生物技术产物(HFS)对酸性蛋白酶酶活的影响

探讨生物技术产物HFS对537酸性蛋白酶活力的影响,测定了该酶的最适反应条件(最适温度为55℃,最适pH3),较系统考察了HFS对537酸性蛋白酶温度作用曲线和pH作用曲线的影响。试验结果表明,生物技术产物HFS对537酸性蛋白酶具有较好的激活作用,且不改变酶的最适反应条件。     

酒曲中高蛋白酶产生菌筛选及酶学性质研究

利用脱脂牛奶平板法从宋河酒曲中分离得到6株有明显水解圈的蛋白酶产生菌,其中水解圈直径与菌落直径之比最大为8.84,经鉴定为芽孢杆菌。以此菌种通过发酵培养提取出粗酶液,然后对该蛋白酶的酶学性质进行研究。试验表明,该蛋白酶的最适酶活力温度为40℃,在40℃～50℃热稳定性较好;该蛋白酶最适pH值为11.0,在pH值为9.0～11.0稳定性较好,在pH6.0条件下酶活力很快丧失;金属离子Fe2+对该蛋白酶有激活作用,Cu2+、Zn2+和Pb+有抑制作用,Mg2+、Ca2+和Li+对该蛋白酶酶活性影响不大。     

曲霉型豆豉酿造中米曲霉产蛋白酶作用条件研究

研究曲霉型豆豉酿造用米曲霉沪酿3.042产蛋白酶在其酿造过程中的最适作用条件。利用大豆豆汁培养基对米曲霉沪酿3.042菌株进行培养,并用(NH4)2SO4溶液对所产蛋白酶进行沉淀,脱盐处理后,研究该酶的最适作用pH及pH稳定性、最适作用温度及热稳定性以及Na Cl浓度对酶活力的影响。结果显示:该蛋白酶最适作用pH为6.0,酶活最高为1941U/m L,在pH为6.0~8.0时稳定性较高;最适作用温度为50℃,酶活为2658U/m L,在40℃以下其酶活力较稳定;Na Cl对淀粉酶酶促反应有明显的抑制作用,随着Na Cl浓度的升高,其抑制效果越明显。     

海洋细菌Pseudoalteromonas flavipulchra HH407低温碱性蛋白酶的发酵条件和酶学性质研究

对一株分离自连云港海域的海洋细菌(Pseudoalteromonas flavipulchra HH407)菌株产蛋白酶的条件及酶学性质进行研究。结果表明,在发酵温度为20℃、培养基pH 值为8.0、NaCl 质量浓度为20g/L、接种量2.5% 和装液量20% 时产酶较高。甘露醇、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、鱼粉和酵母粉有利于蛋白酶的产生。该酶的最适作用温度为35℃,0℃时相对酶活力达21.7%。45℃条件下保温60min 后酶活力仍能保持80% 以上。酶的最适作用pH 值为10.0,pH 值为7.0～11.0 范围为时,酶活力相对比较高。酶在pH8.0～11.0 范围内稳定,最稳定的pH 值为10.0,属于低温碱性蛋白酶,Mn2+、Cu2+、Ca2+ 对其具有较强的激活作用,Hg2+ 较强地抑制其酶活力。苯甲基磺酰氟(PMSF)能完全抑制该蛋白酶,EDTA 无影响表明该酶属于丝氨酸蛋白酶。     

章鱼肠道产蛋白酶菌的筛选、产酶条件及酶学性质

采用检测水解透明圈和测定蛋白酶活力的方法,从章鱼肠道中分离筛选出一株高产蛋白酶的菌株QDV-3,并对其产酶条件及酶学性质进行研究。结果表明:QDV-3菌株在以果糖为碳源,蛋白胨为氮源,培养基初始pH8.0,培养温度30℃的条件下振荡培养3.5d时,所产蛋白酶活力最高,Mn2+和Ba2+对菌株产蛋白酶有促进作用。所产蛋白酶在SDS-PAGE电泳上显示至少有5种蛋白酶,分子质量范围为32.4～124.2kD,蛋白酶的最适作用温度为50～60℃,最适作用pH值为9～11,在50℃条件下保温1h,剩余酶活力为95%,热稳定性较好。     

嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.产胞外蛋白酶特性及其酶学性质

对嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.生长过程中的产酶特性做了初步研究,并研究了其胞外蛋白酶的理化特性。试验结果表明:嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.生长周期较长,从对数期开始分泌大量胞外蛋白酶;胞外蛋白酶的最适酶解反应温度是60℃;该蛋白酶具有较好的热稳定性,70℃条件下放置60 min,酶活力基本保持不变;最适反应p H为7.5,在p H 6.5~8.5范围内酶活力保持稳定;此蛋白酶对Na Cl耐受性不强,Na Cl浓度超过2 mol/L时,酶活力被显著抑制(P0.01);金属离子Ca2+对蛋白酶活力具有激活作用,可以增强蛋白酶热稳定性;Mn2+则对蛋白酶活力具有抑制作用,而K+与Mg2+对蛋白酶活力无影响;1.31 mol/L异丙醇以及1mmol/L DTNB对酶活力基本无影响,5 mmol/L的EDTA严重抑制其蛋白酶活力,1 mmol/L的PMSF则使其完全失活,说明此酶可能是一种金属依赖性的丝氨酸蛋白酶。     

