白花蛇舌草注射剂联合紫杉醇对HO-8910和HeLa细胞生长抑制作用的研究

目的:研究白花蛇舌草注射液(ODI)联合紫杉醇(PTX)对人卵巢癌HO-8910PM细胞株与人宫颈癌HeLa细胞株的生长抑制作用.方法:用M1T法测定白花蛇舌草注射液及其联合紫杉醇分别作用于HO-8910和Hela细胞的生长抑制作用,并用IC50值进行评价.结果:ODI作用于HeLa和HO-8910细胞的IC50值分别为8.88μg/ml和2.91μg/ml(按ODI总黄酮计);LY294002作用于HeLa与HO-8910细胞的IC50分别为43.92μg/ml和23.91 μg/ml;PTX作用于HeLa和HO-8910的IC50值分别为>100μmol/L与46.75μgmol/L;PTX联合ODIICl0(10%生长抑制浓度,ICl0)作用于HeLa和HO-8910细胞的IC50值分别为>100μmol/L与31.02μmol/L,PTX联合LY2940021C10作用于HeLa和HO-8910的IC50值分别为73.26μmol/L和36.01μmol/L.结论:ODI对HO-8910和HeLa细胞均有明显的生长抑制作用,且呈浓度依赖;无毒性剂量或ICl00DI联合PTX)(可明显增加HO-8910细胞对PTX的细胞毒作用或敏感性,但对HeLa细胞无明显影响.     

熊果酸对卵巢癌细胞转移的抑制作用

目的 熊果酸(UA)对人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭及趋化运动的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞黏附能力的影响;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测熊果酸对HO-8910PM细胞侵袭及运动的影响;采用RT-PCR和Western blot方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白的表达的影响。结果 在黏附试验中,不同浓度熊果酸作用细胞24h后,抑制率分别为44.03%、46.62%和55.11%,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度的熊果酸在体外作用24h后可以显著抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力,穿膜细胞数与对照组比较具有统计学意义(P＜0.01)。熊果酸处理后细胞趋化运动能力降低与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度熊果酸作用24小时后,HO-8910PM细胞MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达量明显低于正常对照组(P＜0.05),Western blot结果显示:HO-8910PM细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达量受到明显抑制(P＜0.05)。结论 熊果酸抑制人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭和转移的生物学行为,其作用机制可能与熊果酸显著抑制MMP-2、MMP-9表达水平有密切关系。     

米非司酮对高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM蛋白水解作用的影响

目的研究高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM基质金属蛋白酶的表达情况及米非司酮对HO-8910PM细胞水解基质蛋白作用的影响.方法应用免疫组化染色法,检测H0-8910PM卵巢癌细胞基质金属蛋白酶的表达情况;采用水解空斑法检测不同浓度米非司酮对HO-8910PM细胞的体外水解人血浆基质蛋白空斑的变化.结果HO-8910PM细胞MMP-10及MMP-9表达较高,MMP-2表达较低;10 μmol/L、20μmol/L米非司酮培养48小时可显著降低具有蛋白水解作用的HO-8910PM细胞的百分比(P＜0.01),而5 μmol/L米非司酮组无明显变化(P＞0.05);不同浓度的米非司酮(5 μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L)明显缩小HO-8910PM细胞的平均水解空斑面积.结论HO-8910PM细胞可表达MMP-10、MMP-9、MMP-2;米非司酮可抑制HO-8910PM细胞体外水解基质蛋白的能力.     

