细胞色素氧化酶mRNA在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达变化

目的观察85％高浓度氧（高氧）暴露下早产新生大鼠肺组织的病理改变及线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基（COXI、COXII、COXIII）mRNA表达的动态变化，探讨其在早产大鼠高氧肺损伤发生、发展中的可能作用。方法早产SD大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于85％氧气中，空气组置于同一室内常压空气中。两组分别于暴露满1、4、7、10和14d时，每组取动物8只，行肺组织病理学检查，半定量逆转录聚合酶链反应测定COXI、COXII和COXIIImRNA的表达。结果（1）高氧暴露4d即可见肺泡炎和肺发育滞后的改变。（2）与同时问点空气组相比，高氧暴露1d和4d时，COXImRNA的表达显著增强（P〈0．05和P〈0．01），其后开始下降，7d时两组差异无显著性（P〉0．05），10d时较空气组显著降低（P〈0．01），14d时复又增高，且明显高于空气组，差异有非常显著性（P〈0．01）。COXII和COXIIImRNA在各时间点的表达差异无显著性。结论85％高氧暴露诱导早产新生大鼠肺组织线粒体DNA编码COX亚基异常表达，这种变化可能参与了高氧肺损伤的发生。     

高氧对早产大鼠肺组织细胞色素氧化酶亚基Ⅰ表达的影响

目的探讨85%高体积浓度氧暴露对早产新生大鼠肺组织中线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)动态表达的影响。方法早产SD大鼠生后d2随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中。两组分别于暴露满1、4、7、10和14 d时,提取肺组织RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定COXⅠmRNA表达;采用免疫组织化学、免疫印迹(Western-blot)法检测COXⅠ蛋白表达。结果1.与空气组相比,高氧d1和d4 COXⅠmRNA的表达显著增强(P<0.05,0.01),其后开始下降,d7时两者无显著性差异(P>0.05),d10时较空气组显著降低(P<0.01),d14时又增高(P<0.01)。2.COXⅠ蛋白水平表达,与空气组相比,高氧d1和d4时,COXⅠ表达显著增强(P<0.01,0.05),d7时两者无显著性差异(P>0.05),其后开始下降,d10和d14时较空气组显著降低(P<0.01,0.05)。结论85%高体积浓度氧暴露诱导早产新生大鼠线粒体DNA编码COXⅠ异常表达,这种变化可能参与高氧肺损伤的发生。     

细胞色素b在早产新生大鼠高氧肺损伤肺组织中的表达和意义

目的探讨细胞色素b（cytochrome b，Cytb）与高氧肺损伤发生、发展的关系。方法早产新生SD（Sprague-Dawley）大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组，高氧组持续暴露于常压氧舱中，氧浓度〉85％；空气组置于同一室常压空气中。两组分别于高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d时提取肺组织RNA，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定CytbmRNA表达；同时应用免疫组化方法检测肺组织切片中Cytb蛋白表达；应用Western-blot检测高氧肺损伤肺组织中Cytb蛋白水平的表达变化。结果与空气组相比，高氧暴露1d、4d CytbmRNA含量及其表达显著增强（P〈0．05）；7d后Cytb呈下降趋势，其表达较空气组减弱，但两者相比差异无统计学意义（P〉0．05）。高氧暴露后，随日龄变化肺组织Cytb免化结果与CytbmRNA表达相似；与空气组相比，高氧暴露1d、4d肺组织Cytb表达显著增强（P〈0．05）；7d后Cytb呈逐渐下降趋势，其表达较空气组减弱，但7、10d两组相比差异无统计学意义，14d极显著减弱（P〈0．01）。Western-blot实验结果：与空气组相比，高氧暴露1d、4dCytb蛋白水平表达增强但两组相比差异无统计学意义（P〉0．05）；7d后Cytb呈下降趋势，其表达较空气组减弱，但7、10d两组相比差异无统计学意义（P〉0．05），而14d显著减弱（P〈0．05）。结论85％高浓度氧暴露诱导早产新生大鼠线粒体编码的Cytb异常表达，这种变化可能参与高氧肺损伤的发生。     

