siRNA干扰整合素α_vβ_3表达抑制脑胶质瘤细胞U251增殖的实验研究

目的 探索特异性siRNA靶向干扰恶性胶质瘤U251细胞中INTα_vβ_3表达后对细胞生长的作用.方法 将INTα_vβ_3特异性siRNA经脂质体(LipofectamineTM~(2000))转染U251细胞.RT-PCR、免疫细胞化学和Western blot法检测INTα_vβ_3蛋白表达.MTT检测干扰后细胞增殖变化.结果 INTα_vβ_3特异siRNA对U251细胞增殖有明显抑制作用.siRNA组、脂质体组与对照组各时间点的结果 差异有统计学意义.免疫细胞化学对照组和脂质体组均见INTα_vβ_3呈绿色表达,siRNA组表达降低.Western blot法和RT-PCR结果 证实转染特异siRNA后的细胞在蛋白及mRNA水平均能抑制INTα_vβ_3的表达.结论 特异性siRNA可干扰INTα_vβ_3在脑胶质瘤U251细胞中的表达并抑制细胞增殖.     

抑制C-myc、整合素β1对侵袭性垂体腺瘤侵袭力影响的研究

目的：研究c-myc基因、整合素β_1(integrinβ_1,INTβ_1)在侵袭性垂体瘤中的作用和意义,以探讨垂体腺瘤侵袭性可能的病理机制。方法：选取手术切除的新鲜垂体瘤标本12例。进行原代细胞培养,利用Boyden小室侵袭模型,分别加入c-myc抗体、INTβ_1民抗体联合抑制c-myc、INTβ_1活性,观察干预后垂体瘤细胞侵袭能力的变化。用免疫组化法和原位杂交方法,观察干预后C-myc和c-mycmRNA、INTβ_1和INTβ_1 mRNA表达的变化。结果：在加入c-myc、INTβ_1抗体后,C-myc和c-mycmRNA、INTβ_1和INTβ_1 mRNA表达水平均明显降低(各 P＜0．05);同时伴随细胞侵袭率的显著下降(P＜0．01)。结论：INTβ_1、c-myc与肿瘤细胞的侵袭行为密切相关,抑制其表达,有助于阻止垂体瘤细胞的侵袭性生长。     

Pin1和Bmi1在人类胶质瘤中的表达及其意义

目的 研究人类肽基脯氨酰异构酶(Pin1)和B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点基因(Bmi1)在人类胶质瘤中的表达,并探讨它们与胶质瘤分化程度的关系.方法 制作由WHO Ⅱ级胶质瘤组织30例、WHO Ⅲ级胶质瘤组织19例、WHO Ⅳ级胶质瘤组织21例与正常脑组织13例组成的组织芯片,免疫组化方法检测Pin1和Bmi1的表达情况.结果 Pin1和Bmi1在WHO Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤阳性率分别是(35±3.7)%,(63.7±3.9)%,(77.9±9.2)%和(20.1±5.1)%,(55.1±6.3)%,(61.7±2.7)%,均高于各自正常组(10.7±2.9)%和(7.9±1.3)%,均为P＜0.05.Pin1和Bmi1表达与胶质瘤等级呈正相关.结论 Pin1和Bmi1可能在胶质瘤发生过程中起重要作用.Pin1和Bmi1的表达检测可能成为胶质瘤的有效诊断指标.     

线粒体分裂蛋白DRP1在胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 研究线粒体分裂蛋白DRP1在胶质瘤中的表达和转录水平及其与患者预后的关系。方法 收集中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)中mRNAseq＿325、癌症基因组图谱(TCGA)的胶质瘤数据和GEO数据库中的胶质瘤数据(GSE16011),以及适量的临床组织样本进行DRP1 mRNA与不同胶质瘤级别之间的转录分析,再进行mRNA的转录与不同级别胶质瘤之间的生存预后分析。再通过Western blot和PCR从14例Ⅳ级胶质瘤临床样本中检测DRP1的蛋白表达与mRNA转录水平。结果 (1) WHOⅡ级与Ⅲ级胶质瘤的DRP1 mRNA表达水平间的差异无统计学意义(P=0. 23),Ⅳ级胶质瘤的DRP1 mRNA表达水平显著低于Ⅱ级和Ⅲ级胶质瘤(均P 0. 05)。(2)检测14例Ⅳ级胶质瘤的临床样本发现,Ⅳ级胶质瘤的DRP1蛋白和mRNA表达水平均显著低于正常脑组织(均P 0. 05)。(3)原发性胶质瘤中DRP1的表达水平与生存时间显著相关,DRP1低表达患者的生存时间明显比高表达患者短(P 0. 000 1)。结论 线粒体分裂蛋白DRP1在胶质瘤中的表达和转录水平降低;并且胶质瘤患者的DRP1表达水平降低减少患者的生存时间。     

