一株产抗菌活性物质解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定

从菜园土壤中分离筛选到1 株产广谱抗菌活性物质的菌株K6,其抗菌活性物质对藤黄微球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、酿酒酵母、匍枝根霉和白色念珠菌均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑菌作用最强,对霉菌的抑制作用相对较弱。通过形态特征、16SrDNA 序列分析和系统发育分析,菌株K6 与B. amyloliquefaciens 位于同一簇群,同源性达99%,将其初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌。     

抑制芽孢杆菌乳酸菌的筛选鉴定及其抗菌物质的分离纯化

从朝鲜族辣白菜中分离筛选得到1株对芽孢杆菌具有广谱抑菌活性的菌株JLY-7,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌等食品中常见的腐败性和致病性芽孢杆菌具有较强的抑制作用。对菌株JLY-7进行形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,鉴定其为植物乳杆菌。利用正丁醇萃取、凝胶过滤层析(Sephadex LH-20)和半制备液相色谱纯化等手段对该菌株所产抗菌物质进行分离纯化,得到单一活性抑菌组分,经高分辨电喷雾电离质谱确定该抗菌物质的分子量为694.129 Da。通过蛋白酶处理结果表明,该抗菌物质对常见的蛋白酶均非常敏感。本研究可为乳酸菌抗菌物质控制食品中芽孢杆菌奠定理论基础。     

1株乳酸菌所产类细菌素Lactobacillin SD-22的初步研究

自泡菜中分离的329株乳酸菌中筛选出1株具有较广抑菌活性的菌株SD-22,经鉴定为短乳杆菌(Lac- tobacillus brevis)。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,SD-22菌株发酵液对金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus),枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌(Esche- richia coli),鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimuniuns)等革兰氏阴性菌具有较好的抑制作用,而且对部分真菌也有抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K处理后发酵液抑菌活性略有下降,表明该活性物质为非蛋白成分或起抑菌作用的非单一物质。该活性物质不同于一般细菌素,属于类细菌素,命名为LactobacillinSD-22。它具有很好的热稳定性,在酸性条件下稳定且活性高,对蛋白酶敏感性低,且具有较广的抗菌谱。     

广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定

分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株。采用紫外线-硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株。分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱（Sephadex G-10）和半制备高效液相色谱分离纯化抗菌物质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术对抗菌物质鉴定。本研究从土壤中分离出67 株芽孢杆菌。其中8 株表现出较强的抗菌作用,菌株XF32表现出显著广谱抑制活性,并鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。菌株XF32对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌7 种病原菌具有抗菌活性,对酿酒酵母、黑曲霉、深绿木霉和尖孢镰刀菌有抗真菌活性。经诱变筛选得到突变菌株XF32-22,对金黄色葡萄球菌的抑菌活性比原始菌株显著提高,分离纯化抗菌物质,得到单一的抗菌成分。MALDI-TOF-MS分析表明抗菌物质为Fengycin系脂肽化合物。采用复合诱变技术,可以有效地提高地衣芽孢杆菌脂肽的产量。成功分离得到对多种病原细菌具有较强抑制作用的Fengycin类脂肽,同时该菌株在拮抗植物病原真菌方面也有明显效果。XF32-22菌株在食品保鲜和农业生物防治方面具有很好的应用前景。     

含抗菌肽基因的天然质粒在枯草杆菌中的表达

侧孢短芽孢杆菌抗菌肽具有高效、广谱、稳定的抗菌活性,该抗菌活性与其内源质粒密切相关。为研究侧孢短芽孢杆菌含抗菌肽基因质粒异源表达的可行性,本研究中将侧孢短芽孢杆菌S62~-9的天然质粒电转枯草芽孢杆菌Wb800受体细胞,筛选阳性转化子并对其表达产物性质进行研究。得到了产生抗菌活性产物菌株Z4,发酵6 h后开始产生抗菌物质,12~20 h产量达到最大,达620.96 AU/m L。Tricine~-十二烷基硫酸钠~-聚丙烯酰胺凝胶电泳看到S62~-9质粒在枯草芽孢杆菌中得到了成功的表达,反相高效液相色谱分析Z4表达产物含有与侧孢短芽孢杆菌抗菌肽相同物质。该物质抑菌谱广,稳定性好:对于G~+、G~-和真菌均有抑菌活性,而且对于G~+菌株的抑菌效果优于G~-菌株和真菌,121℃处理20 min后的效价保留率约为90%,100℃处理60 min后仍有81%的活性保留;p H 2~12的范围内效价保留率基本不发生变化;对蛋白酶较为敏感,胰蛋白酶和蛋白酶K处理后抗菌肽的效价保留率为60%左右,其他3种蛋白酶处理后也有一定程度的降低。本研究获得了抗菌肽的异源表达菌株Z4,为进一步工业生产抗菌肽提供支持,而且为该抗菌肽遗传基因定位于质粒上提供了证明。     

