鞘内注射Maresin 1对骨癌痛小鼠痛行为学和脊髓胶质细胞活化的影响

目的 探讨鞘内注射Maresin 1对骨癌痛（BCP）小鼠痛行为学和脊髓胶质细胞活化的影响。
方法 实验一：选择清洁级健康雄性C57BL/6小鼠28只,4～6周龄,体质量18～22 g。随机分为两组：假手术1组（S1组）和BCP1组（B1组）,每组14只。 B1组小鼠股骨髓腔内注射含有2×105个Lewis肺癌细胞的PBS溶液20 μl,建立骨癌痛小鼠模型;S1组仅注射PBS溶液20 μl。造骨癌痛模型（造模）前1 d、造模后3、7、10、14和21 d时随机取6只测定机械缩足阈值（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）。B1组和S1组于造模后7、14和21 d时随机取4只小鼠处死,采用Western blot法检测脊髓胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和离子钙结合适配器分子1（Iba1）含量。实验二：清洁级健康雄性C57BL/6小鼠36只,随机分为三组：假手术2组（S2组）、BCP2组（B2）组和Maresin 1（M）组,每组12只。S2组注射PBS溶液20 μl;B2和M组造骨癌痛小鼠模型。M组于造模后14～16 d时连续3 d鞘内注射Maresin 1 50 ng/5 μl。S2组、B2组和M组于造模后14～18 d时随机取6只测定MWT和TWL。于造模后18 d行为学测试完成后处死小鼠,采用Western blot和免疫荧光法检测脊髓GFAP和Iba1含量。ELISA法检测脊髓IL-1β、IL-6和TNF-α浓度。
结果 实验一：与S1组比较,B1组造模后7、10、14和21 d MWT明显降低,TWL明显缩短,造模后7、14和21 d脊髓GFAP和Iba1含量明显升高（P＜0.05）。实验二：与S2组比较,B2组造模后18 d脊髓GFAP和Iba1含量明显升高,平均荧光强度明显增强,脊髓IL-1β、IL-6和TNF-α浓度明显升高（P＜0.05）。与B2组比较,M组造模后15～18 d时MWT明显升高,TWL明显延长（P＜0.05）,造模后18 d脊髓GFAP和Iba1含量明显降低,平均荧光强度明显减弱（P＜0.05）,脊髓IL-1β、IL-6和TNF-α浓度明显降低（P＜0.05）。
结论 鞘内注射Maresin 1可能通过抑制脊髓胶质细胞活化,减轻神经炎症反应,缓解骨癌痛。     

骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化

目的 评价骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化.方法 雌性SD大鼠,体重180～220 g,采用MADB-106鼠源性乳腺癌细胞注入大鼠左侧胫骨建立骨癌痛模型.14d后,选择一般状况良好、体重无减轻、进食好、活动正常、热痛阈<18.5 s、机械痛阈<27.8 g的大鼠16只,随机分为2组:对照组(n=7)注射等容量生理盐水;吗啡耐受组(n=9)皮下注射吗啡3次/d,连续5 d,每天单次注射剂量按10、20、40、50、60 mg/kg递增.于造模前和造模后10 d开始隔日1次测定热痛阈和机械痛阈;造模后19 d皮下注射吗啡3 mg/ks,30 min后测定热痛阈和机械痛阈.随后处死动物,取腰段脊髓,采用RT-PCR法测定脊髓白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达;采用ELISA法测定脊髓IL-1β和TNF-α的含量;采用免疫组化法测定脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力.结果 与造模前比较.对照组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈降低(P<0.05);与对照组比较,吗啡耐受组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈升高,造模后19 d时热痛阈和机械痛阈降低,左侧脊髓IL-1β mRNA和TNF-αmRNA表达升高,脊髓IL-1β和TNF-α的含量增加,脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力增强(P<0.05).结论 骨癌痛大鼠连续递增剂量腹腔注射吗啡可引起脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞进一步活化,IL-1β和TNF-α释放增加,从而发生吗啡耐受.     

