高效液相色谱法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的含量。方法:采用 Phenomenex C_(18)柱(250 mm×4.6mm,5 μm),以乙腈-甲醇-0.02 mol·L~(-1)硫酸铵(50:10:40,稀硫酸调节至 pH 4.8)为流动相,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长210 nm,柱温30℃。结果:双氢青蒿素进样量在0.84～25.12μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999;平均回收率(n=9)为98.7%。结论:本法结果准确可靠,简便快捷,适用于该复方制剂中双氢青蒿素的测定。     

HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的含量

目的:建立测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的测定方法。方法 :采用高效液相色谱法。色谱柱为Waters YMC-Pack ODS-AQ,流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,检测波长为216 nm,柱温为30℃,进样量为20μl。结果:双氢青蒿素质量浓度在0.009 650~1.930 mg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤0.5%;平均加样回收率为100.76%,RSD为0.95%(n=9)。结论:该方法准确、简便、快速,可用于双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的含量测定。     

改进双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的溶出度测定方法

目的:改进双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的溶出度测定方法。方法:采用桨法进行溶出试验,以0.1 mol/L盐酸溶液为溶出介质,溶出介质体积为500 mL,转速为75 r/min,取样时间为45 min;样品前处理中加入3.6%氢氧化钠溶液的体积由原来的5mL改为20 mL,加入磷酸的体积由原来的0.2 mL改为0.7 mL。采用高效液相色谱法测定制剂中双氢青蒿素的溶出度:色谱柱为YMC-Pack ODS-A,流动相为0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节p H为2.4)-乙腈(65∶35,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为237 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:双氢青蒿素检测质量浓度线性范围为7.802~117.03μg/mL(r=0.999 9);定量限为2.0 ng,检测限为0.6 ng;精密度、重复性试验的RSD<1.0%;回收率为99.18%~100.46%(RSD=0.45%,n=9)。3批样品中双氢青蒿素的平均溶出度分别为94.9%、77.9%、89.6%。结论:改进后的方法提高了其灵敏度、溶出度以及检测结果的准确性。     

高效液相色谱法测定双氢青蒿素片的含量

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定双氢青蒿素片中双氢青蒿素的含量. 方法 采用岛津VP-ODS柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水(60:40)为流动相,流速为0.8 mL.min^-1,检测波长为210 nm,柱温35 ℃. 结果 双氢青蒿素进样浓度在500.2～2 501.0 μg.mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系,r＝0.999 9;平均回收率为99.5%,RSD为1.25%(n＝9). 结论 该方法专属性强,灵敏度高,重复性好, 结果准确,适用于双氢青蒿素片的含量测定.     

HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中的磷酸哌喹含量

目的建立高效液相色谱法测定双氢青蒿素哌喹片中的磷酸哌喹含量。方法采用Watres Symmetry RP18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1%三氯乙酸-磷酸(19∶81∶0.035)为流动相,流速:1.0 mL·min-1,检测波长:349 nm,柱温:30℃。结果磷酸哌喹线性范围为0.003 81⁰.038 1 mg·mL-1(r=0.999 9),平均加样回收率为99.5%,RSD为2.12%(n=9)。结论本方法灵敏、准确,重现性好,可用于本制剂的含量测定及质量控制。     

高效液相-柱后衍生化法同时测定双氢青蒿素和哌喹

目的建立同时测定双氢青蒿素和哌喹的方法。方法采用反相高效液相-柱后衍生化-紫外检测法,流动相为乙腈:甲醇:醋酸钠缓冲液(65:20:15,pH4.0),流速0.8ml/min;衍生化试剂为1mol/LKOH的90%乙醇溶液,流速0.3ml/min;衍生化反应体系包括三通阀和6m长的聚醚醚酮管以及超级恒温水浴,流动相所载药物在柱后与衍生试剂经过三通实现混合后在70℃水浴的聚醚醚酮管中反应1min,然后进入检测器;柱温35℃,检测波长289nm。结果双氢青蒿素在3.0～300μmol/L范围内线性关系良好,以峰面积对双氢青蒿素浓度进行线性回归,方程为A=3544.3C+3846.4,r=0.9999;同时,哌喹在6.8～680μmol/L范围内线性关系良好,以峰面积对哌喹浓度进行线性回归,方程为A=7217.1C+28115,r=0.9996;对两种药物测定的日内、日间精密度相对平均偏差(RSD)均小于2%;平均回收率均在98%～102%之间。结论该方法的灵敏度、精密度、准确性及重现性均符合药典要求,可为各种复方制剂中双氢青蒿素及哌喹的质量控制提供依据。     