链霉菌HMJ-7的鉴定及其抗菌物质稳定性分析

为获得新型抗菌活性物质并应用于食品防腐,用土壤溶液悬浮法从江苏徐州奎河边上的土壤样品中分离到了一株链霉菌菌株,命名为HMJ-7。采用打孔法验证其产生的抗菌物质的抗菌能力,结果表明:该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌等细菌以及酵母菌都有良好的抑制作用,抑菌圈直径都在2 cm以上。对黑曲霉、黄曲霉、米曲霉等霉菌没有抑菌活性;通过对HMJ-7菌株形态特征、培养特性、生理生化性状以及16S rDNA序列分析,初步将该菌株鉴定为链霉菌属灰红紫类群灰红链霉菌(Streptomyces griseoruber);采用不同的温度、pH、有机溶剂、紫外线条件处理该菌株产生的抑菌活性物质,并分别通过打孔法测定其对蜡样芽孢杆菌的抑制活性。结果显示,这些条件对抑制活性没有明显影响,说明该抗菌物质比较稳定。上述结果表明,HMJ-7菌株有较大的利用潜力,也为进一步分离纯化其抑菌物质提供了依据。     

布氏乳杆菌CF10所产类细菌素Lactobacillin FC-10的初步研究

采用纸片法初筛和杯碟法复筛自黄水中分离出一株抗生物质产生茵CF10，经鉴定为布氏乳杆菌。排除酸性末端产物及过氧化氢的干扰后，CF10菌株发酵液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性茵、大肠杆菌和绿脓杆菌等革兰氏阴性茵、K酵母和某些真菌有强烈的抑制作用。经蛋白酶K处理，该菌株具有广谱抑菌活性、热稳定性，在酸性条件下稳定且活性高，对蛋白酶敏感度低。     

从酸白菜中分离出一株产细菌素的乳酸片球菌

本试验从酸白菜中分离出一株有抑制单核细胞增多症李氏杆菌作用的菌株,经鉴定为乳酸片球菌,还对植物乳杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌等革兰氏阳性细菌有抗菌作用。该抗菌物质对蛋白水解酶敏感、对过氧化氢酶不敏感、耐热、在较宽的pH范围内保持活性。在排除是有机酸和过氧化氢后,初步认为该菌产生的抗菌物质为抗菌肽,即细菌素。     

副干酪乳酸杆菌所产抑菌物质的特性研究

为了得到具有应用潜力的抑菌活性菌株,对分离自内蒙古牧区家庭手工制作的酸马奶中具有抑菌活性的乳酸杆菌采用双层琼脂平板扩散法进行筛选,并对有抑菌能力的乳酸菌进行分子生物学鉴定,同时对其所产抑菌物质的特性进行研究,筛选出的8株乳酸杆菌均对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)有抑制作用,选择其中一株乳杆菌Q-1-4(Lactobacillus paracasei)进行鉴定认定该菌株为副干酪乳杆菌。排除有机酸和过氧化氢干扰后,L.paracasei Q-1-4发酵离心后的无细胞上清液(Cell-free fermentation supernatant,CFS)对B.subtilis仍然有抑制作用,经胰蛋白酶、蛋白酶k、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后抑菌活性下降,说明所产生的抑菌物质中应含有蛋白类。并测出其产生的抑菌物质酸性条件下对枯草芽孢杆菌有抑制作用且对热稳定,对紫外线不敏感;与SDS和EDTA共同作用效果好于单一作用,而其它的表面活性剂、有机溶剂、金属离子对其无明显影响;具有一定的储藏稳定性且较广抑菌谱。     

嗜酸乳杆菌产类细菌素Lactobacillin NX2-6的初步研究

从内蒙古传统乳制品酸马奶中筛选出1株产生具有广谱抑菌活性物质的嗜酸乳杆菌NX2-6。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,菌株NX2-6所产生的类细菌素对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌及米曲霉等真菌具有较强的抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K处理后发酵液抑菌活性明显下降,但仍具有较强的抑菌活性,对α-胰凝乳蛋白酶抗菌活性没有显著变化,因此表明该抗菌活性物质为蛋白类物质或非单一物质。在酸性条件下它具有很好的热稳定性,pH2.0时活性最强,中性或碱性条件下不具有抗菌活性,抑菌活性pH值范围在2.0-5.0。此抗菌物质不同于一般细菌素,属于类细菌素,命名为Lactobacillin NX2-6。菌株NX2-6产物在生防、食品具有潜在的应用价值。     