脊髓背角γ-氨基丁酸转运体-1在大鼠骨癌痛中的作用

目的 评价脊髓背角γ-氨基丁酸转运体-1 (GAT-1)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 清洁级健康雌性SD大鼠80只,体重150～180 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=16):假手术组(Ⅰ组);骨癌痛组(Ⅱ组)采用胫骨上段骨髓腔接种Walker-256乳腺癌细胞的方法制备大鼠骨癌痛模型;假手术+ GAT-1选择性抑制剂NO-711组(Ⅲ组)和骨癌痛+NO-711(Ⅳ组)于术后第14天鞘内注射NO-711 20 μg,1次.d,连续3d;骨癌痛+生理盐水组(Ⅴ组)于术后第14天鞘内注射10μl生理盐水,1次/d,连续3d.于术前1d、术后第3、5、7、10、14、16天时测定大鼠机械痛阈,术后第16天机械痛阈测定后处死大鼠,取腰段脊髓,采用Western blot法检测脊髓GAT-1的表达,采用免疫荧光双标法观察Ⅰ组和Ⅱ组大鼠患侧脊髓GAT-1和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物的共表达.结果 与Ⅰ组和Ⅲ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组术后第7～ 16天机械痛阈降低,Ⅱ组和Ⅴ组术后GAT-1表达上调(P＜0.05);与Ⅱ组和Ⅴ组比较,Ⅳ组术后第16天鞘内给药后机械痛阈升高,脊髓背角GAT-1表达下调(P＜0.05);与Ⅰ组比较,Ⅱ组患侧脊髓GFAP和GAT-1共表达增加(P＜0.05).结论 脊髓背角GAT-1的表达上调参与了大鼠骨癌痛的形成与维持,该作用可能与脊髓星形胶质细胞的活化有关.     

μ受体介导靶向毁损脑干下行易化神经元对骨癌痛大鼠的镇痛效应

目的 探讨μ受体介导靶向毁损脑干下行易化神经元对骨癌痛大鼠的镇痛效应.方法 成年雌性Wistar大鼠48只,体重180～200 g,随机分为6组,对照组(n=3):不给予任何处理;骨癌痛组(n=9):于右下肢胫骨中部骨髓腔内注射Walker 256乳腺癌细胞10 μl制备骨癌痛模型;PBS组(n=9):乳腺细胞接种前28 d时延髓头端腹内侧(RVM)区单次微注射PBS;皮啡肽组(n=9):乳腺癌细胞接种前28 d时RVM区单次微注射皮啡肽;皂角素组(n=9):乳腺癌细胞接种前28 d时RVM区单次微注射皂角素;皮啡肽-皂角素耦联体组(n=9):乳腺癌细胞接种前28 d时RVM区单次微注射皮啡肽-皂角素耦联体.于乳腺癌细胞接种前1 d、乳腺癌细胞接种后3、5、7、9、11、14、16、18、20 d时测定机械痛阈.C组于乳腺癌细胞接种后20 d时,其余各组于乳腺癌细胞接种后7、14和20 d时,各处死3只大鼠,测定脊髓背角Fos蛋白表达水平.结果 与对照组比较,骨癌痛组、皮啡肽组和皂角素组接种侧机械痛阈乳腺癌细胞接种后7～20 d时降低,接种对侧机械痛阈乳腺癌细胞接种后9～20 d时降低,接种侧和接种对侧脊髓背角Fos蛋白表达上调,皮啡肽-皂角素组接种侧机械痛阈乳腺癌细胞接种后7～14 d时降低,接种对侧机械痛阈乳腺癌细胞接种后9～14 d时降低,皮啡肽组-皂角素组乳腺癌细胞接种后7 d时接种侧和接种对侧脊髓背角Fos蛋白表达上调(P<0.05);与骨癌痛组比较,皮啡肽组和皂角素组接种侧和接种对侧各时点机械痛阈和脊髓背角Fos蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),皮啡肽-皂角素组接种侧机械痛阈乳腺癌细胞接种后11～20 d时升高,接种对侧机械痛阈乳腺癌细胞接种后4～20 d时升高,乳腺癌细胞接种后14、20 d时接种侧和接种对侧脊髓背角Fos蛋白表达下调(p<0.05).结论 μ受体介导靶向毁损脑干下行易化神经元可有效降低骨癌痛大鼠痛觉超敏的程度.     

