38 MAPK水平显著增加(P<0.01);加入Eexendin-4预处理组的ICAM-1 mRNA表达显著降低;HT+E10组核NF-κB p65荧光强度及p38 MAPK蛋白表达下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Exendin-4减少高糖联合TNF-α诱导的HUVEC-12细胞ICAM-1 mRNA表达,其机制可能与抑制NF-κB p65核转位及p38 MAPK蛋白有关。     

前B细胞克隆增强因子在急性呼吸窘迫综合征大鼠肺组织中表达及对炎症因子TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达影响的研究

目的：观察前B细胞克隆增强因子（pre-B cell colony enhancing factor,PBEF）在急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）大鼠中肺组织的表达,以及对ARDS大鼠肺组织炎症因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）mRNA以及核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）p65蛋白表达的影响,通过以上指标的变化,结合已有体外实验所观察到的现象试图证实前B细胞克隆增强因子在ARDS中的促炎作用。方法：将40只成年SD大鼠随机分为空白对照组（C组）、模型组（OA组）、药物干预组（D组）、溶媒对照组（S组）,OA组、D组及S组大鼠用油酸尾静脉注射复制ARDS模型,D组造模前腹腔内注射PBEF抑制剂FK866,S组造模前注射等体积FK866溶媒二甲基亚砜。造模成功6 h后取材,比较各组大鼠肺组织PBEF、TNF-α、IL-1β mRNA以及NF-κB p65蛋白表达情况。结果：C组大鼠肺组织中几乎见不到PBEF表达,而在其他各组大鼠肺组织肺泡壁及肺泡水肿液中、支气管黏膜上皮及血管内皮均可发现PBEF蛋白分布;OA组、D组和S组大鼠PBEF及炎症因子mRNA和NF-κB p65蛋白表达增加（PBEF：P=0.000,P=0.000,P=0.000;TNF-α：P=0.0３５,P=0.000,P=0.000;IL-1β：P=0.000,P=0.000,P=0.000;NF-κB p65：P=0.000,P=0.000,P=0.000）,D组大鼠肺组织PBEF、炎症因子mRNA和NF-κB p65蛋白表达较OA组和S组低（PBEF：P=0.002,P=0.006;TNF-α：P=0.004,P=0.001;IL-1β：P=0.001,P=0.015;NF-κB p65：P=0.001,P=0.000）。结论：PBEF可能通过激活炎症反应、促进炎症因子表达等途径造成肺组织的炎性损伤,进而在ARDS发生发展中起重要作用。     

Pyrin重组蛋白对小鼠肺纤维化NF-κB信号通路的作用

[目的]探讨Pyrin重组蛋白对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化NF-κB信号通路的作用.[方法]选择雌性清洁级BABL/c小鼠,随机分为正常对照组、肺纤维化模型组及Pyrin重组蛋白治疗组.第14 d给小鼠施行全身麻醉取右肺组织行HE及Masson三色染色.用Western blot检测肺组织中NF-κB p65蛋白的表达.[结果]与正常对照组比较,肺纤维化模型组小鼠肺组织中NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与肺纤维化模型组比较,Pyrin重组蛋白治疗组肺组织中NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05).[结论]Pyrin重组蛋白可抑制肺纤维化的发生,其机制可能是通过阻断NF-κB信号通路实现的.     

基于NF-κB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/lpr小鼠炎症反应的调节作用

[目的] 研究狼疮定对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)MRL/lpr小鼠炎症反应的影响，并分析其对核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路的调节作用。[方法] 将12只MRL/lpr小鼠随机分为模型组(6只)、干预组(6只)，另选取C57BL/6小鼠6只为对照组。干预组灌胃给予0.1 mL/10 g狼疮定浓缩液，对照组、模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液，所有动物均干预8周。给药前后分别测定血清炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、α-干扰素(interferon-α，IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor ɑ，IκBα)、NF-κB抑制蛋白α p50(NF-κB inhibitor ɑ p50，IκBαp50)、NF-κB抑制蛋白α p65(NF-κB inhibitor ɑ p65，IκBαp65)表达水平，采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system Real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction，ARMS-q PCR)检测NF-κB信号通路相关mRNA表达情况。通过苏木精-伊红染色检测肾组织损伤情况，采用免疫印迹法检测肾组织中炎性因子表达水平。[结果] 与对照组比较，模型组血清炎性因子IL-6、IFN-α、TNF-α、NF-κB信号通路相关蛋白(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平、NF-κB信号通路相关mRNA(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平均显著升高(P<0.05)，肾组织中IL-6、IFN-α、TNF-α表达水平升高(P<0.05)。模型组小鼠肾组织损伤明显，主要表现为肾小管扩张，肾小球硬化，结构严重破坏，且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应。干预后，MRL/lpr小鼠血清各指标水平均出现明显降低(P<0.05)，肾组织炎性损伤较模型组减轻。[结论] 狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠炎症反应，从而减轻炎性肾损伤，其作用机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

胶质瘤组织中核因子κB的表达及意义

目的目的探讨核因子κB(NF-κB)在胶质瘤组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学方法检测NF-κB p65在64例胶质瘤中的表达,10例正常大脑组织作为对照。结果64例胶质瘤中NF-κB p65蛋白阳性表达率为54.7%(35/64);10例正常脑组织中NF-κB p65无一例阳性表达。NF-κB p65蛋白的表达在星形细胞瘤与正常脑组织之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论NF-κB组成性活化与胶质瘤的发生相关,NF-κB p65是一种与胶质瘤相关的新的癌蛋白。     

NF-κB抑制剂对脂多糖刺激的退变人椎间盘髓核细胞炎症因子表达的影响

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)与炎症因子表达及相互关系.方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,设立对照组、LPS (500 μg/mL)刺激组、NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500 μg/mL)刺激组.ELISA方法检测各组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β的含量,免疫荧光法检测各组髓核细胞内p65的表达及定位,Western blot检测TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65以及磷酸化p-p65的表达,Real-time PCR检测TNF-α及IL-1β的表达.结果 LPS刺激髓核细胞后,p65入核增多,p-p65表达明显增加,ELISA实验结果表明LPS刺激组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平升高(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显上升(P＜0.05);而与LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组p65入核减少,p-p65表达明显降低,细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平降低(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显下降(P＜0.05).结论 LPS能够通过激活人退变髓核细胞NF-κB信号通路,促进炎性因子TNF-α及IL-1β表达增多,抑制NF-κB信号通路后可明显减轻炎性因子的表达.     

丙酮酸乙酯对滑膜细胞HMGB1的影响及机制

目的 探讨丙酮酸乙酯对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞高迁移率族蛋白-1（HMGB1）表达的影响及分子机制.方法 将培养的RA滑膜细胞分为正常对照组、TNF-α组和丙酮酸乙酯＋TNF-α组;采用RT-PCR法检测细胞HMGB1 mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清液中HMGB1、IL-6和IL-8含量;采用Western blot法分别检测滑膜细胞胞质和核内NF-κB变化;采用免疫荧光法观察NF-κB在细胞中的分布.结果 丙酮酸乙酯可抑制TNF-α诱导滑膜细胞IL-6、IL-8、HMGB1的分泌和HMGB1 mRNA的表达,以及NF-κ B（p65）在滑膜细胞核内的表达和移位.结论 丙酮酸乙酯能下调滑膜细胞HMGB1表达和抑制NF-κB信号通路活化,可能对RA发挥抗炎作用.