芽孢杆菌ZYCHH-01发酵条件优化及其抑菌物质的研究

采用芽孢杆菌ZYCHH-01发酵生产抑菌物质,以大肠杆菌（Escherichia coli）为指示菌株,通过牛津杯法测定其抑菌圈的大小判断其抑菌活性。通过单因素试验结合响应面法研究培养基pH值、发酵温度、接种量以及发酵时间对芽孢杆菌ZYCHH-01浓度和抑菌物质活性的影响。结果表明,最佳发酵条件为接种量3%,发酵温度36 ℃,培养基pH值7.8,发酵时间27.5 h。在此优化条件下,抑菌圈最大直径为21.12 mm。最小抑菌浓度为上清液稀释1∶64。生化试验结果表明,芽孢杆菌ZYCHH-01产抑菌物质对蛋白酶敏感,较耐储存,对有机溶剂和部分表面活性剂稳定,抑菌活性pH范围较大且具有良好的热稳定性,对食源性病菌抑菌活性良好。     

扩展青霉拮抗菌的筛选鉴定及抗菌物质分析

为了防止水果采后青霉病的发生及青霉毒素带来的危害,本实验以扩展青霉(Penicillium expansum 3.3703)为指示菌,采用平板对峙法和双层平板琼脂扩散法筛选得到1株来源于乌龙茶的LPL-T12菌株,其发酵上清液抑菌圈直径达(22.74±0.44)mm。菌株经形态学观察、生理生化实验、16S rDNA序列及特异性PCR分析可知,LPL-T12菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。菌株发酵液通过硫酸铵沉淀及不同孔径透析袋截留后,粗提物经抑菌活性检测、蛋白酶及热处理分析可知,该抗菌物质为分子质量在8000D以上的热敏感蛋白类物质。     

1株产广谱细菌素乳酸菌的筛选及其抑菌物质的特性

从植物性材料中筛选到1株对大肠杆菌有明显抑制作用的乳酸菌,在排除有机酸和过氧化氢的干扰后,该菌株的发酵上清液仍有较强的抑菌性;胃蛋白酶处理后,抑菌活性明显降低,说明其抑菌物质为蛋白质类物质,是一种细菌素。通过形态学和生理生化分析,初步鉴定该菌株为植物乳杆菌。生物学特性研究表明,该菌株发酵上清液经高温、吐温-80、SDS、EDTA处理后,仍保持较好的抑菌活性;在酸性条件下稳定;对蛋白酶K和胰蛋白酶较胃蛋白酶敏感。抑菌谱显示,该菌株的发酵上清液具有广谱抑菌性。     

原桃胶中1株芽孢杆菌的分离鉴定及其主要抗菌物质

从天然原桃胶分离到1 株产抑菌活性物质的芽孢杆菌TJ12。其发酵产物对金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、藤黄微球菌（Micrococcus luteus）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）和串珠镰刀菌（Fusarium moniliforme）有抑菌活性。结合菌落形态、生理生化指标、16S rRNA序列和gyrB序列将TJ12菌株鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。通过硫铵沉淀、有机溶剂萃取、羟丙基葡聚糖凝胶、高效液相色谱分离纯化,得到其主要活性物质。该物质对pH值、温度和3 种蛋白酶（胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶）有较好的稳定性。经电喷雾电离质谱分析,初步鉴定该株地衣芽孢杆菌TJ12的主要抗菌物质为杆菌肽A。     

牛类芽孢杆菌BD3526发酵麦麸抑制变形链球菌的特性

研究牛类芽孢杆菌(Paenibacillus bovis)BD3526抑制变形链球菌(Streptococcus mutans)ATCC35668的特性,拓宽P.bovis BD3526代谢产物的抑菌用途。主要研究P.bovis BD3526在麦麸培养基中的发酵特性和发酵上清液对蛋白水解酶和过氧化氢酶的敏感性、不同pH耐受性和热稳定性,以及对口腔中常见乳杆菌属生长的影响。结果表明,P.bovis BD3526发酵12 h后进入稳定期,在36 h时活性达到4.58×10⁸ CFU/mL、pH值5.20,对Streptococcus mutans ATCC35668抑菌圈直径为(21.27±0.71)mm。该发酵上清液对口腔中常见的有益菌(植物乳杆菌和干酪乳杆菌)无抑菌活性,但对链球菌属微生物抑制作用明显。目标抑菌物质具有良好的热稳定性和pH稳定性、对消化系统蛋白水解酶和过氧化氢酶不敏感;经链霉蛋白酶处理后抑菌活性消失,表明该抑菌物质的化学结构中含有肽类成分。P.bovis BD3526代谢麦麸合成的抑菌物质对S.mutans ATCC35668具有强烈抑制且稳定的抑制效果,这为将来开发特异性功能食品配料或口腔护理产品奠定了理论基础。     

