玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究（网络首发、推荐阅读）

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮（ZEN）快速定量检测试纸条。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核。结果表明：ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1~5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在93.45%~112.20%之间,对于同一个样品5次重复测定的变异系数小于15%。ZEN快速定量检测试纸条具有灵敏度高、反应时间短、准确定量、稳定性好等技术特点,适用于谷物及制品中玉米赤霉烯酮的快速定量检测。     

T-2毒素快速定量检测试纸条的研究

为研制一种快速定量检测玉米中T-2毒素含量的胶体金试纸条,对T-2毒素单克隆抗体进行标记并对胶体金试纸条性能进行研究。用胶体金标记T-2毒素单克隆抗体,通过测定加入不同量碳酸钾后吸光度值的变化,确定标记的最佳pH值,通过与抗原进行正交试验确定最佳组合条件,应用胶体金定量读数仪通过检测线和对照线的对比,检测试纸条的性能。结果表明,单克隆抗体标记的最佳pH值为8.5,最佳标记浓度为20μg/mL,抗原的包被浓度为0.5mg/mL,羊抗鼠IgG的包被浓度为1.0mg/mL,试纸条检测T-2毒素标准品的检测限为5μg/kg。T-2毒素胶体金快速定量检测试纸条检测方法可得出具体数据,与常见真菌毒素无交叉反应,回收率在77%~117.6%之间,批内和批间重复性检测变异系数小于10%,玉米中T-2毒素的检测结果与高效液相法检测结果一致。T-2毒素胶体金快速定量检测试纸条可用于玉米中T-2毒素含量的快速定量检测。     

胶体金免疫层析法定量检测烟叶中霜霉威残留

【背景和目的】利用胶体金免疫层析技术研制霜霉威定量检测试纸条,并探究其在烟叶样品中的应用。【方法】将霜霉威单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制备金标抗体,优化试纸条反应材料,构建霜霉威免疫层析定量试纸条,验证该试纸条的检出限、定量限、准确性和特异性。【结果】（1）所研制的霜霉威定量试纸条的检测范围为1.25～20 mg/kg,检出限和定量限分别为1.187 mg/kg和3.147 mg/kg;加标回收率84.7%～116.7%,相对标准偏差5.3%～10.9%。（2）可特异性识别霜霉威,对烟草中常用杀菌剂无交叉反应。（3）试纸条检测结果与高效液相色谱-串联质谱法检测结果的相对误差在4.3%～20.1%,R2=0.9898。【结论】该试纸条具有操作方便、检测时间短、准确性高、特异性强的优点,可作为霜霉威残留现场检测的有效手段。     

T-2毒素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,研制出一种快速检测T-2毒素的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备20 nm胶体金,标记抗T-2毒素多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗兔二抗分别结合于硝酸纤维素膜上,经过试纸条层析条件优化,依次将样本垫、金标结合释放垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条。测试结果表明T-2毒素快速检测试纸条的灵敏度为50μg/L,检测时间为10 min,批内和批间重复性好,保存期为3个月。使用简单方便,非常适合现场快速检测T-2毒素。     

胶体金免疫层析法快速检测赭曲霉毒素A研究

该研究应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测食品和饲料中赭曲霉毒素A方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记抗赭曲霉毒素A单克隆抗体,标记胶体金抗体喷涂于玻璃纤维上,赭曲霉毒素A偶联抗原OTA-OVA和二抗兔抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维膜上作为检测限和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装成试纸条并装卡。测试结果表明,赭曲霉毒素A快速检测试纸条灵敏度为5 ng/mL,检测时间为10 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。该法简单方便,非常适于现场快速检测赭曲霉毒素A。     

基于预孵育处理的牛奶中四环素增敏型胶体金检测

在传统胶体金检测方法的基础上,采用预孵育反应模式,在均匀的液相中进行胶体金标记抗体与待测物的反应,提高抗原抗体间免疫识别反应的效率。将反应后的溶液滴加至试纸条上进行结果判读。结果表明:通过简单的反应模式改变,预孵育反应后再滴加至试纸条检测,四环素检测灵敏度提高了5倍,达1μg/L。说明改变传统胶体金试纸条反应的模式,从直接加样改为预孵育再加样,可以提高胶体金试纸条方法学的检测灵敏度。     

胶体金免疫层析技术快速检测谷物中3种真菌毒素的研究

目的应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和呕吐毒素(DON)的三联检测卡。方法优化胶体金溶液p H值、金标抗体量及抗原包被量制备3种胶体金试纸条,将试纸条组装成检测卡,研究该卡的检测限、准确度、特异性和稳定性。结果 AFB_1、ZEN和DON 3种试纸条的胶体金溶液最适p H值分别为7.5、7.5和7.0,金标抗体量分别为4.2、7.2和9.6μg/ml,抗原包被量分别为1.0、1.4和0.8 mg/ml。检测卡的检测结果与仪器检测结果基本一致,重复性较好,与结构类似物及其他霉菌毒素无交叉反应,在室温条件下可以保存12个月。结论该三联检测卡操作简便、快速、准确、稳定,且能同时检测3种真菌毒素,在谷物的现场检测中有较好的应用前景。     