人脑胶质瘤中血管内皮生长因子表达与胶质瘤微血管数及肿瘤增殖活性关系的研究

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)表达与胶质瘤微血管数、肿瘤增殖活性及其与胶质瘤恶性程度的相关性。方法　应用免疫组化方法检测 5 0例胶质瘤、8例正常脑组织中VEGF、血小板内皮细胞粘附分子 (CD3 1)和增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达 ,测定其阳性细胞数和阳性血管数。结果　胶质瘤中均有VEGF、CD3 1及PCNA表达。其表达水平与肿瘤恶性程度呈显著正相关 ,其r分别为 0 .745 ,0 .765及 0 .685。结论　VEGF、CD3 1和PCNA在胶质瘤中的高表达是胶质瘤恶性表型之一 ,可作为病理诊断的补充。     

脑胶质瘤的血流改变与其病理生理特点的关系

51例胶质瘤的病人进行~(99m)Tc-HMPAO SPECT和MRI检查.按WHO分类,其中包括21例低级别胶质瘤和30例高级别胶质瘤.使用肿瘤感兴趣区与小脑比值(TCI)半定量~(99m)Tc-HM-PAO的摄取.高、中、低摄取指数在高、低级别胶质瘤中的分布显示了明显的差别(P<0.01),与低级别胶质瘤相比,高级别胶质瘤的血流异常更明显.肿瘤坏死和水肿对~(99m)Tc-HMPAO吸收显示了有意义的影响,是导致局部血流降低的主要因素.     

微小分子RNA在胶质瘤中的研究进展

神经胶质瘤的治疗预后很差,胶质母细胞瘤中存在致肿瘤和抗细胞凋亡的特异性miRNA谱系.6个相互独立的表达谱研究确认了胶质瘤中28个上调的miR和33个下调的miR.其中miR-10b、miR-21和miR-221/222是胶质瘤中最主要的miRNA体系.miR-221和miR-222的过可以导致蛋白碱性磷酸酶μ(PTPμ)的下调,从而使得胶质瘤细胞的迁移率和生长率升高,并且p27、p57和PTEN都是miR-221和miR-222的作用靶点.同时miRNA的表达可能与GBM病人的生存期具有很强的关联.近年来研究表明miRNA可以在血液中稳定的存在,至于其存在的机制及对胶质瘤可能产生的影响,目前尚不确定.目前miRNAs作为肿瘤诊断分子标志物的作用已经在肿瘤研究领域中逐渐显现出来.未来随着对miRNA研究的深入,有可能为胶质瘤的治疗提供新的思路.     

乳酸脱氢酶-A亚基在人胶质瘤中的表达与意义

目的 研究乳酸脱氢酶-A亚基(LDH-A)在人胶质瘤中的表达与意义.方法 收集67例脑胶质瘤标本(WHO Ⅱ级25例、Ⅲ级22例、Ⅳ级20例)及10例行内减压术切除的正常脑组织标本,采用免疫组织化学方法研究LDH-A在不同病理级别胶质瘤及正常脑组织中的表达情况.结果 在正常脑组织中未见阳性表达,LDH-A阳性表达率在Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中分别为68.2％、75.0％,均显著高于Ⅱ级胶质瘤(32.0％)(P＜0.05).胶质瘤病理级别与LDH-A蛋白表达强度呈正相关(r=0.522,P＜0.05).结论 LDH-A在胶质瘤中高度表达,其阳性表达率及表达强度随着病理级别增加而上升,这提示胶质瘤中存在糖酵解通路的活化.     

