脊髓小胶质细胞在SD大鼠骨癌痛中的变化

目的 观察SD大鼠一侧胫骨注射同系Walker 256癌细胞后脊髓小胶质细胞的变化.方法 腹水传代Walker 256癌细胞种植于大鼠一侧胫骨建立骨癌痛模型,25只雌性SD大鼠,体质量150～180 g,随机均分为5组:对照组(N)、热杀死肿瘤细胞组(K)、骨癌痛早期组(C1,种植后第6天)、骨癌痛中期组(C2,种植后第12天)、骨癌痛晚期组(C3,种植后第18天).结果 骨癌痛大鼠在出现自发痛行为与机械性痛觉过敏的同时,两侧脊髓L4～L6 OX-42免疫组织化学染色显著增强,细胞明显增大,染色加深,与N组及K组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);OX-42染色增强以C1组最为显著,术后第6～18天逐步降低,C1组与C2或C3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 胫骨注射Walker 256癌细胞后激活脊髓小胶质细胞;小胶质细胞在两侧脊髓灰质后角均有激活,反映了本模型骨癌痛特征中"镜像痛"的产生机制;小胶质细胞在骨癌痛早期激活最为明显.     

脊髓小胶质细胞在SD大鼠骨癌痛中的变化

目的 观察SD大鼠一侧胫骨注射同系Walker 256癌细胞后脊髓小胶质细胞的变化.方法 腹水传代Walker 256癌细胞种植于大鼠一侧胫骨建立骨癌痛模型,25只雌性SD大鼠,体质量150～180 g,随机均分为5组:对照组(N)、热杀死肿瘤细胞组(K)、骨癌痛早期组(C1,种植后第6天)、骨癌痛中期组(C2,种植后第12天)、骨癌痛晚期组(C3,种植后第18天).结果 骨癌痛大鼠在出现自发痛行为与机械性痛觉过敏的同时,两侧脊髓L4～L6 OX-42免疫组织化学染色显著增强,细胞明显增大,染色加深,与N组及K组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);OX-42染色增强以C1组最为显著,术后第6～18天逐步降低,C1组与C2或C3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 胫骨注射Walker 256癌细胞后激活脊髓小胶质细胞;小胶质细胞在两侧脊髓灰质后角均有激活,反映了本模型骨癌痛特征中"镜像痛"的产生机制;小胶质细胞在骨癌痛早期激活最为明显.     

胫骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞的活化

目的 观察胫骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞的活化情况,探讨骨癌痛产生与维持的机制.方法 Walker 256乳腺癌细胞经大鼠体内腹水传代增殖,种植于大鼠左侧胫骨建立胫骨癌痛模型.雌性SD大鼠35只,体重150-180 g,随机分为3组:对照组(C组,n=5)、热杀死肿瘤细胞组(K组.n=15)、胫骨癌痛组(P组,n=15).C组选取5只大鼠,K组和P组于种植后第6天、第12天和第18天随机取5只大鼠测定左后足机械痛阈,随后处死大鼠,取左侧L4-6脊髓组织,采用免疫组化方法检测脊髓背角胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平.结果 与C组比较,K组大鼠左后足机械痛阈及左侧脊髓背角GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05).与K组比较,P组于种植癌细胞后第6天、第12天及第18天时大鼠左后足机械痛阈降低,左侧脊髓背角GFAP表达升高(P<0.01).与种植癌细胞后第6天比较,种植癌细胞后第12、18天时P组大鼠左后足机械痛阈下降,左侧脊髓背角GFAP表达升高(P<0.01),而P组种植癌细胞后第12天与第18天比较,大鼠左后足机械痛阈与脊髓背角GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 脊髓星形胶质细胞的活化与胫骨癌痛的产生与维持有关.     