星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环在大鼠神经病理性痛形成中的作用

目的 评价星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环在大鼠神经病理性痛形成中的作用.方法 成年雄性SD大鼠48只,体重200～230 g,采用结扎胫神经和腓总神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型.随机分成8组(n=6):对照组(C组)不进行任何处理;假手术组(S组)仅穿线不结扎;神经病理性痛组(NP组)模型制备成功后鞘内注射PBS 50μl,M1～4组分别鞘内注射0.01、0.03、0.05、0.10 mmol/L谷氨酰胺合成酶抑制剂MSO 50μl,MG组鞘内注射0.05 mmol/L MSO 50μl,15 min后鞘内注射0.25 mmol/L氨酰胺50μl.于结扎前1周(T0)、结扎后1周(T1)、注射MSO后15、30、45、60 min(T2～5)时测定机械痛阈,最后1次测痛阈后处死大鼠,取L4～6段脊髓,采用免疫组化法测定神经胶质酸性蛋白(GFAP)和谷氨酰胺合成酶(GS)的表达及共表达(GFAP/GS)情况.结果 与NP组和MG组相比,S组CP组T1～5时、M3,4组T2～4时机械痛阈升高,S组、C组和M3组脊髓背角GFAP、GS和GFAP/GS表达下调(P＜0.05);MG组和NP组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环参与了大鼠神经病理性痛的形成.     

脊髓趋化因子配体2在大鼠胫骨癌痛中的作用

目的 探讨脊髓趋化因子配体2(CCL2)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 健康成年雌性SD大鼠84只,体重160～ 180g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=28):正常对照组(C组)、假手术组(S组)和骨癌痛组(P组).P组胫骨骨髓腔内注射Walker-256乳腺癌细胞混悬液制备大鼠胫骨癌痛模型;S组胫骨骨髓腔内注射生理盐水;C组不作任何处理.于接种前ld、接种后l、3、7、10、14和21 d时,测定机械性刺激阈值.于接种前ld、接种后7、14和21'd时痛阈测定结束后,各组随机处死6只大鼠,取L4～6脊髓组织,采用ELISA法测定CCL2含量,反映其表达.接种后14 d时痛阈测定结束后,P组随机取4只大鼠,采用免疫荧光双标染色法观察脊髓背角CCL2与离子钙接头蛋白分子-1(小胶质细胞特异性标记物)、胶质纤维酸性蛋白(星形胶质细胞特异性标记物)和神经元特异核蛋白(神经元特异性标记物)的共表达情况.结果 与C组和S组相比,P组接种后7～21 d时机械性刺激痛阚下降,接种后7、14和21 d时脊髓CCL2表达上调(P＜0.05).骨癌痛大鼠脊髓背角CCL2在小胶质细胞和星形胶质细胞中存在表达,而在神经元中无表达.结论 脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞中释放的CCL2参与了大鼠胫骨癌痛的发生发展.     