LAT1表达与人脑胶质瘤病理级别、增殖和血管形成的关系

目的探讨大型氨基酸转运载体1(LAT1)在人脑胶质瘤组织中的表达水平及其与胶质瘤病理学特征、细胞增殖以及血管形成的关系。方法采用免疫组化方法检测LAT1、Ki-67和CD34在62例人脑胶质瘤组织中的表达,计算Ki-67标记指数(Ki-67 LI)和微血管密度(MVD)。结果LAT1在胶质瘤中高表达,其免疫阳性染色既定位于瘤细胞也定位于血管内皮;LAT1表达随胶质瘤病理级别升高而明显增强(P=0.000),在高恶性度胶质瘤中LAT1表达明显强于低恶性度胶质瘤(P=0.002);LAT1表达与胶质瘤Ki-67标记指数(P=0.003)和微血管密度(P=0.000)都存在明显正相关。结论 LAT1与胶质瘤的发生和发展关系密切,可能在胶质瘤的恶性增殖和血管形成中发挥重要作用。     

VEGF、MMP-2与人脑胶质瘤的病理分级和侵袭性的相关研究

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)和基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )在人脑不同级别胶质瘤中的表达。探讨VEGF、MMP 2与肿瘤病理级别和侵袭性的关系。方法　采用免疫组织化学 (SP)法检测 5 6例脑胶质瘤中VEGF、MMP 2的表达。结果　胶质瘤中VEGF、MMP 2的表达水平在高级别组 (Ⅲ、Ⅳ级 )明显高于低级别组 (Ⅰ、Ⅱ级 ) ,两组间有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF、MMP 2在胶质瘤的血管生成与侵袭性生长中起重要作用 ,其表达水平与胶质瘤的病理级别有密切关系。     

端粒酶、Ki-67蛋白表达与脑胶质瘤恶性度的关系

目的　研究端粒酶表达在胶质瘤诊断中的意义 ,并与Ki 6 7蛋白表达比较 ,探讨其与胶质瘤恶性程度的关系和对胶质瘤临床诊断的价值。方法　用原位杂交技术及免疫组化技术检测了 6 5例脑胶质瘤 ,5例正常脑组织作对照。结果　 6 5例胶质瘤有 33例表达端粒酶 ,阳性率 5 1.0 % ,随着胶质瘤分级的升高 ,端粒酶表达强度增强 (P <0 .0 5 )。病理分级与端粒酶阳性表达有相关性 (r =0 .4 3,P <0 .0 1)。 6 5例胶质瘤中有 2 1例表达Ki 6 7,阳性率为 32 .3%。端粒酶与Ki 6 7表达间有相关性 (r=0 .2 8,P <0 .0 1)。结论　Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤端粒酶阳性率明显高于Ⅱ级的检出率 ,端粒酶能反映肿瘤的增殖程度和恶性度 ,端粒酶基因可以作为肿瘤诊断的标记物     

PTEN/MMAC1基因改变与胶质细胞瘤生物学特征相关性研究

目的探讨胶质瘤PTEN/MMAC1基因突变及缺失与肿瘤分型、病理分级和肿瘤生长部位、患者年龄、性别的关系.方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性电泳分析(PCR-SSCP)结合银染技术、双重PCR技术检测80例胶质瘤PTEN/MMAC1基因九个外显子点突变与基因缺失情况.结果 80例胶质瘤分别有15例(18.75%)和27例(33.75%)PTEN/MMAC1基因点突变和基因缺失,且PTEN/MMAC1基因失活与胶质瘤病理分级明显相关(P<0.05),其中低分化胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ级)突变率(31.30%)和缺失率(60%)明显高于高分化(Ⅰ～Ⅱ级)胶质瘤(P<0.05).其中,少突胶质细胞瘤仅有1例PTEN/MMAC1基因缺失(7.70%).星形细胞瘤PTEN/MMAC1基因第5外显子、第6外显子和第8外显子是胶质瘤PTEN/MMAC1基因易突变区.PTEN/MMAC1基因失活与患者性别、年龄及肿瘤生长部位无相关性.结论人胶质瘤PTEN/MMAC1基因与病理分级关系密切,不同起源的胶质瘤PTEN/MMAC1基因改变差异明显.     