紫杉醇对浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨紫杉醇对体外培养的浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用。方法:体外培养卵巢癌细胞HO-8910,用浓度1×10-9 mol/L、1×10-8 mol/L、1×10-7 mol/L和1×10-6 mol/L的紫杉醇作用细胞12 h,24 h,48 h后,提取细胞DNA片段进行2.0 mg/L 琼脂糖凝胶电泳;消化HO-8910细胞并经碘化丙锭(IP)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HO-8910细胞进行形态学分析。结果:体外培养的卵巢癌HO-8910细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于1×10-7 mol/L 紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7 %;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变。结论:卵巢癌HO-8910细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对卵巢癌细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

SDZ对大肠癌lovo细胞的影响

目的 观察SDZ体外对大肠癌lovo细胞的影响.方法 培养大肠癌lovo细胞,加入不同浓度的SDZ,作用24 h、48 h、72 h,用MTT法计算细胞生长抑制率,描绘细胞生长曲线.结果 SDZ体外对大肠癌lovo细胞的生长抑制率随作用浓度和作用时间的增加而增大.1 000μg/mL,200μg/mL,40 μg/mL,8 μg/mL,1.6μg/mL SDZ对大肠癌lovo细胞作用24 h,细胞抑制率分别为45%、43%、37%、29%、24%.结论 SDZ体外对大肠癌lovo细胞有生长抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性.     

成纤维细胞激活蛋白对卵巢癌细胞增殖、迁徙和侵袭的影响

背景与目的:肿瘤间质活化的成纤维细胞能表达成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP),本研究通过体外实验研究FAP在卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁徙过程中的作用。方法:人类卵巢癌细胞系HO-8910PM体外培养,加入不同浓度的FAP(30、100和300 pmol/L)处理,用MTT法检测FAP对HO-8910PM增殖的影响;细胞划痕实验检测FAP对HO-8910PM迁徙能力的影响;Transwell侵袭实验来研究FAP对HO-8910PM侵袭能力的影响。结果:MTT法及细胞生长曲线显示FAP对卵巢癌细胞有促增殖作用,并呈时间、剂量依赖性;细胞划痕试验结果显示,不同浓度的FAP对卵巢癌细胞系的迁徙均有促进作用,以100 pmol/L组最为明显(P<0.01);Transwell侵袭实验显示FAP对卵巢癌细胞有促侵袭作用,以100 pmol/L组最为明显(P<0.01)。结论:FAP具有促进卵巢癌细胞的增殖、迁徙和侵袭的作用。     

比卡鲁胺联合紫杉醇对雄激素受体阳性三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用

目的探讨比卡鲁胺(BIC)联合化疗药物紫杉醇(PTX)对雄激素受体(AR)阳性的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及可能的作用机制。 方法采用CCK-8试剂盒观察不同浓度的BIC (0.1、1.0、10.0 μmol/L)和PTX(0.1、1.0、10.0、100.0、1 000.0、10 000.0 nmol/L)以单药及不同联合给药方式处理后,对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用。细胞增殖抑制率比较采用单因素方差分析。组间两两比较采用LSD法。选取10 nmol/L PTX及10 nmol/L DMSO分别处理MDA-MB-231细胞样品(各3个)72 h,采用生物信息学方法分析样品的相关基因表达芯片数据,采用校正t检验筛选出差异基因。 结果使用不同浓度的BIC分别处理MDA-MB-231细胞24、48、72 h后,各组MDA-MB-231细胞增殖抑制率在不同时间点差异均有统计学意义(F＝4.124、8.189、4.139, P＝0.037、0.004、0.032)。BIC 10.0 μmol/L组MDA-MB-231细胞增殖抑制率在48 h最高,为(12.9 ± 5.5)%。不同浓度的PTX分别处理MDA-MB-231细胞24、48、72 h后,不同浓度组MDA-MB-231细胞增殖抑制率在不同时间点差异均有统计学意义(F＝8.407、47.432、14.907, P均<0.001)。PTX在48 h时对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)为5 380.0 nmol/L。5 000.0 nmol/L PTX单药或联合不同浓度(0.1、1.0、10.0 μmol/L)的BIC同时处理MDA-MB-231细胞48 h后,5 000.0 nmol/L PTX单药处理组与3个实验组中细胞增殖抑制率分别为(53.2±2.7)%、(53.2±3.1)%、(51.7±3.4)%、(51.0±2.3)%,组间差异无统计学意义(F＝0.831,P＝0.492)。采用5 000.0 nmol/L PTX和10.0 μmol/L BIC以不同的序贯方式联合给药处理MDA-MB-231细胞(PTX 24 h ＋BIC 24 h组、BIC 24 h ＋PTX 24 h组、PTX 48 h ＋BIC 24 h组、BIC 48 h＋PTX 24 h组),并用5 000.0 nmol/L PTX(PTX 48 h组)和10.0 μmol/L BIC(BIC 48 h组)单药处理及同时联合给药(PTX 48 h＋ BIC 48 h组)分别处理MDA-MB-231细胞后,各组间细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F＝241.466,P<0.001)。其中,两两比较结果显示,PTX 24 h ＋BIC 24 h组细胞增殖抑制率为(72.9±1.9)%,高于BIC 24 h ＋PTX 24 h组的(42.9±1.7)%(P<0.001),PTX 48 h组的(60.9±3.7)%(P<0.001)和PTX 48 h ＋BIC 48 h组的(60.3±4.1)%(P<0.001)。PTX处理组中有EGR1、FST、FOS、IL8、IL6、RPL27A及CA2 7个基因的表达量与DMSO处理组比较,差异均有统计学意义(t＝18.647、10.336、10.098、9.683、9.408、9.050、8.001,P均<0.050)。 结论通过先PTX再BIC的序贯联合给药方式较单药及其他联合给药方式能够更有效抑制AR阳性三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,两者间可能存在协同作用。     