新斯的明对神经病理性痛大鼠脊髓小胶质细胞的影响

目的 评价新斯的明鞘内给药对神经病理性痛大鼠脊髓小胶质细胞的影响.方法 健康雄性SD大鼠,月龄1月,体重200～250 g,建立坐骨神经分支选择性损伤(SNI)致神经病理性痛模型.术后5 d行鞘内置管,取鞘内置管成功的SNI大鼠40只,恢复2 d后行鞘内给药.随机分为4组(n=10):SNI组、新斯的明组(N组)、阿托品+新斯的明组(A+N组)和美加明+新斯的明组(M+N组).SNI组鞘内注射生理盐水20μL,N组鞘内注射新斯的明10μg,A+N组和M+N组分别于鞘内注射阿托品10μg或美加明10μg后5min鞘内注射新斯的明10μg.分别于造模前2 d(基础状态)、造模后即刻(T_1)、1 d(T_2)、3 d(T_3)、5 d(T_4)、新斯的明给药前即刻(T_5)、给药后15 min(T_6)、30 min(T_7)、45 min(T_8)、60 min(T_9)时各组随机取5只大鼠测定机械痛阈,并确定给药后机械痛阈最高点,在机械痛阈最高点时另取5只大鼠麻醉后取脊髓,镜下计数阳性脊髓小胶质细胞.结果 与SNI组比较,N组给药后各时点机械痛阚升高,T_6时达峰值,A+N组和M+N组给药后各时点机械痛阈升高,N组和A+N组术侧阳性脊髓小胶质细胞数量减少(P<0.05),M+N组术侧阳性脊髓小胶质细胞数量差异无统计学意义(P>0.05).与N组比较,A+N组和M+N组给药后各时点机械痛阈降低(P<0.05).结论 新斯的明鞘内给药可抑制神经病理性痛大鼠脊髓小胶质细胞的激活,从而发挥镇痛作用,其机制与激活N胆碱能受体有关.     

NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠的镇痛效应

目的 评价NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠的镇痛效应.方法 成年雌性SD大鼠,体重180～200 g,制备保留性神经损伤(SNI)模型,7 d后选取SNI模型制备成功的大鼠18只,随机分为3组(n=6),NR2B组沿背部两侧皮下多点注射NR2B多肽疫苗50 μl(含NR2B 100μg)3次,每隔2周注射1次;PBS组和KLH组分别给予PBS 50 μl和匙孔虫戚血蓝蛋白100 μg,均用弗氏佐剂稀释至100 μl.分别于制备SNI前1 d(基础值)、第1次免疫前1 d及第3次免疫后14d时测定机械痛阈;分别于制备SNI前1 d及第3次免疫后14 d时取血清和脑脊液,测定NR2B抗体滴度,然后处死大鼠,取L3-5脊髓组织,其中3只采用免疫组化法测定脊髓背角胶质纤维酸性蛋白表达水平,反映星形胶质细胞激活程度;另外3只采用Western blotting法测定脊髓背角NR2B蛋白表达水平.结果 NR2B组第3次免疫后14 d时血清及脑脊液中均可检测到NR2B抗体,而SNI前1 d时未检测到NR2B抗体,PBS组及KLH组各时点均未检测到NR2B抗体.与基础值比较,各组机械痛阈均降低(P<0.05);与PBS组和KLH组比较,NR2B组第3次免疫后机械痛阈升高,脊髓背角星形胶质细胞激活程度降低,NR2B蛋白表达下调(P<0.05).结论 NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠具有镇痛作用,其机制与进入脊髓的NR2B抗体下调了NR2B蛋白表达有关.     

胫骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞的活化

目的 观察胫骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞的活化情况,探讨骨癌痛产生与维持的机制.方法 Walker 256乳腺癌细胞经大鼠体内腹水传代增殖,种植于大鼠左侧胫骨建立胫骨癌痛模型.雌性SD大鼠35只,体重150-180 g,随机分为3组:对照组(C组,n=5)、热杀死肿瘤细胞组(K组.n=15)、胫骨癌痛组(P组,n=15).C组选取5只大鼠,K组和P组于种植后第6天、第12天和第18天随机取5只大鼠测定左后足机械痛阈,随后处死大鼠,取左侧L4-6脊髓组织,采用免疫组化方法检测脊髓背角胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平.结果 与C组比较,K组大鼠左后足机械痛阈及左侧脊髓背角GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05).与K组比较,P组于种植癌细胞后第6天、第12天及第18天时大鼠左后足机械痛阈降低,左侧脊髓背角GFAP表达升高(P<0.01).与种植癌细胞后第6天比较,种植癌细胞后第12、18天时P组大鼠左后足机械痛阈下降,左侧脊髓背角GFAP表达升高(P<0.01),而P组种植癌细胞后第12天与第18天比较,大鼠左后足机械痛阈与脊髓背角GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 脊髓星形胶质细胞的活化与胫骨癌痛的产生与维持有关.     

脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S在大鼠骨癌痛维持中的作用

目的 探讨脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S(CatS)在大鼠骨癌痛维持中的作用.方法 雌性未交配SD大鼠50只,4～6周龄,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将其分为5组(n=10):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、假手术+CatS抑制剂吗啉亮氨酸高苯丙氨酸乙烯基苯基砜(LHVS)组(S+L组)、骨癌痛+二甲基亚砜组(BCP+D组)和骨癌痛+LHVS组(BCP+L组).左侧胫骨骨髓腔内接种浓度为2×107/ml Walker256细胞5μl制备大鼠骨癌痛模型.分别于造模后10、11、12d时S+L组和BCP+L组鞘内注射LHVS 50 nmol/10l,1次/d,BCP+D组给予等容量二甲基亚砜.分别于造模前1d(基础状态)及造模后3、6、9、10、11、12 d(T0-6)测定机械缩爪反应阈(MWT),分别于鞘内给药前、鞘内给药后0.5、1.0、3.0、6.0、9.0、12.0、24.0 h时测定(MWT).处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定OX-42表达.结果 与S组比较,BCP组、BCP+D组和BCP+L组T2-6时MWT降低,脊髓背角OX-42表达上调(P＜0.01),S+L组MWT和脊髓背角OX-42表达差异无统计学意义(P＞0.05);与BCP组比较,BCP+L组T4-6时MWT升高,脊髓背角OX-42表达下调(P＜0.01),BCP+D组MWT和脊髓背角0X-42表达差异无统计学意义(P＞0.05).S+L组和BCP+D组鞘内给药后3.0、6.0、9.0h时MWT低于BCP+D组(P＜0.01).结论 脊髓背角小胶质细胞CatS激活参与了大鼠骨癌痛的维持.     

胫骨癌痛大鼠脊髓背角5-羟色胺水平的变化

目的 评价胫骨癌痛大鼠脊髓背角5-羟色胺(5-HT)水平的变化.方法 雌性SD大鼠60只,体重160～180 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=20):对照组(C组)、假手术组(S组)和胫骨癌痛组(P组).C组不做任何处理;S组于右侧胫骨上段骨髓腔注射D-hank液10 μl;P组于右侧胫骨上段骨髓腔接种Walker 256大鼠乳腺癌细胞悬液10μl制备胫骨癌痛模型.于接种前1d、接种后3、5、7、9、11、14、16、18和21 d时测定机械痛阈.于接种前1 d、接种后7、14和21 d时,每组痛阈测定结束后随机处死大鼠4只,取脊髓组织,采用高效液相色谱法测定脊髓背角5-HT含量;接种后14 d取接种侧胫骨组织,光镜下观察胫骨破坏情况.脊髓背角5-HT含量与机械痛阈进行直线相关分析.结果 与C组和S组比较,P组接种后7～21 d时机械痛阈降低,接种后7、14和21 d时脊髓背角5-HT含量升高(P＜0.05),且5-HT含量与机械痛阈呈负相关(r=-0.973,P＜0.05).C组和S组各时点机械痛阈和脊髓背角5-HT含量比较差异无统计学意义(P＞0.05).光镜下P组大鼠术侧胫骨骨质严重破坏.结论 大鼠胫骨癌痛的形成与维持可能与脊髓背角5-HT水平升高有关.

