冻存复苏后骨髓间充质干细胞体外扩增和多向分化潜能研究

冻存复苏的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)被传至15代并分别诱导成软骨细胞、脂肪细胞和神经细胞，以此研究冻存干细胞的扩增和分化潜能.结果表明，复苏细胞在软骨细胞诱导液的作用下分化为软骨细胞，对甲苯胺蓝异染并通过RT PCR检测出Ⅱ型前胶原mRNA的表达；在脂肪细胞诱导液的作用下，可检测到被诱导细胞中脂滴的产生，通过油红O染色显示出细胞核周围聚集的脂滴；在神经细胞诱导液的作用下，通过免疫组化和RT PCR均检测出被诱导细胞具有巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达，分化细胞延伸分支， 末端为典型曲张体.推断复苏的hMSCs仍是具有向软骨、脂肪和神经元多系分化的潜能性干细胞群，可以作为细胞组织工程和治疗相关疾病的一种干细胞来源.     

苯扎贝特联合维甲酸对APPswe M17细胞分化的影响

通过Western blot法、细胞形态检测等方法研究联合运用苯扎贝特(Bezafibrate, Beza)和维甲酸(Retinoic acid, RA)诱导Appswe M17细胞向神经元样细胞分化的作用和机制。结果发现,Vector M17细胞几乎不表达APP, APPswe M17细胞表达高水平的APP。10μmol/L RA可以诱导Vector M17分化为神经元样细胞,联合运用250μmol/L Beza和10μmol/L RA可以诱导APPswe M17细胞分化为神经元样细胞,其作用机制是通过上调APPswe M17细胞中的DLP1的表达恢复APPswe M17细胞的分化潜能。     

油酸对C57/BL6J小鼠脂肪干细胞体外成脂分化的影响

对C57/BL6J小鼠脂肪干细胞进行原代培养,通过流式细胞术鉴定细胞表面抗原标志物。体外培养条件下,在成脂诱导分化培养基中加入不同浓度的油酸处理小鼠ADSCs 3d,倒置显微镜下观察ADSCs的形态变化,油红O染色观察胞质中脂滴的聚集,并测定细胞中甘油三酯总量。结果表明,诱导3d后,油酸处理组细胞胞体显著增大,形态由梭形变为圆形,胞质内脂滴显著增多;油红O染色细胞中可见大量红色的脂滴染色。各浓度油酸处理组细胞胞浆内甘油三酯总量增多,显著高于对照组,并呈剂量效应关系。说明油酸可促进小鼠ADSCs体外成脂分化。     

角蒿咖啡酸酯对小鼠耳肿胀的抑制作用

研究了角蒿咖啡酸酯((+)-2-(1-hydroxyl-4-oxocyclohexyl)ethyl caffeate,JH2)对花生四烯酸(arachidonic acid,AA)致小鼠耳肿胀的抑制作用,探讨其作用机制,采用花生四烯酸诱导的小鼠急性耳肿胀模型评价JH2的体内药效,通过酶联免疫吸附测定实验检测JH2对AA通路中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)活性的影响.实验结果显示,在AA诱导的小鼠耳肿胀模型中,JH2能显著抑制AA所致的小鼠耳肿胀程度和组织蛋白渗出量,并降低小鼠发炎耳组织中白三烯B4(leukotrienes B4,LTB4)的生成量.体外活性研究显示,JH2对5-LOX有较强的抑制活性,半抑制浓度IC50值为12.16μmol/L.说明JH2对AA诱导的小鼠耳肿胀急性炎症具有抑制作用,其作用机制可能与JH2抑制AA通路中5-LOX的活性从而降低炎症介质LTB4的产生有关.     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以周麦18成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.结果表明,在Ms+2,4-D(3.0mg/L)+6-BA(0.5mg/L)+VB1(2.0mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为70.8%,但愈伤组织质量较差.将其在降低2,4-D浓度和添加ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤组织.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0mg/L)+N从(0.3mg/L)中,分化率为72.33%.通过研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体小麦组织培养的再生体系.     