山萘黄素对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的研究山萘黄素(kaempferol)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法以台盼蓝拒染法检测山萘黄素对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;采用Transwell小室法检测山萘黄素对HO-8910PM细胞的侵袭能力、趋化运动能力和黏附能力的影响。结果50μmol/L的山萘黄素作用细胞6h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基膜和趋化运动能力,抑制率分别为(10.53±2.71)%和(10.84±1.45)%,但与对照组相比,对黏附能力的影响无显著性差异。结论山萘菌素能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭和运动能力,对黏附能力无显著影响。     

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖影响

目的 探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖的影响。方法 不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测HO-8910PM增殖情况。结果 MTT结果显示50、100,200、300,400、500、600ug／mL浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率（GI）分别是13．1％、22．6％,35．1％、43．7％、54．3％、64．8％、70．9％，不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖；提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

SDZ对人胃癌SGC-7901细胞的影响

[目的]观察SDZ体外对人胃癌SGC-7901细胞的影响。[方法]培养人胃癌SGC-7901细胞,加入不同浓度的SDZ,作用24h、48h、72h,用MTT法计算细胞生长抑制率,描绘细胞生长曲线,荧光染色和电镜检测并观察细胞凋亡情况。[结果]SDZ体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制率随作用浓度和作用时间的增加而增大。1000μg/ml、200μg/ml、40μg/ml、8μg/ml、1.6μg/mlSDZ对人胃癌SGC-7901细胞作用24h,细胞抑制率分别为38%、35%、33%、29%、20%。[结论]SDZ体外对人胃癌SGC-7901细胞有生长抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,与细胞生长抑制率呈正相关,能引起细胞凋亡。     

Knockdown of UHRF1 by Lentivirus-mediated shRNA Inhibits Ovarian Cancer Cell Growth