一株强抑菌活性植物乳杆菌的分离及益生性能研究

以健康黔北黑猪肠道黏膜内容物为原料,采用厌氧罐培养法分离出肠道细菌,结合抑菌试验筛选出其中具有强抑菌活性菌种进行分子生物学鉴定,并对其耐受性及抑菌物质的稳定性进行研究。结果表明,该菌株被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,对金黄色葡萄球菌ATCC6538、大肠埃希氏菌ATCC25922和鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028等指示菌具有强抑制作用,其发酵上清液对3种指示菌的最大抑菌圈直径分别约为44.7 mm、23.1 mm和31.8 mm;菌株发酵上清液抑菌物质耐高温,120 ℃处理30 min抑菌活性无显著变化（P＞0.05）;胰蛋白酶处理后,上清液的抑菌圈直径显著减小（P＜0.05）,而过氧化氢酶和胃蛋白酶处理后抑菌圈直径无显著变化（P＞0.05）,表明主要抑菌物质为有机酸和活性肽;菌株经pH 2、0.3%猪胆盐或人工胃肠液处理6 h后存活率分别为0.06%、0.61%、40.80%和25.65%,显示出良好的益生性能。     

泡菜中抑菌性芽孢杆菌的筛选及其细菌素理化特性

目的:本文旨在从传统发酵泡菜中筛选有抑菌活性的芽孢杆菌。方法:采用热处理和抑菌板双重筛选出具有抑菌活性的芽孢杆菌,通过生理生化反应和16S rDNA序列分析鉴定分离菌株,研究蛋白酶、温度和pH对芽孢杆菌无细胞上清液抑菌活性的影响。结果:从泡菜中筛选出具有较强抑菌活性的芽孢杆菌PC-2,经鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。PC-2无细胞上清液对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、链霉蛋白酶敏感,对淀粉酶和脂肪酶不敏感;经70、80、90℃处理30 min后,对大肠杆菌和酵母菌的拮抗活性基本不变;在pH2.0~8.0范围内保持其抑菌活性;对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、酵母菌及链霉菌具有广泛的抑菌作用;结论:从泡菜中筛选出的蜡样芽孢杆菌PC-2对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有较强抑制作用,初步分析抑菌活性物质为细菌素类,为生物保鲜新品种的开发奠定基础。     

广谱抑菌性多粘类芽孢杆菌的筛选及其细菌素理化特性

采用热处理和琼脂扩散法从湖泥中筛选出一株产广谱抗菌活性物质的芽孢杆菌XW4,通过形态观察、生理生化实验、16S rDNA分析等对其进行鉴定,并对其发酵产物进行抑菌活性探究。结果表明XW4在细菌发育分类学上鉴定为多粘类芽孢杆菌,其发酵产物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、赖氨酸芽孢杆菌等多种腐败微生物均有抑制作用XW4。XW4无细胞上清液对蛋白酶k敏感,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶不敏感;经60、80、100℃处理30 min后,对大肠杆菌拮抗活性基本不变;在pH3.0~11.0范围内保持其抑菌活性。     

一株防霉微生物的筛选及其产物性质初探

霉菌污染是粮食产后损失的重要原因,其产生的毒素可能引起严重的公共卫生问题。本试验从土壤中分离得到一株具有抑霉性能的菌株,经Biolog微生物自动分析系统鉴定、小鼠急毒试验,并对其代谢产物的理化性质初步分析。结果表明,菌株CG1.0062为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）;离心后的上清液对青霉有稳定的抑制能力,发酵天数、多倍稀释、80 ℃加热、pH调整、蛋白酶K处理均显著影响抑霉活力;抑霉代谢产物为胞外产物,推断是蛋白质类物质。     

高产红曲色素红曲霉菌株的筛选及抑菌试验的研究

用麦芽汁分离培养基从红曲中分离到1株产红曲色素较高的红曲霉S8.研究了S8发酵培养时间对红曲色素及干重的影响,结果表明,当培养时间为72h时,红曲色素及干重均达到最大,分别为158U/mL、0.6657g/L.同时还研究了发酵上清液的抑菌性,结果表明其上清液对指示菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、短小杆菌、枯草芽孢杆菌)均有较强的抑菌活性.