γ-氨基丁酸受体基因的系统性调控网络

提出一种多学科交叉结合的策略,试图初步获得系统性调控γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)受体基因的转录因子线索.利用基于功能基因组学方法的DNA元件百科全书计划已发表的数据,系统性地获得GABA受体基因的开放染色质序列,并以此作为固相化探针,捕获与其特异性相互作用的蛋白质分子,并利用质谱分析鉴定蛋白.结果发现,对不同脑区获得的核蛋白,探针都能捕获到同样的特异性条带,然而,作为对照的天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体基因相关的开放染色质探针,在不同脑区中并未检获上述特异信号,说明结合蛋白是特异的.质谱分析表明,与GABA受体基因相关的开放染色质特异相互作用的蛋白是核膜血影重复蛋白-1(nuclear envelop spectrin repeatprotein-1,Nesprin-1),又称synaptic nuclear envelope-1(SYNE-1).进一步的调控网络生物信息学分析表明,Nesprin-1可能与MAFA、IRX2、BCL6、CEBPA以及RP58等转录因子形成复合物,并与GABA受体基因GABRA5、GABRA6、GABBR1和GABBR2等共表达.表明GABA受体基因在不同脑区是通过相同的转录调控机制进行表达的,Nesprin-1可能与MAFA、IRX2、BCL6、CEBPA以及RP58等转录因子形成复合物进而调控GABA受体基因表达,该特异的转录因子调控网络有望用于诱导多能干细胞或是前体细胞直接分化为GABA能神经元.     

石榴皮提取物和鞣花酸对人脂肪干细胞增殖和分化的影响

肥胖已成为世界的流行病并可引发与肥胖相关的疾病, 而肥胖的产生与脂肪细胞的增殖及分化密切相关。本研究采用MTT法测定了石榴皮提取物及鞣花酸对融合期人脂肪干细胞增殖的抑制活性, 采用油红染色法观察分化期脂肪干细胞的形态学变化及测定甘油三酯的相对含量。研究表明, 随着石榴皮多酚提取物和鞣花酸浓度的增加, 脂肪干细胞的增殖和分化出现呈剂量效应的抑制作用。当石榴皮提取物质量浓度为25 μg·mL-1时, 对脂肪干细胞增殖和分化的抑制率分别为31.87%、45.88%。鞣花酸质量浓度为4.5 μg·mL-1时, 对脂肪干细胞增殖和分化的抑制率分别为47.23%、44.96%。说明石榴皮多酚提取物及鞣花酸可有效抑制人脂肪干细胞增殖和分化为成熟脂肪, 减少甘油三酯的累积。鞣花酸与石榴皮多酚提取物相比具有更强的抑制作用, 提示其具有潜在的预防肥胖作用。     

卵巢癌病人腹水细胞的培养及其分化研究

肿瘤干细胞是指能分化出不同表型、自我更新和不断分化的肿瘤细胞群,具有与干细胞相似的特征。文章通过流式细胞术分析从人卵巢癌腹水分离所得的细胞表面蛋白的分化特征,发现这些腹水细胞具有部分干细胞表面标志(CD44+,CD90+,β2M+)蛋白,但却不表达CD133和CD34,且体外培养2周后,腹水细胞表面标志发生了变化,这些结果为卵巢癌干细胞研究提出了新的启示。     

约氏疟原虫Pys25和Pys48抗原的表达与产物活性初步研究

通过家蚕杆状病毒表面展示技术获得约氏疟原虫有性阶段候选抗原Pys25(217AA)和Pys48(455AA),以期建立一种新的鼠疟模型。首先利用大肠杆菌原核表达系统表达这两种抗原,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,同时利用家蚕杆状病毒表面展示技术,并改造pFastBac Dual载体,在其Ph启动子前端加入哺乳动物启动子CMV,并将目的蛋白基因与杆状病毒囊膜蛋白gp64基因片段融合表达,融合蛋白展示在病毒粒子表面。用其免疫Balb/c小鼠,在小鼠体内,CMV启动子启动融合蛋白表达,共同刺激小鼠产生多克隆抗体。通过间接ELISA检测,两种抗原抗体效价均能达到1∶12 800。本实验为后期免疫阻断效应研究、多时期多价疫苗的构建及鼠疫模型的建立提供了实验基础。     

大壁虎嗅球神经元在香蕉水气味作用下的放电模式

通过细胞外记录方法研究了大壁虎嗅球神经元在香蕉水气味作用下的放电模式。实验中共记录了21只大壁虎主嗅球上的275个神经元,其神经脉冲发放规律可以分为三类:无反应的神经元占43.6%,放电受到抑制的神经元占4.7%,而兴奋性神经元的比例达到51.7%。兴奋性神经元的放电模式又可以分为长时间持续兴奋(持续超过60s)、短时兴奋、延迟兴奋和取消时兴奋4种模式,分别占神经元总数的34.5%,6.25%,6.25%和4.7%,长时间持续兴奋占主导地位。这些神经元在嗅球上的分布范围很广,但在端部背侧和尾部腹侧的分布密度相对更高。本文工作为基于嗅觉的大壁虎运动干预中刺激位置和信号形态等关键参数的选取提供了基础信息。