大鼠切牙颈环结构成牙能力的实验研究

目的:观察大鼠切牙颈环结构种植于鼠肾被膜下形成牙齿样结构的能力。方法:取出生后3~4d的SD仔鼠切牙,将切取的颈环结构种植到母鼠肾被膜下,建立组织工程牙齿的体内培养模型。2~4周后取材,常规固定,HE染色观察。结果:下切牙颈环结构在体内形成了包含釉质和牙本质牙髓复合体的牙齿样结构,上切牙颈环结构仅形成了牙本质牙髓复合体的牙齿样结构。结论:大鼠切牙颈环结构在体内能够形成牙齿样结构,其中颈环中的上皮干细胞起着重要的作用。大鼠肾被膜下种植可以做为体内组织工程化牙齿样结构构建的立体培养模式。     

出生后牙胚细胞肾被膜移植的成牙能力研究

目的：将出生后牙胚细胞接种于肾被膜下探讨其成牙能力。方法：通过酶消化法获得出生后4d SD仔鼠第一磨牙牙胚细胞，离心后与明胶海绵支架复合植入大鼠肾被膜下，2周后组织学观察移植物中的组织新生情况。结果：细胞与支架复合体形成了包含釉质样组织和牙本质牙髓复合体的牙齿样结构，形成的硬组织与正常牙齿的形态结构与排列方式相似。Masson’s三色法显示绿色矿化基质形成。结论：出生后牙胚细胞仍保留了牙齿发育的遗传信号，体内移植后牙源性上皮细胞与间充质细胞相互作用，能重新排列构建出与正常牙体组织类似的规则排列结构，在适当条件下具有形成组织工程牙齿的潜能。     

大鼠牙胚同种异体异位移植的组织学观察

目的:观察牙胚在同种异体大鼠体内不同部位的发育情况,为进一步组织工程化牙齿的构建探寻合适的体内生长环境。方法:将封闭群SD仔鼠第一磨牙牙胚分别植入SD成年大鼠肾被膜下、肠系膜内、腹膜外间隙、腹腔内和口腔黏膜下,3周取材,HE染色,观察移植牙胚的发育情况。结果:牙胚在肾被膜下和肠系膜内生长良好,釉质和牙髓牙本质复合体继续发育,牙本质小管结构清晰可见;腹膜外间隙和腹腔内牙胚均未进一步发育,且牙髓腔内和移植物周边淋巴细胞浸润明显;口腔黏膜下未回收到移植物。结论:封闭群SD大鼠肾被膜下和肠系膜内环境有利于同种异体牙胚的生长,可为组织工程化牙齿的体内构建提供新的发育环境。     

大鼠冠根部牙髓体内成牙能力比较

目的 比较成年大鼠冠、根部牙髓分别接种于肾被膜下的成牙能力.方法 无菌条件下分离8周龄SD大鼠切牙牙髓,将冠部与根部牙髓锐分离,分别植入大鼠肾被膜下,2周后进行组织学观察.结果 冠部牙髓形成了包含釉质样组织和牙本质-牙髓复合体的牙齿样结构,与正常牙齿相似.而根部牙髓则形成了骨样牙本质结构.结论 成年大鼠牙髓依然具有独立的牙齿发育的能力,冠髓和根髓的成牙能力不尽相同.     

大鼠牙胚细胞团块培养法构建组织工程化牙齿

目的探索采用大鼠牙胚细胞团块培养法在体内构建组织工程化牙齿的可行性。方法体外培养SD仔鼠磨牙牙胚细胞,并将牙胚细胞团置于离心管内孵育48h后植入近交系SD大鼠肾被膜下,2周取材,苏木精-伊红染色,观察移植物中的组织新生情况。结果牙胚细胞团块在肾被膜下生长良好,形成典型的牙髓牙本质复合体样组织和少量釉质样结构,牙本质小管样结构清晰可见,内侧可见长柱状的成牙本质细胞有序排列,牙髓样组织中可见少量血管样结构。结论以牙胚细胞为种子细胞,用团块培养法在大鼠肾被膜下成功地构建出组织工程化牙冠样结构。     

斑马鱼牙齿的组织结构和超微结构特征

目的：观察成年斑马鱼牙齿的组织结构和超微结构特征。方法：以成年斑马鱼（鱼龄〉3月）为研究对象,在体视显微镜下,解剖成年斑马鱼腮弓,对其腮弓和牙齿进行阿辛兰和茜素红染色观察、扫描电镜观察和石蜡切片苏木精-伊红染色观察。结果：阿辛兰和茜素红染色显示斑马鱼牙齿位于第五腮弓上,斑马鱼腮弓和牙齿为硬组织结构,具有透明的牙釉质和红染的牙本质。扫描电镜和苏木精-伊红染色显示斑马鱼牙齿的硬组织有类似人牙釉质和牙本质样结构,斑马鱼牙齿也具有牙髓腔,髓腔内也有牙髓样软组织结构,牙髓腔硬组织壁上具有丰富的牙本质小管样结构。结论：成年斑马鱼牙齿在组织结构和超微结构上与人类牙齿具有相似性。     

