地黄多糖对K562细胞增殖抑制作用及bcr/abl融合基因表达的影响

目的：研究地黄多糖（RPS）对K562细胞bcr/abl融合基因表达和细胞增殖的影响。方法：不同浓度RPS作用于K562细胞,MTS法检测其对细胞增殖的影响,Real-time PCR检测bcr/abl融合基因mRNA表达变化,Western blotting检测bcr/abl融合基因表达的P210蛋白变化。结果：RPS能够抑制K562细胞增殖,用400 μg·mL^-1 RPS作用12 h,细胞增殖抑制率为35.16%,随着RPS浓度增加抑制作用明显增强（P<0.05）;用200 μg·mL^-1 RPS作用24 h,K562细胞内bcr/abl融合基因mRNA相对表达量为0.26,P210蛋白相对含量为0.35。RPS使K562细胞内P210蛋白及bcr/abl融合基因mRNA表达量呈时间和剂量依赖性下降。结论：RPS可能通过下调bcr/abl融合基因mRNA及P210蛋白表达对K562细胞增殖产生抑制作用。     

bcr／abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建ber/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响.方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tusch Ⅰ设计原则,选择设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/abl mRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达.结果:构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24 h后,pTER117使bcr/abl mRNA的相对水平下降50%,使P210蛋白下降47%.结论:bcr/abl融合基因siR-NA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达.     

甲磺酸伊马替尼对K562细胞bcr/abl、SHIP-2基因表达的影响及意义

目的研究甲磺酸伊马替尼对K562细胞bcr/abl、SHIP2的表达影响及意义。方法采用定量PCR方法检测甲磺酸伊马替尼干预K562细胞后bcr/abl、SHIP2基因表达变化。采用MTT及Western blot方法分别检测细胞增殖与AKT磷酸化水平的变化。结果随着甲磺酸伊马替尼浓度增加及作用时间的延长bcr/abl基因的表达下降（P〈0.01）,SHIP2的表达增加（P〈0.01）。Akt磷酸化水平降低,细胞增殖能力降低。结论甲磺酸伊马替尼能下调bcr/abl基因的表达;SHIP2表达可能受bcr/abl基因的调节,并可能通过调节PI3K/AKT途径影响细胞的增殖。     

Hedgehog信号通路在肾透明细胞癌中的表达及作用

目的 研究人肾透明细胞癌(RCCC)中Hedgehog信号通路相关因子Shh、Ptch、Smo和Gli1蛋白的表达,探讨Hedgehog信号转导通路的异常激活与RCCC的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测76例RCCC标本及12例癌旁正常肾组织,应用蛋白免疫印迹技术检测10例新鲜癌组织及癌旁正常肾组织中Shh、Ptch、Smo和Gli1蛋白的表达。结果 Shh、Ptch、Smo和Gli1蛋白在RCCC中的异常表达率(分别为52.6%、63.2%、44.7%、60.5%)高于正常肾组织(分别为8.3%、16.7%、8.3%、25.0%)。且其表达与患者的年龄、性别和肿瘤大小无显著相关,而与肿瘤临床分期有关,随肿瘤的恶性程度加重,表达率增加。结论 Hedgehog信号转导通路在RCCC中呈现高度激活状态,此通路的激活可能与RCCC的发生、发展密切相关,有望成为治疗RCCC的靶点。     

SHH信号通路在宫颈癌或宫颈上皮内瘤变细胞中的表达及意义

目的 探讨Sonic hedgehog(SHH)信号通路中Shh、Ptch、Smo蛋白及其下游转录因子Gli1、Gli2、Gli3蛋白在宫颈癌或宫颈上皮内瘤变细胞中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学方法分别检测57例正常宫颈上皮组织(NC),86例宫颈上皮内瘤变组织(CIN),137例子宫颈鳞状细胞癌组织(SCC)中Sonic hedgehog信号通路的表达.结果 Shh、Ptch、Smo蛋白及其下游转录因子Gli1、Gli2、Gli3蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织及宫颈癌组织的表达呈逐渐上升趋势,三组比较差异有统计学意义(P＜0.05),Shh、Ptch、Smo蛋白在宫颈癌中的表达与淋巴结转移成正相关(P＜0.01).结论 Sonic hedgehog信号通路在宫颈癌患者体内高度激活与宫颈癌的发病、转移密切相关.     

P210bcr/abl融合蛋白的形成机制及作用的研究进展

慢性粒细胞白血病(CML)是以费城染色体(Ph)为特征的多潜能干细胞异常的骨髓恶性增殖性疾病。Ph染色体是由9号染色体c-abl癌基因易位到22号染色体的bcr基因处,形成bcr／abl融合基因,该基因经转录后,编码8．5kb的嵌合体mRNA,翻译成分子量为210kD的蛋白质,即P210^bcr/abl融合蛋白(P210^bcr/abl),该蛋白具有异常活跃的酪氨酸激酶活性(PTK),并活化细胞内相关的信号转导通路从而调控细胞的分裂与增殖,抑制细胞的凋亡。P210^bcr/abl是CML的特征性标志。因此,研究P210^bcr/abl对研究与治疗CML具有重要的意义．有关P210^bcr/abl的形成机制及作用已部分阐明．现做综速如下．     