Abstract：

Objective To investigate the change in 5-hydroxytryptomine (5-HT) content in spinal dorsal horn in a rat model of tibial bone cancer pain (BCP). Methods Sixty female SD rats weighing 160-180 g were randomly divided into 3 groups ( n = 20 each): control group (group C), sham operation group (group S) and BCP group. BCP was induced by intra-tibial inoculation of 10 μl Walker 256 breast cancer cell suspension in group BCP, while group S received intra-tibial inoculation of 10 μl D-hank solution. Paw withdrawal threshold to mechanical stimulation with yon Frey filaments (MWT) was measured 1 d before (baseline) and at 3, 5, 7, 9, 11,14, 16, 18 and 21 d after breast cancer cell inoculation. At 1 d before and 7, 14 and 21 d after breast cancer cell inoculation, four animals in each group were sacrificed after measurement of MWT. Their lumber segments of the spinal cord were removed for assay of 5-HT content in spinal dorsal horn using HPLC with fluorescence detector.HE staining was used to detect the damage to the tibia. Correlation between the 5-HT content and MWT was analyzed. Results MWT was significantly decreased after breast cancer cell inoculation in group BCP ( P ＜ 0.05).Microscopic examination showed serious bone destruction of tibia at the injection site in group BCP, while no bone destruction was found in groups C and S. 5-HT content in spinal dorsal horn was significantly higher in group BCP than in groups C and S (P ＜ 0.05). There was strong negative linear correlation between 5-HT content in spinal dorsal horn and MWT ( r = - 0.973, P ＜ 0.05 ). Conclusion The 5- HT content in spinal dorsal horn is significantly increased in rats with tibial BCP and is involved in the development of BCP.     

骨癌痛大鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ表达的变化

目的 探讨骨癌痛大鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ(PKCγ)表达的变化.方法 成年雌性Wistar大鼠48只,随机分为3组(n=16):对照组、假手术组和骨癌痛组.对照组不给予任何处理,骨癌痛组右侧胫骨上部骨髓腔内注射Walker 256乳腺癌细胞10μl制作骨癌痛模型;假手术组同部位注射热灭活的Walker 256乳腺癌细胞10μl.各组于术前1 d、术后3、6、9、12、15、18和21 d时测定术侧后爪机械痛阈,并于术前1 d、术后6、15和21 d时各处死4只大鼠,取L_(4～6)脊髓组织,采用免疫组化法测定脊髓背角PKCγ的表达水平.结果 与术前1 d时比较,骨癌痛组术后PKCγ表达上调,术后15 d时达最大值(P<0.05);与对照组和假手术组比较,骨癌痛组术后机械痛阈降低,PKCγ表达上调(P<0.05);PKCγ表达水平与机械痛阈呈负相关(r=-0.984,P<0.05).结论 骨癌痛大鼠脊髓背角PKCγ表达上调,该变化可能参与了骨癌痛的维持.     

骨癌痛大鼠脊髓CX3CR1表达的变化

目的 评价骨癌痛大鼠脊髓趋化因子Fractalkine受体1(CX3CRl)表达的变化.方法 雌性未交配SD大鼠650只,体重150～180 g,随机分为3组:对照组(n=10)、假手术组(n=10)和骨癌痛组(n=40).对照组不给予任何处理,假手术组、骨癌痛组分别在左胫骨上端注射Hank液和Walker 256乳腺癌细胞5 μl.对照组和假手术组于术前1 d、术后6、12、18 d时测定机械痛阈和双后肢负重;骨癌痛组于术前1 d、术后6、12、18 d时各取10只大鼠测定机械痛阈和双后肢负重.对照组和假手术组于术后18 d时,骨癌痛组于术后6、12、18 d时各处死10只大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定CX3CR1阳性细胞计数,采用Western blot法测定CX3CR1表达.结果 与对照组和假手术组比较,骨癌痛组术后各时点机械痛阈降低,双后肢负重差,CX3CR1阳性细胞计数升高,CX3CR1表达上调(P<0.01).结论 脊髓CX3CR1可能参与了大鼠骨癌痛的发生和维持.     

