基于BMP-Smad/RUNX2信号通路探讨固本增骨方含药血清对大鼠BMSCs增殖和成骨分化的影响＊

目的 基于BMPs-Smad/RUNX2信号通路探讨固本增骨方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用机制。方法 制备固本增骨方含药血清；台盼蓝染色观察细胞生长情况；取P3代大鼠BMSCs分为空白血清组、5%、10%、20%、30%浓度含药血清组及传统诱导组，分别对各组大鼠BMSCs进行培养及成骨诱导，向6组加入相应培养液24 h后幵始测量细胞计数，连续测量4天；成骨诱导2周后，进行碱性磷酸酶染色试剂盒说明书进行染色，光镜下观察各组细胞蓝紫色区域的密集程度；ELISA法检测COL-I、ALP、BGP、OPN蛋白的含量；Real-time PCR检测BMPs信号通路相关基因BMP2、BMP4、Smad1、RUNX2表达。结果 各组固本增骨方含药血清组在培养24h后比空白组及传统成骨诱导组OD值比较差异均具有统计学意义（P < 0.05），并且20%含药血清组较5%、10%及30%含药血清组OD值比较差异具有统计学意义（P < 0.05）；碱性磷酸酶染色后镜下观察在浓度为20%时染色区域最密集；5%、10%、20%含药血清组与其他各组BGP、OPN、ALP、COL-I含量比较差异具有统计学意义（P < 0.05），且20%含药血清组与5%、10%含药血清组比较差异具有统计学意义（P < 0.05）；20%含药血清组与其他各组BMP2、BMP4、Smad1、RUNX2 mRNA表达比较差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论 固本增骨方能促进BMSCs的增殖，并且能促进成骨标志蛋白BGP、OPN、ALP、COL-I蛋白含量的增加，且在20%浓度为最佳，这个机制可能是激活了BMP-Smad/RUNX2信号通路实现的。     

益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞成骨性的影响

目的探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及其成骨分化的影响。方法实验分为益骨汤高剂量组、益骨汤中剂量组、益骨汤低剂量组、a-D3胶丸组、空白组,先制备各组相应含药血清,然后采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,每组给予相应含药血清培养成骨细胞,分别检测各组成骨细胞增殖情况及碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量。结果益骨汤高、中、低剂量组和a-D3胶丸组成骨细胞增殖情况均明显优于空白组(P均0.05),益骨汤高、中、低剂量组间比较差异无统计学意义;成骨细胞ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量均明显高于空白组(P均0.05),而与a-D3胶丸组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益骨汤中剂量组ALP活性、钙盐沉积量、钙素分泌量均明显高于益骨汤低剂量组。结论益骨汤含药血清可促进成骨细胞的增殖及成骨分化。     

基于Smads信号通路探讨止消通脉宁干预TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的研究

目的:探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测TβRI、TβRⅡ的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRI、TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2、Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

阳和汤体外对大鼠成骨细胞及破骨细胞增殖的影响

目的探讨阳和汤含药血清对成骨细胞、破骨细胞的影响作用。方法 SD大鼠连续7 d灌胃阳和汤,腹主动脉采血,制备含药血清。分离并培养原代成骨细胞、成骨细胞株UMR106、原代破骨细胞、破骨前体细胞RAW264.7。随机分为阳和汤含药血清低剂量组、中剂量、高剂量,空白血清组,各组加入相应含药血清进行培养,分别于24、48、72h收获细胞,采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响;比色法测定破骨细胞TRAP酶活性。结果阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在24、48、72h均能提高成骨细胞的增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组在48、72h也能明显提高细胞增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组对破骨前体细胞RAW264.7增殖率24、48、72h均没有影响,与空白血清组比较差异均无统计学意义;阳和汤含药血清中、高剂量组破骨前体细胞RAW264.7增殖率均低于空白血清组,24、48、72h比较差异有统计学意义;阳和汤含药血清低剂量组对破骨细胞的TRAP活性24、48 h影响不大,但72h TRAP活性低于空白血清组;阳和汤含药血清中、高剂量组48、72h破骨细胞TRAP活性均显著低于空白血清组。结论阳和汤能抑制体外培养的破骨前体细胞增殖,降低破骨前体细胞TRAP活性,对成骨细胞的增殖有促进作用。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的：探讨止消通脉宁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、Smad 3、Smad 7的影响。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1：1)培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测Smad 2、smad 3、Smad 7的mRNA表达。结果：HK-2细胞经TGF-β1诱导后, Smad 2、smad 3的mRNA表达显著上升,Smad 7的mRNA表达下降,与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05),但经止消通脉宁含药血清干预后, Smad 2、smad 3的mRNA表达逐步下降,Smad 7的mRNA表达上调,与单纯TGF-β1诱导组相比有显著性差异(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论：止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路mRNA表达的作用,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