趋化因子CCL2中和抗体在大鼠胫骨癌痛治疗中的作用

目的观察鞘内注射趋化因子CCL2中和抗体在胫骨癌痛大鼠治疗中的作用,并探讨可能的机制。方法 40只雌性SD大鼠随机均分为五组:假手术组(Ⅰ组)、假手术+CCL2中和抗体组(Ⅱ组)、骨癌痛组(Ⅲ组)、骨癌痛+controlIgG组(Ⅳ组)和骨癌痛+CCL2中和抗体组(Ⅴ组)。Walker256乳腺癌细胞注入胫骨骨髓腔建立大鼠胫骨癌痛模型。术后10～12d鞘内注射CCL2中和抗体或对照IgG(10μg/15μl)。测定术前1d,术后1、3、5、7、10、14、21d各组大鼠自由行走痛评分。另取30只大鼠,分组同前(n=6),术后14d取材,免疫荧光染色法测定脊髓背角星形胶质细胞标志物(GFAP)的平均光密度值(MOD)。结果与Ⅲ组相比,Ⅴ组大鼠术后10、14和21d自由行走痛评分明显降低,术后14dMOD值明显降低(P<0.01),Ⅳ组对应时点各值无明显变化。结论胫骨癌痛大鼠鞘内注射CCL2中和抗体能显著减轻自由行走痛并抑制脊髓星形胶质细胞的活化。CCL2可能通过激活脊髓星形胶质细胞参与大鼠胫骨癌痛维持的调控。     

脊髓趋化因子配体2在大鼠胫骨癌痛中的作用

目的 探讨脊髓趋化因子配体2(CCL2)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 健康成年雌性SD大鼠84只,体重160～ 180g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=28):正常对照组(C组)、假手术组(S组)和骨癌痛组(P组).P组胫骨骨髓腔内注射Walker-256乳腺癌细胞混悬液制备大鼠胫骨癌痛模型;S组胫骨骨髓腔内注射生理盐水;C组不作任何处理.于接种前ld、接种后l、3、7、10、14和21 d时,测定机械性刺激阈值.于接种前ld、接种后7、14和21'd时痛阈测定结束后,各组随机处死6只大鼠,取L4～6脊髓组织,采用ELISA法测定CCL2含量,反映其表达.接种后14 d时痛阈测定结束后,P组随机取4只大鼠,采用免疫荧光双标染色法观察脊髓背角CCL2与离子钙接头蛋白分子-1(小胶质细胞特异性标记物)、胶质纤维酸性蛋白(星形胶质细胞特异性标记物)和神经元特异核蛋白(神经元特异性标记物)的共表达情况.结果 与C组和S组相比,P组接种后7～21 d时机械性刺激痛阚下降,接种后7、14和21 d时脊髓CCL2表达上调(P＜0.05).骨癌痛大鼠脊髓背角CCL2在小胶质细胞和星形胶质细胞中存在表达,而在神经元中无表达.结论 脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞中释放的CCL2参与了大鼠胫骨癌痛的发生发展.     

骨癌痛大鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ表达的变化

目的 探讨骨癌痛大鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ(PKCγ)表达的变化.方法 成年雌性Wistar大鼠48只,随机分为3组(n=16):对照组、假手术组和骨癌痛组.对照组不给予任何处理,骨癌痛组右侧胫骨上部骨髓腔内注射Walker 256乳腺癌细胞10μl制作骨癌痛模型;假手术组同部位注射热灭活的Walker 256乳腺癌细胞10μl.各组于术前1 d、术后3、6、9、12、15、18和21 d时测定术侧后爪机械痛阈,并于术前1 d、术后6、15和21 d时各处死4只大鼠,取L_(4～6)脊髓组织,采用免疫组化法测定脊髓背角PKCγ的表达水平.结果 与术前1 d时比较,骨癌痛组术后PKCγ表达上调,术后15 d时达最大值(P<0.05);与对照组和假手术组比较,骨癌痛组术后机械痛阈降低,PKCγ表达上调(P<0.05);PKCγ表达水平与机械痛阈呈负相关(r=-0.984,P<0.05).结论 骨癌痛大鼠脊髓背角PKCγ表达上调,该变化可能参与了骨癌痛的维持.     

脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S在大鼠骨癌痛维持中的作用

目的 探讨脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S(CatS)在大鼠骨癌痛维持中的作用.方法 雌性未交配SD大鼠50只,4～6周龄,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将其分为5组(n=10):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、假手术+CatS抑制剂吗啉亮氨酸高苯丙氨酸乙烯基苯基砜(LHVS)组(S+L组)、骨癌痛+二甲基亚砜组(BCP+D组)和骨癌痛+LHVS组(BCP+L组).左侧胫骨骨髓腔内接种浓度为2×107/ml Walker256细胞5μl制备大鼠骨癌痛模型.分别于造模后10、11、12d时S+L组和BCP+L组鞘内注射LHVS 50 nmol/10l,1次/d,BCP+D组给予等容量二甲基亚砜.分别于造模前1d(基础状态)及造模后3、6、9、10、11、12 d(T0-6)测定机械缩爪反应阈(MWT),分别于鞘内给药前、鞘内给药后0.5、1.0、3.0、6.0、9.0、12.0、24.0 h时测定(MWT).处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定OX-42表达.结果 与S组比较,BCP组、BCP+D组和BCP+L组T2-6时MWT降低,脊髓背角OX-42表达上调(P＜0.01),S+L组MWT和脊髓背角OX-42表达差异无统计学意义(P＞0.05);与BCP组比较,BCP+L组T4-6时MWT升高,脊髓背角OX-42表达下调(P＜0.01),BCP+D组MWT和脊髓背角0X-42表达差异无统计学意义(P＞0.05).S+L组和BCP+D组鞘内给药后3.0、6.0、9.0h时MWT低于BCP+D组(P＜0.01).结论 脊髓背角小胶质细胞CatS激活参与了大鼠骨癌痛的维持.     

骨癌痛大鼠脊髓脑啡肽表达的变化

目的观察脊髓脑啡肽在大鼠骨癌痛中的表达变化。方法雌性未交配Wistar大鼠72只,体重160～180g,随机均分为两组:骨癌痛组（B组）和空白对照组（C组）。B组制成骨癌痛模型,C组为假手术组,B组和C组分别在左胫骨中上端注射Walker256乳腺癌细胞2×10⁵个或PBS液,体积为10μl。所有大鼠于术前1d、术后7、14、21d时测定机械痛阈和左后肢抬足时间。大鼠行影像学检测判定其胫骨骨质破坏情况。两组于术后7、14、21d各取12只大鼠分别处死,取左侧胫骨作HE染色,组织学鉴定肿瘤生长及骨质破坏的程度;取腰膨大L₄～L₆脊髓组织,采用逆转录-定量聚合酶链反应（RT-PCR）测定前脑啡肽原（PENK）mRNA表达情况和放射免疫法（ELISA）检测脊髓组织中亮氨酸脑啡肽（L-EK）的含量变化。结果与C组比较,B组术后7、14、21d机械痛阈进行性下降（P<0.01）,左后肢抬足时间进行性延长（P<0.01）。与C组比较,B组术后7d脊髓PENK mRNA和L-EK增加,14、21d脊髓PENK mRNA和L-EK逐渐减少（P<0.01）。结论脊髓脑啡肽的表达在大鼠骨癌痛中明显变化,推测脊髓脑啡肽在骨癌痛产生和维持中起重要作用。     

