健脾清化方对AngⅡ刺激下大鼠系膜细胞NADPH/p38MAPK氧化应激通路的影响

目的研究健脾清化方对AngⅡ刺激下大鼠系膜细胞NADPH/p38MAPK通路的影响。方法 SD大鼠分为正常组、健脾清化方组(5.8 g/kg)、氯沙坦组(10 mg/kg),灌胃给药3 d后,腹主动脉取血,得含药血清。大鼠肾小球系膜细胞株随机分为6组,分别予10%正常大鼠血清、10%健脾清化方含药血清、10%氯沙坦含药血清、10%正常大鼠血清和100 nmol/L AngⅡ、10%健脾清化方含药血清和100 nmol/L AngⅡ、10%氯沙坦含药血清和100 nmol/L AngⅡ,处理24 h。RT-PCR法检测p47phox mRNA表达,化学发光法检测MDA、SOD水平,Western blot法检测p-p38MAPK蛋白表达。结果与10%正常大鼠血清组比较,10%正常大鼠血清+AngⅡ组SOD水平明显减弱,MDA水平明显增加,p47phox mRNA以及p-p38MAPK蛋白表达显著增高(P0.01);健脾清化方干预后,能明显改善AngⅡ刺激后大鼠系膜细胞以上各指标。结论健脾清化方可能通过抑制被AngⅡ激活的大鼠系膜细胞NADPH/p38氧化应激通路,从而延缓慢性肾衰进程。     

基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响

目的 基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响。方法 取3月龄SPF级雌雄各半SD大鼠40只，随机分为药物组与蒸馏水组各20只，药物组按2.7 mL/（kg·d）灌服生药量浓度为1.554 g/mL接骨丹药液，蒸馏水组以等剂量蒸馏水灌胃，2组每日早晚各灌胃1次，灌胃7 d后取大鼠腹主动脉血制备接骨丹含药血清和空白血清。取2月龄SD大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓液培养传代至第4代制备骨髓间充质干细胞模型，随机分为空白组、模型组、接骨丹组、抑制剂组，选用细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂对ERK通路进行抑制。空白组采用10%空白血清+α-MEM培养液进行培养；模型组采用10%空白血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养；接骨丹组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液进行培养；抑制剂组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养。4组均培养9 d后分别检测4组碱性磷酸酶（ALP）浓度，采用免疫荧光法测定Ⅰ型胶原（COLI）表达水平，采用qPCR法检测COLI、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad4...     

滋肾健骨方含药血清对人骨髓间充质干细胞成骨分化中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨滋肾健骨方含药血清对老年骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其作用机制。方法 取SD大鼠制备低、中、高剂量滋肾健骨方含药血清和空白血清。将培养第3代的老年骨质疏松症患者hBMSCs分为6组，空白组常规培养；模型组进行成骨诱导；空白血清组进行成骨诱导+空白血清培养；低剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+低剂量滋肾健骨方含药血清培养；中剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+中剂量滋肾健骨方含药血清培养；高剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+高剂量滋肾健骨方含药血清培养。CKK-8法检测细胞增殖情况，碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞分化情况，Western blot法检测细胞中转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达情况。结果 与模型组和空白血清组比较，各剂量滋肾健骨含药血清组细胞增殖活性和ALP活性均明显增强(P均<0.05),且中、高剂量滋肾健骨含药血清组均明显强于低剂量滋肾健骨含药血清组(P均<0.05);与模型组和空白血清组比较，各剂量滋肾健骨含药血清组细胞...     

补中益气汤通过Nrf2/ROS通路调控线粒体途径细胞凋亡改善A549/DDP细胞顺铂耐药的分子机制

目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E₂相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组(10%空白血清)、顺铂组(10%空白血清+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤组(10%含药血清+20 mg·L^-1顺铂)、ML385组(10%空白血清+5μmol·L^-1ML385+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤联合ML385组(10%含药血清+5μmol·L^-1ML385+20 mg·L^-1顺铂)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组(10%空白血清+5μmol·L^-1TBHQ+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤联合TBHQ组(10%含药血清+5μmol·L^-1TBHQ+20 mg·L^-1顺铂)...     

