介入微创式门静脉内间充质干细胞移植治疗肝硬化可行性的实验研究

目的 探讨介入技术将骨髓间充质干细胞(MSC)超选择性移植入门静脉分支的可行性:观察移植MSC对肝功能的影响,为临床应用提供参考依据.方法 用密度梯度离心法和贴壁培养法分离纯化新西兰白兔MSC,用5-Bromo-2-deoxyuridine(BrdU)标记后,采用介入技术超选择性注入肝硬化兔的门静脉二级分支内,移植后3周取肝脏标本,用荧光免疫组织化学染色检测移植细胞,同时做血清肝功能检测[天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBiL)、直接胆红素(DBiL)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)],观察移植MSC前后的肝功能变化.结果 超选择性门静脉MSC移植后3周,对移植区肝脏做冰冻切片、荧光免疫组织化学分析显示,存活的16只动物中有13只结果为阳性,移植阳性率约为81.2%(13/16),证实移植的MSC可以在病理性肝脏组织内存活;移植MSC至病理性肝脏(肝纤维化)后,血清ALT下降,与移植MSC前相比差异有统计学意义[(146.96±63.12)U/L比(101.26±39.23)U/L,P<0.05],AST、TBiL、DBiL、TP、Alb变化无统计学意义(P>0.05).结论 通过介人技术做超选择性门静脉分支内MSC移植可以作为一项治疗肝硬化的新手段,但需要在提高移植细胞存活率、客观评价疗效(改善肝脏功能)等方面做进一步工作.     

细胞因子激活骨髓免疫细胞的实验研究

目的：通过对骨髓单个核细胞在体外与不同细胞因子培养,了解不同细胞因子对骨髓淋巴细胞的激活能力和对骨髓干祖细胞的损伤情况。方法：将IL-1、IL-2、γ-IFN、CD3单抗进行不同组合后,在体外与骨髓单个核细胞分成对照组、IL-2组、CD3-AK、CIK组进行培养。培养过程中观察细胞形态和数量的变化,并在培养后检测免疫活性细胞的细胞毒性和造血干细胞的保存情况。结果：培养过程中对照组细胞数量减少;IL-2组细胞数量变化不明显;CD3-AK组、CIK组细胞数量显著增多,并出现较多的集聚成簇的淋巴样细胞,培养后其细胞毒性明显强于对照组及IL-2组,但细胞数量增加和细胞毒性无明性差异,培养后各组造血干细胞保存情况约16%～87%。结论：IL-2、CD3单抗在体外与骨髓单个核细胞培养后,即能激活免疫细胞增殖,又能保留足够的造血干细胞。     

体外G-CSF刺激对健康人外周血淋巴细胞亚群分布的影响

目的:探讨体外粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对健康人外周血淋巴细胞亚群分布的影响。方法:采集8例健康人的外周血,密度梯度离心法分离单个核细胞(MNC),并以200 ng/ml G-CSF、200 ng/ml G-CSF~+10μg/ml ConA体外培养3 d,流式细胞术检测不同培养条件下健康人外周血淋巴细胞亚群的分布。结果:与对照组相比,GCSF和G-CSF~+Con A组T淋巴细胞水平显著增高(P0.01,P0.05),而3组间B淋巴细胞、NK细胞水平表达无明显差异;进一步分析G-CSF对健康人外周血T淋巴细胞亚群分布影响的结果发现,与对照组相比,G-CSF组CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞水平均明显增高(P0.01,P0.05),Treg细胞水平无明显变化;与对照组相比,G-CSF~+ConA组CD4~+T、CD8~+T、Treg细胞水平均显著增高(P0.05,P0.01,P0.01);T淋巴细胞表面G-CSF受体分析发现,与对照组相比,G-CSF~+ConA组T淋巴细胞表面G-CSF受体表达显著升高(P0.01)。结论:体外G-CSF刺激能增加健康人外周血CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞的水平;Con A可提高T淋巴细胞的水平,诱导其表面G-CSF受体表达。     

间充质干细胞来源胞外囊泡救治辐射损伤的研究进展

间充质干细胞来源胞外囊泡（MSC-EV）在保留间充质干细胞（MSC）生物学功能的同时,能够避免MSC内在缺陷;MSC-EV脂质双分子层结构能够避免其脂质、蛋白、DNA、RNA等内容物被酶类物质降解;此外,MSC-EV适合通过永生化MSC技术进行大规模制备。因此,与MSC相比,MSC-EV是一种新型高效、安全、便捷、可行的非细胞治疗方法,且在组织修复及免疫调节方面呈现出同等功效。本文仅就MSC-EV在辐射损伤救治方面的研究进展作一综述。     

自体外周血造血干细胞和自体骨髓移植治疗急性髓性白血病的临床疗效比较研究

目的：比较自体外周血干细胞移植（APBSCT）与自体骨髓移植治疗CR1期急性髓性白血病（AML）的临床疗效。方法：用APBSCT治疗AML患者27例，用非净化自体骨髓移植（ABMT）治疗AML患者13例，用净化自体骨髓移植（PABMT）治疗AML患者25例。结果：（1）APBSCT组造血重建校其他两组显著加快；（2）APBSCT组的3年无病生存率（DFS）和复发率（RR）分别为51．％和42．2％，与ABMT组的46．2％、46．7％相当，但与净化ABMT组的72．9％、23．7％相比差异有显著性意义。（3）三组的移植相关死亡率（TRM）差异无显著性意义，死亡的主要原因为感染和内脏出血。结论：APBSCT治疗CR1期AML，其造血重建显著快于ABMT，其疗效与ABMT相当，而显著低于PABMT。     

慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析及临床意义

1对象和方法1.1对象2001年4月-2005年3月在我院血液科就诊的慢性淋巴细胞白血病(chron ic lymphocytic leukem ia,CLL)患者31例,其中男25例,女6例,年龄52~81岁(平均61.8岁)。患者起病缓慢。早期表现为乏力、疲倦,后期出现食欲减退、消瘦、低热、盗汗及贫血等症状。淋巴结肿大常     

异基因移植患者进行Id4基因检测的意义初探

[目的]探讨在行异基因外周血干细胞移植的急性白血病(AL)患者中进行Id4基因甲基化检测对预测临床复发意义.[方法]用甲基化特异性PCR(MS-PCR)方法对16例接受异基因外周血干细胞移植的AL患者,检测其移植前、移植后6个月和12个月的骨髓Id4基因甲基化状态,并随诊分析.[结果]10例患者移植前Id4基因呈甲基化的患者中5例在移植后再次出现Id4基因甲基化,其中4例在随访期出现复发或复发倾向.而5例移植前Id4基因呈非甲基化的患者中,无一例在移植后再次甲基化,随访期间也无复发倾向.[结论]AL患者在移植后进行Id4基因甲基化检测对于预测白血病的复发可能有一定意义.     

动员外周血造血干细胞移植物中同时高效去除T／B细胞的体外研究

单倍体相合造血干细胞移植时，去除移植物中的T细胞和B细胞可减少移植物抗宿主病和EBV相关的淋巴细胞增殖性疾病的发生。本研究在国内首次应用CliniMACS系统，通过CD3／CD19磁珠抗体同时有效地去除动员外周血造血干细胞中的T细胞和B细胞。用流式细胞术检测移植物中T细胞和B细胞的去除效率，以集落形成实验评价去除后的干细胞功能。结果表明：T细胞和B细胞去除之前单个核细胞总数为4．88×10^10，去除之后移植物中T细胞比例为0．02％，去除4．4Log；B细胞比例不到0．01％，至少去除3．3Log。移植物中除CD34^＋细胞外。还包括NK细胞，单核细胞和粒细胞。CD34^＋细胞纯度为0．98％，计数1．84×10^8，回收率为69．7％；NK细胞计数2．54×10^9，回收率为71．7％。集落形成实验显示CD3／CD19去除对造血干细胞功能无影响。结论：应用CliniMACS系统可有效地同时去除动员外周血干细胞中的T细胞和B细胞，且不影响造血干细胞的生物学功能，此项研究为去除T／B细胞的单倍体相合造血干细胞移植提供了技术平台。     

自体造血干细胞移植治疗急性髓系白血病77例

背景:急性髓系白血病采用化疗方案效果欠佳,而异基因造血干细胞移植虽然是最有效的治疗方法,但寻找到HLA相合的供者概率较低,且易发生严重并发症。目的:评价自体造血干细胞移植对急性髓系白血病的改善效果。设计、时间及地点:回顾性病例分析,于1989-01/2007-03在解放军总医院血液科完成。对象:选取急性髓系白血病患者77例,中位年龄27.6岁,均同意行自体造血干细胞移植,实验经医院医学伦理委员会批准。单次造血干细胞移植72例,其中自体外周血造血干细胞移植21例、自体骨髓移植51例;移植前CR1期69例,CR2期2例,CR3期1例。双次造血干细胞移植5例,其中均为自体骨髓移植1例,其余4例分别为首次进行骨髓移植和第2次进行自体外周血造血干细胞移植,移植前均为CR1期。方法:骨髓移植患者按单个核细胞(0.8～1.5)×108/kg采集骨髓细胞,外周血干细胞移植患者在联合化疗后行粒系-巨噬集落刺激因子动员,当白细胞>5.0×109L-1时采集造血干细胞。骨髓移植及外周血干细胞移植患者回输单个核细胞中位数分别为2.62×108/kg,4.03×108/kg。25例患者行TLI预处理方案,47例患者行TBI预处理方案,5例患者行不含TBI的高剂量化疗预处理方案。9例患者给予移植后治疗,接受VP/MM维持化疗3例,接受白细胞介素2 干扰素α免疫维持治疗4例,三者联合维持化疗2例。移植后每3个月进行随访,定期检测血常规、骨髓象等变化。主要观察指标:移植后造血重建情况、存活情况以及维持治疗对患者骨髓功能的影响。结果:所有患者均获得髓系造血重建。72例单次自体造血干细胞移植患者无病存活42例,其中移植前CR1期41例,CR3期1例,至今无病存活率58.3%;5例双次自体造血干细胞移植患者至今无病存活4例。定期进行血象和骨髓象复查,均未发现移植后维持治疗对患者骨髓功能有明显影响,患者对维持治疗的耐受性良好。结论:自体造血干细胞移植治疗急性髓系白血病安全有效,可改善难治急性髓系白血病患者预后。     

MOAP方案治疗急性淋巴细胞白血病疗效观察

目的观察MOAP方案治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）的近期疗效和不良反应。方法我科于2003年1月-2008年12月应用MOAP方案治疗30例ALL,对照组用TOLP方案,2个疗程评价化疗方案的疗效,同时记录不良反应。结果MOAP组治疗初治ALL缓解率90.9%,对照组86.2%。MOAP组达到缓解的时间（15.7±6.4）d,对照组（19.8±3.2）d。MOAP组感染率、药物不良反应均低于对照组。结论MOAP方案治疗ALL有良好的疗效,且耐受性好。