迟缓爱德华氏菌等温扩增快速检测方法的建立

迟缓爱德华氏菌是一种危害淡水及海水水产动物的致病菌,可感染包括鳗鲡、牙鲆、罗非鱼、鲤鱼等在内的多种水产鱼类,极易给水产养殖业造成严重的经济损失.现有的迟缓爱德华氏菌检测方法须借助实验室条件才能完成,检测过程较为复杂.建立一种简便的、无需依赖实验室条件即可快速检测迟缓爱德华氏菌的方法,对水产养殖业预警和该病菌引发病害的防治具有重要指导意义和实用价值.针对迟缓爱德华氏菌的基因组设计了特异性引物和探针,建立了重组酶聚合酶扩增与侧向流试纸条(RPA-LFS)相结合的检测方法,评价了该方法的特异性和灵敏度,并使用人工模拟样本进行了方法验证.结果显示,RPA-LFS法在37℃孵育20 min即可完成核酸扩增步骤,整体检测时间不超过40 min,与参试的嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、灿烂弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌这8种水产和食品中常见的致病菌不发生交叉反应,对迟缓爱德华氏菌培养物的检测限为单次反应1个菌落形成单位(CFU),在富集培养后,可检出1×101 CFU/g人工污染样本中的迟缓爱德华氏菌.该方法具有良好的特异性和灵敏度,不依赖精密仪器,是一种快速、便捷的迟缓爱德华氏菌检测方法,具有良好的应用前景.     

一种肿瘤标志物的高灵敏电化学检测方法研究

以肿瘤标志物IgG蛋白,构建了一种利用新型电化学探针采用夹心捕获和探针标记的方法对肿瘤标志物IgG蛋白进行检测。通过池底部修饰的抗体将肿瘤标志物IgG蛋白捕获并固定到检测池中,利用DNA适体修饰的DNA纳米网络探针对IgG蛋白进行识别和标记,再将DNA纳米网络探针上负载的大量CdTe量子点酸溶并利用阳极溶出伏安法检测溶解的Cd离子浓度,以此间接检测肿瘤标志物IgG蛋白。DNA适体起到特异性识别肿瘤标志物IgG蛋白的作用,而DNA纳米网络起到负载大量信号物质CdTe量子点的信号放大作用。肿瘤标志物的高灵敏的电化学检测方法的构建对于肿瘤疾病的早期诊断有着重要的意义,可以为临床医疗争取极为宝贵的时间。     

水产品中致病性弧菌的分离与鉴定

采用传统分析法和仪器法对438份水产品进行了分离与鉴定。结果检出7种致病性弧菌186株，检出率依次为副溶血性弧菌46．2％，溶藻弧菌28．5％，创伤弧菌11．3％，拟态弧菌5．9％，河弧菌4．8％，费尼斯弧菌2．2％和海鱼弧菌1．1％，未检出霍乱弧菌。不同水产品及其不同部位致病性弧菌的污染情况不同，而且传统分析法与仪器法(AMS)具有不同的检出率。     

溶藻弧菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法的建立

采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)检测体系,对溶藻弧菌进行检测。采用溶藻弧菌的hsp60基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测溶藻弧菌的NASBA检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明:所建立起的NASBA检测方法,灵敏度为6.9×102 cfu.mL-1,高于普通PCR方法。溶藻弧菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法具有较高灵敏度和和良好特异性,并且对仪器要求更低,用普通恒温设备即可进行反应,具有广阔的推广前景。     

花生制品中金黄色葡萄球菌SYBR Green qPCR快检方法的评价研究

金黄色葡萄球菌是花生及其制品中常见的一种食源性致病菌,针对金黄色葡萄球菌的快速检测方法对实现花生及其制品中的食品安全防控有重要意义.根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)设计了3对特异性引物,同时优化了退火温度,成功建立了一种特异性引物的SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测方法,进一步对该方法的特异性、重现性及灵敏度进行了验证.以8种模拟污染花生加工产品为实验对象,对该方法与荧光定量PCR试剂盒-探针法及商品化Baird-Parker干粉培养基法进行了评价研究.结果表明,建立的SYBR Green qPCR快速检测方法特异性和重现性良好,最低检测限为8.99 copies/μL,其灵敏度比荧光定量PCR试剂盒-探针法高2个数量级. SYBR Green qPCR快速检测方法具有成本低、检测快速、特异性好、灵敏度高的优点,可用于花生及其制品中金黄色葡萄球菌的快速检测,也可为防控其他食品中的金黄色葡萄球菌污染提供参考.     