高氧暴露对早产鼠肺组织HO-1和GCLC表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对新生早产大鼠肺组织中血红素加氧酶-1（HO-1）和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位（GCLC）动态表达的影响。方法受孕21 d大鼠行剖宫产取出早产鼠80只，喂养1 d后随机分为空气组和高氧组。空气组早产鼠放置在室内常压空气中饲养，高氧组早产鼠放置在同一室内常压氧箱中（氧浓度85%~95%）饲养，分别于第1、4、7、10、14天，每组取8只大鼠，采集两组早产鼠肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法检测两组早产鼠不同时间点肺组织结构的病理变化；采用Western blot技术和RT-qPCR检测两组早产鼠不同时间点肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化。结果与空气组相比，高氧组早产鼠体重下降显著（P < 0.05）。与空气组相比，高氧组早产鼠肺组织病理切片显示肺组织结构紊乱、肺泡间隔增宽、肺泡数目减少和肺泡简单化。高氧组早产鼠肺组织中HO-1 mRNA相对表达量在第7天时低于空气组，在第10、14天时高于空气组（P < 0.05）。高氧组早产鼠肺组织中GCLC mRNA表达量在第1、4、7天时低于空气组，在第10天时高于空气组（P < 0.05）。与空气组比较，高氧组早产鼠肺组织中HO-1蛋白表达水平在各时间点均升高；除第1天外，GCLC蛋白表达水平在其他各时间点均升高（P < 0.05）。结论高氧暴露导致早产鼠生长发育迟缓、肺发育阻滞。早产鼠肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化可能与高氧暴露导致早产鼠肺损伤发病过程相关。     

高氧对早产新生大鼠肺组织细胞色素b、三磷酸腺苷合成酶6表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对早产新生大鼠肺组织细胞色素b(Cyt b)、ATP合成酶6(ATPase 6)动态表达的影响。方法早产新生SD大鼠生后1 d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中,氧质量浓度>85%;空气组置于同一室常压空气中。两组分别于高氧或空气暴露后1、4、7、101、4 d提取肺组织RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Cyt b、ATPase 6 mRNA表达;应用免疫组化方法检测肺组织切片Cyt b。结果1.与空气组比较,高氧暴露14、d Cyt b mRNA含量及其表达显著增强(P<0.05);7 d后Cyt b呈下降趋势,其表达较空气组减弱,但两者比较无显著性差异(P>0.05)。2.高氧组与空气组比较,ATPase 6 mRNA表达于1 d时显著增强(P<0.05),4 d虽无显著改变(P>0.05)但仍增强;7、10 d时减弱;14 d又极显著增强(P<0.01)。3.随日龄变化高氧暴露后,肺组织Cyt b免疫组化结果与Cyt b mRNA表达相似。与空气组比较,高氧暴露14、d肺组织Cyt b表达显著增强(P<0.05);7 d后Cyt b呈渐下降趋势,其表达较空气组减弱,但7、10 d两者比较无显著性差异,14 d极显著减弱。结论线粒体呼吸链中Cyt b、ATPase 6在肺发育中起重要作用。高氧诱导线粒体呼吸链中Cyt b、AT-Pase 6结构和功能改变,导致氧化磷酸化解耦联,参与高氧肺损伤的发病机制。     

早产大鼠高氧肺损伤组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶的动态表达及其意义

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）脱氢酶亚单位1、2、5在早产大鼠高氧肺损伤组织中的动态表达及其意义。方法早产新生大鼠生后1d随机分为高氧和空气组，高氧组持续暴露于850mL／L氧气中，空气组置同一室内常压空气中。分别取二组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d肺组织标本，采用HE染色观察肺组织形态学改变，采用RT—PCR法在mRNA水平检测NADH脱氢酶亚单位1、2、5的表达。结果1，高氧暴露1、4d，早产大鼠肺组织形态较空气组无明显改变；高氧暴露7、10d，肺组织渐出现小血管充血扩张，肺泡腔内炎性细胞浸润，肺泡间隔增厚，肺泡数目减少、结构简单化和囊泡化等改变。2．空气组NADH脱氢酶亚单位1（ND1）和亚单位2（ND2）mRNA的表达随日龄增长渐降低，至7d时最低，随后其表达逐渐增高；空气组NADH脱氢酶亚单位5（ND5）mRNA的表达随日龄增长渐降低，至4d时最低，随后其表达逐渐增高。3．与同时间点空气组相比，高氧暴露后1、4和7dND1和ND5mRNA表达显著增强（Pa〈0．05），随后其表达渐下降，10、14d时低于空气组，但二者相比差异无显著性意义（Pa〉0，05）；与同时间点空气组相比，高氧暴露后1、4dND2mRNA表达二组间差异无显著性意义（Pa〉0．05），7d时较空气组极显著增强（P〈0．01），10、14d时较空气组显著降低（P。〈0．05）。结论高氧可导致早产大鼠肺组织NADH脱氢酶表达改变，提示其可能参与高氧肺损伤的病理生理过程。     