双氢青蒿素差向异构体转化的研究

目的:对双氢青蒿素β型差向异构体向α型转化过程进行分析。方法:建立高效液相色谱法分离异构体。色谱柱:Kromasil C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水(80:20),流速:1.0mL·min~(-1),进样量:20μL,检测波长:216nm。采用LC/MS,LC/NMR对其异构体进行了确证。LC/MS:ESI,扫描:50～1000m/z,干燥气:N_2(10L·min~(-1)),温度:350℃,电压:4000V。LC/NMR:500MHz,溶剂:甲醇。结果:双氢青蒿素在有机溶剂中由β型差向异构体向α型转化并且在一定条件下达到平衡。结论:将双氢青蒿素的α型和β型差向异构体的转化条件及其历程作为双氢青蒿素的手性分离。     

HPLC同时测定复方双氢青蒿素片中磷酸哌喹与甲氧苄啶的含量

目的　建立HPLC法 ,测定复方双氢青蒿素片中磷酸哌喹与甲氧苄啶的含量。方法　LichrospherCN色谱柱 (2 5 0mm×4 .6mm ,5 μm) ,流动相为 0 .0 4mol·L-1磷酸二氢钾溶液 (稀盐酸调pH 2 .5 ) -乙腈 (90∶10 ) ,检测波长 2 80nm。结果　磷酸哌喹在 1.6～ 8μg范围内、甲氧苄啶在 0 .4 5～ 2 .2 5 μg范围内 ,其峰面积与进样量呈良好的线性关系。磷酸哌喹的平均回收率为 99.6 % ,RSD =1.17% (n =9) ;甲氧苄啶的平均回收率为 98.7% ,RSD =1.2 6 % (n =9)。结论　所用方法准确、快速、简便 ,适用于复方制剂中磷酸哌喹与甲氧苄啶的同时测定 ,可作为同类产品的质量控制方法。     

双氢青蒿素诱导人肿瘤细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:研究双氢青蒿素诱导人白血病细胞凋亡作用及其机制。方法:用双氢青蒿素处理K562细胞,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果;荧光显微镜观察细胞的凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测半胱氨酰-天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,蛋白印迹技术(Western blot)检测线粒体、胞浆细胞色素C的表达。结果:双氢青蒿素处理K562细胞48h后MTT检测,570nm波长处测定半数细胞抑制浓度为8×10-5mol.L-1;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞增殖抑制表现;RT-PCR检测到caspase-3的表达,Western-blot检测线粒体细胞色素C表达下调,胞浆中细胞色素C表达阳性。结论:双氢青蒿素能够在体外抑制人白血病细胞增殖并诱导其凋亡,而促进细胞色素C的释放,激活caspase-3可能是其作用机制之一。     

双波长光谱法测定复方氯霉素酊中氯霉素与水杨酸的含量

目的：对复方氯霉素酊的含量测定进行研究。方法：采用双波长光谱法不经分离直接测定复方氯霉素酊中氯霉素与水杨酸的含量。选定氯霉素的测定波长为274．5nm,参比波长为326nm;水杨酸的测定波长为290nm,参比波长为260nm。结果：平均回收率：氯霉素为99．4％,RSD为1．8％（n=6),水杨酸为100．1％,RSD为2．1％（n=6)。结论：该方法简便、快速,准确可靠,适用于该制剂的含量测定。     