米曲霉M3中性蛋白酶的提取及酶学特性研究

采用硫酸铵沉降法分离纯化米曲霉M3所产中性蛋白酶，并对其酶学性质进行了研究。结果表明：用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达159781．1μ／g；该酶的最适反应温度为50℃，最适作用pH值为7．5；该酶在30～40℃时具有良好的热稳定性，在pH值6．5—7．5的条件下酶是稳定的；NH4^1 ，K^1 对该蛋白酶有明显的激活作用，Fe^3 则对其表现出强烈的抑制作用。     

毛霉3039产蛋白酶特性研究

通过对毛霉蛋白酶活力的测定初步研究了毛霉蛋白酶的特性.研究表明,毛霉分泌蛋白酶的旺盛期在培养的第5至6天.毛霉蛋白酶的最适反应pH在4.0～6.0之间,且在pH4.0～6.0之间稳定性较好;毛霉蛋白酶的最适反应温度为45℃～55℃,50℃时酶活力最大,且在40℃以下热稳定性较好.1.0%NaCl、1.0%CaCl2、1.0%MnSO4和1.0%Mg2SO4对蛋白酶有激活作用,1.0%KCl、1.0%ZnSO4扣1.0%CuSO4则对蛋白有不同程度的抑制作用.     

枯草芽孢杆菌B.SUBT12酶学性质研究

考察分离得到的一株产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌B.SUBT12最适作用温度、pH值以及温度、pH值、金属离子和表面活性剂对酶稳定性的影响。试验研究表明:该酶最适作用温度为55℃,最适作用pH为7.5,酶在55℃反应45min仍有50%的酶活力,热稳定性较好。金属Ca2+和表面活性剂Tween-80对酶有一定的激活作用,但激活作用不显著。     

中性和碱性蛋白酶协同酶解大豆分离蛋白研究

采用中性和碱性蛋白酶协同酶解大豆分离蛋白制备大豆多肽,采用茚三酮分析法测定酶解液中氨基氮含量以判断其酶解效率。影响大豆分离蛋白酶解主要因素有中性与碱性蛋白酶用量比、酶解pH值、酶解温度、酶解时间,通过单因素和优化酶解条件正交试验分析,筛选出酶解最适实验条件:中性蛋白酶与碱性蛋白酶用量比为1∶3、温度55℃、pH 8.5、酶解时间6 h;在此条件下酶解,氨基氮含量为15.86 mg/g。     

双酶法制备玉米肽酶解条件研究

利用双酶法水解玉米蛋白粉制备玉米肽,探讨各因素对水解度(DH)的影响,旨在确定玉米肽制备的最佳酶解条件。结果表明：最佳酶解条件为温度55℃、底物质量浓度5g/100mL、pH8.5,按4% 的酶与底物比加碱性蛋白酶水解1.5h 后,调整pH 值至7.5,之后再按3.5% 的酶与底物比加木瓜蛋白酶水解1.5h。在此条件下,水解液中DH 为80.97%。与单酶法相比,DH 明显提高。     

稻米淀粉的酶法研制

研究了用食品级碱性蛋白酶水解米粉蛋白质制备米淀粉的工艺条件,重点考察了酶用量、pH值、反应温度和水解时间对籼米粉蛋白质水解率的影响。实验结果表明,在反应温度为55℃,pH8.5,酶用量为12.0×10-3AU/g(米粉)下水解8h,籼米粉蛋白质的水解率达到94.00%以上,米淀粉蛋白质残留量<0.5%,米淀粉收率和回收率分别高于72.00%和90.00%。     

二次旋转正交组合设计优化羊骨蛋白酶解工艺

以新鲜羊骨为原料,选用碱性蛋白酶和风味蛋白酶按序分步水解羊骨蛋白,采用二次旋转正交组合设计优化双酶水解羊骨蛋白工艺条件。结果表明,在初始pH为8.5,初始温度为55℃,羊骨蛋白的最佳酶解方案为：底物浓度为10%,碱性蛋白酶添加量为3000u/g,作用时间为5h;风味蛋白酶添加量为3500u/g,作用时间为3.5h。     