胫骨癌痛模型大鼠脊髓信号传导子与转录激活子STAT3的表达

目的观察胫骨癌痛模型大鼠脊髓STAT3的表达,探讨其与星形胶质细胞的关系。方法选择雌性SD大鼠20只,随机分为2组:模型组(n=10),为左侧胫骨上段骨髓腔注入3μlMADB-106大鼠乳腺癌细胞(4.8×109/L);对照组(n=10),为左侧胫骨上段骨髓腔注入3μlHank液。第14天,采用免疫组织化学方法和荧光双标法观察骨癌痛模型大鼠患侧腰段脊髓STAT3和GFAP免疫反应阳性产物的变化和关系。结果左侧胫骨上段骨髓腔注入癌细胞后第14天,骨癌痛模型大鼠患侧脊髓STAT3、GFAP免疫反应阳性产物表达明显增加(P<0.05);荧光双标免疫组化显示患侧脊髓STAT3与星形胶质细胞标志物GFAP有共表达。结论胫骨癌痛敏的产生和维持与脊髓STAT3的表达上调相关,脊髓星形胶质细胞可能通过JAK/STAT3信号通路参与骨癌痛的发生和发展。     

CX3C趋化因子受体1对骨癌痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角μ受体和辣椒素受体表达的影响

目的 评价CX3C趋化因子受体1(CX3 CR1)对骨癌痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角μ受体和辣椒素受体(TRPVl)表达的影响.方法 清洁级成年雌性SD大鼠,体重180-200 g,月龄3月,经L3.4棘突间隙行鞘内置管,取鞘内置管成功的大鼠48只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=12):对照组(A组)、鞘内注射生理盐水组(AM组)、鞘内注射IgG组(GM组)和鞘内注射CX3CR1中和抗体组(BM组).A组仪手术暴露右侧胫骨七段;其余3组右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker256 乳腺癌细胞10μl(400个/ μl)建立骨癌痛模型,术后第10天开始鞘内注射吗啡20tg/kg,2次/d,连续7d,建立骨癌痛-吗啡耐受模型,注射吗啡第8天分别经鞘内注射相应溶液10μl,1次/d,连续3d.分别于接种Walker 256乳腺癌细胞前(T0)、接种后第3、6、9天、注射吗啡第3、7天、鞘内注射抗体第3天(T1-T6)时测定机械缩足阈值(MWT)和机械缩足持续时间(MWD),于T6时测定痛阈后处死大鼠,取脊髓L4-6节段组织,采用Western blot法检测脊髓背角小胶质细胞CX3 CR1蛋白的表达,采用免疫组化法检测神经元μ受体和TRPV1的表达.结果 与A组比较,BM组T2.3.5时、AM组和GM组T2,3,5,6时MWT下降,MWD升高,T6时CX3CR1蛋白和TRPV1表达上调,μ受体表达下调(P＜0.01);与AM组和GM组比较,BM组T6时MWT上升,MWD降低,CX3CR1蛋白和TRPV1表达下调,μ受体表达上调(P＜0.01).AM组和GM组上述指标差异无统计学意义(p＞0.05).结论 CX3CR1可通过下调大鼠脊髓背角μ受体和上调TRPVI参与骨癌痛大鼠吗啡耐受的形成.     

骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化

目的 评价骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化.方法 雌性SD大鼠,体重180～220 g,采用MADB-106鼠源性乳腺癌细胞注入大鼠左侧胫骨建立骨癌痛模型.14d后,选择一般状况良好、体重无减轻、进食好、活动正常、热痛阈<18.5 s、机械痛阈<27.8 g的大鼠16只,随机分为2组:对照组(n=7)注射等容量生理盐水;吗啡耐受组(n=9)皮下注射吗啡3次/d,连续5 d,每天单次注射剂量按10、20、40、50、60 mg/kg递增.于造模前和造模后10 d开始隔日1次测定热痛阈和机械痛阈;造模后19 d皮下注射吗啡3 mg/ks,30 min后测定热痛阈和机械痛阈.随后处死动物,取腰段脊髓,采用RT-PCR法测定脊髓白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达;采用ELISA法测定脊髓IL-1β和TNF-α的含量;采用免疫组化法测定脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力.结果 与造模前比较.对照组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈降低(P<0.05);与对照组比较,吗啡耐受组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈升高,造模后19 d时热痛阈和机械痛阈降低,左侧脊髓IL-1β mRNA和TNF-αmRNA表达升高,脊髓IL-1β和TNF-α的含量增加,脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力增强(P<0.05).结论 骨癌痛大鼠连续递增剂量腹腔注射吗啡可引起脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞进一步活化,IL-1β和TNF-α释放增加,从而发生吗啡耐受.     