Human UHRF1 (ubiquitin-like PHD and RING finger domain-containing 1) has been reported to beover-expressed in many cancers, but its role in ovarian cancer remains elusive. Here, we determined whetherknockdown of UHRF1 by lentivirus-mediated shRNA could inhibit ovarian cancer cell growth. Lentivirusmediatedshort hairpin RNAs (lv-shRNAs-UHRF1) were designed to trigger the gene silencing RNA interference(RNAi) pathway. The efficiency of lentivirus-mediated shRNA infection into HO-8910 and HO-8910 PM cells wasdetermined using fluorescence microscopy to observe lentivirus-mediated GFP expressionand was confirmed to beover 80 percent. UHRF1 expression in infected HO-8910 and HO-8910 PM was evaluated by real-time PCR andWestern blot analysis. The Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay was used to measure cell viability; flow cytometryand Hoechst 33342 assay was applied to measure cell cycle arrest and apoptosis. Cell invasion was assessedusing transwell chambers. Our results demonstrated that the loss of UHRF1 promoted HO-8910 and HO-8910PM cell apoptosis, while inhibiting cell proliferation. In addition, UHRF1 knockdown significantly inhibitedthe invasion of human ovarian cancer cells. In the present study, we also showed that depleting HO-8910 cellsof UHRF1 caused activation of the DNA damage response pathway, with the cell cycle arrested in G2/M-phase.The DNA damage response in cells depleted of UHRF1 was illustrated by phosphorylation of CHK (checkpointkinase) 2 on Thr68, phosphorylation of CDC25 (cell division control 25) on Ser 216 and phosphorylation ofCDK1 (cyclin-dependent kinase 1) on Tyr 15.     

Silencing of IQGAP1 by shRNA inhibits the invasion of ovarian carcinoma HO-8910PM cells in vitro

Background

IQGAP1 is a scaffolding protein and overexpressed in many human tumors, including ovarian cancer. However, the contribution of IQGAP1 to invasive properties of ovarian cancer cells remains unknown. Here, we investigated the effect of IQGAP1-specific short hairpin RNA (shRNA) expressing plasmids on metastatic potential of ovarian cancer HO-8910PM cells.

Methods

We used RT-PCR and Western blot analysis to characterize expression of IQGAP1 in three human ovarian cancer-derived cell lines SK-OV-3, HO-8910 and HO-8910PM. We then determined whether expression of endogenous IQGAP1 correlated with invasive and migratory ability by using an in vitro Matrigel assay and cell migration assay. We further knocked down IQGAP1 using shRNA expressing plasmids controlled by U1 promoter in HO-8910PM cells and examined the proliferation activity, invasive and migration potential of IQGAP1 shRNA transfectants using MTT assay, in vitro Matrigel-coated invasion assay and migration assay.

Results

IQGAP1 expression level seemed to be closely associated with the enhanced invasion and migration in ovarian cancer cell lines. Levels of both IQGAP1 mRNA and protein were significantly reduced in HO-8910PM cells transfected with plasmid-based IQGAP1-specific shRNAs. RNAi-mediated knockdown of IQGAP1 expression in HO-8910PM cells resulted in a significant decrease in cell invasion and migration.

Conclusion

Our findings support the hypothesis that IQGAP1 promotes tumor progression and identify IQGAP1 as a potential therapeutic strategy for ovarian cancer and some other tumors with over-expression of the IQGAP1 gene.     

FAP-1在卵巢癌细胞株中的表达与意义

目的 :探讨Fas相关磷酸酯酶 -1(FAP 1)在卵巢癌细胞株SKOV3、HO 8910、TC 1和 3AO中的表达与意义。方法 :采用免疫印迹法和逆转录聚合酶链式反应方法 ,检测了 4种卵巢癌细胞株中FAP 1蛋白与核酸的表达水平 ;应用四唑盐比色法和流式细胞术检测了经抗Fas激活性抗体DX2诱导凋亡后 ,FAP 1分子与 4种细胞对凋亡敏感性的关系。结果 :FAP 1蛋白与mRNA的表达结果一致 ,均在SKOV3和HO 8910细胞中有表达 ,以SKOV3表达最强 ,而在TC 1和 3AO中未见表达。当用DX2以不同时间诱导凋亡后 ,FAP 1阴性株的细胞抑制率与凋亡率均高于FAP 1阳性株 ,P<0 0 5 ,P <0 0 1;而FAP 1阳性株中 ,HO 8910的生长抑制率又高于SKOV3 ,P <0 0 5。同时 ,FAP 1阴性株对DX2的反应具有时间依赖性 ,而FAP 1阳性株却表现出对DX2的逐渐耐受性。结论 :FAP 1对细胞凋亡的敏感性具有负性调控作用 ,可能对卵巢癌的发病和耐药具有重要意义     