miR-203提高白血病K562细胞对熊果酸的敏感性研究

目的研究miR-203影响白血病K562细胞对熊果酸的敏感性及可能的作用机制。方法利用脂质体LipofectamineTM2000将miR-203的真核表达载体PmiR-203转染K562细胞。MTT法检测单纯使用PmiR-203、熊果酸以及两者联合使用对细胞的增殖抑制作用;Annexin V/PI双染法检测细胞早期凋亡率;Western blot检测细胞内bcr/abl蛋白表达水平。结果熊果酸与PmiR-203联合使用后,IC50从44.3μmol·L-1降低到30.7μmol·L-1,敏感性提高到单纯使用熊果酸的1.55倍。PmiR-203联合熊果酸组细胞早期凋亡率明显增加(P<0.05)。PmiR-203组细胞内bcr/abl的表达水平明显降低。结论PmiR-203可通过抑制Bcr/abl融合基因的表达发挥抗白血病作用,与熊果酸联合使用可提高白血病K562细胞对熊果酸的敏感性。     

木犀草素对K562细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的　探讨木犀草素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期K562细胞分别加入0、10、25、50、100 μmol/L木犀草素培养24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;K562细胞分别加入0、25、50 μmol/L木犀草素培养48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;K562细胞分别加入0、10、50、100 μmol/L木犀草素培养48 h,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Cleaved-PARP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、断裂点簇集区蛋白（BCR）、c-abl癌基因1（c-ABL）BCR-ABL蛋白表达。结果　CCK-8检测结果显示,随木犀草素浓度增加及作用时间的延长,K562细胞增殖抑制率均呈增长趋势（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果显示,木犀草素0、25、50 μmol/L组K562细胞的凋亡率依次升高（分别为8.21%±0.55%、23.43%±1.50%和40.47%±2.97%）。Western blot结果显示,Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase3表达水平随木犀草素浓度的增加而升高（P＜0.05）。木犀草素0、10、50 μmol/L组PARP蛋白表达水平依次升高（P＜0.05）,100 μmol/L组与50 μmol/L组差异无统计学意义。100 μmol/L组Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平均低于其余组（P＜0.05）。50、100 μmol/L组p-AKT蛋白表达水平低于0、10 μmol/L组,100 μmol/L组低于50 μmol/L组。50 μmol/L组BCR-ABL融合蛋白表达水平高于0 μmol/L组,100 μmol/L组低于0、50 μmol/L组（P＜0.05）。结论　木犀草素可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控BCR-ABL蛋白表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

急性淋巴细胞性白血病bcr/abl融合基因表达的临床研究

目的：研究bcr/abl融合基因在急性淋巴细胞白血病（ALL）患的表达与临床疗效的关系。方法：利用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）方法检测了31例ALL患bcr/abl融合基因的表达。结果：患bcr/abl融合基因阳性表达9例（29％），其中完全缓解3例（33．3％）；bcr/abl融合基因阴性表达22例（71％），其中完全缓解17例（77．3％），两组比较具有差异性（P＜0．05）。结论：bcr/abl融合基因阳性表达的ALL患临床疗效较差。     

慢性粒细胞白血病bcr-abl融合基因克隆与真核细胞表达的研究

目的 为研究慢性粒细胞白血病(CML)的肿瘤基因疫苗，克隆和表达CML的bcr—abl融合基因片段。方法 根据bcr—abl(b3a2)融合基因序列自行设计一对寡核苷酸引物，以CML K562细胞株的总RNA为模板，通过RT—PCR扩增包含bcr-abl融合位点周围450bp的基因片段，并将其克隆进pGEM—T easy载体。经序列测定证实其阅读框架正确后，将bcr—abl融合基因片段正向插入真核细胞表达载体pcDNA3．1。以脂质体介导重组质粒pcDNAbcr—abl转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，用间接免疫荧光法(IFA)检测基因表达情况。结果 成功构建了包含融合位点基因片段的bcr—abl融合基因真核细胞表达载体pcDNAbcr—abl，pcDNAbcr—abl转染的CHO细胞的免疫荧光强度高于K562阳性对照细胞。结论 bcr—abl融合基因片段在真核细胞中能高效表达，pcDNAbcr—abl真核细胞表达载体的构建为进一步研究bcr—abl融合基因在CML防治中的作用奠定了基础。     