不同浓度麝香含药血清对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响

目的探讨不同浓度麝香对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和定向成骨、成脂诱导分化的影响。方法 60只SD大鼠随机分为麝香高、中、低剂量组及空白对照组,每组15只。麝香高、中、低剂量组分别给予麝香16. 8、8. 4、4. 2μl/100 g灌胃,每日1次,连续8天,分别制备不同浓度麝香含药血清及空白血清。另取15只SD大鼠利用全骨髓贴壁筛选法分离BMSCs,培养至第3代,通过细胞形态学观察、细胞表型鉴定、成骨及成脂诱导分化方法鉴定BMSCs。利用不同浓度麝香含药血清和空白血清干预BMSCs,检测各组细胞不同时间细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原免疫荧光染色、钙化结节数及脂肪细胞转化率。结果与空白血清组同时间比较,麝香低剂量血清组在第2、3、4、5、7天,麝香中剂量血清组在第1、5天细胞增殖率均升高;麝香低剂量血清组在第2、4、6、8天,麝香中剂量血清组在第4、8天,麝香高剂量血清组在第2、8天ALP活性升高;除麝香高剂量血清组钙化结节数外,各组钙化结节数和脂肪细胞转化率亦升高(P 0. 05或P 0. 01)。与麝香低剂量血清组比较,麝香高剂量血清组在第1、3、5、7天,麝香中剂量血清组在第1、5天细胞增殖率降低,在第6、8天ALP活性降低,钙化结节数及脂肪细胞转化率亦降低(P 0. 05)。麝香高、中、低剂量血清组Ⅰ型胶原细胞阳性表达依次增强,空白血清组细胞阳性表达很弱或几乎未见。结论麝香可以促进BMSCs增殖并诱导其定向分化,以4. 2μl/100 g浓度效果最好。     

基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响

目的 基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响。方法 取3月龄SPF级雌雄各半SD大鼠40只，随机分为药物组与蒸馏水组各20只，药物组按2.7 mL/（kg·d）灌服生药量浓度为1.554 g/mL接骨丹药液，蒸馏水组以等剂量蒸馏水灌胃，2组每日早晚各灌胃1次，灌胃7 d后取大鼠腹主动脉血制备接骨丹含药血清和空白血清。取2月龄SD大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓液培养传代至第4代制备骨髓间充质干细胞模型，随机分为空白组、模型组、接骨丹组、抑制剂组，选用细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂对ERK通路进行抑制。空白组采用10%空白血清+α-MEM培养液进行培养；模型组采用10%空白血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养；接骨丹组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液进行培养；抑制剂组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养。4组均培养9 d后分别检测4组碱性磷酸酶（ALP）浓度，采用免疫荧光法测定Ⅰ型胶原（COLI）表达水平，采用qPCR法检测COLI、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad4...     