高低转移人卵巢癌细胞系基因表达谱差异

目的 用基因芯片技术研究高低转移人卵巢癌细胞系（HO－8910PM和HO－8910）基因表达谱差异,筛选与转移相关的基因。方法 分别抽提高低转移人卵巢癌细胞和对照正常卵巢上皮的总RNA并纯化mRNA;分别将等量的mRNA逆转录合成以图像,用软件对扫描图像进行数字化处理和分析。结果 HO－8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因;HO－8910PM细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有323个基因。HO－8910PM与母系HO－8910比较差异2倍以上共有163个基因,差异3倍以上共有21个基因。结论 两株人卵巢癌细胞与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异,提示这些基因与卵巢癌的发生和发展有关;HO－8910PM与HO－8910比较存在差异的基因可能与高转移特性相关。     

长链非编码RNA FOXD2-AS1对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

  目的  观察长链非编码RNA（lncRNA）FOXD2-AS1对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。  方法  收集2017年2月至2017年9月华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院（武汉市妇幼保健院）手术切除的16例卵巢癌患者的组织标本,采用荧光实时定量聚合酶链式反应（quantitative PCR,qPCR）检测组织标本、人卵巢癌细胞系及人正常卵巢上皮细胞系中的FOXD2-AS1表达水平。将HO-8910细胞分为实验组和对照组,分别转染siRNA-FOXD2-AS1和阴性对照RNA。细胞计数CCK-8法、Transwell迁移实验分别检测沉默FOXD2-AS1表达对卵巢癌HO-8910细胞增殖活性和迁移能力的影响。生物信息学方法预测FOXD2-AS1的下游靶基因,qPCR检测下游靶基因表达,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白94（glucose regulated protein94,GRP94）和信号通路Wnt/β-catenin的蛋白表达。  结果  卵巢癌组织中的FOXD2-AS1相对表达量8.56±0.51明显高于正常癌旁组织的2.38±0.21（P < 0.01）,FOXD2-AS1在卵巢癌细胞系OC3、HO-8910、A2780、SKOV-3中表达明显增加（P < 0.05）。下调FOXD2-AS1表达明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖活性和迁移能力（均P < 0.01）。生物信息学方法显示,FOXD2-AS1靶向结合miR-150-5p后,可靶向结合GRP94基因。实验组和对照组miR-150-5p相对表达量分别为5.45±0.91和1.01±0.08（P < 0.01）,GRP94 mRNA相对表达量分别为0.32±0.05和1.02±0.11（P < 0.01）。GRP94和Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达减少。  结论  FOXD2-AS1在卵巢癌组织和细胞系呈高表达,下调FOXD2-AS1可调控miR-150-5p表达,抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖和迁移,可发挥抑癌基因的功能。      

C17orf76-AS1在卵巢上皮癌中的表达及其对卵巢上皮癌细胞SKOV3生物学功能的影响

目的 检测C17orf76-AS1在正常卵巢上皮细胞与卵巢上皮癌细胞系中的表达情况并探讨C17orf76-AS1过表达对卵巢上皮癌细胞系SKOV3生物学功能的影响。方法 通过定量PCR（QPCR）方法检测C17orf76-AS1在在卵巢上皮细胞IOSE80及不同卵巢上皮癌细胞系（A2780、SKOV3、OVCAR3、HO-8910和HO-8910PM）中的表达。在pcDNA3.1基础上构建C17orf76-AS1过表达质粒并采用Lipo2000瞬时转染SKOV3细胞,QPCR检测SKOV3细胞中C17orf76-AS1的过表达效率;CCK-8实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞增殖的影响;Transwell法和划痕实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞侵袭迁移能力的影响。结果 与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,C17orf76-AS1在A2780、SKOV3、 OVCAR3、HO-8910及HO-8910PM细胞中均呈低表达,分别下降了0.36、0.30、0.46、0.32、0.31倍（P＜0.05）。在SKOV3细胞中过表达C17orf76-AS1,CCK-8结果显示C17orf76-AS1过表达48 h后,SKOV3的增殖能力显著下降了约1.5倍;Transwell结果显示SKOV3细胞迁移能力下降约1.3倍,划痕实验也同样证实过表达C17orf76-AS1后,SKOV3细胞愈合能力显著低于对照组（P＜0.05）。结论 C17orf76-AS1在卵巢上皮癌细胞中异常低表达,其过表达显著降低了卵巢癌细胞增殖和迁移能力。     