半胱氨酸蛋白酶3和白细胞介素8在高氧暴露下早产大鼠肺组织中的动态表达及其意义

目的 探讨半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及白细胞介素-8(IL-8)在早产大鼠高氧肺损伤中的动态表达及其意义.方法 孕21 d的SD早产大鼠生后第2天,随机分为空气组和高氧组(均n=40).高氧组大鼠予以85%高氧持续暴露,空气组大鼠置于空气中.于暴露1、4、7、14和21 d每组各处死8只大鼠,收集肺组织标本,苏木精-伊红染色观察肺组织病理形态学变化,双抗夹心ELISA法检测IL-8含量,免疫组化和Western blot检测Caspase-3表达.结果 高氧暴露后肺泡腔内可见有坏死脱落细胞、炎症细胞渗出增多、间质水肿,肺组织结构紊乱,肺泡形成明显滞后,肺泡结构简单化和囊泡化;与空气对照组比较,高氧暴露4、7和14 d肺组织Caspase-3和IL-8含量均明显增高(P＜0.01).结论 在高氧所致早产大鼠肺损伤中细胞凋亡和坏死共存,两者共同参与了早产大鼠高氧肺损伤的病理过程.     

早产大鼠高氧暴露下肺组织TNF-αCaspase-3表达时相研究

目的：探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)及半胱氨酸蛋FB白酶3(Caspase3)在早产大鼠高氧肺损伤中的动态表达及其意义。方法：孕21d的SD早产大鼠生后第2天,随机分为空气组和高氧组(均n=40)。高氧组大鼠予以85%高氧持续暴露,空气组大鼠置于空气中。于高氧暴露1d、4d、7d、14d和21d每组各处死8只大鼠,收集肺组织标本,苏木精-伊红染色观察肺组织病理形态学变化,双抗夹心ELISA法检测TNFα含量,免疫组化和Westernblot检测Caspase3表达。结果：高氧暴露4d、7d和14d肺组织TNFα和Caspase3含量明显增高(均P<0.01),且两者之间具有显著相关性(r=0.93,P<0.01)。结论：TNFα诱导Caspase3过度表达导致细胞凋亡可能是早产大鼠高氧肺损伤的发病机制之一。     

三磷酸腺苷合成酶6、8与早产新生大鼠高氧肺损伤的相关性

目的 探讨线粒体呼吸链三磷酸腺苷合成酶6、8（ATPase6、8）与早产新生大鼠高氧肺损伤的关系。方法 早产新生SD大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中，氧体积分数〉850mL／L；空气组置于同一室常压空气中。二组分别于实验后1、4、7、10和14d提取其肺组织RNA．采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ATPase6、8mRNA表达。结果 1．与空气组比较，高氧暴露1dATPase6mRNA表达显著增强（P〈0．05）；4、7、10d时无显著性差异（Pa〉0．05）；14d又显著增强（P〈0.01）。2．高氧组与空气组比较，ATPase8mRNA表达于1、4、10d时无显著改变（Pa〉0．05）；7、14d时明显增强（Pa〈0．05）。结论 高体积分数氧暴露诱导线粒体呼吸链中ATPase6、8异常表达，这种变化可能参与早产新生大鼠高氧肺损伤的发病过程。     