应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测副溶血性弧菌

以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·mL-1,与普通PCR方法相当。副溶血性弧菌的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。     

PCR-核酸薄膜层析法检测创伤弧菌

采用自行建立和优化的PCR-核酸薄膜层析检测体系,对创伤弧菌(Vibriovulnificus)进行检测。采用创伤弧菌的vvhA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明,所建立起的检测法灵敏度为3.6×102 cfu·mL-1,比PCR-琼脂糖凝胶电泳检测方法高一个数量级。创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测方法具有较高灵敏度和良好特异性,操作简单,检测速度快,同时又保护了操作人员的身体健康,具有广阔的推广前景。     

水产品中致病性弧菌的分离与鉴定

采用传统分析法和仪器法对438份水产品进行了分离与鉴定。结果检出7种致病性弧菌186株,检出率依次为副溶血性弧菌46.2%,溶藻弧菌28.5%,创伤弧菌11.3%,拟态弧菌5.9%,河弧菌4.8%,费尼斯弧菌2.2%和海鱼弧菌1.1%,未检出霍乱弧菌。不同水产品及其不同部位致病性弧菌的污染情况不同,而且传统分析法与仪器法(AMS)具有不同的检出率。     

变性泡介导的链交换扩增反应对副溶血性弧菌检测的研究

以副溶血性弧菌为研究对象,根据其特异性基因GyrB的保守序列,设计了一对扩增引物,利用SEA反应对该基因进行了特异性扩增。研究结果表明:SEA反应对副溶血性弧菌的检测,检测限可达到0.1fmol、特异性高、抗干扰能力强。     

褐藻寡糖对3种水产致病菌抗菌活性研究

采用氧化法制备了褐藻寡糖,研究了褐藻寡糖对3种常见水产致病菌的抗菌活性.结果表明,褐藻寡糖对嗜水气单胞菌、白色念珠菌有较强的抗菌活性,且抗菌活性随寡糖浓度的增大而增强.褐藻寡糖对鳗弧菌在指数期前期几乎没有抗菌活性,但指数期后期表现出较强的抗菌活性,且随着寡糖浓度增大抗菌活性增强.     

混合酵母菌处理高浓度味精废水的研究

为解决味精生产废水的处理问题,通过富集培养并利用选择性培养基分离到3种能适应味精生产过程中离交尾液(COD为29 860 mg/L,NH4+-N质量浓度为14 620 mg/L)的酵母菌,经初步鉴定分别属于胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、易变假丝酵母(Candida versa tilis)和异常汉逊酵母(Hansenula anom ala).对3种酵母菌混合处理味精生产废水的条件进行了研究,结果表明,最佳处理条件为:pH值4.0、温度28℃、时间20 h、接种量10%.同时,二倍稀释废水中COD去除率可达到82.9%,结果优于目前的处理方法.     

盐生卤虫BADH基因的克隆及序列分析

实验以盐生动物卤虫（Artemia）为材料,采用酚-氯仿法提取总DNA,以已报道的BADH基因的保守序列设计引物,通过PCR技术,从卤虫的基因组DNA中分离得到了1个BADH基因片段,经测序,得到一段868 bp的核苷酸序列,输入Gen-Bank进行BLAST同源性比较,发现所得片段与植物中的籽粒苋的BADH4基因中的一段序列有96%的同源性,此项研究为更深入地研究抗盐动物的BADH基因奠定了良好的基础.     

影响RNA芯片探针杂交效率的因素分析

RNA芯片作为研究ncRNA的主要技术之一,已受到广泛关注。然而因RNA芯片中靶序列的单链特征,使得RNA芯片的探针设计比DNA复杂。本研究对加强型绿色荧光蛋白（EGFP）RNA序列进行覆瓦式探针设计,制作了RNA原位合成芯片,研究探针／靶序列杂交双链△G和Tm、靶序列二级结构以及探针的末端碱基对RNA芯片杂交信号强度的影响。结果表明,探针／靶序列杂交双链△G和Tm相同的探针间的杂交信号存在较大差异,探针／靶序列杂交双链△G和,Tm与RNA芯片杂交信号之间未发现明显的规律性;靶序列二级结构的探针PT-sc参数与芯片杂交信号强度间呈较好的线性关系;探针5’末端碱基组成对芯片杂交信号强度也有影响,5’末端碱基为6／C的探针杂交信号总体上高于其邻近的5’末端碱基为A／T的探针的杂交信号,为RNA芯片的探针筛选提供一定的理论基础。     