大鼠完整牙胚肾被膜下种植实验研究

目的：评价肾被膜作为组织工程牙根和牙周组织的种植环境。方法：分离出生后6 d SD大鼠下颌第一磨牙完整牙胚，种植于成年SD大鼠肾被膜下，4周后收获种植牙胚，组织学观察种植牙胚的牙根和牙周组织发育情况。结果：20个种植牙胚中，4个种植牙胚有牙根和牙周组织生成，剩余种植牙胚仅见牙本质继续发育。结论：肾被膜是组织工程牙根和牙周组织的适宜种植环境。     

上皮根鞘结构对牙根发育的影响

目的: 研究上皮根鞘的结构对牙根发育的影响。方法: 选择出生后(postnatal, PN)8 d的SD大鼠, 切取第一磨牙牙胚的颈部组织, 用胶原酶和dispase酶消化, 1组直接离心形成细胞团, 另1组加用胰酶消化后, 离心形成细胞团。将细胞团体外培养4 h后, 种植到母鼠肾被膜下, 4周后取材观察。结果: 胶原酶和dispase酶消化可将上皮根鞘解离成碎片, 加用胰酶消化后, 上皮根鞘被解离为单个细胞。含有上皮根鞘碎片的细胞团种植后形成牙根样结构, 而含有上皮根鞘离散细胞的细胞团则形成管状牙本质和骨样牙本质块。结论: 上皮根鞘的结构对其引导牙根发育具有重要作用。     

不同时期大鼠牙齿胚基各部分组织发育能力的研究

目的：比较不同发育时期牙胚各部分异位环境下的发育能力,为牙齿再生重组实验提供参考。方法：分离获取SD大鼠帽状期和钟状末期牙胚,分离成釉上皮与牙乳头间充质,分别将完整牙胚、牙间充质、成釉上皮剪碎后异位移植至同种异体大鼠肾被膜下。4周后取材,对移植物进行组织学观察。结果：帽状期牙胚碎组织块移植物中可见部分不规则的牙齿样结构形成。钟状末期牙问充质碎组织块移植组中既有牙本质牙髓复合体样结构形成,还能观察到大量骨样基质形成。而钟状末期成釉上皮碎组织块移植物生成的组织均为骨样的结构。结论：发育早期牙胚的碎组织较发育末期的牙胚碎组织具有更强的牙齿形成能力,所形成的牙齿结构完整包括釉质、牙本质以及牙髓且顺序正确,提示这个时期牙上皮和间充质之间信号网络所提供的微环境可以更加完善和充分地指导牙齿的发育。     

成年斑马鱼牙齿的扫描电镜观察

目的用扫描电镜观察研究成年斑马鱼牙齿的形态和超微结构并和人类的牙齿进行比较。方法以成年斑马鱼(鱼龄>3个月)为研究对象,在体视显微镜下,解剖成年斑马鱼腮弓,分离第五腮弓,去净软组织,常规扫描电镜标本制备,日立S-3000n扫描电子显微镜下观察。结果成年斑马鱼牙齿位于第五腮弓上,约11颗功能牙,外形呈锥形,没有牙根,类似人类牙齿的牙尖,也由类似人牙釉质和牙本质样的硬组织包绕其内的牙髓腔构成。斑马鱼牙齿的牙本质层结构疏松,其内有很多贯穿牙面至牙髓腔的孔道,类似人牙齿的牙本质小管,牙本质小管内可见牙本质细胞突,牙髓腔内也有牙髓样软组织结构。结论扫描电镜下,成年斑马鱼牙齿与人类牙齿具有高度相似性,能够模拟人类牙齿的形态和组织特征。斑马鱼作为研究牙发育的模式动物在组织形态上是具有有利条件的。     

Myogenic determination and differentiation of the mouse palatal muscle in relation to the developing mandibular nerve.

The vertebrate palatal muscles are derived from the cranial paraxial mesoderm and start myogenesis by the expression of myogenic regulatory factors (MRFs). Predetermined myogenic cells migrate from the cranial paraxial mesoderm into the branchial arches, followed by myogenic differentiation. The objective of this study was to elucidate whether the determination, migration, and differentiation of myogenic cells during the myogenesis of the palatal muscles, particularly the tensor veli palatini (TVP), are related to the extending mandibular nerve in mouse embryos. By immunohistochemical staining at embryonic day (E) 9.5, MyoD1 and myogenin have been expressed in the mandibular arch, into which the mandibular nerve had not yet extended. At E11.5, these myogenic cells encircled the extending mandibular nerve and were distributed from the distal and lateral to the trigeminal ganglion and into the mandibular arch to form the muscle plate, a girdle-like structure. By E12.5, these myogenic cells lost their girdle-like pattern, vacated the trunk area of the mandibular nerve, and were separated into several incompletely divided masses encircling the collateral branches of the mandibular nerve. The TVP started differentiation at E13.5 with the appearance of myofilaments and acetylcholinesterase (AchE), whereas the other palatal muscles began differentiation at E14.5. We defined the differentiation process of mouse palatal muscles into five stages based on the present findings. These results suggest that the determination and initial migration of the palatal myogenic cells into the mandibular arch occur before the mandibular nerve extends out of the trigeminal ganglion, whereas the myogenic cells migrating into the final sites of differentiation intimately relate to the extending nerve.     