红霉素对高氧暴露早产鼠肺组织肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-8的干预作用

目的 观察大环内酯类抗生素红霉素对高氧暴露下早产新生大鼠肺组织肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白细胞介素(interleukin,IL)-8表达的影响,探讨红霉素对高氧肺损伤的干预作用.方法 早产新生SD大鼠生后ld按随机数字表法随机分为4组:空气暴露+生理盐水组、空气暴露+红霉素组、高氧暴露+生理盐水组及高氧暴露+红霉素组.空气暴露组置于同一室常压空气中;高氧暴露组持续暴露于常压氧舱中,氧浓度＞85％.4组早产鼠分别于空气或高浓度氧暴露后1、7、14d提取肺组织标本.采用石蜡包埋切片行苏木精-伊红染色观察肺组织的病理学变化.采取ELISA法分析血清细胞因子TNF-α和IL-8的水平.结果 (1)与空气暴露+生理盐水组比较,高氧暴露1、7d,高氧暴露+生理盐水组早产鼠肺组织TNF-α和IL-8表达水平显著增强[1 d:TNF-α:(16.163±0.574) ng/ml vs.(21.923±2.066) ng/ml,IL-8:(18.214±3.649) ng/ml vs.(23.546±5.240) ng/ml;7 d:TNF-α:(15.940±0.821) ng/ml vs.(19.688±0.764) ng/ml,IL-8:(18.541±4.114) ng/ml vs.(24.255±4.692) ng/ml],尤其TNF-α表达增强出现更早,14 d明显减弱(P＜0.05).(2)与高氧暴露+生理盐水组比较,红霉素干预后l、7、14d,高氧暴露+红霉素组早产鼠肺组织中TNF-α和IL-8表达水平显著降低(P＜0.05)[1 d:TNF-α:(21.923±2.066) ng/ml vs.(18.903±1.851) ng/ml,7 d:IL-8:(24.255±4.692) ng/ml vs.(23.508±3.543) ng/ml,14 d:TNF-α:(16.443±5.466) ng/ml vs.(14.453±0.963) ng/ml],但相对于1、7d时,14d降低程度轻.结论 氧化爆发诱导的炎症介质TNF-α和IL-8释放参与高氧肺损伤的发生发展过程,红霉素可能通过机体免疫调节作用,抑制炎症介质释放,在减轻高氧肺损伤过程中发挥重要作用.     

角质细胞生长因子对吸入高体积分数氧新生大鼠肺组织的影响

目的 研究角质细胞生长因子(KGF)对高体积分数氧(高氧)暴露下新生大鼠肺组织结构的影响.方法 将新生的108只SD大鼠随机分为空气组、高氧组和KGF干预组,每组36只.每组又分为3d、7d、14d3个亚组.高氧组、KGF干预组大鼠持续暴露于氧体积分数＞950mL·L-1氧箱中,KGF干预组于吸氧同时背部皮下注射重组人角质细胞生长因子(rhKGF)1mg·d-1,连用3d后改为0.5mg·d-1直至实验结束.空气组和高氧组给予等量9g·L-1盐水.空气组大鼠呼吸空气.3d、7d、14d亚组在相应时间点取肺组织,通过肉眼及光镜下观察其肺组织病理学变化,并作肺泡辐射状计数(RAC).结果 空气组7d时出现肺泡化,14d时肺泡化成熟.高氧组时小血管扩张充血,肺间质细胞增多,7d时肺间隔变厚,肺泡腔大小不一,肺泡数减少,14d时肺泡数明显减少,肺泡大小不等,出现明显纤维化.KGF干预组7d时可见肺泡结构较完整,14d时少数肺泡融合,间质细胞增生不严重.高氧组3d时RAC与空气组相比差异无统计学意义(P＞0.05),7d、14d时RAC与空气组相比差异均有统计学意义(Pa＞0.01).KGF干预组各时间点RAC与空气组比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论 长时间暴露于高氧环境,可导致新生大鼠肺组织发育障碍,但KGF能促进肺泡的发育,减轻纤维化,可有效减轻高氧吸入对新生大鼠肺组织的损伤.     