双氢青蒿素抗癌药理作用机制的研究进展

双氢青蒿素是青蒿素的一种重要衍生物,是我国自行研发的抗疟新药。近年来,人们发现双氢青蒿素不但具有抗疟活性,而且具有良好的抗肿瘤效果,被认为是前景良好的抗肿瘤药。因此,综述目前双氢青蒿素抗肿瘤作用发生机制、靶点和通路的研究进展,主要包括癌细胞凋亡、内质网应激、癌细胞生长增殖、侵袭转移、肿瘤多药耐药以及细胞氧化损伤等方面。为抗肿瘤的基础研究、新药物研发以及药物设计提供参考和依据。     

二氢青蒿素诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氢青蒿素对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的治疗作用。方法采用台盼蓝染色法和MTT法测定二氢青蒿素对HL-60细胞存活的影响,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹分析凋亡相关蛋白的表达。结果二氢青蒿素可抑制HL-60细胞存活,诱导HL-60细胞凋亡,同时降低HL-60细胞Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白和凋亡执行蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,并呈浓度依赖性。结论二氢青蒿素可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能是通过对线粒体凋亡通路中Bcl-2,Bax和caspase-3蛋白表达的调控而发挥作用。     

Protein binding and alpha : beta anomer ratio of dihydroartemisinin in vivo

AIMS: To determine the ratio of alpha : beta anomers and the protein binding of dihydroartemisinin (DHA) in vivo. METHODS: 10-[(3)H]-DHA was synthesized by reduction of artemisinin with sodium boro-[(3)H]-hydride and purified with preparative thin layer chromatography. A solution of (3)H-DHA (2000 ng in 20 micro l) was added to 2 ml whole blood from 15 healthy volunteers and 22 Vietnamese patients with falciparum or vivax malaria. The blood was centrifuged and the plasma stored at -25 degrees C until analysed by HPLC with radiochromatographic detection. Protein-free ultrafiltrate of the plasma was assayed to determine the free fraction of DHA and the in vivo ratio of alpha-DHA : beta-DHA. RESULTS: The DHA fraction unbound (mean +/- SD) was 0.068 +/- 0.032 in Vietnamese patients with falciparum malaria (n = 17), 0.065 +/- 0.009 in Vietnamese patients with vivax malaria (n = 5), 0.117 +/- 0.015 in Vietnamese volunteers (n = 7) and 0.092 +/- 0.020 in Caucasian volunteers (n = 8). The ratios of alpha-DHA : beta-DHA for the four groups were 6.3 +/- 0.9, 6.9 +/- 0.8, 6.9 +/- 0.6 and 5.4 +/- 0.8, respectively. CONCLUSIONS: DHA is approximately 93% protein-bound in patients with malaria infection and there is a preferential existence in vivo of the alpha-DHA anomer. Knowledge of this stereochemistry may be valuable in elucidation of the mechanisms of DHA action and/or toxicity, and in the synthesis of new trioxane antimalarials.     

二氢青蒿素抗肿瘤作用及其机制研究进展

二氢青蒿素是青蒿素的重要衍生物,具有显著的抗疟作用。对多种肿瘤动物模型具有一定的肿瘤抑制作用,提示其具有抗肿瘤作用。二氢青蒿素的抗肿瘤作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖包括诱导肿瘤细胞周期阻滞和促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成以及抗肿瘤细胞侵袭和转移等有关。细胞内亚铁或亚铁血红素可能是二氢青蒿素抗肿瘤作用的直接靶点。由于二氢青蒿素具有广谱抗肿瘤作用、对正常细胞毒性小及对多药耐药细胞有效等优点,因此有可能被开发为新的抗肿瘤药物。     

双氢青蒿素诱导肿瘤细胞凋亡的信号通路研究进展

双氢青蒿素作为青蒿素的重要衍生物,是我国自行研制出的抗疟新药。近些年来,人们对双氢青蒿素进行了多方面的研究,在抗肿瘤研究方面有许多新进展,发现其诱导肿瘤细胞凋亡的机制与多条信号通路有关,例如PI3K/Akt、MAPK、STAT3、Wnt/β-catenin、NF-κB等信号通路。通过对作用机制的深入研究和阐述有望发现双氢青蒿素的新适应症,使其在临床上的应用更加广泛。     

双氢青蒿素对伯氏疟原虫ANKA株超微结构的影响(英文)