米诺环素对骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3C趋化因子受体1mRNA表达的影响

目的 探讨米诺环素对骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)mRNA表达的影响.方法 清洁级雌性SD大鼠,体重180～200 g,月龄3月,经L3,4间隙行鞘内置管,取鞘内置管成功的大鼠60只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组:正常对照组(C组,n=10)、米诺环素对照组(M组,n=10)、骨癌痛-吗啡耐受组(BM组,n=20)和米诺环素治疗组(BM+M组,n=20).C组不作任何处理;BM组和BM+M组右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker256细胞10 μl(400个/μl)制备骨癌痛模型,术后第10天开始鞘内注射吗啡20 μg/kg(100 μl),2次/d,连续7 d,制备骨癌痛-吗啡耐受模型,注射吗啡第8天分别经鞘内注射20μl生理盐水或米诺环素0.25 mg/kg(20 μl),1次/d,连续3 d;M组不行手术,于BM组注射吗啡第8天时鞘内注射米诺环素0.25 mg/kg,1次/d,连续3 d.于术前、术后3、6、9 d、鞘内注射吗啡4、7、10、12 d(T0～7)时测定机械缩足阈值(MWT)和机械缩足持续时间(MWD).C组和M组于T7时,BM组和BM+M组于T6,7时取L4～6脊髓节段,采用免疫组化法检测小胶质细胞标记物——OX-42表达,采用实时PCR法检测CX3CR1 mRNA表达水平.结果 与C组和M组比较,BM组T2,3.5～7时、BM+M组T2,3,5,时MWT降低,MWD延长,CX3CR1 mRNA和OX-42表达上调(P＜0.01).与BM组比较,BM+M组L6,7时MWT升高,MWD缩短,CX3CR1 mRNA和OX-42表达下调(P＜0.01).C组和M组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 米诺环素可抑制骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3CR1 mRNA的表达,可能是其拮抗吗啡耐受的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effect of minocycline on spinal CX3 C chemokine receptor 1(CX3 CR1)mRNA expression in morphine-tolerant rats with bone cancer pain.Methods Sixty female SD rats weighing 180-200 g in which intrathecal(IT)catheter was successfully placed at L3,4 interspace without complications were randomly divided into 4 groups:control group(group C,n=10);minocycline group(group M,n=10);bone cancer pain + morphine tolerance group(group BM,n=20)and bone cancer pain+morphine tolerance+ minocycline group(group BM+M,n=20).Bone cancer pain was induced by injection of breast cancer cells(Walker256)10μl(400/μl)into upper segment of bone marrow of right tibia.Morphine tolerance was induced by IT injection of morphine 20 μg/kg twice a day for 7 consecutive days starting from the 10th day after intratibia injection in BM and BM + M groups. Minocycline 0.25 mg/kg was injected IT once a day for 3 consecutive days in group M and after the model of bone cancer pain and morphine tolerance was established in group BM + M. Mechanical withdrawal threshold (MWT) and mechanical withdrawal duration (MWD) were determined before (T0, baseline) and at3, 6 and 9 days after operation (T1-3) and at 4, 7, 10 and 12 days after IT morphine injection was started (T4-7).The animals were sacrificed at T6 and T7 respectively in BM and BM + M groups and at T7 in C and M groups.The lumbar segment of the spinal cord (L4-6) was removed for determination of CX3 CR1 mRNA (by RT-PCR) and OX-42 expression (by immuno-histochemistry) .Results There was no significant difference in MWT and MWD at all time points between group C and group M. MWT was significantly decreased while MWD prolonged in morphine tolerant rats with cancer pain in group BM as compared with C and M groups. The hyperalgesia was significantly attenuated by IT minocycline in group BM + M. Spinal CX3 CR1 mRNA and OX-42 expression was significantly increased in group BM than in C and M groups. IT minocycline attenuated the increase in spinal CX3 CR, mRNA and OX-42 expression induced by bone cancer. Conclusion IT minocycline can inhibit spinal CX3CR1 mRNA expression, thereby antagonizing morphine tolerance in morphine-tolerant rats with bone cancer pain.     