苓桂术甘汤调节Sig1R抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大的作用及机制

探讨苓桂术甘汤通过调节sigma-1受体分子(sigma-1 receptor, Sig1R)抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。制备苓桂术甘汤含药血清与空白血清,构建体外AngⅡ诱导H9c2心肌细胞肥大模型,将H9c2细胞分为正常组、AngⅡ模型组、20%空白血清组(20%normal rat serum, 20%NSC)、20%苓桂术甘汤含药血清组。按分组将细胞用AngⅡ(1μmol·L^-1)或AngⅡ与血清共孵育72 h后,鬼笔环肽染色检测心肌细胞表面积,微量法检测细胞Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性,流式细胞术检测线粒体Ca²⁺水平,Western blot法检测细胞中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)、Sig1R、肌醇1,4,5-三磷酸受体2型(inositol ...     

真武汤抗大鼠心肌细胞凋亡机制的体外实验研究

目的:通过真武汤抗大鼠心肌细胞凋亡机制的体外实验研究,阐述真武汤抗心肌细胞凋亡的具体机制。方法:(1)采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量;(2)筛选真武汤含药血清的最佳浓度;(3)实验分为模型对照组[异丙肾上腺素(10~6 mol/L)]、空白对照组、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)、卡托普利组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)];(4)AO/EB双重荧光染色和流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;(5)Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果:(1)异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;异丙肾上腺素10μmol/L作用6h后,细胞存活率降低明显。(2)真武汤含药血清浓度的选择:各组心肌细胞与相应干预措施作用48h后,各干预组细胞活性均低于空白组,差异有统计学意义(P0.05);卡托普利组及不同浓度含药血清组细胞活性均高于异丙肾上腺素组(P0.05);20%含药血清组、10%含药血清组与卡托普利组相比细胞存活率相似,差异无统计学意义,但考虑到中药的细胞毒作用及成本,选择10%含药血清组进行后续实验。(3)AO/EB双重荧光染色检测细胞凋亡:与空白组比较,真武汤组及西药组可见明显抑制心肌细胞凋亡。(4)流式细胞仪检测心肌细胞凋亡:模型对照组细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较有显著差异(P0.01);卡托普利组及真武汤组与模型对照组相比细胞凋亡明显降低,有统计学差异(P0.05)。(5)Western Blotting检测结果:真武汤组和卡托普利组与模型对照组相比较,Caspase-3蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能降低心肌细胞损伤,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与调节Caspase-3蛋白表达有关。     

真武汤对心力衰竭大鼠血清AngⅡ及ALD的影响

目的:观察真武汤对心力衰竭大鼠的疗效,并探讨其作用机制。方法:以80只健康雄性wistar大鼠为研究对象,除空白组10只外,其余70只通过冠脉结扎手术,术后结合冷水力竭式游泳,复制心力衰竭动物模型,把造模后存活的50只大鼠随机分为真武汤高剂量组、中剂量组、低剂量组,西药组和模型组5组,分别予以真武汤、卡托普利、生理盐水灌胃,疗程15 d。采用ELISA法分别测定大鼠血清BNP、AngⅡ及ALD浓度。结果:除ALD真武汤低剂量组外,其余各组与模型组比较均可降低大鼠BNP、AngⅡ及ALD水平(P<0.05);真武汤高剂量组BNP水平较卡托普利组明显降低(P<0.05);真武汤各剂量组中高剂量组降低大鼠的BNP、AngⅡ及ALD水平最为显著(P<0.05),与真武汤中剂量组ALD水平比具有降低趋势(P>0.05);真武汤高剂量组降低AngⅡ水平与卡托普利组比较有降低趋势(P>0.05);真武汤中、低剂量组大鼠血浆ALD水平明显高于卡托普利组(P<0.05)。结论:真武汤能够明显降低心力衰竭大鼠血清AngⅡ及ALD水平,说明真武汤通过拮抗RAAS系统来逆转心室重构,可能是真武汤治疗心力衰竭的机制之一。     