呋喃唑酮代谢物单克隆抗体和胶体金免疫层析试纸条的研制

本研究旨在建立一种快速检测呋喃唑酮代谢物残留的方法。试验用呋喃唑酮代谢物的衍生物（CPAOZ）与牛血清白蛋白（BSA）的偶联物免疫小鼠,利用单克隆抗体技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA和间接竞争ELISA法对阳性克隆进行筛选。单克隆细胞株诱生腹水后,经纯化即为单克隆抗体,用于胶体金标记,制备呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析试纸条。融合后得到2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,其中4G3纯化后的抗体效价达到1:100万,对CPAOZ的50%抑制质量浓度（IC50）为1.7 μg/L,亲和常数Ka=1.6×109 L/mol。该抗体制备的胶体金试纸条的检测限为4 μg/L,与其他3种硝基呋喃代谢物的衍生物CPAHD、CPSEM和CPAMOZ均不存在交叉反应,对样品的检测与高效液相色谱结果一致。本研究制备了抗呋喃唑酮代谢物特异性单克隆抗体,并研制了以单抗为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够实现呋喃唑酮代谢物残留的快速、灵敏的检测。     

胶体金免疫层析法快速检测烟叶中三唑酮残留量

[目的] 应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测烟叶中三唑酮残留量的方法。 [方法] 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其与抗三唑酮抗体标记制备得金标抗体。三唑酮-OVA偶联物和残留量羊抗鼠IgG抗体分别结合于醋酸纤维膜上,依次将样品垫、醋酸纤维膜和吸水纸组装,切割成胶体金试纸条。 [结果] 测试结果表明,三唑酮胶体金试纸条检测烟叶中三唑酮、三唑醇残留量的灵敏度为1mg/kg,检测时间为5~10 min,特异性高,重复性好,与气相色谱-串联质谱检测法符合率为98%。      

一种新型玉米赤霉烯酮的定量检测方法

采用间接竞争法原理和液相芯片技术平台,选用玉米赤霉烯酮单克隆抗体(Monoclonal Anti-ZEN)对玉米赤霉烯酮(ZEN)定量检测方法进行探索。将ZEN-BSA与36﹟微球偶联,同时加入待检的游离的ZEN小分子和其标记有生物素的ZEN单克隆抗体,偶联抗原和目标抗原竞争结合生物素标记抗体,通过报告分子SA-PE在532 nm波长的激光下,即可检测出报告分子发出的荧光强度,荧光强度与待检ZEN的量成反比。该研究优化了液相反应体系中ZEN单克隆抗浓度、确定了ZEN单抗临界饱和浓度以及抗原抗体最佳孵育时间,其中ZEN单抗临界饱和浓度为2.0μg/mL,偶联抗原和抗体最佳孵育时间为3h。研究所建立的ZEN液相芯片定量检测方法,以国际通用的IC50作为衡量标准,其检测灵敏度为0.005 4μg/mL,线性范围为0.000 8～0.04μg/mL。应用该方法对脱脂牛奶和全脂牛奶进行加标回收检测,平均回收率均大于75%。该方法简化了样品的纯化和分离步骤,经过实际样品的检测,证明方法灵敏、稳定、快速、简便,适用于大量样本的检测。     

基于免疫磁珠的胶体金免疫层析法快速检测水产品中地西泮残留

本研究针对水产品中地西泮残留的问题,建立了一种快速、灵敏的免疫磁珠-胶体金免疫层析法。采用链霉亲和素磁珠与生物素化地西泮单克隆抗体偶联制备的免疫磁珠,快速富集、分离水产品中地西泮残留,并结合胶体金免疫层析法进行半定量检测。结果表明,经过优化后试剂卡最佳工艺为金标抗体标记量25 μg/mL、T线抗原包被量0.6 mg/mL、C线羊抗鼠二抗包被量1.5 mg/mL、金标喷量3.0 μL/cm,地西泮加标浓度为1.0、5.0、10.0和15.0 μg/kg时回收率为78.34%~90.40%,相对标准偏差(RSD)为5.03%~8.96%。本方法特异性强、稳定性好,可在25 min内完成单个样本检测,对水产品中地西泮残留检出限为0.5 μg/kg,优于常规前处理法。经验证,对40份水产品样本检测结果与GC-MS法结果一致,证明免疫磁珠-胶体金免疫层析法可作为水产品中地西泮残留快速检测的有效手段。     