硫酸酸化膨润土负载Au及Au—Ce催化剂的制备及其催化性能

采用硫酸对膨润土（Ben）进行改性处理,通过沉积-沉淀法（DP）制备活化后膨润土负载的金催化剂,以CO氧化作为探针反应对催化剂的催化性能进行研究。采用CTAB修饰载体表面并添加ce作为助剂制备Au—ce催化剂,并用BET、XRD、ICP和TPD等对催化剂进行了表征。结果表明：经过简单酸处理后的膨润土比表面积和孔体积有了大幅度的提高,质量分数30％的硫酸对膨润土的改性效果更好。以硫酸酸化膨润土作为载体,Au—ce复合催化剂相比Au催化剂性能有较大提高。     

真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取

根据已知的人参皂苷糖苷酶(GluGF)的N端氨基酸序列设计简并引物,从Absidia Sp.R84g菌株的总RNA出发,应用RACE技术,快速扩增测序得到cDNA3′末端与cDNA5′末端的未知序列,利用扩增测序所得到的cDNA5′末端和cDNA3′末端的序列设计引物,进行二次RT-PCR扩增并测序得到GluGF基因的...     

J61321(Alteromonas aurantia)菌株产铁载体培养条件的研究

在摇瓶水平上采用单次单因子方法对铁载体高产菌株J61321(Alteromonas au- rantia)的生长和产铁载体的发酵条件进行优化,考察了碳源、氮源、培养时间、培养温度、初始pH值、摇床转速等因素的影响,获得菌株J61321产铁载体的最佳发酵条件:酵母粉0．1%(W/V),蛋白胨0．2%(W/V),FePO_40．01g·L~(-1),温度28℃,转速180 r·min~(-1), pH7．5,铁载体在菌株J61321培养22 h后达到最大产量。在最适培养条件下测定了出发菌株A18和突变株J61321不同培养时间的菌液OD_(600nm)值、铁载体产量和抑菌活性,结果显示二者的生长量差距不大(p＞0．05),但是铁载体产量和抑菌活性之间存在显著性差异(p＜0．05)。     

长白山湿地细菌群落结构分析及优势菌株鉴定

对长白山北坡和西坡不同湿地的土壤细菌的群落结构及优势菌株进行了总体研究.采用PCR-DGGE分子生物学技术,对湿地土壤样品中总DNA的16S rDNA的V3区进行PCR扩增,通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)对扩增产物进行分离.回收了26个清晰的条带,对其中19个特征性条带进行了测序,除了条带12、13、16为可培养的微生物外,其他16个条带都是不可培养微生物.通过传统培养法,利用MIDI微生物鉴定系统,对8种可培养的最优势菌株进行了分析,各菌种分别为Bacillus sp., Bacillus licheniformis, Virgibacillus pantothenticus, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Paenibacillus alginolyticus, 优势菌株间的相似性水平较低.     

电涡流传感器探头输出阻抗的改进变压器模型

针对电涡流传感器的探头线圈与被测材料间电磁耦合的输出阻抗的定量计算问题,在DARKO V提出的变压器模型的基础上,通过将探头线圈与被测材料中涡流分布区域全部进行轴向与径向的划分,提出了以单元涡流与单元线圈为基础的改进变压器模型.通过求解包括所有单元涡流和单元线圈的电压方程组,得到探头线圈的输出阻抗.通过将改进前后变压器模型的计算结果与实测输出阻抗值相比较,验证了改进变压器模型的有效性.结果表明,改进变压器模型的计算值与实际吻合度高,能够定量分析参数变化对线圈输出阻抗的影响,对于电涡流传感器的设计与应用,具有一定的参考价值.     

几种催化剂对SO_2氧化性能的对比实验研究

选择氮掺杂纳米TiO2作为光催化剂,CuO,Al2O3,V2O5作为普通催化剂,对比研究提高SO3生产效益的实验条件。结果表明:普通催化剂对SO2的吸附平衡时间和催化氧化生成SO3的反应时间均为20 min;有氧气存在时普通催化剂对SO2的吸附效果为V2O5>Al2O3>CuO;温度对V2O5吸附SO2效果影响较大,实验条件下440℃为最佳温度;氮掺杂纳米TiO2光催化剂最佳制备条件为500℃焙烧3 h,且采用普通荧光灯照射就会产生催化效果;有氧气存在时增加SO2的体积流量,提高吸收液的pH值,增加光照强度可以提高SO3生成量。实验结果为燃煤、石油脱硫,纳米材料的研究和硫酸生产等化工行业选择催化剂提供借鉴和参考。