目的:观察双氢青蒿素对伯氏疟原虫ANKA株超微结构的影响。方法:双氢青蒿素180mg/kg×1d和109.4mg/kg×3d分别给受染小白鼠灌胃,定时取血进行红内期虫体电镜观察。结果:在伯氏疟原虫ANKA株:1h,食物泡膜被破坏,疟色素有些变形;2h,核膜、质膜和食物泡,线粒体明显肿胀或皱缩,内外膜剥离;4h,核膜、质膜剥离加剧,空泡形成;8h少数滋养体仅存自噬泡,大部分原虫结构被破坏。试图培育的伯氏疟原虫抗DATM/ANKA株,仅见食泡膜和质膜明显分层,膜间隙增厚,核糖体分布不均匀,疟色素稍有变形等。结论:双氢青蒿素是高效、速效的抗疟药,主要作用于原虫表膜—线粒体系统。抗性培育虽经4个多月血传24代,但并未形成明显的抗药性的形态特征。     

二氢青蒿素联合环氧化酶2抑制剂抗S180肉瘤作用机制研究

目的探讨二氢青蒿素联合环氧化酶2抑制剂对S180肉瘤的生长抑制作用及其可能的机制。方法采用ICR小鼠皮下移植瘤模型,观察二氢青蒿素联合环氧化酶2抑制剂对小鼠S180肉瘤生长抑制作用,以及对肿瘤COX-2、VEGF、CD31蛋白表达与白细胞数目的影响。结果二氢青蒿素分别以50、100、150mg·kg-1剂量与环氧化酶2抑制剂美洛昔康10mg·kg-1剂量合用能明显抑制S180肉瘤的生长,抑瘤率最高达55.38%,优于两药单用的效果;免疫组织化学检测表明,3个剂量的二氢青蒿素合用环氧化酶2抑制剂的肿瘤组织COX-2、VEGF及CD31蛋白的表达量均下降;Westernblot方法检测得在高剂量二氢青蒿素(150mg.kg-1.d-1)联合应用美洛昔康(10mg.kg-1.d-1)组VEGF和COX-2蛋白的表达量均有下降,与模型对照组差异有显著性(P<0.05);RT-PCR检测得各合用药物组的肿瘤组织VEGFmRNA表达量均减少(P<0.05)。结论二氢青蒿素联合环氧化酶2抑制剂能明显抑制S180肉瘤的生长,其机制可能与下调肿瘤组织中COX-2和VEGF的表达有关。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆双氢青蒿素浓度

目的:建立液相色谱-质谱联用法测定健康人血浆中双氢青蒿素浓度的方法。方法:以青蒿素为内标,血浆样品采用液-液萃取法处理。用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测方式检测双氢青蒿素。结果:该方法双氢青蒿素线性范围为1.01~2020 ng.ml-1;定量下限为1.001±0.072 ng.ml-1;方法回收率在93.0%~98.2%;批内、批间变异系数均<10%。结论:该方法准确、灵敏、特异、简便,适用于健康人血浆双氢青蒿素浓度的测定。     

Synergistic anti-cancer activity of the combination of dihydroartemisinin and doxorubicin in breast cancer cells

BackgroundDihydroartemisinin (DHA) exhibits potent anti-malarial and anti-cancer activities. This study aimed to investigate the anti-proliferative effects of a combination of DHA and doxorubicin (DOX) on human breast cancer cells.MethodsMTT assay and the combination index (CI) were used to show the anti-proliferative effects and calculate the synergism potential, respectively. Flow cytometry assay was used to detect apoptosis and the intracellular accumulation of DOX. JC-1 staining was used to determine the mitochondrial membrane potential. Western blot analysis was used to detect the protein expression of some apoptosis-related molecules.ResultsAsynergistic anti-proliferative effect was found, and the enhanced anti-cancer activity was observed to be accompanied by the prompt onset of apoptosis in MCF-7 cells. The combinative treatment remarkably decreased the mitochondrial membrane potential and activated caspase cascades more than the mono-treatment. Pretreatment with DHAalso did not influence the accumulation of DOX in MCF-7 cells.ConclusionThis study presented a new opportunity to enhance the effectiveness of future treatment regimens of breast cancer using DOX.