金磁微粒介导多克隆抗体纯化的最优化条件研究

将牛血清白蛋白(BSA)包被在自制的金磁微粒表面,以金磁微粒与抗体比例、反应时间、反应温度为主要影响因素,依据均匀设计表,对盐酸克伦特罗(CL)多克隆抗体进行纯化,并对纯化前后抗体的效价以及抗体对CL的检测灵敏度进行了研究。结果表明,金磁微粒与抗体的比例以及两者的反应时间是影响抗体纯化的主要因素;纯化后多克隆抗体中抗BSA抗体明显下降,而抗CL抗体基本保持不变;对比纯化前后CL的检测曲线,纯化后的最低检测限(LOD)和半抑制浓度(IC50)分别下降了6.90%和24.37%。     

免疫检测用的胶体金制备工艺的优化研究

利用抗坏血酸液相还原法制备适用于免疫检测用的胶体金纳米颗粒,并采用紫外/可见光分光光度计对胶体金颗粒的光学吸收特性进行表征.通过对实验中抗坏血酸的加入浓度、加热程度以及稳定剂作用的探讨.发现当氧化剂HAuCl_4的浓度为1%时,反应体系中抗坏血酸浓度控制在1%,制备得到的胶体金颗粒较小且有较好的均一性;良好的加热并适量添加PEG能提高胶体金的质量.实验还发现胶体金溶液的最大吸收峰和其粒径之间存在一定的线性关系,其线性度达到0.9768,线性回归方程为Y=2.834X+474.16.     

单增李斯特菌免疫磁珠的制备研究

目的:制备可高效、特异地分离单增李斯特菌的免疫磁珠。探讨羧基修饰磁珠与多克隆抗体的不同偶联条件和免疫磁珠捕获单增李斯特菌的能力。方法:以单增李斯特菌作为抗原,免疫新西兰兔,获得兔源多克隆抗体,鉴定其与单增李斯特菌体的结合能力;选择6种不同的偶联缓冲溶液,设置了6个主要偶联时间和6组偶联温度,通过比较磁珠与抗体偶联后上清中剩余的抗体量来确定最佳偶联条件。结果:制备的多克隆抗体效价为1.3×105,该抗体与单增李斯特菌体有较好的结合,抗体与1mg羧基修饰磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水吗啉乙磺酸缓冲溶液(MES)中,37℃偶联2h,偶联抗体的量为160μg;制得的免疫磁珠的捕获率可达77.0%。结论:获得羧基磁珠与抗体偶联的最佳条件,该免疫磁珠用于食品中单增李斯特菌的检测,与常规的平皿增菌培养显色法比较,检测时间至少缩短20h。     

达氟沙星残留生物条形码检测技术的建立

将达氟沙星多克隆抗体和条形码DNA链同时修饰在金纳米颗粒表面用于制备纳米金复合探针（NP）,达氟沙星单克隆抗体与磁性颗粒相结合制备磁性探针（MMP）,待上述两种探针制备成功后与达氟沙星标准品进行杂交反应,同时发挥磁场作用固定MMP,除去未结合的NP探针,最后将标记在金纳米复合探针上的DNA链释放出来,对收集释放的DNA链应用微孔板银染的生物条形码技术进行检测间接得到达氟沙星的残留量,该检测方法不需要昂贵的仪器设备,普通实验室利用酶标仪即可完成全部实验操作,操作简单,检测速度快,其检测灵敏度要优于传统的酶联免疫吸附法。结果表明,在0.05~50 ng/mL范围内检测达氟沙星的最低检出限IC15为3.62 ng/mL,其检测灵敏度是常规免疫检测方法的100倍。本方法实现了对达氟沙星残留的超高灵敏度检测,同时本方法也可应用于其它类抗生素的高效快速检测,因此,本方法的建立具备一定的实用性。     

溶菌酶功能化金纳米颗粒抑菌性能研究

为了提高溶菌酶的稳定性及对革兰氏阴性菌的抑菌性能,以金纳米颗粒为核,通过表面定向修饰溶菌酶,制备了绿色、高效的溶菌酶功能化金纳米颗粒抑菌材料,研究溶菌酶与金纳米的比例、纳米颗粒质量浓度等对抑菌效果的影响,研究溶菌酶功能化纳米材料对大肠杆菌的抑菌机理及对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)的细胞毒性。结果表明:与未修饰的金纳米及单纯的溶菌酶相比,溶菌酶功能化金纳米颗粒对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果均显著增强,表现出协同抑菌作用,在最优条件下,0.1 g/L溶菌酶功能化金纳米颗粒可以完全杀死2种细菌,并且该溶菌酶功能化金纳米颗粒具有持久抑菌性及良好的生物相容性,对哺乳细胞没有毒性。透射电子显微镜和活菌/死菌荧光染色结果表明:溶菌酶功能化金纳米颗粒主要通过破坏菌体细胞壁和细胞膜结构,从而杀死细菌。     