真武汤含药血清对异丙肾上腺素致心肌细胞凋亡Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察真武汤含药血清对异丙肾上腺素致大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨真武汤对心肌细胞损伤的保护作用机制。方法:采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量。筛选真武汤含药血清的最佳浓度。实验分为空白组、模型组[异丙肾上腺素(10-6mol/L)]、西药组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)]、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)。硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)的含量来衡量心肌细胞的损伤程度。免疫荧光检测线粒体膜电位。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:1、异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;2、异丙肾上腺素10μmol/L作用6 h后,细胞存活率降低较明显;3、TBA法检测MDA含量:与异丙肾上腺素作用相比,真武汤使心肌细胞内MDA含量减少,使心肌细胞受损伤的程度降低;4、免疫荧光检测线粒体膜电位:模型组与空白组比较线粒体膜电位明显变化,而真武汤与西药组较模型组线粒体荧光表达有所下降;5、TUNEL分析心肌细胞凋亡率:异丙肾上腺素组心肌细胞凋亡率明显升高,与空白组相比有显著性差异(P0.05);卡托普利组及真武汤10%含药血清组心肌细胞凋亡率与异丙肾上腺素组相比明显降低,有显著性差异(P0.05);6、Western Blotting检测结果:异丙肾上腺素组心肌细胞Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增加,与空白对照组比较有显著性差异(P0.01);真武汤10%含药血清组和西药组与模型组相比较,Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能有效降低异丙肾上腺素引起的心肌细胞损伤,抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与其能够保护心肌细胞内线粒体,调节Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

山仙颗粒含药血清对大鼠S-180肉瘤细胞Fas/FasL基因表达的相关性研究

目的探讨山仙颗粒(SXG)含药血清对大鼠S-180肉瘤的抑制作用及肿瘤凋亡相关基因fas/fasl表达的影响,探讨其抗肿瘤发生和发展的机理。方法通过体外细胞培养扩增S-180肉瘤细胞制备细胞悬液,将其置入不同浓度的含药SD大鼠血清及正常SD大鼠血清中,分成对照组(1640培养液)、空白1组(10%正常鼠血清)、空白2组(100%正常鼠血清)、含药血清1组(10%鼠含药血清)和含药血清2组(100%鼠含药血清),分别培养24h、48h、72h后收集细胞计数并制成细胞涂片,免疫细胞化学(二步法)检测瘤组织中fas/fasl基因的表达情况对照分析。结果 1、各时间段的对照组及空白1、2组比较、含药血清1组与空白血清1组比较Fas基因及Fasl基因表达水平无显著差异(P>0.05);含药血清2组与空白血清2组比较Fas基因表达水平升高而Fasl基因表达水平下降(P<0.05)。2、含药血清2组各时间段比较,Fas基因表达水平48 h及72 h较24 h的Fas基因表达水平升高(P<0.05),而48 h与72 h比较无显著差异(P>0.05);Fasl基因表达水平各时间段无显著差异(P>0.05)。结论 SXG大鼠含药血清能显著使体外培养的S-180肉瘤的促凋亡基因Fas表达增强而抑凋亡基因Fasl表达减弱,从而诱导S-180肉瘤细胞的凋亡来抑制其生长。     

当归补血汤通过PI3K/Akt通路对AngⅡ诱导肥大心肌细胞的保护作用

目的:研究当归补血汤对肥大心肌细胞的保护作用及其与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(e NOS)/一氧化氮(NO)信号转导通路的关系。方法:体外培养H9C2心肌细胞,采用α-肌动蛋白(α-actin)抗体进行免疫组化法鉴定心肌细胞;用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2心肌细胞肥大模型,通过BCA蛋白测定法测定心肌细胞总蛋白含量,比较空白组和模型组蛋白含量的不同,以验证AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的模型;取同代生长状态良好的细胞分为空白组,模型组,LY294002阻断剂组和10%含药血清组,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组心肌细胞p-Akt,Akt,p-e NOS,e NOS等信号通路的相关蛋白表达,硝酸还原酶法检测各组细胞培养液中NO浓度。结果:免疫组化法鉴定细胞,棕黄色细密颗粒位于细胞浆,其鉴定结果符合心肌细胞特征;BCA测定细胞蛋白,模型组较空白组蛋白表达增加(P0.05),AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的模型建立;Western blot结果显示模型组较空白组p-Akt,Akt,e NOS蛋白表达减少(P0.05);含药血清组较模型组p-Akt,Akt,e NOS蛋白表达增加(P0.05),LY294002阻断剂组可消减含药血清的作用。结论:当归补血汤含药血清对AngⅡ诱导心肌细胞肥大起保护作用,其机制之一可能是通过调控心肌细胞PI3K/Akt信号通路实现的。     