腺病毒介导白细胞介素24基因转染对胫骨癌痛大鼠的镇痛效应

目的 评价腺病毒介导白细胞介素24基因转染对胫骨癌痛大鼠的镇痛效应.方法 将已构建好的含IL-24基因的腺病毒(Ad-IL-24)和空白腺病毒载体(Ad-GFP)转入QBI-293A细胞,多次扩增后获得高效价病毒.雌性SD大鼠32只,体重180～200 g,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、PBS阴性对照组(PBS组)、Ad-GFP组和Ad-IL-24组.C组不做任何处理,其余3组均于左侧胫骨骨髓腔内接种Walker 256乳腺癌细胞建立胫骨癌痛模型,建模后第9天分别在术侧后肢局部皮下注射PBS70μl、Ad-GFP70 μl和Ad-IL-24 70 μl,隔天给药,共3次.于接种前(基础状态)、接种后3、6、8、10、12、14d时测定机械痛阚;于接种后14 d时,取术侧胫骨组织,观察肿瘤细胞生长情况和骨小梁破坏情况;取股动脉血样测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、β-内啡肽、干扰素γ(IFN-γ)的浓度.结果 C组胫骨骨髓腔内未见异常,PBS组和Ad-GFP组肿瘤向外生长,骨小梁和骨皮质破坏;Ad-IL-24组骨小梁破坏程度较轻;骨皮质完整.与C组和基础值比较,PBS组、Ad-GFP组和Ad-IL-24组其余各时点机械痛阈降低(P<0.05);与PBS组和Ad-GFP组比较,Ad-IL-24组机械痛阈升高,血浆IFN-γ、β-内啡肽、TNF-α的浓度升高,IL-6浓度降低(P<0.05);PBS组和Ad-GFP组间上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 腺病毒介导-IL-24基因转染对胫骨癌痛大鼠可产生一定程度的镇痛效应,其机制与其可抑制肿瘤细胞生长和调节细胞因子分泌有关.     

μ受体在抗神经生长因子抗体减轻大鼠骨癌痛中的作用

目的 评价μ受体在抗神经生长因子抗体(anti-NGF)减轻大鼠骨癌痛中的作用.方法 实验一健康雌性SD大鼠60只,体重200～220 g,随机分为4组(n=15):假手术组(S组)、假手术+anti-NGF组(SN组)、骨癌痛组(P组)和骨癌痛+anti-NGF组(PN组).P组和PN组于左侧胫骨上段骨髓腔内注射10μl Walker256乳腺癌细胞(1×105个)制备骨癌痛模型;S组和SN组于左侧胫骨上段注射PBS 10μl.于肿瘤细胞接种后13 d时,进行鞘内置管.鞘内置管成功后3 d,SN组和PN组鞘内注射anti-NGF 10μg(用生理盐水稀释至10μl),S组和P组鞘内注射生理盐水10μl,2次/d,连续5 d.于肿瘤细胞接种前、肿瘤细胞接种后13、16、18、21 d时测定自发缩足次数(NSF)、热缩足潜伏期(PWL)和机械性痛阈(PWT).肿瘤细胞接种后21 d时,处死大鼠,取L4.5段脊髓背角和背根神经节,测定μ受体及其mRNA的表达.实验二健康雌性SD大鼠30只,体重200～220 g,随机分为2组(n=15):骨癌痛+anti-NGF组(PN组)和骨癌痛+纳洛酮+anti-NGF组(PNN组).于左侧胫骨上段骨髓腔内注射10μlWalker256乳腺癌细胞(1×105个)制备骨癌痛模型.于肿瘤细胞接种后13 d时,进行鞘内置管.鞘内置管成功后3 d,PN组鞘内注射鞘内注入anti-NGF 10μg(生理盐水稀释至25μl);PNN组鞘内注射纳洛酮10μg(生理盐水稀释至25μl),0.5 h后,鞘内注射anti-NGF 10μg(生理盐水稀释至25 μl),2次/d,连续5 d.于肿瘤细胞接种前、肿瘤细胞接种后13、16、18、21 d时测定大鼠NSF、PWL和PWT.结果 实验一与S组比较,SN组NSF、PWL和PWT差异无统计学意义,SN组和PN组μ受体及其mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),P组和PN组瘤细胞接种后13～21 d时NSF增加,PWL缩短,PWT降低,P组μ受体及其mRNA表达下调(P＜0.05或0.01);与P组比较,PN组肿瘤细胞接种后18～21 d时NSF减少,PWL延长,PWT升高,μ受体及其mRNA表达上调(P＜0.05或0.01).实验二与PN组比较,PNN组肿瘤细胞接种后18～21 d时NSF增加,PWL缩短,PWT降低(P＜0.05或0.01).结论 anti-NGF减轻大鼠骨癌痛与μ受体的激活有关.     