上转换发光纳米技术检测食品中磺胺类药物含量

本文基于上转换发光纳米技术建立了一种灵敏、稳定的检测食品中含五元杂环磺胺类药物的方法。利用上转换发光纳米材料作为能量供体,金纳米颗粒作为能量受体,构建荧光共振能量转移体系,通过荧光量的恢复量来定量游离抗原以达到快速检测含五元杂环磺胺类药物。结果表明,与抗体相偶联的上转换发光纳米材料和包被抗原的金纳米颗粒能够很好地结合在一起,具有良好的灵敏度和特异度。荧光的恢复量与磺胺类抗原浓度(范围在0.08～100ng/mL)呈现出良好的线性关系,相关系数为0.99371,可以检测到磺胺类药物的最低检出限为0.08 ng/mL。同时,该方法成功应用于牛奶中,能够识别出含五元杂环磺胺类的药物,且操作简单、特异性好。基于上转换发光纳米技术构建荧光共振能量转移体系检测含五元杂环磺胺类药物残留的方法可为食品中兽药残留的检测提供新思路。     

Effect of surface chemistry of Fe-Ni nanoparticles on mechanistic pathways of azo dye degradation

The degradation of Orange G, a monoazo dye, in aqueous solutions was investigated using as-synthesized and stored Fe-Ni bimetallic nanoparticles. Batch experiments with a nanocatalyst loading of 3 g/L showed complete dye degradation (150 mg/L) after 10 min of reaction time. HPLC-MS analysis of the degradation products showed that as-synthesized nanoparticles reductively cleaved the azo linkage to produce aniline as the major degradation product. However, 1-year-stored nanoparticles showed an oxidative degradation of Orange G through a hydroxyl-radical induced coupling of parent and/or product molecules. XPS analysis in corroboration with HPLC-MS data showed that the surface chemistry between Fe and Ni in as-synthesized and stored nanoparticles play a crucial role in directing the mode of degradation. Reductive dye degradation using as-synthesized nanoparticles proceeded through hydride transfer from nickel, whereas formation of a Fe2+ -Ni(0) galvanic cell in stored nanoparticles generated hydroxyl radicals from water in a nonFenton type reaction. The latter were responsible for the generation of radical centers on the dye molecule, which led to a coupling-mediated oxidative degradation of Orange G. The generation of hydroxyl radicals is further substantiated with radical quenching experiments using ascorbic acid indicating that stored nanoparticles degrade Orange G through a predominantly oxidative mechanism. HPLC-MS and XPS analysis of dye degradation using as-synthesized nanoparticles exposed to air and water confirmed that the reductive or oxidative degradation capability of Fe-Ni nanoparticles is decided by the time and type of catalyst aging process.     

胶体金免疫层析法检测食用肉中的氨基脲

制备特异性胶体金免疫层析试纸条,检测肉类食品中氨基脲的残留。用活性酯法将氨基脲(SEM)衍生物CPSEM交联到牛血清白蛋白(BSA)上制备完全抗原CPSEM-BSA,将硫酸铵沉淀法纯化的抗CPSEM单克隆抗体标记到柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,通过优化C/T线及金标抗体工作浓度,制备检测氨基脲的胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性进行测定。制备的试纸条检测5min后即可用肉眼观察到结果;对SEM的最低检测限达0.72ng/ml;除与呋喃西林有弱交叉反应外,与其他同类物均无交叉反应;该试纸条对猪肉中添加的SEM检测结果与酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结果呈现了很好的相关性;试纸条在室温下保存7周后不会失效。通过制备针对SEM的试纸条所建立的胶体金免疫层析法(ICA),快速简便、灵敏度高、特异性强、准确性和稳定性好,基本能达到商用检测要求。     

胶体金免疫层析法定量检测鱼和虾中苯巴比妥残留

建立了一种快速定量检测水产品鱼和虾中苯巴比妥残留的胶体金免疫层析方法。采用胶体金纳米粒标记苯巴比妥单克隆抗体,研究了胶体金免疫层析条件如标记体系p H值、标记抗体浓度、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等对胶体金灵敏度的影响,并借助胶体金试纸条读数仪进行定量检测。结果表明:方法检出限为0.07 ng/mL,线性范围0.08～0.94ng/m L,裸眼消线值(cut-off值)为10.0 ng/mL。方法特异性良好,与巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥三种结构类似物交叉反应率小于10%。选择罗非鱼、草鱼、鲈鱼和虾进行添加回收试验,样品回收率在73.50%～114.17%之间,相对标准偏差小于15%,且结果与UPLC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速等特点,非常适用于水产品鱼和虾中苯巴比妥残留现场快速筛查。