化浊解毒补肾方含药血清对肝星状细胞内雌激素受体转录激活的影响

目的 探讨化浊解毒补肾方延缓肝纤维化可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为化浊解毒补肾方含药血清组和空白血清组，无菌条件下收集腹主动脉血液制备血清。肝星状细胞(HSC-T6)分组为空白组、模型组(0.1mmol·L^-1H₂O₂干预诱导2h)、空白血清组+模型组、化浊解毒补肾方含药血清+模型组(含药血清浓度分别为2.5%、5%、10%、15%和20%)、E2(雌二醇)+模型组、ICI(ER拮抗剂)+空白血清组+模型组、ICI+化浊解毒补肾方含药血清+模型组、E2+ICI+模型组。MTT法测HSC-T6细胞增殖、流式细胞仪测细胞凋亡、免疫荧光染色法测细胞内α-SMA(α-肌动蛋白)荧光强度、Western blot法分析测细胞上清液Ⅰ型胶原蛋白、ER(雌激素受体)和α-SMA蛋白表达、qRT-PCR法分析细胞中ER-α、ER-β mRNA水平。结果 10%化浊解毒补肾方含药血清抑制H₂O₂诱导的HSC-T6细胞增殖和凋亡效果最佳(P<0.0001)。与空白组相比，模型组细胞α...     

复方芪麻胶囊含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导损伤脐静脉内皮细胞相关因子的影响

目的:观察复方芪麻胶囊含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导损伤脐静脉内皮细胞相关因子的影响。方法:体外培养脐静脉内皮细胞,根据培养基的不同分为空白组、模型组、5%复方芪麻胶囊含药血清组、10%复方芪麻胶囊含药血清组、20%复方芪麻胶囊含药血清组和阿托伐他汀钙组。分组培养24 h后,检测各组脐静脉内皮细胞的细胞活性、培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)水平、细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)及细胞凋亡率。结果:与空白组比较,AngⅡ刺激后的脐静脉内皮细胞活性及NO水平显著下降,差异具有统计学意义(P0.05),同时ROS水平及细胞凋亡率显著升高,差异具有统计学意义(P0.05);各浓度的复方芪麻胶囊含药血清均不同程度提高细胞活性及NO水平并降低细胞内ROS水平及细胞凋亡率,其中以10%复方芪麻胶囊含药血清组效果最显著,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:复方芪麻胶囊含药血清对AngⅡ诱导损伤脐静脉内皮细胞具有保护作用。     

基于Smads信号通路探讨止消通脉宁干预TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的研究

目的:探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测TβRI、TβRⅡ的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRI、TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2、Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨健骨颗粒含药血清对氧化应激状态成骨细胞骨形成的调控机制

目的 基于Nrf2/HO-1通路探讨健骨颗粒含药血清对氧化应激状态成骨细胞骨形成的调控机制。方法 取6周龄SPF级雄性SD大鼠40只,随机分为健骨颗粒组和生理盐水组各20只。健骨颗粒组每天灌服含生药量7.8 g/kg健骨颗粒浸膏稀释液2 mL,生理盐水组每天灌服生理盐水2 mL,2组每日灌胃1次,灌胃7 d后取大鼠腹主动脉血制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清。将课题组前期选用UMR-106细胞构建的Nrf2敲减稳定株细胞和Nrf2阴性对照细胞,分别分为Nrf2-KD+JG组、Nrf2-KD+NS组和NC+JG组、NC+NS组。Nrf2-KD+JG组和NC+JG组分别采用10%健骨颗粒含药血清加高糖DMEM培养12 h;Nrf2-KD+NS组和NC+NS组分别采用10%生理盐水血清加高糖DMEM培养12 h,再用10μmol/L过氧化氢干预12 h;采用超氧化物阴离子荧光探针（DHE）检测4组超氧化物阴离子含量,茜素红染色实验观察4组矿化结节数量,Western blot检测4组Nrf2、核Nrf2、HO-1、RUNX2蛋白相对表达量。结果 与NC+JG组比较,Nrf2-KD+JG组超氧...     