补肾益髓中药含药血清诱导BMSC骨向分化作用机制的实验研究

目的:探讨补肾益髓中药血清对骨质疏松症大鼠BMSC骨向分化的调控机制。方法:分离培养大鼠BMSC,实验随机分为6组即空白组、血清组、血清+TGF组、血清+BMP组、TGF+BMP组、综合诱导组,检测补肾中药含药血清对BMP-2、TGF-β1、Smad4、Cbfa1 mRNA表达,探讨补肾益髓中药含药血清在诱导BMSC骨向分化过程中可能的作用机制。结果:综合诱导组能明显促进ALP、Coll、BGP、TGF-β1、、BMP-2的表达量;血清+TGF、TGF+BMP、血清+BMP联合使用有一定的协同作用。各诱导在促进BMSC向OB分化过程中,通过上调TGF-β超家族/Smads信号传导通路中Smad4以及Cbfa1 mRNA水平,对骨向分化起到了启动和促进作用。结论:各诱导组在诱导BMSC骨向分化的过程中,上调Smad4、Cbfa1mRNA水平可能是诱导各组促进BMSC骨向分化的作用机制之一。     

糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对TGF-β1、HO-1干预作用的研究

[目的]探讨糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血红素氯合酶-1(HO-1)干预作用。[方法]制备小鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:空白对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、空白血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%空白血清)、糖肾方低剂量血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%低剂量含药血清)、糖肾方高剂量血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%高剂量含药血清)。使用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖的影响。运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测肾小管上皮细胞中TGF-β1、HO-1和α-SMA蛋白的表达。[结果]高糖诱导下,肾小管上皮细胞呈成纤维细胞样的长梭形,细胞核呈梭形改变。MTT检测:与空白组比较,高糖组光度值明显增高(P0.05);与高糖组比较,高低剂量含药血清组在培养24 h后吸光度值均有下降,吸光度差异有统计学意义(P0.05),且高剂量组光度值下降强于低剂量组(P0.05)。Western blotting及RT-PCR测定实验结果显示:与空白对照组细胞对比,高糖组中TGF-β1、α-SMA含量增加;经过含药血清干预后,高糖诱导的HK-2细胞TGF-β1、α-SMA含量降低,差别有统计学意义(P0.05);糖肾方高、低剂量组血清比较,在降低TGF-β1方面,高剂量组效果较好(P0.05),在降低α-SMA方面没有统计学差异(P0.05)。HO-1在高糖诱导后含量稍升高,与空白对照组对比,差异有统计学意义(P0.05);在经过糖肾方含药血清干预后,含量升高,与高糖组对比,差异有统计学意义(P0.05),糖肾方高低剂量组血清比较,升高HO-1含量方面没有统计学差异(P0.05)。[结论]糖肾方通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和干预TGF-β1、α-SMA、HO-1相关分子的表达,可以抑制细胞外基质成分沉积,减少氧化应激反应,减轻细胞损伤,逆转上皮-间质转分化,从而抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。     

壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞增殖 及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的观察壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)增殖、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)合成的影响,探讨壮骨胶囊对骨代谢、骨形成机制的作用。方法壮骨胶囊由射干、白芍等组成。实验分为对照组、壮骨胶囊高、中、低剂量组(4.3、2.15、1.08 g生药/kg),给药组灌胃给予Wistar大鼠壮骨胶囊,对照组给于等体积水,连续给予7 d后,采血离心制备对照组空白血清及含药组血清;以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,用空白血清及含药血清处理体外培养的MC3T3-E1成骨细胞,采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,IFCC速率法测定ALP活性,酶联免疫法测定BGP分泌量。结果壮骨胶囊含药血清各剂量组对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖有显著的促进作用,高、中剂量组48 h可促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.05),高、中、低剂量组72 h均能促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.01,P 0.05);高、中剂量组含药血清作用于MC3T3-E1细胞72 h后,ALP活性、BGP分泌量较对照组明显提高(P 0.01,P 0.05)。结论壮骨胶囊含药血清具有促进骨形成作用,这可能与其促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞ALP的合成和BGP的分泌,从而改善骨代谢有关。     