肿瘤血管内皮细胞对胶质瘤细胞侵袭力的影响

目的 探讨胶质瘤血管内皮细胞(GVEC)在胶质瘤瘤细胞浸润过程中的作用.方法 通过免疫磁珠分离肿瘤血管内皮细胞,Tanswell 研究内皮细胞对胶质瘤细胞的迁徙和侵袭能力.结果 将内皮细胞与胶质瘤细胞共同培养后能显著增加其迁徙和侵袭能力,并能增加MMP-2,9 蛋白的表达.结论 血管内皮细胞与胶质瘤浸润的过程密切相关,通过增加MMP-2,9 蛋白的表达提高浸润的能力.     

ARK5和MMP-2在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在人脑胶质瘤中的表达,并探讨两者的相关性及其临床意义.方法 收集具有明确病理分级的67例新鲜人脑胶质瘤标本(实验组,A组),其中低级别级胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级)28例(A1组,n=28),高级别胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ级)39例(A2,n=39),并收集32例脑外伤行内减压去除的脑组织标本作为对照组(B,n=32).分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot测定标本中ARK5和MMP-2的mRNA及蛋白表达水平,研究ARK5和MMP-2在胶质瘤中的表达水平及与病理分级的关系.结果 (1)胶质瘤组ARK5和MMP-2 mRNA及蛋白表达水平较对照组显著上调(P＜0.05).(2)A2组ARK5和MMP-2 mRNA及蛋白表达水平较A1组显著上调(P＜0.05).(3)MMP-2在胶质瘤中的表达与ARK5呈显著正相关(r=0.782,P＜0.01).结论 ARK5和MMP-2在人脑胶质瘤中呈高表达,且它们的表达与胶质瘤的病理分级相关,可能与人脑胶质瘤的增殖及侵袭有关.     

PEX与胶质瘤干细胞微环境相关性研究

胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)生存和自我更新依赖由多种可溶性分子以及间质细胞组成的微环境。基质金属蛋白酶(MMPs)是由多种锌离子依赖性酶组成的能降解细胞外基质蛋白的重要酶类,MMPs激活与恶性胶质瘤的生长、侵袭以及转移密切相关。PEX是大多数MMPs在羧基末端都含有的血红素结合蛋白样结构域,近年来研究证明PEX是MMPs内源性抑制剂,抑制MMPs的活性从而影响胶质瘤干细胞微环境,破坏胶质瘤干细胞的相对稳态来阻止胶质瘤的增殖、侵袭和转移。PEX基因的发现给胶质瘤的治疗带来了新思路。因此,本文就PEX基因与胶质瘤干细胞微环境的关系作一综述。     

人脑胶质瘤中PCNA、Ki-67和Mitosin/CENP-F的表达研究

目的 检测PCNA、Ki-67和Mitosin/CENP-F在人脑胶质瘤的表达,探讨它们与胶质瘤恶性生物学行为的关系.方法 应用免疫组化S-P法检测70例不同病理分级、不同组织学分型人脑胶质瘤和24例非肿瘤脑组织中PCNA、Ki-67和Mitosin/CENP-F的表达.结果 (1)70例脑胶质瘤标本中,PCNA、Ki-67和Mitosin/CENP-F的增殖标记指数(LI)分别为(44.02±29.37)%、(17.01±17.68)%和(36.80±27023)%;对照组24例非肿瘤脑组织中Ki-67不表达,PCNA LI和Mitosin/CENP-F LI为(12.11±19.81)%和(9.06+8.27)%,两组比较具有显著差异(P<0.01).(2)PCNA、Ki-67和Mitosin/CENP-F的表达与胶质瘤患者的年龄、性别无关,与病理分级和组织学分型相关(P<0.05).结论 人脑胶质瘤中PCNA、Ki-67和Mitosin/CENP-F的LI与胶质瘤的病理分级和病理分型密切相关,均可作为判断胶质瘤恶性程度的重要指标.     