骨癌痛大鼠脊髓背角T细胞死亡相关基因8表达的变化

目的 探讨骨癌痛大鼠脊髓背角T细胞死亡相关基因8(TDAG8)表达的变化.方法 雌性未交配SD大鼠224只,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组:正常对照组(Ⅰ组,n＝64)、生理盐水组(Ⅱ组,n＝64)和骨癌痛组(Ⅲ组,n＝96).采用左侧胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌肿瘤细胞的方法建立骨癌痛模型.Ⅲ组于接种前1天(基础状态)及接种后第1、3、6、9、12、15、18天、Ⅰ组和Ⅱ组于相应时点取8只大鼠,测定左后肢机械缩足阈值(MWT).Ⅲ组于接种前1天(基础状态)及接种后第6、9、12、15、18天各处死16只,Ⅰ组和Ⅱ组相应于接种后第18天处死16只,取L4～6脊髓,免疫组化染色法测定脊髓背角TDAG8阳性细胞计数,实时定量PCR法检测脊髓TDAG8 mRNA的表达.结果 与Ⅰ组及基础值相比,Ⅲ组接种后第6～ 18天MWT降低,脊髓背角TD-AG8阳性细胞计数升高,脊髓TDAG8 mRNA表达上调(P<0.01),Ⅱ组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨癌痛大鼠脊髓TDAG8表达上调,该变化可能是骨癌痛形成的机制.     

大鼠骨癌痛-慢性吗啡耐受模型的建立

目的 建立大鼠骨癌痛-慢性吗啡耐受模型.方法 鞘内置管成功的成年雌性SD大鼠36只,体重180～200 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、慢性吗啡耐受组(M组)和骨癌痛+慢性吗啡耐受组(BM组).BM组右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker256癌细胞10 μl(4×102个细胞/μl)制备骨癌痛模型,M组注射热灭活的Walker256癌细胞10μl,接种后10 d开始鞘内注射吗啡20μg/kg,2次/d,连续9 d.S组仅暴露右侧胫骨上段.分别于接种Walker256癌细胞前、接种后1、3、6、9 d、给予吗啡1、3、5、7、9 d时测定机械缩足阈值(MWT)和机械缩足持续时间(MWD),并于接种后9 d时行放射学检查,进行骨质破坏评分.最后1次测定痛周后,对右侧足底进行触摸刺激,停止刺激后3 h时取脊髓L4-6节段,测定脊髓背角Foa表达水平.结果 与S组比较,M组MWT降低,MWD延长,脊髓背角Fos表达上调(P＜0.05或0.01);与M组比较,BM组MWT降低,骨质破坏评分升高,MWD延长,脊髓背角Fos表达上调(P＜0.05或0.01).结论 成功制备了大鼠骨癌痛-慢性吗啡耐受模型.