酶法制备小分子大豆肽的蛋白酶筛选以及酶解条件优化

本研究对制备小分子大豆肽的蛋白酶进行筛选,并对酶解条件进行优化。综合考虑酶量对产物的水解度、平均分子量及游离氨基酸的影响,确定酶解的最佳条件为:温度55℃,pH值8.5,底物浓度为10%,分别加入1.5%的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶和3942中性蛋白酶,调pH值至4.5,再分别加入2.5%的Fromase真菌蛋白酶和537酸性蛋白酶。结果显示,多酶复合水解可提高蛋白质降解率,并尽可能降低多肽的相对分子质量。     

产中性蛋白酶种曲培养基的优化及酶学特性研究

以中性蛋白酶活力为检验指标,采用响应面法对米曲霉产中性蛋白酶的种曲培养基进行优化,确定其最佳配方组成为：面粉用量2．24g,花生粕用量8．46g,氯化钙用量0．028g,种曲中性蛋白酶活力高达15559．40U／g。经研究纯化后中性蛋白酶酶学特性,发现中性蛋白酶的最适pH为7．0,在pH5．0-7．0范围内具有良好的稳定性;最适作用温度为50℃,在40-55℃条件下能保持较高的酶活力;试验金属离子对蛋白酶没有显著的激活作用,Ba^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋和Cu^2＋具有显著的抑制作用。     

碱性蛋白酶水解红曲霉菌体的研究

为了使红曲霉菌体滤渣得到高值化利用,对红曲霉菌体的酶解条件进行研究。采用碱性蛋白酶对红曲霉菌体进行酶解,通过单因素试验和正交试验,确定最佳的酶解条件:酶解pH为8.5,酶解温度为55℃,底物浓度为40g/L,酶量为6×104 U/g.干菌体,酶解时间为20h。该条件下,酶解率为25.28%。     

麻疯树籽蛋白提取工艺的研究

采用碱提酸沉法对麻疯树籽粕中的麻疯树籽蛋白进行了提取研究。通过单因素试验和正交试验得到的最优工艺条件为:碱提料液比1∶11,pH8.5,温度55℃,时间100 min;酸沉pH4.4,温度55℃,时间40 min。在该工艺条件下,麻疯树籽蛋白提取率达到76.71%,分离物蛋白纯度达到81.18%。     

麦芽根中核酸酶的分离纯化及性质研究

采用硫酸铵沉淀及色谱分离技术对麦芽根中核酸酶进行了分离纯化,通过Sephacryl S-200,DEAE Sephadex A-50 and Sephacryl S-2003步色谱分离,得到了部分纯化的两种核酸酶(Ⅰ和Ⅱ),核酸酶Ⅰ的纯化倍数为94,核酸酶Ⅱ的纯化倍数为1790.高效液相色谱显示两种酶作用于酵母RNA的产物均为5′-核苷酸.核酸酶Ⅰ的热稳定性比核酸酶Ⅱ好,在55℃下保温2h后,核酸酶I的活力损失仅13%,而核酸酶Ⅱ则高达64%.两种酶的最适温度分别为55℃和65℃.两种酶的pH稳定性相似,在pH2.5～9.0范围内很稳定.核酸酶Ⅰ的最适pH值为5.0和8.0～8.5,核酸酶Ⅱ的最适pH范围为4.0～5.5.     

方便型阿胶元粉的生物复合酶酶解工艺技术研究及开发

对阿胶提取液的生物复合酶酶解工艺进行了研究.研究结果表明,酶解后产品低肽分子量80％小于2000u,各种氨基酸组成合理,易于人体吸收利用.最佳酶解工艺条件为选用2709碱性蛋白酶和Alcalase 2.4L碱性蛋白酶按1:1比例复配成复合酶制剂,底物浓度8％,酶浓度3％,温度55℃,pH值8.5,水解时间2h.     

低苦味花生多肽的制备

以花生分离蛋白为原料,研究复合酶协同酶解法制备低苦味花生多肽的最佳条件,并分析其体外抗氧化活性。根据单因素实验的结果,筛选出低苦味花生多肽的最佳水解条件,并通过测定清除DPPH、ABTS+自由基的能力来评价其抗氧化活性。结果表明,复合蛋白酶协同酶解花生分离蛋白的最佳反应条件为:使用碱性蛋白酶(pH8.5,温度55℃,时间4 h)、蛋白酶P(pH7.0,温度50℃,时间3 h)和风味酶(pH7.0,温度50℃,时间2 h)依次分步酶解花生分离蛋白,三种酶添加量分别为0.8%、0.4%和0.2%。此工艺下,酶解液苦味值为1.3,多肽得率为86.75%,相对分子质量低于1 kDa的多肽含量达85.93%。酶解液质量浓度为4 mg/mL时,对DPPH自由基和ABTS+自由基清除率分别为80.70%和87.92%,表明花生粗多肽抗氧化活性较好。