滋肾骨康丸对去卵巢大鼠骨质疏松症作用的实验研究

目的：探讨滋肾骨康丸对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用。方法：选择雌性大鼠50只，随机分为空白组、模型组、高剂量组、低剂量组和尼尔雌醇组5组，每组10只，造模后两周开始灌胃给药，治疗组按照大（12g/kg）、小（6g/kg）给以滋肾骨康丸，阳性对照组给以尼尔雌醇1．0g/kg，空白组与模型组给以生理盐水，共12周。试验结束后，取样本测骨密度、骨矿含量和血清E2含量的变化。结果：与空白组比，模型组测骨密度、骨矿含量和血清E2含量均明显降低（P〈0．01）；与模型组比，高剂量组、低剂量组和尼尔雌醇组均可使骨密度、骨矿含量和血清E2含量升高（P〈0．01）。结论：结果表明，滋肾骨康丸具有较好的治疗骨质疏松症的作用，值得进一步的开发和利用。     

右归丸方含药血清对BMSC增殖、骨向分化的干预作用研究

目的:观察右归丸含药血清对骨髓基质干细胞的骨向分化诱导作用,通过右归丸含药血清对骨髓基质干细胞Akt、mTOR磷酸化水平的影响,探讨右归丸含药血清促骨髓基质干细胞骨向分化的部分作用机制。方法:制备高中低3个剂量的右归丸大鼠含药血清,提取大鼠骨髓基质干细胞,传至第3代,将细胞随机分为5组:空白对照组、空白血清组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组、高剂量含药血清组。分别给予不同浓度血清及PBS干预24 h后,检测各组细胞中碱性磷酸酶活性、骨钙素表达水平及Akt、mTOR磷酸化水平。结果:空白对照组与空白血清组之间比较,ALP、Osteocalcin、p-Akt、p-mTOR表达水平无统计学差异(P>0.05),与空白对照组和空白血清组比较,3个剂量含药血清组细胞中ALP活性及Osteocalcin、p-Akt、p-mTOR表达水平均不同程度提高(P>0.01),但中剂量和高剂量含药血清组ALP活性及Osteocalcin、p-Akt、p-mTOR表达水平均无显著性差异(P>0.05)。结论:右归丸含药血清具有一定的促进骨髓基质干细胞骨向分化的作用,该作用可能是通过提高Akt、mTOR的磷酸化水平而实现的。     

羌活鱼水提物在大鼠骨髓间充质细胞成骨中的作用

目的：探讨羌活鱼水提物含药血清对大鼠骨髓间充质细胞（BMSCs）成骨的作用。方法：取大鼠第三代BMSCs分为4组,待BMSCs接近80%融合时,分别应用生理盐水＋DMEM/F12培养液＋成骨分化诱导液＋5%FBS（生理盐水对照组）、高剂量羌活鱼水提物＋DMEM/F12培养液＋成骨分化诱导液＋5%FBS（羌活鱼水提物高剂量组）、中剂量羌活鱼水提物＋DMEM/F12培养液＋成骨分化诱导液＋5%FBS（羌活鱼水提物中剂量组）、低剂量羌活鱼水提物＋DMEM/F12培养液＋成骨分化诱导液＋5%FBS（羌活鱼水提物低剂量组）培养基培养。应用碱性磷酸酶（ALP）活性、钙盐沉积量及钙化结节数检测成骨分化程度。采用SPSS 16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果：羌活鱼水提物含药血清组较生理盐水对照组表现出高ALP活性、高钙盐沉积量、高骨钙素分泌量。结论：羌活鱼水提物含药血清可提高成骨性诱导液诱导BMSCs成骨分化的能力,表现出高ALP活性及基质矿化能力,在BMSCs成骨分化中可起到重要作用。     