脊髓IL-1β和TNF-α在胶质细胞活化诱发小鼠骨癌痛中的作用

目的 评价脊髓IL-1β和TNF-α在胶质细胞活化诱发小鼠骨癌痛中的作用.方法 雄性C3H/He小鼠360只,8～10周,体重18～22 g,随机分为6组(n=60):对照组(C组)、假手术组(S组)、骨癌痛+5μl人工脑脊液组(BCP组)、骨癌痛+0.5 nmol氟代柠檬酸组(FC组)、骨癌痛+16μg米诺四环素组(MI组)和骨癌痛+0.25 nmol FC+8 μg MI组(FC+MI组).S组左侧跟骨骨髓腔内仅注入10 μl α-MEN;BCP组、FC组、MI组和FC+MI组注入含有2×105个肿瘤细胞的10 μl α-MEN制备小鼠骨癌痛模型,各组于注射肿瘤细胞前即刻及注射后分别每天定时鞘内注射人工脑脊液、氟代柠檬酸、米诺四环素、氟代柠檬酸+米诺四环素1次,连续21 d.分别于注射肿瘤细胞前0.5 h(T0)、注射后3、5、7、10、14、21 d(T1-6)时采用von Frey细丝刺激足底测定机械痛阈,于T0,1,3,5,6时各组随机取12只小鼠处死取脊髓,采用ELISA法检测IL-1β和TNF-α的含量.结果 与T0时和C组比较,BCP组、FC组、MI组和Fc+MI组L1-6时机械痛阈降低,T1,3,5,6时IL-1β、T5,6时,TNF-α含量升高(P<0.05);与BCP组比较,MI组和FC+MI组T1-6时、FC组T4-6时机械痛阈升高,MI组和FC+MI组T1,3,5,6时、FC组T5,6时IL-1β含量降低,FC组、MI组和FC+MI组T5,6时TNF-α含量降低(P<0.05).结论 脊髓IL-lβ和TNF-α参与了胶质细胞活化诱发小鼠骨癌痛的过程.     

脊髓TNF-α在小鼠骨癌痛发生中的作用

目的 探讨脊髓TNF-α在小鼠骨癌痛发生中的作用.方法 雄性C3H/He小鼠72只,体重18～25 g,周龄4～6周,随机分为3组(n=24):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)和TNF-α拮抗剂依那西普组(E组).采用股骨远端骨髓腔注射肿瘤细胞的方法制备小鼠骨癌痛模型,S组注射等量不含肿瘤细胞的α-MEM,E组于注射肿瘤细胞前3 d、注射前即刻、注射后3、6 d时分别腹腔注射依那西普100μg(溶于0.5 ml生理盐水).分别于注射肿瘤细胞前、注射后3、5、7、10、14 d(T1～6)时测定热痛阈和机械痛阈.分别于T4～6时随机取8只小鼠测定痛阈后处死取脊髓,采用RT-PCR法检测TNF-αmRNA的表达水平.结果 与S组比较,BCP组T3～6时热痛阈和T5、6时机械痛阈降低,T4～6时TNF-αmRNA表达上调,E组T4～6时热痛阈降低,T5,6时机械痛阈降低、TNF-αmRNA表达上调(P<0.05);与BCP组比较,E组T4～6时热痛阈、T6时机械痛阚升高,T5,6时TNF-α mRNA表达下调(P<0.05).结论 脊髓TNF-α参与了小鼠骨癌痛的发生.