Abstract：

Objective To establish a rat model of bone cancer pain-chronic morphine tolerance. Methods Thirty-six adult female Sprague-Dawley rats weighing 180-200 g in which intrathecal catheters were successfully placed without complications were randomly divided into 3 groups ( n = 12 each) :group sham operation (group S),group chronic morphine tolerance (group M) and group bone cancer pain + chronic morphine tolerance (group BM). Bone cancer pain was induced by intra-tibia inoculation of Walker256 mammary gland carcinoma cells (4 ×102 cells/μl) in group BM, while in group M heat-inactivated Walker256 mammary gland carcinoma cells were given instead, and then 10 days later, intrathecal morphine 20 μg,/kg was administered twice a day for 9 consecutive days. The mechanical paw withdrawal threshold (MWT) and mechanical paw withdrawal duration (MWD) were measured before inoculation, at day 1, 3, 6 and 9 after inoculation, and at day 1, 3, 5, 7 and 9 of morphine administration. The degree of bone destruction was assessed by radiological analysis at day 9 after inoculation. After the last measurement of pain threshold, the rats were given innoxious touch-stimulus. The rats were sacrificed 3 h after stopping the stimulus, and L4-6 segment of the spinal cord was isolated to determine the expression of Fos protein in the spinal dorsal horn. Results Compared with group S, MWT was significantly decreased, MWD was significantly prolonged and the expression of Fos protein was up-regulated in group M ( P ＜ 0.05 or 0.01 ). MWT was significantly decreased, MWD was significantly prolonged, bone destruction scores were significantly increased,and the expression of Fos protein was up-regulated in group BM compared with group M ( P ＜ 0.05 or 0.01 ). Conclusion A rat model of bone cancer pain-chronic morphine tolerance is successfully established.     

脊髓背角P2Y1受体在大鼠骨癌痛形成中的作用

目的 评价脊髓背角P2Y1受体在大鼠骨癌痛形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雌性SD大鼠90只,体重150～180 g,随机分为5组(n=18):假手术组(Ⅰ组)、骨癌痛组(Ⅱ组)、假手术+P2Y1受体特异性拮抗剂MRS 2179组(Ⅲ组)、骨癌痛+生理盐水组(Ⅳ组)和骨癌痛+MRS2179组(Ⅴ组).采用胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌细胞的方法制备骨癌痛模型.Ⅲ组和Ⅴ组术后第7～9天鞘内注射MRS2179 100 pmol/10μl,1次/d,Ⅳ组注射等体积生理盐水.于术前及术后第3、7、9、12、15、18天给药后测定机械痛阈,于术后第9天测定机械痛阈后处死6只大鼠,取L4～6脊髓背角,测定P2Y1受体和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 与Ⅰ组和Ⅲ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组术后第7～18天机械痛阈降低,P2Y1受体和p-ERK1/2表达上调(P＜0.01);与Ⅱ组和Ⅳ组比较,Ⅴ组术后第9～18天机械痛阈升高,P2Y1受体和p-ERK1/2表达下调(P＜0.01).结论 脊髓背角P2Y1受体参与了大鼠骨癌痛的形成,可能与ERK1/2的激活有关.     

骨癌痛大鼠脊髓NF-κB、IL-6和TNF-α表达的变化

目的 评价骨癌痛大鼠脊髓NF-κB、IL-6和TNF-α表达的变化.方法 雌性健康SD大鼠72只,体重150～180 g,随机分为3组(n=24):对照组(C组)、假手术组(S组)和骨癌痛组(BP组).BP组于大鼠左侧胫骨干骺端骨髓腔内注射5μl Walker 256(1×105)乳腺癌细胞制备骨癌痛模型,S组左胫骨上端注射Hank液5μl.分别于肿瘤细胞接种前、接种后2、4、6、9、12、14、16、18和21 d时测定机械阈值.分别于肿瘤细胞接种后6、12和18 d时,处死3只大鼠,取L4-6脊髓组织,采用RT-PCR法测定NF-κB p65 mRNA、IL-6 mRNA和TNF-α mRNA的表达;另处死3只大鼠,取L4-6脊髓组织,计数NF-κBp65阳性细胞,采用免疫组化法测定NF-κB p65表达.结果 与C组和S组比较,BP组机械痛阈降低,脊髓NF-κB p65及其mRNA、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA的表达上调,NF-κB p65阳性细胞计数增加(P＜0.05或0.01);C组和S组间上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠胫骨骨髓腔内注射肿瘤细胞通过激活脊髓NF-κB,导致炎性细胞因子IL-6和TNF-α大量释放,从而诱发骨癌痛.