真武汤经Ito/Kv通路对心力衰竭心肌细胞电重构的影响

探讨真武汤通过瞬时外向钾电流(I_to)/电压门控钾(Kv)通路来调节电重构以治疗心力衰竭的可能作用机制。取5只正常SD大鼠灌服真武汤颗粒剂制备含药血清,另取7只正常SD大鼠灌服等量蒸馏水制备空白血清,常规传代H9c2心肌细胞,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用24 h后,分别采取2%、4%、8%含药血清,辛伐他汀(simvastatin, SIM)及氯化钡(BaCl₂)干预细胞24 h,设为对照组[N,10%空白血清+90%高糖培养基(DMEM-H)];模型组(M,AngⅡ+10%空白血清+90%DMEM-H);真武汤含药血清低剂量组(Z1,AngⅡ+真武汤2%含药血清+8%空白血清+90%DMEM-H);真武汤含药血清中剂量组(Z2,AngⅡ+真武汤4%含药血清组+6%空白血清+90%DMEM-H);真武汤含药血清高剂量组(Z3,AngⅡ+真武汤8%含药血清组+2%空白血清+90%DMEM-H);诱导剂组(YD,AngⅡ+SIM+10%空白血清+90%DMEM-H);抑制剂组(YZ,AngⅡ+BaCl₂+10%空白血清+90...     

基于Hippo-YAP信号通路探讨桃红四物汤对BMSCs增殖与成骨分化的影响

目的 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,运用桃红四物汤含药血清和Hippo信号通路抑制剂Verteporfin干预,进而观察BMSCs增殖和成骨分化的能力。方法 采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,选用10倍等效剂量的桃红四物汤灌服大鼠制备桃红四物汤含药血清,采取0.9%氯化钠注射液灌胃大鼠制取空白组对照血清,将BMSCs分为3组：空白血清组、桃红四物汤含药血清组（THSWT组）以及桃红四物汤含药血清+Verteporfin组（THSWT+V组）,使用CCK-8分析法分析4个时相点0、1、3、7 d细胞增殖活力;干预7 d后,进行ALP测定,观察骨向分化程度;处理21 d后,进行茜素红染色,观察钙积累,Western blotting法检测各组细胞成骨关键因子及Hippo通路关键蛋白表达。结果 THSWT组BMSCs细胞增殖能力明显高于THSWT+V组及空白血清组（P <0.01）;THSWT组BMSCs成骨分化能力及钙盐沉积程度高于THSWT+V组及空白血清组;THSWT组中YAP蛋白表达低于空白血清组、TAZ蛋白表达高于空白血清组（P <0.05）;THSWT...     

益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡干预作用的初步研究

目的:探讨益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡作用的影响。方法:采用血清药理学方法制备益气养阴解毒方含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562/A02白血病细胞,采用MTT比色法观察益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测益气养阴解毒含药血清诱导K562/A02细胞凋亡的影响。结果:不同浓度益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。高、中、低剂量的益气养阴解毒方含药血清可诱导K562/A02细胞的凋亡,其凋亡作用以中、高剂量中药血清组最强。结论:益气养阴解毒方含药血清具有抑制K562/A02白血病细胞增殖作用,可诱导K562/A02白血病细胞明显凋亡,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关。     

加味茵陈四逆汤含药血清对TGF-β1干预的大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smads通道及胶原蛋白的影响

目的:探讨加味茵陈四逆汤含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)干预的大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad通道相关蛋白及胶原蛋白3(Collagen3)生成量的影响。方法:以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象,将细胞分为空白组,模型组,阳性药物组(甲强龙,10%含药血清),加味茵陈四逆汤高、中、低剂量组(10%含药血清),共6组。除空白组外,其余均给予TGF-β1(10 g·L-1)并采用相应10%的含药血清培养,并采用蛋白质免疫印迹(Western blot)的方法检测各研究组含药血清对大鼠肝星状细胞HSC-T6 Smad3,Smad7,Collagen3蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,模型组HSC-T6细胞Smad3,Smad7,Collagen3蛋白表达升高,Collagen3蛋白表达升高较为明显(P0.05);与模型组比较,加味茵陈四逆汤低剂量明显降低Smad3蛋白表达(P0.05),加味茵陈四逆汤中剂量明显降低Collagen3蛋白表达(P0.05)。结论:加味茵陈四逆汤含药血清使Smad3,Collagen3蛋白表达下调,Smad7未见明显变化,提示本药在离体条件下可以延缓肝纤维化的进程。     