牙胚颈部组织肾被膜下种植实验

目的：观察含上皮根鞘（Hertwig’s epithelial root sheath,HERS）的牙胚颈部组织发育牙根和牙周组织的能力。方法：选择出生后（postnatal,PN）8d的SD大鼠,分离下颌第一磨牙牙胚,横切牙胚,将获得的牙胚冠部和颈部组织分别植入成年大鼠肾被膜下。结果：牙胚颈部组织在肾被膜下发育出形态和结构正常的牙根和牙周组织,而牙胚冠部组织未能发育出牙根和牙周组织。结论：含HERS的牙胚颈部组织具有单独发育牙根和牙周组织的能力。     

大鼠牙胚体内种植实验

目的:观察牙胚在肾被膜、大网膜和皮下的生长发育情况。方法:分离出生后(PN)7～8 d的SD大鼠下颌第一磨牙完整牙胚,分别种植到成年SD大鼠肾被膜、大网膜和皮下,4周后收获种植牙胚并进行组织学观察。结果:牙胚在肾被膜、大网膜和皮下均发育出牙根和牙周组织。结论:除了牙槽窝外,体内多个部位的微环境均可满足牙根和牙周组织生长发育的需要。     

种植牙胚的牙冠发育

目的：观察种植牙胚的牙冠发育情况。方法：选择出生后（PN）8天的SD大鼠,完整剥离第一磨牙牙胚,种植到母鼠肾被膜下,4周后取材观察。结果：种植牙胚的牙冠继续发育,冠周有新生牙槽骨,部分釉质外侧生成骨样结构。结论：牙胚种植到肾被膜下后牙冠可正常发育。     

Regulatory issues during early craniofacial development: a summary

During neurulation, craniofacial structures derived from the first branchial arch are determined to become maxillary, mandibular, and tongue formations. At least four interdependent developmental processes become integrated: (1) allocation of cells into specific lineages (perhaps during gastrulation); (2) regulation of time-dependent differential regulatory and structural gene expressions; (3) positional information resulting in pattern formations; and (4) morphogenesis, histogenesis, and cytodifferentiation. This review highlights progress toward understanding when, where, and how the one-dimensional genetic information encoded within DNA (deoxyribonucleic acid) is sequentially expressed into the embryonic craniofacial complex. Specifically, how might intrinsic autocrine and/or paracrine regulatory factors control the developmental program for early first branchial arch morphogenesis, histogenesis, and cytodifferentiation. Rules learned from normal development should be useful toward advancing the diagnosis, treatment, prognosis, and prevention of congenital craniofacial malformations.     

大鼠磨牙牙根根端组织异体移植实验

目的:探讨大鼠磨牙牙根根端组织发育牙根和牙周组织的能力.方法:选择出生后25 d的SD大鼠,切取下颌第一磨牙牙根端组织,移植于成年大鼠肾被膜下,4周后取材,组织学观察.结果:大鼠磨牙牙根端组织发育出根尖样组织结构.结论:牙根根端组织具有发育牙根和牙周组织的能力.     

The induction of odontogenesis in non-dental mesenchyme combined with early murine mandibular arch epithelium

First and second branchial arches were dissected from mouse embryos of 9-13 days gestational age. The epithelial and mesenchymal components were separated after enzymic digestion. Scanning electron microscopy did not reveal a dental lamina along the dental arches before day 12, after which the lamina was formed locally in the incisor and molar regions. There was no epithelial down-growth in the diastema region. Heterotypic recombinations of mandibular arch and second branchial arch tissues showed that early mandibular arch epithelia, before day 12, have odontogenic potential and can elicit the formation of a dental papilla in non-odontogenic, neural-crest-derived mesenchymal cells of the second arch. However, the mandibular mesenchyme must interact with mandibular epithelium in order to have the competence to induce teeth in non-odontogenic epithelium.     

大鼠牙乳头与成釉器重组肾被膜下种植的研究

目的：观察大鼠牙乳头对成釉器上皮的诱导作用。方法：出生后7dSD大鼠下颌第一磨牙根部的牙乳头与出生后2d的第二磨牙成釉器分别重组，出生后2d冠部牙乳头与成釉器重组为对照组。体外培养2d后种植于成年大鼠肾被膜下，1周，4周后取材，组织学观察上皮分化情况和硬组织形成情况。结果：1周后实验组重组体生成薄层的牙本质结构，内侧成牙本质细胞排列整齐，牙源性上皮未分化成成釉细胞，而有大量的骨样物质生成，对照组形成较为完整的牙冠结构。4周后，实验组重组体形成类牙根形态但仍无釉质形成。结论：根部牙乳头不具有促进成釉上皮分化的能力。