粘着斑激酶在早产大鼠高氧肺损伤肺组织中的表达变化和意义

目的探讨粘着斑激酶(FAK)与高氧肺损伤发生、发展的关系。方法剖宫术取出孕21 d大鼠作为早产鼠,分别置早产鼠于85％高氧环境下3、7和14 d,各组均以空气组早产鼠为对照,留取肺组织标本,采用免疫组织化学法和Western blot技术对高氧组和空气组肺组织FAK多肽表达进行定位、定量检测,采用RT-PCR方法对FAK mRNA表达水平进行半定量分析。结果 FAK mRNA和蛋白在空气组早产大鼠肺组织均有较高水平表达,高氧暴露3、7和14 d后,FAK mRNA和蛋白表达水平均呈不同程度的下降,尤以高氧14 d最明显。结论高氧抑制FAK表达是导致正常肺泡化过程受阻以及不成熟肺组织损伤后异常修复的重要因素,其机制可能与其抑制肺泡上皮细胞增殖、分化,以及毛细血管形成有关。     

高氧致新生大鼠支气管肺发育不良肺成肌纤维细胞分布的变化及意义

目的 观察高氧致新生大鼠支气管肺发育不良(BPD)肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及胶原的变化,探讨高氧致新生大鼠BPD的发生与成肌纤维细胞的内在联系.方法 将新生大鼠持续暴露在85%高氧环境中,在实验的1、3、7、14、21 d,取左肺组织固定、脱水、石蜡包埋、切片,用于肺组织病理变化观察及α-SMA表达的免疫组织化学检测;右肺-80℃冰冻,用于Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白和mRNA表达检测.结果 新生大鼠长期高氧暴露可致肺泡简单化,肺泡数目减少,终末气腔扩张,次级隔数目减少,肺泡间隔显著增厚,出现纤维化.高氧暴露14和21 d时,α-SMA在肺泡间隔和肺泡表面表达显著增强,呈条素状分布;但空气组仅在次级间隔的顶端呈点状分布.随高氧暴露时间延长,Col Ⅰ表达增加,并且高氧组肺组织α-SMA表达与Col Ⅰ mRNA表达呈明显正相关(r=0.59,P< 0.05).结论 新生大鼠高氧暴露导致肺损伤符合早产儿BPD的病理改变,成肌纤维细胞分布紊乱可能在BPD的发病过程中起重要作用.     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组，每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg），高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本，通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化；采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常；高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱，有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变；高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚；高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻；各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05），且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时，高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）；高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）；高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05），空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路；USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤；USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解，减少肺上皮-间质转化，从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织CDK4 p21的表达及意义

目的：早产儿慢性肺疾病（CLD）的发病机制目前研究还不十分清楚,但CLD的最终病理变化与肺细胞增殖有关。该文采用高氧诱导早产鼠CLD模型为对象,探讨CDK4和p21基因动态表达与肺细胞增殖调控的关系。方法：高浓度氧致早产鼠CLD模型（实验组）和正常对照组各40例为研究对象,每组分别于实验后的1,3,7,14和21 d随机选取8只大鼠处死, 取出肺组织,常规制成5 μm切片。检测观察：①肺组织形态学;②肺组织纤维化评分;③采用免疫组化检测肺组织内PCNA表达;④采用原位杂交检测肺组织CDK4 mRNA和p21 mRNA的表达。结果：两组肺组织细胞PCNA指数：与对照组比较,实验组1 d,3 d PCNA表达均减弱（P﹤0.05）,7 d开始表达增强（P＜0.01）, 14 d和21 d明显高于对照组（P＜0.01）。两组肺组织细胞CDK4 mRNA表达强度： 从7 d开始实验组高于对照组（P﹤0.05）, 14 d,21 d明显高于对照组（P﹤0.01）。两组肺组织细胞p21 mRNA表达强度：实验组1 d,3 d表达明显高于对照组（P﹤0.01）, 7 d 后持续下降, 但也高于对照组（P﹤0.05）。7~21 d肺组织细胞CDK4 mRNA,p21 mRNA 表达分别与PCNA呈显著正、负相关（r分别为0.83和-0.81,P﹤0.05）。结论：高氧可诱导早产鼠肺细胞增殖。肺组织细胞CDK4基因的过度表达、p21基因的表达下降,可能是高氧诱导肺细胞增殖的机制之一。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：595-600］     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