补阳还五汤含药血清对TGF-β1诱导的人肺动脉内皮细胞Dll4/Notch4信号的调控作用

目的:观察补阳还五汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAEC)Dll4/Notch4信号的调控作用。方法:以53.36 g/(kg·d)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,TGF-β1诱导建立内皮间质转化(EndMT)模型,设立空白组(10%空白血清)、模型组(10%空白血清+TGF-β1)、DAPT组(10%空白血清+DAPT+TGF-β1)、10%含药血清组(10%含药血清+TGF-β1)、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和2.5%含药血清组(2.5%含药血清+7.5%空白血清+TGF-β1)6组。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1蛋白的表达,采用免疫共沉淀(Co-IP)法检测各组HPAEC细胞NICD4与CBF1的相互作用。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01),且NICD4与CBF1有结合作用;与模型组比较,DAPT组和补阳还五汤各剂量含药血清组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA及蛋白表达均降低,NICD4与CBF1的结合被抑制,随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可抑制TGF-β1诱导的HPAEC细胞的Dll4/Notch4信号,这可能是其干预内皮间质转化的机制之一。     

天麻钩藤饮对肾性高血压动物模型的作用机制探讨

目的:探讨中药复方天麻钩藤饮治疗肾性高血压动物模型的疗效及可能的作用机制.方法:选取造模成功的肾性高血压SD大鼠24只,将其随机分为模型组、中药组、西药组,每组各8只,另以正常同周龄的SD大鼠作为空白组.中药组予中药复方天麻钩藤饮灌服,西药组予雷米普利灌服,空白组和模型组灌服同体积的纯净水,共干预4周.分别于手术前后、给药后每周测定尾动脉血压,于给药4周后检测血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)水平,主动脉、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、血管紧张素转化酶(ACE)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素(ET)的mRNA相对表达量,动脉B细胞淋巴瘤因子-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达量.结果:与空白组比较,其余3组在结扎肾动脉手术后收缩压均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01),说明动物模型分配合理.给药后中药组、西药组的收缩压每周均明显降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).给药4周后,与空白组比较,模型组大鼠的AngⅡ、ALD水平明显升高,AT1R、ACE、ET的mRNA相对表达量明显上调,eNOS的mRNA相对表达量明显下调,Bax、Caspase-3蛋白表达量量显著增加,差异均有统计学意义(均P＜0.01).与模型组比较,中药组、西药组大鼠的AngⅡ、ALD水平明显降低,ACE、ET的mRNA相对表达量明显下调,eNOS mRNA相对表达量上调,Bax蛋白表达量降低,差异均有统计学意义(P＜0.01);中药组AT1R的mRNA相对表达量、Caspase-3蛋白表达与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:天麻钩藤饮能通过调控肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)和内皮素-一氧化氮系统(ET-NO)降低血压,同时也可抑制血管内皮细胞的凋亡,缓解血管重构的病理进程.     

天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导PC12细胞凋亡JNK通路的影响

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP~+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其是否通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路发挥神经保护作用。方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、天麻钩藤饮低、中、高剂量组,每组8只。天麻钩藤饮按照5.7,11.4,22.8 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备空白和含药血清。PC12细胞常规培养并分为空白组、模型组、天麻钩藤饮含药血清低、中、高剂量组,空白组和模型组加空白血清,其他3组加10%的天麻钩藤饮含药血清,孵育30 min后,模型组和含药血清组再加500μmol·L~(-1)MPP~+共孵育48 h后收集细胞,采用Cell Titer 96Aoueous MTS Reagent powder(MTS法)检测细胞存活率。后续实验分为5组,即:空白组,MPP~+组,MPP~++含药血清高剂量组,MPP~++SP600125组,MPP~++含药血清高剂量+SP600125组,采用Annexin VFITC/PI双染色法检测细胞凋亡,分光光度法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JNK,p-JNK,c-Jun,p-c-Jun蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低(P0.05);与模型组比较,10%的天麻钩藤饮低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加(P0.05)。后续试验中,与空白组比较,MPP~+组细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显升高(P0.05)。与MPP~+组比较,MPP~++含药血清高剂量组,MPP~++SP600125组均能够使细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显降低(P0.05),而MPP~++含药血清高剂量+SP600125组的作用明显高于MPP~++含药血清高剂量组(P0.05),但不高于MPP~++SP600125组。JNK和c-Jun蛋白表达无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与JNK信号通路密切相关。     