胃热消炎合剂对人胃癌细胞SGC-7901增殖影响的机制研究

目的研究胃热消炎合剂对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法取对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901进行体外实验,其中空白血清组加入含10%正常血清培养,低剂量含药血清组加入含2.5%药物血清+7.5%正常血清培养,中剂量含药血清组加入含5%药物血清+5%正常血清培养,高剂量含药血清组加入含10%药物血清培养,胃热消炎合剂含药血清通过给大鼠灌胃的方式获得。分别采用CCK-8法、EdU染色法和免疫荧光法检测各组细胞增殖情况,采用RT-PCR法检测各组细胞增殖信号通路p53-p21的相关基因p21、p53、CyclinD1、CDX2、CDK7mRNA的表达情况,采用Western blot法检测各组细胞中p21、p53、CyclinD1、CDX2蛋白表达水平。结果各含药血清组SGC-7901细胞增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性。各含药血清组p21、p53 mRNA表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),CyclinD1 mRNA表达水平均明显低于空白血清组(P均<0.05),且呈浓度依赖性;各组CDX2、CDK7mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。各含药血清组p21蛋白表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),且呈浓度依赖性;低剂量含药血清组和中剂量含药血清组p53蛋白表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),而高剂量含药血清组p53蛋白表达水平明显低于空白血清组(P<0.05);各组CyclinD1、CDX2蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论胃热消炎合剂可能通过作用于细胞周期来抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,其可能具有预防和治疗早期胃癌的作用。     

益肺方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:探究益肺方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法选取15只大耳兔分别给予高剂量益肺方、低剂量益肺方和生理盐水连续灌胃14天处理,采心脏血液并取其血清,并在体外培养的肺癌A549细胞株中加入上述益肺方含药血清。使用MTT法检测肺腺癌A549细胞增殖能力,使用Annexin V/PI法检测细胞凋亡、使用Westen Bolt和RT-PCR定性、半定量检测Bcl-2、Bax、P-mTOR、P-AMPK、caspase-3、caspase-9的表达量。结果MTT比色结果显示,相比空白对照组,低剂量组和高剂量组细胞抑制率显著升高(P0.01),相比低剂量组,高剂量组的抑制率显著提高(P0.01);相比空白组,低剂量组和高剂量组含药血清caspase-3、caspase-9表达量显著增加,相比低剂量组,高剂量组caspase-3、caspase-9表达量显著增加(P0.01);相比空白组,低剂量组和高剂量组Bcl-2、P-mTOR表达量显著降低,Bax、P-AMPK表达量显著增加且两者有显著性差异(P0.01),相比低剂量组,高剂量组Bcl-2、P-mTOR表达量显著降低,Bax、P-AMPK表达量显著增加且两者有显著性差异(P0.01)。结论:益肺方含药血清可以抑制肺腺癌A549细胞增殖,同时可以通过调控AMPK/mTRO信号通路促进结直肠癌细胞的凋亡。     

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞的影响

目的:探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为血竭高、中、低剂量含药血清组和正常对照组,每组6只。用药组分别以0.2、0.1、0.05 g·kg-1·d-1的血竭灌胃,正常对照组给予生理盐水,7 d后取血制备含药血清。组织块法培养大鼠成纤维细胞,检测血竭含药血清对成纤维细胞增殖活性、TGF-β1分泌水平以及TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响。结果:与正常对照组比较,血竭各剂量含药血清能显著提高成纤维细胞的增殖活性和TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ及p-Smad3蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);中、高剂量含药血清组TGF-β1水平、Smad3、和Smad3蛋白磷酸化水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论:血竭对创伤的修复作用可能与其调节TGF-β1/Smad3信号转导通路有关。