宫内炎性预敏和生后高氧暴露对早产大鼠肺Bax和Bcl-2基因表达和肺细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察宫内炎性预敏及生后60%氧暴露对肺增殖性细胞核抗原(PCNA)及肺细胞凋亡影响的动态变化规律及Bcl-2家族中Bax、Bcl-2基因的表达对肺细胞凋亡的调控作用;探讨其与新型支气管肺发育不良(BPD)发病机制之间的关系.方法早产大鼠随机分为生理盐水+高氧组、脂多糖(LPS)+高氧组、LPS组和正常对照组,于生后第1、7和14天利用简单随机抽样方法取8只,采用免疫组织化学染色方法检测各组肺组织PCNA表达水平及脱氧核糖核酸转移酶介导的细胞凋亡标记技术(TUNEL)和逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测各组肺组织凋亡和Bax、Bcl-2基因表达水平.结果 ①PCNA的表达:LPS组和生理盐水+高氧组在生后第1天表达明显低于对照组(LPS组:0.18±0.01;生理盐水+高氧组:0.53±0.11;对照组:1.16±0.31;P=0.005,0.021);LPS+高氧组在生后第14天明显低于其他3组(对照组:0.89±0.22;LPS组:1.03±0.07;生理盐水+高氧组:0.96±0.16;LPS+高氧组:0.47±0.08;P=0.048,0.019,0.030).②凋亡指数(AI):LPS组在生后第1天明显高于对照组(17.73±2.21 vs 7.16±0.31,P=0.021);生理盐水+高氧组在生后第7天最高;LPS+高氧组在生后第14天表达明显高于其他3组(对照组:20.53±4.51;LPS组:13.99±1.69;生理盐水+高氧组:35.08±4.96;LPS+高氧组:49.92±7.93;P=0.005,0.002,0.048).③BaxmRNA的表达:LPS组在生后1 d明显高于其他3组(LPS组:0.73±0.06;对照组:0.16±0.03;生理盐水+高氧组:0.23±0.03;LPS+高氧组:0.24±0.13;P=0.001,0.002,0.002);生理盐水+高氧组在生后第7天表达明显高于对照组(0.58±0.06 vs 0.19±0.05,P=0.002);LPS+高氧组在出生后第14天明显高于对照组(0.58±0.01 vs 0.29±0.09,P=0.009).④Bcl-2 mRNA的表达:LPS组在生后在第1天明显低于其他3组(LPS组:0.18±0.02;对照组:0.41±0.09;生理盐水+高氧组:0.48±0.03;LPS+高氧组:0.59±0.05;P=0.019,0.007,0.012);生理盐水+高氧组及LPS+高氧组在生后第7天明显低于对照组(0.28±0.05/0.21±0.02 vs 0.49±0.09,P=0.02,0.008).结论 宫内炎性预敏及生后高氧暴露可抑制肺细胞增殖,可能通过提高Bax/Bcl-2的表达途径使肺组织细胞过度凋亡,进而导致BPD的发生.     

SUMO化修饰C/EBPα在高氧暴露所致支气管肺发育不良早产大鼠中的动态表达及作用

目的 探讨小泛素相关修饰物（SUMO）化修饰CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）在支气管肺发育不良（BPD）早产大鼠中的表达及其作用。方法 将18只早产大鼠随机分为空气组和高氧组（n=9），建立高氧暴露早产大鼠BPD模型。分别在4 d、7 d及14 d，每组各取3只大鼠采集肺组织，糖原染色观察肺组织分化情况；免疫组化检测Ki67表达；Western blot检测SUMO1及C/EBPα蛋白表达；免疫共沉淀检测SUMO化C/EBPα表达。结果 与同时间点空气组相比，高氧组大鼠肺组织糖原染色强度4 d时减弱，7 d及14 d时明显增强；随高氧暴露时间延长，高氧组大鼠肺组织中Ki67表达逐渐升高，且均高于同时间点空气组；与空气组相比，高氧组C/EBPα蛋白4 d时表达增加，7 d及14 d时表达降低（P < 0.05）；高氧组SUMO1及SUMO化C/EBPα蛋白表达呈逐渐上升趋势，均明显高于同时间点空气组（P < 0.05）。高氧组SUMO化C/EBPα表达与糖原染色强度及核增殖抗原Ki67均呈正相关（r=0.529、0.671，P < 0.05）。结论 高氧暴露所致早产大鼠BPD模型中，肺泡上皮细胞过度增殖与分化障碍可能与SUMO化C/EBPα表达增加相关。