姜黄素对K562细胞增殖的影响及其与P210~(bcr/abl)激活的Ras信号途径的关系

目的　研究姜黄素 (Cur)对慢性粒细胞白血病 (CML)细胞株K5 62增殖的影响 ,并且探讨这种影响与P2 10 bcr/abl及其激活的Ras信号途径的关系。方法　应用MTT法检测Cur对细胞增殖的影响 ,应用Westernblot的方法检测蛋白含量的变化。结果　Cur对P2 10 bcr/abl阳性的K5 62细胞抑制作用呈量效、时效关系 ,Cur 10mg·L-1作用 48h对K5 62细胞的抑制率高达 (81 9± 1 0 ) % ;相比之下 ,已知对P2 10 bcr/abl无影响的VP 16作为抗癌药对照 ,对K5 62细胞的抑制作用明显较弱。Cur和VP 16对K5 62细胞的不同作用提示Cur对K5 62细胞作用可能有特异性 ,而这个特异的作用靶点可能就是引起CML对多种化疗药物耐药的CML特征性的P2 10 bcr/abl蛋白。Westernblot的实验结果表明Cur使K5 62细胞P2 10 bcr/abl、MEK 1和c Jun蛋白含量明显减少 ,且呈量效关系 ,相比之下 ,VP 16对K5 62细胞P2 10 bcr/abl的蛋白含量无影响而仅轻微减少MEK 1和c Jun的蛋白含量 ,提示MEK 1和c Jun蛋白含量的减少是非特异性的 ,并且 ,在P2 10 bcr/abl阳性的K5 62细胞 ,Cur除了非特异性地抑制细胞中MEK 1及c Jun的表达外 ,Cur还可能通过特异性地抑制K5 62细胞的特异性靶点P2 10 bcr/abl的表达 ,从而下调其下游的Ras信号途径中的其它信号分子。结论　Cur可特     

Curcumin synergistically augments bcr/abl phosphorothioate antisense oligonucleotides to inhibit growth of chronic myelogenous leukemia cells

AIM: To investigate the growth inhibition effect of the combination of bcr/abl phosphorothioate antisense oligonucleotides (PS-ASODN) and curcumin (cur), and the possible mechanisms of cur on the chronic myelogenous leukemia cell line K562. METHODS: The K562 cell line was used as a P210( bcr/abl )-positive cell model in vitro and was exposed to different concentrations of PS-ASODN (0-20 micromol/L), cur (0-20 micromol/L), or a combination of both. Growth inhibition and apoptosis of K562 cells were assessed by MTT assay and AO/EB fluorescent staining, respectively. The expression levels of P210( bcr/abl ), NF-kappaB and heat shock protein 90 (Hsp90) were assessed by Western blot. RESULTS: Exposure to cur (5-20 micromol/L) and PSASODN (5-20 micromol/L) resulted in a synergistic inhibitory effect on cell growth. Growth inhibition was associated with the inhibition of the proliferation and induction of apoptosis. Western blot analysis showed that the drugs synergistically downregulated the level of P210( bcr/abl ) and NF-kappaB. Cur downregulated Hsp90, whereas no synergism was observed when cur was combined with PS-ASODN. CONCLUSION: PS-ASODN and cur exhibited a synergistic inhibitory effect on the cell growth of K562. The synergistic growth inhibition was mediated through different mechanisms that involved the inhibition of P210( bcr/abl ).     

姜黄素对K562细胞增殖的抑制作用与其下调p210~bcr／abl激活的Ras信号途径有关

目的:研究姜黄素(Cur)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562增殖的影响,并且探讨这种影响与p210~(ber/abl)及其激活的Ras信号途径的关系。方法:以K562细胞为p210~(ber/abl)阳性表达细胞模型,以HL-60细胞为P210~(ber/abl)阴性表达细胞模型,以对p210~(ber/abl)无影响,并已知K562细胞对其有一定耐药性的足叶乙甙(Etoposide,VP-16)为抗癌药的对照,应用MTT法检测Cur对细胞增殖及凋亡的影响,应用Western blot及FCM方法检测蛋白含量的变化。结果:Cur对K562细胞及HL-60细胞增殖的抑制作用呈浓度和时间依赖性,并且Cur对二者的作用无差别(P>0.05);相比之下,VP-16对HL-60细胞更敏感,对K562细胞较耐药(P<0.01),Cur使K562细胞p210~(ber/abl)、MEK-1和c-JUN蛋白含量显著减少,且呈量 效关系:而同样处理的HL-60细胞的MEK-1及c-JUN的含量减少不及K562细胞明显。结论:Cur抑制K562细胞增殖的作用与Cur下调p210~(ber/abl)含量从而阻断其激活的Ras信号途径有关,从新的角度证明了姜黄素具有治疗CML的潜在价值。     

磷酰肌醇-3激酶途径与bcr/abl基因介导的白血病细胞增殖和抗凋亡信号传导

目的探讨磷酰肌醇-3激酶途径在K562、NB4和HL60细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用。方法短期培养法直接法G显带检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的染色体核型,RQ-PCR检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因;用磷酰肌醇-3激酶特异抑制剂渥曼青霉素(WT)抑制磷酰肌醇-3激酶活性,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数。观察K562、NB4和HL60细胞增殖能力及凋亡抗性的变化。统计学采用t检验。结果K562细胞G显带检出Ph染色体,RQ-PCR检测K562细胞存在bcr/abl基因;与标准Ph染色体表达的CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因完全吻合;K562、NB4和HL60细胞在24h、48h、72h的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和26.29%、5.51%、2.10%及32.14%、17.14%、13.14%。生长曲线显示WT抑制磷酰肌醇-3激酶途径可显著抑制K562细胞的增殖(P<0.05),而对NB4和HL60细胞增殖无明显影响(P>0.05)。K562、NB4和HL60细胞加和不...