糖耐康对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smads通路的影响

目的:探讨糖耐康(TNK)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110μg·L-1)、空白血清对照组(TGF-β110μg·L-1+10%空白血清)、TNK高浓度组(TGF-β110μg·L-1+20%糖耐康含药血清)、TNK中浓度组(TGF-β110μg·L-1+10%糖耐康含药血清)、TNK低浓度组(TGF-β110μg·L-1+5%糖耐康含药血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测TGF-β1及其Ⅰ,Ⅱ受体(TβRI,TβRⅡ)的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRⅠ,TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2,Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05),但经TNK含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组及TGF-β1+空白血清对照组相比有显著性差异(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:TNK能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

健脾祛湿和络方含药血清对足细胞标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及mTOR表达的影响

目的探讨健脾祛湿和络方(Jianpi Qushi Heluo Formula,JQHF)含药血清对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的小鼠足细胞损伤模型标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及mTOR相关自噬因子表达的影响。方法以体外培养小鼠足细胞为研究对象,除空白组外均以PAN(100μ/mL)体外诱导足细胞,根据含药血清细胞培养基的不同分为空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+PAN),JQHF低剂量组(10%低剂量JQHF含药血清+PAN),JQHF中剂量组(10%中剂量JQHF含药血清+PAN),JQHF高剂量组(10%高剂量JQHF含药血清+PAN),替米沙坦(TMST)组(10%TMST含药血清+PAN),醋酸泼尼松(PRE)组(10%PRE含药血清+PAN),雷帕霉素(RAP)组(100μg/L RAP+10%空白组血清+PAN)。CCK-8法检测足细胞损伤模型在各组血清作用后的活性变化;Western blot法检测各组足细胞标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及细胞内mTOR相关自噬蛋白表达水平。结果 (1)与空白组比较,模型组细胞活力显著下降(P0.01),与模型组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组足细胞活力上升(P0.05);(2)与模型组比较,除JQHF低剂量组Podocalyxin表达外,其余各药物干预组Nephrin、Podocalyxin表达均增多(P0.05,P0.01);与JQHF低剂量组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组Nephrin表达增多(P0.05);与JQHF中剂量组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组Nephrin表达增多(P0.05),TMST、PRE、RAP组Podocalyxin表达亦增多(P0.05);与JQHF高剂量组比较,TMST、PRE、RAP组Podocalyxin表达增多(P0.05)。(3)与模型组比较,各药物干预组LC3-Ⅱ表达均增多(P0.05,P0.01),JQHF高剂量组、TMST组、PRE组、RAP组P-mTOR、P-4EBP1表达均减少(P0.05),JQHF高剂量组、TMST组、RAP组P-P70S6K表达减少(P0.01)。结论 JQHF可以改善细胞内自噬水平,修复PAN诱导损伤足细胞,与上调细胞内Nephrin、Podocalyxin及LC3-Ⅱ的表达,减少mTOR及相关因子合成有关。     

补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1/Smad/ERK信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%、10%、20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%、10%、20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用Western blot检测细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK蛋白的表达。结果:与模型组比较,20%含药血清组肺成纤维细胞中Smad3蛋白的表达显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%含药血清组Smad3蛋白表达有减少趋势;阳性组和不同浓度含药血清组肺成纤维细胞中Smad4蛋白表达有减少趋势;20%含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有减少趋势;阳性组和不同浓度补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中p-ERK蛋白均有减少趋势。结论:20%补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-β1/Smad/ERK信号通路中关键细胞因子Smad3、ERK1/2蛋白的表达,从而发挥较好的抗肺纤维化作用。