PI3K/Akt/mTOR信号通路靶向治疗胶质细胞瘤研究进展

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,虽然近年来在胶质瘤的手术技术、化疗、放疗等治疗手段上都取得了长足的进步,但是治疗效果都不是很满意,患者预后仍不容乐观,特别是胶质母细胞瘤患者中位生存期只有8个月[1].随着分子靶向治疗的地位在治疗肿瘤中越来越重要,对胶质瘤中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)丝/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,Akt)/和哺动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号传导通路(PI3K/Akt/mTOR传导信号通路)及其抑制剂的研究,越来越成为学者们关注的热点.因此本文就PI3K/Akt/mTOR信号通路靶向治疗胶质瘤的研究进展做一综述.     

RGS16与p53在人胶质瘤中的表达及相关性研究

目的 研究G蛋白信号调节子16(RGS16)与p53在人胶质瘤中表达及其相关性.方法 利用免疫组织化学链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测42例胶质瘤标本中RGS16与p53的表达.结果 RGS16在10例胶质瘤旁正常脑组织有8例神经元阳性但胶质细胞阴性、42例胶质瘤中37例肿瘤细胞阳性,二者差异显著(P<0.05);p53在瘤旁正常脑组织中阴性,胶质瘤中15例阳性,差异明显(P<0.05);RGS16、p53表达均与病理分型、分级无关(P>0.05);其中,RGS16与p53共同阳性表达11例,共同阴性表达1例,Kappa检验二者表达呈负相一致(P<0.05).结论 RGS16在胶质瘤中高表达而与病理分级无关,推测RGS16可能在胶质瘤发生中起作用.另外,胶质瘤中RGS16与p53表达呈负相关.     

逆转录酶抑制剂AZT对胶质瘤干细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的 探讨逆转录酶抑制剂3-叠氮-3-脱氧胸腺核苷(AZT)对脑胶质瘤干细胞增殖的影响及相关机制.方法 原代分离培养脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞并鉴定,两种细胞同时设立为实验组(0.125 mot/L、0.250 mol/L、0.500 mol/L AZT)和对照组.MTT法检测AZT对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的改变;端粒重复序列扩增技术-酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)检测端粒酶活性的变化.结果 AZT对两组细胞的生长抑制呈浓度-时间依赖性(均P<0.05),在同一浓度和时间点,AZT对脑胶质瘤干细胞的生长抑制作用弱于脑胶质瘤细胞(均P<0.05).0.250 mol/L、0.500 mol/L AZT作用72 h后,脑胶质瘤干细胞的凋亡率分别为(4.21±1.53)%、(10.60±0.38)%,而脑胶质瘤细胞的凋亡率分别为(6.75±1.25)%,(14.30±2,59)%,明显高于胶质瘤干细胞(均P<0.05).AZT对两组细胞端粒酶活性的抑制呈浓度-时间依赖性(均P<0.05),且在同一浓度和时间点对脑胶质瘤细胞的作用明显强于脑胶质瘤干细胞(均P<0.05).结论 逆转录酶抑制剂AZT对脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞均有明显的生长抑制作用,可能机制是通过抑制端粒酶活性、调控细胞周期和诱导细胞凋亡实现.脑胶质瘤干细胞的耐药性强于胶质瘤细胞,其机制有待进一步研究.     

脑胶质瘤中c—myc基因扩增,H—ras及p53基因突变

研究脑胶质瘤中癌基因c-myc的扩增、H-ras的突变及抑癌基因p53的5～8外显子的突变情况以及与胶质瘤的恶性程度的关系.采用差异性PCR(DPCR)及PCR-SSCP、PCR-RFLP等方法检测22例脑胶质瘤的基因突变情况.22例脑胶质瘤中c-myc扩增率为63.6%(14/22),H-ras的突变率为36.4%(8/22),p53的突变率45.5%(10/22).提示:癌基因c-myc的扩增及抑癌基因p53的突变与脑胶质瘤的恶性程度有关(P<0.05),而癌基因H-ras的突变则与脑胶质瘤的发生有关,与脑胶质瘤的恶性程度无关(P>0.05).各类型脑胶质瘤基因突变未发现不同(P>0.05),可能与标本量少有关.