A STUDY OF MULTI-GENE EXPRESSION IN THE HIGHLY METASTASIZING HUMAN OVARIAN CANCER CELL LINE HO-8910PM AND ITS MOTHER CELL LINE HO-8910

Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｏｆｔｕｍｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓｈａｖｅｐｒｏｖｅｄｔｈａｔｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅａｎｄｔｕｍｏｒｓｕｐｒｅｓｏｒｇｅｎｅｐｌａｙｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅ...     

人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：构建人反义VEGF基因真核表达载体,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验。方法：RT－PCR法获得人VEGF基因,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定结果。用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO－8910,G418筛选获得阳性克隆,RNA斑点杂交鉴定HO－8910细胞中VEGF表达。Western blot及间接免疫荧光法检测转染前后HO－8910 细胞中VEGF蛋白表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性。结果：RT－PCR法得到VEGF基因,并获得反向构建的VEGF真核表达载体。VEGF反义RNA部分阻断了HO－8910细胞中VEGF表达,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变。裸鼠体内致瘤性降低。结论：成功构建了反义VEGF基因真核表达载体,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的基因治疗提供了一定的实验依据。     

Involvement of GRP78 in the Resistance of Ovarian Carcinoma Cells to Paclitaxel

Background: Glucose regulated protein 78 (GRP78) is a type of molecular chaperone. It is a possible candidateprotein that contributes to development of drug resistance. We first examined the involvement of GRP78 inchemotherapy-resistance in human ovarian cancer cell. Materials and Methods: The expression of GRP78mRNA and protein were examined by RT-PCR and western blotting, respectively, in human ovarian cancer cellsline (HO-8910). Sensitivity of HO-8910 to paclitaxel was determined with methyl thiazolyl tetrazolium (MTT).Suppression of GRP78 expression was performed using specific small-interfering RNA (siRNA) in HO-8910cells, and cell apoptosis was assessed by flow cytometry. Statistical analysis was performed using the SPSS 15.0statistical package. Results: HO-8910 cells, with high basal levels of GRP78, exhibited low sensitivity to paclitaxel.The mRNA and protein levels of GRP78 were dramatically decreased at 24h, 48h and 72h after transfection andthe sensitivity to paclitaxel was increased when the GRP78 gene was disturbed by specific siRNA transfection.Conclusions: The results suggested that high GRP78 expression might be one of the molecular mechanismscausing resistance to paclitaxel, and therefore siRNA of GRP78 may be useful in tumor-specific gene therapyfor ovarian cancer.     

p16基因在人卵巢上皮癌细胞系中的缺失分析研究

目的：了解新型抑癌基因ｐ１６在人卵巢上皮癌细胞系中的变异情况,为认识卵巢上皮癌的形成和发展依据。方法：应用ＰＣＲ扩增、ｍＲＮＡ原位杂交和免疫细胞化学方法,对５种人卵巢上皮癌细胞系ＣＡＯＶ３、ＯＶＣＡＲ３、ＡＯ、ＨＯ－８９１０及ＨＯ－８９１０ＰＭ进行分析。结果：５种人卵巢上皮癌细胞系中只有ＣＡＯＶ３（２０％）显示ｐ１６基因纯合性缺失,ＣＡＯＶ３细胞亦无ｐ１６基因ｍＲＮＡ及蛋白表达。ＯＶＣＡＲ３、Ｈ０